Pengecatan BTA Zeihl NeelsenPrinsip :Dinding bakteri yang tahan asam mempunyai lapisan lilin dan lemak yang sukar ditembus cat. Oleh karena pengaruh fenol dan pemanasan maka lapisan lilin dan lemak itu dapat ditembus cat basic fuchsin. Pada waktu pencucian lapisan lilin dan lemak yang terbuka akan merapat kembali. Pada pencucian dengan asam alkohol warna fuchsin tidak dilepas. Sedangkan pada bakteri tidak tahan asam akan luntur dan mengambil warna biru dari methylen blue.Alat :

- Spirtus- Obyek glass- Jembatan pengecatan- Ose dan mikroskop- Pipet pasteur

Reagen :1. Carbol fuchsin :

- Basic fuchsin 3,0 gr- Etanol/methanol 100 ml- Kristal phenol 45 gr- Aquadest 900 ml

2. Larutan dekolorisasi :- HCl pekat 30 ml- Etanol 970 ml

3. Pewarna kontras :- Methylen blue khlorida 30 ml- Air suling/aquadest 1000 ml

Cara kerja : Mempersiapkan alat-alatnyang di perlukan Mempersiapkan reagensia Membuat preparat/sediaan dari bagian spesimen yang purulen/berdarah,

menghapus spesimen pada bagian tengah obyek glass ukuran 2 x 3 cm Membakar ose sampai membara setelah setiap mengerjakan 1 spesimen Mengeringkan dan memfiksasi preparat di atas nyala api lampu spirtus Melakukan pengecatan :

o Meletakkan preparat diatas jembatan pengecatano Menuangi preparat dengan carbol fuchsino Memanaskan dari bawah setiap sediaan dengan lampu spirtus sampai

keluar uap, api harus selalu di gerakkan, dihentikan bila sudah timbul uap

o Mendinginkan selama 5 menit atau lebih, jangan sampai pewarna kering

o Mencuci dengan air mengalir, memiringkan setiap sediaan untuk mengalirkn air yang berlebih

o Mencuci sediaan dengan decolorasi sampai tidak ada pewarna carbol fuchsin, maksimal 3 menit

o Mencuci dengan air mengaliro Menggenangi tiap sediaan dengan pewarna kontras 30 menit

o Mencuci lagi setiap sediaan dengan air mengalir, memiringkan sediaan untuk mengurangi air yang berlebih, mengeringkan di udara terbuka

o Mengamati preparat di bawah mikroskop dengan pembesaran kuat (100x) untuk mencari adanya bakteri tahan asam (BTA)

Metode : Kinyoun GabbetTujuan : Untuk mencari BTAPrinsip :Dinding bakteri yang tahan asam mempunyai lapisan lilin dan lemak yang sukar ditembus cat. Oleh karena pengaruh fenol dan kadar cat yang tinggi maka lapisan lilin dan lemak itu dapat ditembus cat basic fuchsin. Pada waktu pencucian lapisan lilin dan lemak yang terbuka akan merapat kembali. Pada pencucian dengan asam alkohol warna fuchsin tidak dilepas. Sedangkan pada bakteri tidak tahan asam akan luntur dan mengambil warna biru dari methylen blue.Larutan Kinyoun

fuchsin basis 4g fenol 8ml, alkohol 95% 20ml H2O destilata (100ml)

Gabbet methylene blue 1g. H2SO4 96% 20ml. alkohol absolut 30ml H2O destilata 50m

Cara KerjaLarutan Kinyoun dituang pada permukaan sediaan, dibiarkan selama 3 menit, kemudian kelebihan zat warna dibuang dan dicuci denganair yang mengalir perlahan. Selanjutnya larutan Gabbet dituang pada permukaan sediaan, dibiarkan 1 menit kemudian kelebihan zat warna dibuang dan dicuci dengan air yang mengalir perlahan, kemudian sediaan dikeringkan di udara

PerbedaanZeihl neelsen Kinyoun Gabbet

Methylen blue 30 ml 1 gr Fuchsin basis 3 gr 4 gr Alkohol 970 ml 50 ml H2SO4 - 20 ml Aquadest 900 ml 150 ml