Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

BIOSAFETY LABORATORIUM PCR COVID-19

Disampaikan oleh

dr. Titiek Sulistyowati, MKK, Sp. MK

Dalam

BIMTEK BBLK SURABAYA, 19 NOV 2020

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

PEMBAHASAN

SITUASI TERKINI COVID-19

TERMINOLOGI

PENILAIAN RISIKO

LANGKAH PENGENDALIAN

UJI KLINIS DAN POINT OF CARE

DESINFEKSI, INAKTIVASI, MANAJEMEN LIMBAH

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! TERMINOLOGI

• Biohazard

Sumber potensi bahaya yang disebabkan oleh agen biologis atau toksin

• Biorisk

Kombinasi kemungkinan terjadinya bahaya dan tingkat keparahan bahaya dengan sumber kerusakan adalah agen biologis atau toksin

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

BAHAN INFEKSIUS Bahan yang mengandung mikroorganisme hidup seperti bakteri, virus, parasit, jamur, toksin, rekombinan, yang dapat menimbulkan penyakit pada manusia dan hewan.

Bahaya biologi (biohazard) dan bahan yang potensial infeksius

1. Patogen pada manusia, hewan and tumbuhan :

· Bakteri, termasuk yang resisten

· Plasmid

· Fungi / jamur

· Virus, termasuk virus onkogenik

· Parasit

· Prion

2. Semua darah manusia, produk darah, jaringan dan cairan tubuh

3. Kultur sel (semua manusia atau hewan)

4. Alergen

5. Toksin (bakterial, fungal, tumbuhan, dll)

6. Rekombinan DNA (rDNA)

7. Spesimen klinis

8. Hewan terinfeksi dan jaringan hewan

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! PATOGEN (HAZARD) VS PROSES (LIKELIHOOD)

RISIKO

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! REAGEN BERBAHAYA

1. Explosif (mudah meledak)

2. Flamable (mudah terbakar)

3. Oxidazing Agent (bahan oksidator)

4. Bahan mudah terbakar oleh air

5. Bahan mudah terbakar oleh asam

6. Bahan-bahan beracun

7. Bahan korosif

8. Karsinogenik

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Keamanan kerja laboratorium (BIOSAFETY)

Menjelaskan prinsip-prinsip, teknologi dan praktik yang dilaksanakan sebagai upaya perlindungan dan

pencegahan terpaparnya pekerja laboratorium, orang sekitar dan lingkungan oleh mikroorganisme dan toksin

yang dikerjakan, dengan secara tidak sengaja.

“Melindungi manusia dari patogen’’

Source: Laboratory Biosafety Manual, Third Edition, 2004

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

BIOSAFETY containment/pembatasan

Kebijakan administratif

Praktik kerja

Desain fasilitas

Desain peralatan

MELINDUNGI :

1. PETUGAS

2. ORANG LAIN

3. LINGKUNGAN

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! CONTAINMENT

Barier primer

APD

GMPP

Safety equipment

Barier sekunder

Proteksi lingkungan luar

Desain fasilitas

Praktik operasional

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

PENILAIAN RISIKO BIOLOGIS

Proses sistematis dalam mengumpulkan informasi dan

mengevaluasi kemungkinan dan dampak paparan atau pelepasan

bahaya di tempat kerja dan menentukan tindakan

pengendalian risiko yang tepat untuk mengurangi risiko.

Identifikasi bahaya biologis

Evaluasi risiko

Pengembangan strategi

kontrol risiko

Penentuan dan

pelaksanaan pengukuran

kontrol risiko

Review risiko dan

pengukuran kontrol risiko

Proses ini paling baik dilakukan oleh tim staf yang terlibat dalam berbagai proses pekerjaan laboratorium

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! IDENTIFIKASI BAHAYA BIOLOGIS

Agen biologis (SARS CoV 2)

Prosedur dan peralatan laboratorium

Langkah-langkah pengendalian sudah ada

Personil

Fasilitas Faktor lain

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

VIRUS CORONA • Corona = mahkota

• Ukuran kecil

diameter 65-125 nm

• RNA untai tunggal

sebagai bahan

nukleat

• Ber-envelope

• Sub grup adalah

alpha (a), beta (b),

gamma (c) and

delta (d).

