PERBANDINGAN HISTOPATHOGENESIS KASUS AVIAN INFLUENZA

SUBTIPE H5N1, PADA AYAM DAN ITIK DENGAN TEKNIK

IMUNOHISTOKIMIA

SKRIPSI

Diajukan untuk Melengkapi Tugas -Tugas dan Memenuhi

Persyaratan untuk Mencapai Gelar Sarjana Kedokteran Hewan

Diajukan Oleh :

Bayu Setiabudi

1009005107

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS UDAYANA

DENPASAR

2014

ii

iii

iv

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Lamongan, Jawa Timur pada tanggal 27 Mei 1992,

merupakan putra dari pasangan Bapak Kusnadi dan Ibu Rukhoiyah. Penulis

menyelesaikan sekolah dasar di SD Negeri 1 Dinoyo, lulus pada tahun 2004.

Pendidikan lanjutan tingkat pertama di SMP Negeri 1 Deket, lulus pada tahun

2007. Pendidikan lanjutan tingkat atas di SMA Negeri 1 Lamongan lulus pada

tahun 2010.

Pada tahun 2010 penulis diterima sebagai mahasiswa di Fakultas

Kedokteran Hewan Universitas Udayana melalui jalur SNMPTN (Seleksi

Nasional Masuk Perguruan Tinggi Negeri). Selanjutnya penulis melakukan

penelitian di Balai Besar Veteriner (BBVET) Denpasar dan Laboratorium

Pathobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana dengan judul

“Perbandingan Histopathogenesis Kasus Avian Influenza Subtipe H5N1, pada

Ayam dan Itik dengan Teknik Imunohistokimia” sebagai salah satu syarat untuk

memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan (S.KH) di Fakultas Kedokteran

Hewan Universitas Udayana.

v

RINGKASAN

Virus avian influenza (AI) subtipe H5N1 adalah Highly Pathogenic

Avian Influenza. Virus ini telah menjadi endemic di Indonesia pada tahun 2003.

Wabah ini menyebabkan kematian pada ayam dalam jumlah banyak. Pada tahun

2012, kejadian AI subtipe H5N1 terulang kembali di Indonesia dengan

karakteristik berbeda oleh virus AI subtipe H5N1 yang terdahulu. Selain kematian

pada ayam, kejadian ini menyebabkan kematian unggas air (itik) dalam jumlah

banyak.

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah ayam dan itik yang

mati karena infeksi virus AI subtipe H5N1. Sampel diperoleh dari kasus avian

influenza pada ayam dan itik selama bulan Desember tahun 2012 sampai 2013.

Sampel jaringan otak, jantung, paru-paru, limpa, ginjal, pankreas, dan usus,

kemudian ditentukan untuk adanya sel positif antigen dengan teknik

imunohistokimia metode Labeled Streptavidin Biotin (LSAB). Jaringan

direaksikan dengan antibodi monoklonal (AbMo) anti-AI subtipe H5N1 dan

antibodi sekunder biotinylated antimouse IgG, ikatan kompleks antigen-antibodi

dilacak dengan streptavidin-HRP dan divisualisasi dengan subtrat

diaminobenzidine (DAB) yang menghasilkan warna coklat, dan membuktikan

bahwa jaringan tersebut mengandung antigen virus AI subtipe H5N1.

Perbandingan histopathogenesis dari kasus AI subtipe H5N1 pada ayam

dan itik ditentukan dengan membandingkan jumlah sel positif di setiap jaringan.

Pada ayam dan itik ditemukan sel positif antigen dalam semua jaringan sampel.

Usus memiliki sejumlah besar sel positif baik pada ayam dan itik. Paru-paru ayam

memiliki jumlah sel positif antigen dengan kategori tinggi, sedangkan pada itik

termasuk kategori rendah. Secara umum jumlah sel positif antigen dalam jaringan

ayam lebih tinggi daripada itik (P<0.05). Pada sampel jaringan ayam, kategori

yang tertinggi dari sel positif antigen ditemukan di paru-paru, limpa dan usus.

Namun pada itik itu ditemukan pada usus.

Kata kunci : AI subtipe H5N1, histopathogenesis, ayam, itik, imunohistokimia.

vi

SUMMARY

The virus of avian influenza (AI) H5N1 subtype is highly pathogenic

avian influenza. The virus has become an endemic in Indonesia in 2003. The

outbreaks this caused mortality of chickens in large number. In 2012, the

recurrence incidence of AI subtype H5N1 has been occured in Indonesia, it has

different characterized by AI virus subtype H5N1 erlier. In addition to mortality

in chickens, this incident led to the death of waterfowl (ducks) in large number.

