LAporan enumerisasi

8/7/2019 LAporan enumerisasi

1/14

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Beratus-ratus spesies dapat menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita,

termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit baik sebagai flora normal atau bahkan

patogenik. Oleh karena sebab itu, farmasi dituntut untukmengembangkan penelitian pada

obat-obatan yang dapat menekan laju pertumbuhan mikroba-mikroba tersebut.

Contohnya, antibakteri, baik bakteriostatik maupun bakterisid dan antimikotika

baik itu fungisid atau fungistatik. Obat-obatan ini tidak saja bermanfaat langsung pada

manusia namun juga pada produk makanan, minuman, dan kosmetika. Sifat0sifat obat ini

dapat dimanfaatkan untuk mengawetkan produk-produk tersebut.

Kemampuan atau efektivitas pengawet sangat mempengaruhi stabilitas produk

obat, makanan, minuman atau kosmetika. Oleh sebab itu dibutuhkan evaluasi efektifitas

pengawet. Parameter evaluasinya adalah jumlah sel mikroba yang tersisa atau masih tetap

ada setelah pengawet bekerja. Muncul pertanyaan, bagaimana cara menghitung jumlah sel

mikroba ini ?

Berangkat dari hal inilah, praktikum Enumerasi Sel sebaiknya dipahami dengan

benar agar pertanyaan diatas dapat dijawab oleh calon-calon farmasis. Pengetahuan

mengenai cara enumerasi sel merupakan salah satu modal penunjang keterampilan

seorang farmasis.

1.2 Tujuan

Mahasiswa mengetahui dan dapat melakukan cara penghitungan mikroorganisme.


2/14

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Definisi Pertumbuhan Mikroorganisme

Pertumbuhan mikroorganisme adalah pertambahan jumlah sel yang juga berarti

pertambahan jumlah organisme yang membentuk populasi atau suatu biakan. Para

mikroorganisme penambahan kualitas isi dan kandungan di dalam sel dapat berubah

langsung menjadi pertumbuhan populasi, sehingga karena terlalu cepat perubahannya,

sulit untuk diamati dan dibedakan (Waluyo, 2007).

2.2 Pengukuran Pertumbuhan Mikroorganisme

Hakikatnya, terdapat 2 macam pengukuran dasar yaitu penentuan jumlah sel dan

penentuan massa sel. Pengukuran jumlah sel biasanya dilakukan bagi organismebersel

tunggal (misalnya bakteri), sedangkan penentuan massa sel dapat dilakukan tidak hanya

bagi organisme bakteri tunggal tetapi juga organisme berfilamen (misalnya kapang)

(Hadioetomo, 1990).

2.2.1 Penetapan Jumlah Bakteri

a) Hitungan mikroskopik secara langsung

Pada metode ini, dihitung semua sel yang nampak,sehingga dengan

demikian sel-sel mati dan cacat ikut dihitung. Cara yang paling banyak

digunakan untuk penetapan jumlah sel total ialah penghitungan dengan

mikroskop sel-sel yang disebarkan dalam lapis tipis dalam bilik hitung (contoh

menurut Neubauer, Thoma, atau Petroff-Hauser) (Schlegel, 1994).

Metode Petroff-Hauser

Hitungan mikroskopik dilakukan dalam pertolongan kotak-kotak skala,

dimana dalam setiap ukuran skala seluas 1mm2 terdapat 25buah kotak besar

dengan luas 0,04 mm2, dan setiap kotak besar terdiri dari 16 kotak-kotak kecil.

Tinggi sampel yang terletak di antara kaca benda dan kaca penutup adalah 0,02

mm. Jumlah sel dalam beberapa kotak besar dapat dihitung, kemudian dihitung

jumlah sel rata-rata dalam kotak besar. Jumlah sel per ml sampel dapat dihitung

sebagai berikut (Waluyo, 2007) :


3/14

Jumlah sel/ml sampel = Jumlah sel/kotak besar x 25 kotak x 1/0,02 x 103

Jumlah sel/mm2

Jumlah sel/mm3

Jumlah sel/cm(ml)3

Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per kotak besar x 253 x 50 x 10

Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per kotak besar x 1,25 x 106

b) Hitungan Cawan

Prinsip dari metode ini adalah bila sel mikroba yang masih hidup

ditumbuhkan pada medium, maka mikroba tersebut akan berkembang biak dan

membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan kemudian dihitung tanpa

menggunakan mikroskop (Waluyo, 2007).

Metode hitungan cawan dibedakan atas dua cara, yakni metode tuang

(pour plate) dan metode permukaan (surface / spread plate). Jumlah kolonidalam

sampel dapat dihitung sebagai berikut (Waluyo, 2007) :

c) Metode MPN (Most Probable Number)

Pada metode MPN digunakan medium cair di dalam tabung reaksi.

Perhitungan MPN berdasarkan pada jumlah tabung reaksi yang positif, yakni

yang ditumbuhi oleh mikroba setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu

(Waluyo, 2007).

