LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA

Uji KLT Dengan Berbagai Eluen

Oleh Kelompok A2

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2015

BAB I

Otniel Aji Yogatama 135070500111015Fadhila Putri Imananta 135070507011116Rizcha Anastasia W 135070500111008Luh Anindya Savira L 135070500111026Niela Rizki Amalia 135070507111002Almas Mazaya Husna 135070507111011

PENDAHULUAN

1.1. Tujuan PraktikumTujuan dilaksanakannya praktikum uji KLT dengan berbagai eluen yaitu agar mahasiswa

mampu menjelaskan tentang kaitan antara polaritas eluen dengan harga Rf.

1.2. Tinjauan PustakaKromatografi adalah metode pemisahan fisik, dimana komponen – komponen yang

dipisahkan didistribusikan diantara dua fasa. Fasa pertama yaitu suatu lapisan stasioner (fasa diam) dengan permukaan yang luas dan fasakeua sebagai fluida yang mengalir lembut disepanjang landasan stasioner (fasa bergerak) Fase stasioner dapat berupa cairan atau padatan, sedangkan fasa bergerak dapat berupa cairan maupun gas (Day and Underwood, 2002). Kromatografi memisahkan campuran berdasarkan perbedaan afinitasnya (Sumawinata, 2011).

Kromatogafi Lapis Tipis (KLT) atau Thin Layer Chromatography (TLC) merupakan kromatografi yang fase stasionernya berupa lapisan tipis atau suatu absorban misalnya silica gel, dilapiskan pada pelat dan fase geraknya adalah suatu pelarut (eluen) campur. Sampel ditotolkan pada plat, kemudian plat diberdirikan dengan ujug bawah pada pelarut campur. Ketika pelarut naik akbiat aksi kapiler pada absorben, komponen sampel terbawa dengan kecepatan yang berbeda dan dapat dilihat sebagai deretan titik-titik setelah pelat dikeringkan dan dilihat dibawah sinar UV (Sumawinata, 2011).

Senyawa piperin(C17H19NO3) merupakan golongan senyawa alkaloid, senyawa ini termasuk basa tidak optis aktif, terbentuk Kristal berwarna kuning, sedikit larut dalam air, larut dalam alkohol, eter, dan benzene. Apabila piperin terhidrolisis akan menjadi piperidin dan asam piperat, mempunyai berat molekul 285, 3377, titik lebur 128-132oC, titik didih 498, 524oC, kelarutan air 40mg/L(18oC). pelarut yang digunakan untuk piperin merupakan pelarut non polar. Dimana pelarut non polar akan melarutkan zat yang non polar (Istiqomah, 2013).

Etil asetat atau asetic ester (C4H8O2) memiliki Kd 6,11 yang menunjukkan bahwa etil asetat merupakan senyawa yang non polar. Senyawa ini dapat melarutkan senyawa yang non polar. Memiliki berat molekul 88,1. Senyawa ini biasa digunakan sebagai pelarut atau sebagai flavoring agent (perasa), memiliki titik didh 77˚C dengan massa jenis 0,0902 g/cm3 pada suhu 20˚C, titik beku -83,6˚C, memiliki konstanta dielektrik 6,11.etil asetat larut dalam 10 bagian air pada suhu 25˚C, tetapi lebih larut pada

temperature yang rendah. Dapat dicampur dengan aseton, klorofrom, diklorometana, etanol (957), eter, dan beberapa pelarut organik (Rowe, 2009).

Toluen atau C6H5CH3 memiliki Kd sebesar 2,379 sehingga merupakan senyawa yang non polar. Senyawa ini dapat melarutkan senyawa yang non polar. Memiliki bobot 0,860 gram sampai 0,865 gram /ml3, mudah terbakar,kelarutannya praktis tidak larut dalam air, dapat bercampur dengan etanol mutlak P. jarak didihnya tidak kurang dari 95% tersuling pada sushu antara 109˚C dan 111˚C (Depkes RI, 1979).

Pemilihan eluen didasarkan pada polaritas senyawa, biasanya eluen yang digunakan merupakan campuran dari beberapa cairan yang berbeda polaritas. Kepolaran eluen akan mempengaruhi nilai Rf yaitu perbandingan antara jarak akhir komponen (dilihat di bawah sinar UV) dan jarak tempuh eluen atau jarak media elusi. Sampel yang memiliki nilai Rf besar maka memiliki kepolaran yang rendah. Hal tersebut karena senyawa yang lebih polar akan tertahan kuat pada fasa diam (sampel tertahan pada fase diam yang bersifat polar) sehingga mehasilkan nilai Rf yang rendah. Rf pada KLT yang baikyaitu sekitar 0,2-0,8 yang jika nilainya di bawa 0,2 maka dapat diatasi dengan mengurangi kepolaran dari eluennya dan apabila nilainya lebih dari 0,8 maka dapat diatasi dengan penambahan kepolaran pada eluen yang akan digunakan (Ewing Galen Wood, 1985).