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

FAKTA : SARS COV-2

• Ditularkan melalui DROPLET / tetesan aerosol (kemungkinan aerosol)

• Tidak ada vaksin

• Sangat menular

• Dosis infeksi tidak diketahui

• Waktu paruh di permukaan tidak pasti

• Gejala tidak spesifik dan bervariasi

• Orang tanpa gejala dapat menyebarkan penyakit

• Morbiditas berat pada orang dg imun inkompeten dan komorbid

• Kemungkinan kematian meningkat dengan bertambahnya usia dan kelemahan

• Tidak ada kekebalan khusus yang sudah ada sebelumnya dalam populasi manusia

• Beberapa obat antivirus sedang diuji; pengobatan hanya untuk gejala

Faktor-faktor ini akan mempengaruhi konsekuensi dari paparan atau pelepasan yang tidak disengaja!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Klasifikasi Risk Group (RG) Agen biologis yang diketahui menginfeksi manusia diklasifikasikan menurut Risk Groups (RG),

dengan RG1 sebagai yang terendah / paling tidak berbahaya dan RG4 sebagai yang tertinggi.

Perbandingan RG1 RG2 RG3 RG4

Karakteristik Sakit (-) pada dewasa

sehat

Sakit (+) dg keparahan

bervariasi. Jarang letal.

Sakit (+) dg keparahan

sedang sd tinggi, bisa letal. Parah s.d letal

Terapi - + / sistem imun +/- -

Rute Penularan - Tertelan, kulit / membrane

mukosa

Tertelan, kulit / membrane

mukosa, inhalasi

Tertelan, kulit /

membrane mukosa,

inhalasi

Tingkat keparahan

terhadap individu - Rendah s.d sedang Sedang s.d tinggi Tinggi

Resiko komunitas Rendah Rendah Rendah s.d sedang Tinggi

Dosis infeksi - Umumnya tinggi (variasi) Dosis rendah (+) Min 1 organisme

Contoh agen

Non-conjugative strains

of E.

coli, Sacchromyces

cerevisiae.

Parasites (Plasmodium,

Trypanosomes, Leishmania)

Patogen sal. cerna (Salmonella,

Shigella), patogen di darah (HBV,

HCV, Borrelia).

Mycobacterium tuberculosis,

West Nile Virus, Yellow

Fever Virus, Rickettsia

rickettsi.

Ebola virus, Marburg virus,

Sabia virus, Equine

Morbillivirus.

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Alfonso_Rodriguez-Morales, 2020

Perilaku virus COVID-19: Stabilitas

• Aerosol di udara: 3 jam

• Permukaan Tembaga: 8 jam

• Permukaan Kardus: 24 jam (satu hari)

• Permukaan Stainless Steel: 48 jam (2 hari)

• Permukaan Plastik: 72 jam (3 hari)

• Dapat bertahan pada kondisi kering dan basah serta Asam

Van Doremalen, NEJM, 2020

TRANSMISI SARS CoV 2

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Peralatan yang potensial aerosol

https://biosafety.utk.edu/biosafety-program/biosafety-manual/3-biosafety-practices-and-procedures/

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Aktivitas laboratorium potensial aerosol

Inokulasi

• Streaking

• Subkultur

• Pemanasan dan pendinginan ose

Pemipetan

• Mencampur dengan pipet

• Tumpahan pipet

Manipulasi syring dan jarum

• membuang udara

• Menarik jarum dari stopper

• Menyuntik hewan

• Syring didorong saat jarum terpisah

Lain

•Sentrifugasi

•Blender, shaker, sonikator, dan mixer

•Menuang cairan

•Membuka wadah kultur

•Tumpahan bahan infeksius

•Liofilisasi dan filtrasi dalam vakum

• Inokulasi telur

Prosedur ini meningkatkan kemungkinan paparan atau pelepasan yang tidak disengaja

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

LANGKAH PENGENDALIAN

• BSC

• Glovebox (alternatif) BIOCONTAINMENT

• Hand schoen, gown lengan panjang

• Face shield, googles, mask/respirator APD

• Pelatihan, GMPP

• SOP, Biosafety manual KONTROL

ADMINISTRATIF

Langkah-langkah pengendalian ini mengurangi kemungkinan pelepasan atau paparan yang tidak disengaja

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

GMPP

Serangkaian praktik dan

prosedur dalam penanganan

bahan biologis / bahan menular

terbaik di laboratorium

Kebersihan tangan

Hand Wash and Hand Rub

Mencegah penyebaran

Dekontaminasi dan deaktivasi / pembuangan

yang sesuai

Hindari tusukan

Prosedur benda tajam yang aman

Hindari tertelan dan kontak kulit & mata

Penggunaan APD

Hindari terhirup

Mencegah pembentukan aerosol

https://www.who.int/ihr/publications/biosafety-video-series/en/ https://www.who.int/publications/i/item/laboratory-biosafety-guidance-related-to-coronavirus-disease-(covid-19)

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

PERSONIL : KOMPETENSI !!!