Samples used in this study were chickens and ducks that died due to

avian influenza virus H5N1 infection. The samples were obtained from bird flue

cases in chickens and ducks during December 2012 to 2013. Tissue samples of the

brain, heart, lungs, spleen, kidneys, pancreas, and intestines, were then determined

for the presence of antigen positive cells by immunohistochemistry (IHC)

technique labeled streptavidin biotin (LSAB) method. The tissues reacted with

monoclonal antibodies (MAbs) anti-AI subtype H5N1 and biotinylated antimouse

IgG secondary antibody, antigen-antibody complex bond with streptavidin-HRP

tracked and visualized with the subtrate diaminobenzidine (DAB), which

produces a brown color, and prove that this tissues contain antigen of AI subtype

H5N1.

The comparison of histopathogenesis from case of AI subtype H5N1 in

chickens and ducks were determined by comparing the number of positive cells in

each tissues. In chickens and ducks were found antigen positive cells in all tissue

samples. The intestines has a high number of positive cells in both the chickens

and ducks. Chicken’s lungs have a number of antigen positive cells with high

category, whereas in ducks categories include low. In general the number of

antigen positive cells in chicken tissues is higher than the ducks (P<0.05). In the

chickens tissue samples, the highest catagory of antigen positive cells were found

in lungs and spleen and intestines. However in the ducks it were found in the

intestines.

Keywords: AI H5N1 subtype, Histopathogenesis, Chickens, Ducks, Immunohisto-

chemistry.

vii

UCAPAN TERIMA KASIH

Puji syukur kehadirat Allah Subhanahu Wa Ta’ala, yang telah

memberikan segala nikmat, rahmat dan sayang-Nya sehingga penulisan skripsi ini

dapat diselesaikan. Sholawat serta salam tersanjungkan kepada Nabi Muhammad

Sholallahu ‘Alaihi Wa Salam, yang telah menyampaikan ilmu-ilmu ilahi yang

terbukti dari zaman ke zaman.

Skripsi yang berjudul “Perbandingan Histopathogenesis Kasus Avian

Influenza Subtipe H5N1, pada Ayam dan Itik dengan Teknik Imunohistokimia”

disusun berdasarkan hasil penelitian salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana.

Melalui kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih yang setulus-tulusnya

kepada :

1. Bapak Dr. drh. Nyoman Adi Suratma, MP, selaku Dekan Fakultas

Kedokteran Hewan Universitas Udayana.

2. Bapak drh. Samsuri, M.Kes, selaku pembimbing akademik yang telah

memberikan motivasi dan dukungan moril.

3. Bapak Prof. drh. I Nyoman Mantik Astawa, Ph.D, selaku pembimbing I

atas bimbingan, nasehat dan motivasi yang telah diberikan selama

penelitian dan penulisan skripsi ini hingga selesai.

4. Ibu Prof. drh. A.A. Ayu Mirah Adi, M.Si., Ph.D, selaku pembimbing II

atas bimbingan, nasehat dan motivasi yang telah diberikan selama

penelitian dan penulisan skripsi ini hingga selesai.

5. Bapak dan Ibu Tim penguji Prof. Dr. drh. Gusti Ayu Yuniati Kencana,

M.P, Dr. drh. I Nyoman Suartha, M.Si, dan drh. I Made Kardena, MVS

atas saran dan masukan yang diberikan.

6. Ibu drh. Ni Luh Eka Setiasih, M.Si yang sudah membantu dan

memberikan masukan dalam penelitian ini.

7. Bapak drh. I Ketut Diarmita, MP, selaku Kepala Balai Besar Veteriner

(BBVET) Denpasar yang telah memberikan ijin untuk melakukan

penelitian ini.

viii

8. Bapak drh. I Wayan Masa Tenaya, M.Phil., Ph.D yang telah memberikan

masukan, dan sumbangsih ilmu selama penelitian ini.

9. Bapak-Bapak tim dari laboratorium patologi BBVET Denpasar drh. I

Ketut Eli Supartika, M.Sc, drh. I Ketut Wirata, drh. Gede Agus Joni

Uliantara, I Wayan Sudira, I Ketut Widia, dan Fiki Indra Kusumah, Amd

yang memberikan bantuan dan masukan dalam penelitian ini.

10. Bapak dan Ibu dosen di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas

Udayana yang telah mendidik dan membimbing penulis selama

mengikuti masa perkuliahan.

11. Untuk Ibunda Rukhoiyah tercinta yang telah banyak berjasa dalam

memberikan dorongan baik moril dan materil serta doa sehingga

penulisan skripsi ini dapat berjalan dan selesai dengan tepat waktu.

12. Untuk semua keluarga di rumah atas doa, semangat, dan dorongan yang

telah diberikan.

13. Untuk Aulia Insani yang sudah sangat membantu dalam kelancaran dari

penelitian ini.

14. Untuk teman-teman surgical team Andi Isma L, Tri Suci G, Natazha P.

D, Ruwaidah, Dwi Lestari, Wahyu H, Iga P. A, Restu I dan Asyauqi I. P.