Kapasitas elusi (kekuatan solven) pelarut didefinisikan sebagai kemampuan untuk memindahkan solut tertentu. Kekuatan elusi lebih tinggi jika pergerakan solut tinggi. Namun, kekuatan elusi juga bergantung pada sorben dan karakter kimiawi solut. Solven yang disukai dalam KLT adalah solven dengan titik didih rendah, viskositas rendah, dan toksisitas rendah. Titik didih yang rendah membantu evaporasi fase gerak dari permukaan lapisan, sedangkan pelarut yang viskos akan memperlambat waktu pengembangan dan bentuk spot yang lebih terdifusi (Fried, 1996).

Konstanta dielektrik pelarut campur atau suatu eluen dapat ditentukan berdasarkan konstanta dielektrik pelarut campur dengan rumus sbb (Tim Pengajar Farmasi Fisik, 2014) :

Kd Pelarut Campur=(V 1 xKd 1 )+ (V 2 xKd 2 )+. …

V 1+V 2. ...

Pada praktikum uji KLT dengan berbagai eluen ini digunakan 3macam perbandingan pelarut campur yaitu antara Toluen dan Etil Asetat. Dari nilai Kd Toluen 2,379 dan Kd Etil Asetat 6,11 maka dapat dihitung Kd pelarut campur sebagai berikut:

• Toluen : Etil Asetat = 70:3

Vol toluen = 9,59ml ; Vol Etil Asetat = 0,41ml

Kd=(9,59 x 2,379 )+(0,41 x 6,11)

10=2,532

• Toluen : Etil Asetat = 70:30

Vol toluen = 7ml ; Vol Etil Asetat = 3ml

Kd=(7 x 2,379 )+(3x 6,11)

10=3,4983

• Toluen : Etil Asetat = 35:3

Vol toluen = 9,21ml ; Vol Etil Asetat = 0,79ml

Kd=(9,21x 2,379 )+(0,79x 6,11)

10=2,674

BAB II

METODE

2.1. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan pada praktikum uji KLT dengan berbagai eluen yaitu beaker glass, plat KLT (silica gell), pipa kapiler, chamber, kaca penutup chamber, semprotan penampak noda atau sinar UV, penggaris bening, pensil 2B, pinset, pemanas, dan kertas saring. Sedangkan bahan yang digunakan pada uji KLT dengan berbagai eluen yaitu senyawa piperin, kloroform, toluene, etil asetat, reagen vanillin asam sulfat.

2.2. Prosedur Kerja

Diambil sedikit Digunting dengan ukuran 2x10cm sebanyak 3 buah

Dilarutkan dengan kloroform Diberi tanda batas bawah dan atas

Larutan piperin ditotolkan pada setiap KLT tepat pada batas bawah

Ditambahkan toluen 9,59mlDitambahkan 0,41ml etil asetalDimasukkan kertas saringDitutup dg kaca penutup, ditunggu hingga jenuh yang di tandai dg sdh terbasahinya kertas saring scr keseluruhanKertas saring dikeluarkan

Ditambahkan toluen 7mlDitambahkan etil asetal 3mlDimasukkan kertas saringDitutup dg kaca penutup, ditunggu hingga jenuh yang di tandai dg sdh terbasahinya kertas saring scr keseluruhanKertas saring dikeluarkan

Ditambahkan toluen 9,21mlDitambahkan etil asetal 0,79Dimasukkan kertas saringDitutup dg kaca penutup, ditunggu hingga jenuh yang di tandai dg sdh terbasahinya kertas saring scr keseluruhanKertas saring dikeluarkan

1plat dimasukkan ke dalam chamber menggunakan pinset, ditutup, diamati hingga terelusi hingga batas atas pd plat

1plat dimasukkan ke dalam chamber menggunakan pinset, ditutup, diamati hingga terelusi hingga batas atas pd plat

1plat dimasukkan ke dalam chamber menggunakan pinset, ditutup, diamati hingga terelusi hingga batas atas pd platPlat dikeluarkan dr chamber

Piperin Plat KLT (Silica gell)

Hasil Hasil

Hasil

Chamber A Chamber B Chamber C

HasilHasilHasil

Plat dikeluarkan dr chamber dan dibiarkan kering terlebih dahuluDisemprot dengan reagen vanilin asam sulfatDipanaskan pd 100˚C slm 10menitDilihat di bawah sinar UV χ254 nm dan χ365nmDi ukur jarak noda dari batas bawah

Plat dikeluarkan dr chamber dan dibiarkan kering terlebih dahuluDisemprot dengan reagen vanilin asam sulfatDipanaskan pd 100˚C slm 10menitDilihat di bawah sinar UV χ254 nm dan χ365nmDi ukur jarak noda dari batas bawah

dan dibiarkan kering terlebih dahuluDisemprot dengan reagen vanilin asam sulfatDipanaskan pd 100˚C slm 10menitDilihat di bawah sinar UV χ254 nm dan χ365nmDi ukur jarak noda dari batas bawah