Terlatih untuk melakukan pekerjaan

• Metode dan peralatan

• Praktik biosafe dan penggunaan APD yang benar

• Pembelajaran berkelanjutan

Memahami risiko

• Mitigasi dan remediasi

Pengalaman

• Terlatih dan berpengetahuan luas dalam teknik lab yang relevan

Sikap

• Profesional

• Terfokus

Personil laboratorium yang terlatih dan berpengalaman mengurangi

kemungkinan pelepasan atau paparan yang tidak disengaja

This Photo by Unknown Author is licensed under CC BY-NC

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

FASILITAS IN

TEG

RIT

AS

• Ruang cukup dg wastafel

• Intak (struktur tidak ada celah/rusak)

• Mudah dibersihkan dan didekontaminasi

• Dirancang supaya aman, efektif dan ergonomis

KESELAM

ATAN

& K

EAM

AN

AN

• Akses ke lab terbatas

• Pintu diberi label dan tanda biohazard

• Alur kerja rapi dan tidak berantakan

VEN

TIL

ASI

• Ventilasi memadai

• Aliran udara langsung ke lab

Fasilitas dengan fitur ini mengurangi kemungkinan pelepasan atau paparan yang tidak disengaja

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Langkah 5 REVIEW RISIKO DAN PENGUKURAN KONTROL RISIKO

• Penilaian risiko harus menjadi proses yang berkelanjutan

• Harus dilakukan setiap kali terjadi perubahan:

Personil

Fasilitas

Peralatan

Metode

Regulasi

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

LAB RT- PCR

GMPP

APD sesuai

Staf yang kompeten

Lab BSL-2

BSC atau primary containment

Buffer lisis eksternal dari kit

ekstraksi RNA umum efektif

dalam menonaktifkan virus

COVID 19 tanpa panas atau

cara tambahan lainnya.

UJI KLINIS

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! Pengaturan ruangan molekuler

Area 1

Ruang preparasi reagen

Tekanan positif

Area 2 Ruang preparasi

/ kontrol spesimen

Tekanan negatif

Area 3 Ruang

amplifikasi dan analisis

Tekanan negatif

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! Alternatif : pengaturan ruangan molekuler

• Ruang preparasi reagen (LAF)

• Ruang preparasi spesimen (BSC) Area 1

• Ruang amplifikasi dan analisis Area 2

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! Prinsip

• Alur satu arah

• Petugas atau spesimen dari “area bersih” ke “area kotor”.

• Amplifikasi free product ke rich product

• Setiap area mempunyai peralatan dan perlengkapan

• Lepaskan APD sebelum meninggalkan satu area

• Hindari atau batasi arah sebaliknya

• Persediaan yang dapat digunakan kembali dengan arah sebaliknya perlu di bleach.

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Point of Care (PoC) dan near-POC Assays termasuk antigen-detecting RDTs (Ag-RDT) tanpa ekstraksi asam nukleat

• GMPP

• APD sesuai

• Staf yang kompeten

• Memungkinkan dilakukan di sebuah meja kerja (di luar lab) Area berventilasi baik

Diberi alas absorben

Bebas dari kekacauan

• Pilihan : BSC / glovebox

Gunakan primary containment jika ada

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

VENTILASI Pergerakan udara segar di sekitar ruang tertutup atau dengan sistem otomatis

Natural • Dibangun khusus,

bukaan bangunan (jendela, pintu, lubang burung, cerobong asap, dll.)

Assisted (campuran) • Mengandalkan daya

penggerak alami untuk memberikan aliran (desain) yang diinginkan

Ventilasi Mekanis dengan penggerak kipas. • Dipasang di jendela,

dinding, saluran udara

Manajemen memutuskan jenis ventilasi lab berdasarkan kesesuaian dan ketersediaan

https://medicalguidelines.msf.org/viewport/TUB/latest/appendix-18-advantages-and-disadvantages-of-

ventilation-techniques-20324472.html

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

DESINFEKSI

Natrium hypochlorite (bleach)

•1000 bagian per juta [ppm] (0,1%) untuk permukaan

•10.000 ppm (1%) untuk desinfeksi tumpahan sampel

•Siapkan pengenceran baru setiap 24 jam

•Waktu kontak ≥10 menit

Ethanol (EtOH) 62-71%

•Waktu kontak ≥ 10 menit

Hydrogen peroxide (H2O2 ) 0.5%

Senyawa amonium kuarter dan senyawa fenolik

•Jika digunakan, maka harus sesuai dengan rekomendasi pabrikan

Senyawa lain

•Sesuai pabrikan

• Gunakan dengan hati-hati di area yang berventilasi baik

• Berikan waktu kontak yang sesuai

• Jangan gunakan bahan kimia kadaluwarsa

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! INAKTIVASI

•Kimia Beberapa buffer ektraksi RNA

Formalin untuk jaringan

•Radiasi Sinar gamma (≥ 1 Mrad)