15. Untuk teman-teman seperjuangan Egik H. L, M. H Isnan, Fiki Agus P,

Eva Candra A, Andika Budi. K, dan Afianita Anake Y.

16. Untuk kakak-kakak Faturrahman N, S.KH, Muhsoni F, S.KH, Juang

Hudaya, dan Syamsudin.

17. Untuk teman-teman satu angkatan 2010 yang telah memberikan

dukungan dan doanya selama ini.

Dalam penelitian skripsi ini masih banyak kekurangan, dan untuk itu

segala saran dan kritik yang sifatnya membangun sangat penulis harapkan.

Sebagai akhir kata, semoga skripsi ini bermanfaat bagi para pembaca.

Denpasar,7 Mei 2014

Penulis

ix

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .................................................................................... i

HALAMAN PENGESAHAN ...................................................................... ii

HALAMAN PERSETUJUAN..................................................................... iii

RIWAYAT HIDUP ...................................................................................... iv

RINGKASAN ............................................................................................... v

SUMMARY .................................................................................................. vi

UCAPAN TERIMA KASIH........................................................................ vii

DAFTAR ISI ................................................................................................. ix

DATAR TABEL ........................................................................................... xi

DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ xiii

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang ....................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ................................................................. 3

1.3 Tujuan Penelitian ................................................................... 3

1.4 Manfaat Penelitian ................................................................. 4

1.5 Kerangka Konsep .................................................................. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Virus Influenza Tipe A .......................................................... 6

2.2 Virus Avian Influenza Subtipe H5N1 ................................... 8

2.3 Pathogenesis .......................................................................... 10

2.4 Avian Influenza Pada Ayam ................................................... 11

2.5 Avian Influenza Pada Unggas Air (Itik) ................................ 12

2.6 Imunohistokimia (IHK) ......................................................... 14

BAB III MATERI DAN METODE

3.1 Sampel Penelitian .................................................................. 17

3.2 Bahan Penelitian .................................................................... 17

3.3 Alat Penelitian ....................................................................... 18

3.4 Rancangan Penelitian ............................................................ 18

3.5 Variabel Penelitian ................................................................ 18

3.6 Prosedur Penelitian ................................................................ 18

3.6.1 Deparafinisasi dan Rehidrasi ...................................... 18

3.6.2 Pewarnaan Imunohistokimia ...................................... 20

3.7 Sel Positif Terinfeksi Virus Avian Influenza ........................ 21

3.8 Komparasi Histopathogenesis ............................................... 22

3.9 Analisis Data.......................................................................... 22

3.10 Waktu dan Tempat Penelitian................................................ 22

x

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil ....................................................................................... 23

4.1.1 Histopathogenesis Kasus Avian Influenza Subtipe

H5N1 Pada Ayam ..................................................... 23

4.1.2 Histopathogenesis Kasus Avian Influenza Subtipe

H5N1 pada Itik ........................................................ 24

4.1.3 Perbandingan Histopathogenesis Kasus Avian

Influenza Subtipe H5N1 pada Ayam dan Itik .......... 25

4.2 Pembahasan .......................................................................... 29

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan ............................................................................... 37

5.2 Saran ..................................................................................... 38

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 39

LAMPIRAN .................................................................................................. 47

xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar Keterangan Halaman

2.1 A) Metode Avidin-Biotin Complex (ABC), B) Metode Labeled

Streptavidin Biotin (LSAB) .......................................................... 16

4.1 Sel positif antigen virus AI subtipe H5N1 pada beberapa organ

ayam (A, C) dan Itik (B, D) .......................................................... 27

xii

DAFTAR TABEL

Tabel Keterangan Halaman

4.1 Distribusi dari Virus AI Subtipe H5N1 pada Organ dari Tiga

Sampel Ayam dengan Teknik Imunohistokimia ........................... 23

4.2 Distribusi dari virus AI subtipe H5N1 pada Organ dari Tiga

Sampel Itik dengan Imunohistokimia ........................................... 24

4.3 Perbandingan Distribusi dari Virus AI Subtipe H5N1 pada Organ

dari Tiga Sampel Ayam dan Itik dengan Teknik

Imunohistokimia ........................................................................... 26

4.4 Distribusi Virus AI Subtipe H5N1 pada Organ dari Rata-Rata

Tiga Sampel Ayam dan Itik dengan Teknik Imunohistokimia ..... 28

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Keterangan Halaman

1. Skoring dari Imunohistokimia pada Ayam dan Itik ........................ 47

2. Perbandingan gambaran distribusi virus AI subtipe H5N1, pada

jaringan ayam (A) dan itik (I) dengan teknik imunohistokimia ...... 49

3. Uji Statistik Menggunakan SPSS 17, Uji Wilcoxson Berpasangan . 52