Hasil HasilHasil

BAB III

HASIL

3.1. Pengamatan KLT dan Perhitungan Rf

Foto Plat KLT dengan sinar UV χ366

A B C

A B C

Foto Plat KLT dengan sinar UV χ254

1. Plat pada Chamber A

• χ254 → jarak migrasi noda dari batas bawah 0,5cm

Rf =0,58

=0,0625

• χ366 → jarak migrasi noda dari batas bawah 5,3cm

Rf =5,38

=0,6625

2. Plat pada chamber B

• χ254 → jarak migrasi noda dari batas bawah 3,4cm

Rf =3,48

=0,425

• χ366 → jarak migrasi noda dari batas bawah 7,4cm

Rf =7,48

=0,925

3. Plat pada chamber C• χ254 → jarak migrasi noda dari batas bawah 1,25cm

Rf =1,258

=0,15625

• χ366 → jarak migrasi noda dari batas bawah 6,5cm

Rf =6,58

=0,8125

3.2. Lempeng Plat KLT

BAB IV

PEMBAHASAN

Piperin merupakan senyawa non polar dimana senyawa non polar dapat larut pada pelarut non polar, semi polar dan polar. Pada praktikum kali ini peperin digunakan sebagai sampel yang akan di uji pada KLT. Sedangkan pelarut yang digunakan pada praktikum kali ini yaitu toluen dan etil asetat. Dimana toluen memiliki nilai Kd 2,379 , nilai tersebut mengindikasikan bahwa toluen termasuk senyawa non polar. Sedangkan pelarut yang kedua yaitu etil asetat memiliki Kd 6,11 yang mengindekasikan bahwa etil asetat lebih polar dari pada toluen. Pada praktikum kali ini toluen dan etil asetat dikombinasikan untuk mendapatkan Kd pelarut yang sesuai sehingga menghasilkan nilai Rf yang baik yaitu 0,2-0,8. Kombinasi toluen dan etil asetat yang digunakan tigas jenis perbandingan yaitu 70:3 ; 70:30 ; dan 35:5. Dari ketiga kombinasi tersebut dilakukan perhitungan nilai Kd, dengan nilai Kd perbandingan 70:3 didapatkan sebesar 2,532, perbandingan 70:30 didapatkan sebesar 3,4983, perbandingan 35:5 didapatkan sebesar 2,674. Setelah dilakukan perhitungan nilai Kd, maka dapat disimpulkan bahwa dapat disimpulkan eluen campuran antara toluen dengan etil asetat yang memiliki nilai kepolaran paling tinggi yaitu perbandingan 70:30. Sesuai dengan teori like desolve like, dimana kombinasi eluen toluen dan etil asetat melarutkan piperin.

Dari tiga macam perbandingan kombinasi antara toluen dengan etil asetat menghasilkan nilai Rf yang berbeda-beda setelah dilihat di bawah sinar UV dengan χ366 dan χ254. Pada perbandingan 70:3 dihasilkan nilai Rf χ254 sebesar 0,0625 dan χ366 sebesar 0,6625; pada perbandingan 70:30 dihasilkan nilai Rf χ254 sebesar 0,425 dan χ366 sebesar 0,925; padaperbandingan 35:5 dihasilkan nilai Rf χ254 sebesar 0,15625 dan χ366 sebesar 0,8125. Dari nilai Rf yang didapatkan dapat disimpulkan bahwa perbandingan 70:30 menghasilkan nilai Rf yang mendekati baik. Apabila nilai Rf terlalu rendah (<0,20) maka dapat ditambahkan pelarut polar untuk menambah kepolaran dari pelarut tersebut.

BAB V

KESIMPULAN

Dari percobaan yang telah dilakukan untuk mengetahui pengaruh eluen pada uji KLT ini dapat disimpulkan bahwa kombinasi pelarut campur antara toluen dan etil asetat yang menghasilkan nilai Rf yang paling baik yaitu perbandingan 70:30 yang memiliki nilai kd pelarut campur yaitu 3,4983 dan dengan perbandingan ini dihasilkan nilai Rf sebesar χ254 sebesar 0,425 dan χ366 sebesar 0,925.

DAFTAR PUSTAKA

Day, R.A Jr and Underwood. 2006. Analisis Kimia Kuantitatif Ed Keenam. Erlangga, Jakarta

Depkes, RI. 1979. Farmakope Indonesia III. Depkes RI, Jakarta

Edwin, Galen Wood. 1985. Instrumental of Chemical Analysis Fifth Ed. McGraw Hill, Singapore

Fried, B., Sherma, J. 1996. Instrumental of Chemical Analysis 5th Edition. McGraw-Hill, Singapore.

Istiqomah. 2013. Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi Dan Sokletasi Terhadap Kadar

Piperin Uah Cabe Jawa. UIN syarif Hidayatullah , Jakarta

Rowe, Raymond. 2009. Handbook of Pharmaceutical Excipients ed 6th. Pharmacetical Press, London

Sumawinata, nartan drg. 2011. Senarai Istilah Kedokteran Gigi. EGC, Jakarta

Tim Pengajar Farmasi Fisik. 2014. Petunjuk Praktikum Farmasi Fisik. PSF FK UB, Malang