•Pemanasan Klasik (suhu 65 C selama 30 menit waterbath, dll)

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! PRINSIP DEKONTAMINASI

Eliminasi atau merusak semua agen biologi yang hidup maupun spora

Eliminasi agen biologi yang hidup

Mengurangi agen biologi yang hidup

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! PRINSIP DEKONTAMINASI

•Pengendalian risiko biologis Setiap permukaan atau bahan yang diketahui atau berpotensi terkontaminasi

Benchtop, permukaan interior BSC, peralatan dan perangkat

• Identifikasi dan pisahkan material yang terkontaminasi Benda tajam

Limbah yang tercemar

Limbah kimia Sodium azide (buffer Ag-RDT), gas beracun dan mudah meledak

Limbah umum (tidak berbahaya)

•Semua material dan cairan terkontaminasi Dekontaminasi di tempat untuk memungkinkan penanganan atau pengemasan lebih lanjut dan

transportasi yang aman ke lokasi pembuangan akhir atau lain.

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! PENGELOLAAN LIMBAH

• Otoklaf atau insinerasi limbah infeksius 1

• Limbah adalah Kategori B untuk keperluan transportasi

Limbah medis yang diatur UN 3291

• Pembuangan kartrid uji POC bekas

Baca instruksi khusus pabrikan

Baca lembar data keamanan material

Ikuti peraturan lokal dan nasional untuk pembuangan

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! WARNING

• Hati-hati saat bekerja dengan produk yang mengandung guanidinium iso / tiosianat (GITC / GTC) karena GTC melisiskan sel dan mengubah sifat nuklease (RNase / DNase)

• Baca dan ikuti petunjuk pabrikan dan Lembar Data Keselamatan (SDS / MSDS) Jangan gunakan bleach untuk GTC reaksi menghasilkan gas sianida dan klorin

GTC menonaktifkan organisme, jadi bleach tidak diperlukan

Limbah GTC adalah Limbah Berbahaya dan Beracun bagi kehidupan laut dan akuatik

Jangan dibuang ke aliran air limbah

Pisahkan limbah GTC

Buang sesuai dengan pedoman federal, negara bagian dan lokal

• Produk yang mengandung GITC

Kebanyakan kit ekstraksi DNA / RNA

Kartrid GeneXpert

TRIzol ™ dan produk serupa

Beberapa media transportasi virus (misalnya PrimeStore ® MTM, Zymo DNA / RNA Shield)

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! Penerimaan Spesimen

• Spesimen yg diterima lab harus memiliki informasi dan identitas yg jelas

• Personil terlatih dalam penanganan bahan biologis

• Desinfeksi pada bagian permukaan kemasan

• Pencatatan

• Laboratory transfer box

• Dibuka di dalam Biosafety Cabinet (BSC)

• Spesimen rusak, pecah atau bocor, maka lakukan prosedur penanganan insiden dengan spill kit dan desinfektan

• Setelah spesimen dibuka dan akan diuji, maka segera inaktifasi spesimen dengan lisis buffer yang sesuai

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! Penyimpanan Spesimen

• SOP penyimpanan spesimen COVID-19

• Masing masing spesimen COVID-19 memiliki identitas dan ketertelusuran yang jelas selama masa penyimpanan.

• Inventarisir semua spesimen COVID-19 yang disimpan

• Jadwal monitoring penyimpanan spesimen COVID-19

• Pengawasan terhadap pengambilan atau penggunaan spesimen COVID-19 beserta pencatatan

• SOP pemusnahan spesimen COVID-19 beserta berita acara pemusnahan secara berkala jika diperlukan.

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! Respon Emergensi thd Insiden

• SOP Insiden, petugas dilatih sesuai SOP dan refresh periodik

• P3K

• Eye washer

• Tersedia spill kits

• Setiap insiden harus dilaporkan kepada kepala laboratorium atau Biosafety officer/K3 dan didokumentasikan

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Kesehatan Kerja

• Kesehatan petugas lab selalu dimonitor oleh kepala lab

• Diperiksa rutin dan didokumentasikan

• Pemeriksaan kesehatan (MCU) atau status kesehatan petugas lab mungkin dibutuhkan untuk verifikasi keamanan lab

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

! REFERENSI • WHO Laboratory biosafety guidance related to coronavirus disease (COVID-19)

Interim guidance 13 May 2020

https://www.who.int/publications/i/item/laboratory-biosafety-guidance-related-to-coronavirus-disease-(covid-19)

Fin

d m

ore

Pow

erP

oin

t te

mpla

tes

on p

rezentr

.com

!

Terima kasih tenaga kesehatan