Metode MPN sering digunakan dalam pengamatan untuk menghitung

jumlah bakteri yang terdapat di dalam tanah seperti Nitrosomonas dan

Nitrobacter. Kedua jenis bakteri ini memegang peranan penting dalam

meningkatkan pertumbuhan dan produksi tanaman, sehubungan dengan

kemampuannya dalam mengikat N2 dari udara dan mengubah amonium menjadi

nitrat (Sutedjo, 1991).

Koloni per ml atau per gram = Jumlah koloni per cawan x 1

Faktor Pengenceran


4/14

2.2.2 Perhitungan Massa Sel Secara Tidak Langsung

Perhitungan ini terdiri dari analisa komponen sel dan produk katabolisme.

Perhitungan massa sel secara tidak langsung sering digunakan dalam mengamati

pertumbuhan sel selama proses fermentasi, dimana komponen substrat atau bahan

yang difermentasi dapat diamati dan diukur (Waluto, 2007).

Metode pengukuran ini dipakai jika metode lain tidak dapat digunakan,

misalnya pada kerapatan sel yang amat rendah (Schlegel, 1994).

2.2.3 Perhitungan Massa Sel Secara Langsung

Metode ini terdiri dari cara volumetrik, gravimetrik, dan turbidimetrik.

Metode volumetrik dan gravimetrik,pengukuran volume dan berat sel dilakukan

terlebih dahulu dengan menyaring mikroorganisme tersebut (Waluyo, 2007).


5/14

BAB III

METODE PERCOBAAN

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam percobaan ini adalah :

a. Cawan petri f. Pembakar bunsen

b. Counter g. Petroff-Hauser Counting Chamber

c. Cover glass h. Pipet ukur

d. Jarum inokulum i. Tabung reaksi

e. Mikroskop

3.1.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah :

a. Alkohol

b. Aquadest steril

c. Bakteri / jamur

d. Tissue

3.2 Prosedur Kerja

3.2.1 Perhitungan langsung (dengan kotak sedang)

Petroff-Hauser Counting Chamber

-dibersihkan dengan alkohol 70%

-dikeringkan dengan tissue

-diletakkan cover glass di atasnya

-ditambahkan 50L suspensi sel mikroba

pada parit kaca counting chamber

-dibiarkan sejenak hingga sel diam

Counting Chamber + Sel Mikoba

-diletakkan di meja benda mikroskop

-dicari fokusnya pada perbasaran 40x10

-dilakukan perhitungan kasar (koloni harus :30-300) untuk menentukan perlu atau


6/14

tidaknya pengenceran

-dihitung sampel paling tidak sebanyak 5 kotak

sedang

Hasil (Jumlah sel/ml samapel)

3.2.2 Perhitungan tidak langsung

Suspensi bakteri

-diencerkan tiga tingkat 10-6 ,10-9 ,10-8 dengan

aquadest steril

-ditanam dengan metode tuang masing-masing

pengenceran dalam 3 cawan petri

3 cawan petri/ media tanaman-diinkubasi pada suhu 30c selama 24-48 jam

-diamati dan dihitung jumlah koloni yang

tumbuh dari setiap pengenceran

-dipilih cawan petri yang sesui untuk total plate

count (koloni : 30-300)

-ditentukan jumlah mikroorganisme/ml sampel

Hasil = Jumlah mikroorganisme/ml sampel

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN


7/14

4.1 Hasil

4.1.1 Total Plate Count

Tingkat pengenceran = 10-3 atau 1000 kali

4.1.2 Mikroskop Langsung

Isolat = Bakteri air, NA P2

Banyakna sel terhitung = 503

4.2 Pembahasan

4.2.1 Total Plate Count

Jumlah koloni yang muncul pada cawan petridish merupakan suatu moleks

bagi jumlah organisme yang dapat hidup yang terkandung dalam sampel. Inti dalam

perhitungan jumlah koloni dengan metode ini adalah pengenceran dan pencawanan

sampel dengan teliti. Pengenceran dilakukan agar jumlah koloni dalam bakteri

sesuai (tidak terlalu padat ataupun jarang), yakni memenuhi syarat 30-300 koloni per

cawan.

Metode hitungan cawan yang praktikan gunakan adalah metode tuang (pour

plate), dalam metode ini ditamakan 1 ml sampel dengan faktor pengenceran 10

-3

dalam 15 ml media NA. Cawan lebih baik dihitung jumlah koloninya dengan

bantuan colony counter daripada cara manual , agar hasil perhitungan lebih akurat.

Koloni dihitung dengan ketentuan : beberapa koloni yang bergabung menjadi

kumpulan koloni besar dihitung sebagai satu koloni dan satu deretan rantai koloni

yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni

Bantuan dari colony counter ini dapat diperoleh jumlah koloni sampel air

yang memenuhi syarat 30-300 jumlah koloni, sementara sampel tanah lebih dari 300

koloni. Hal ini dapat disebabkan variasi atau tingkat pengenceran yang hanya 1 jenis

yakni 10-3. Padahal seharusnya dibuat tingkat pengenceran lainnya agar dapat dipilih

Media Jumlah Koloni

Sampel air NA P1

Sampel air NA P2

Sampel tanah NA P1

Sampel tanah NA P2

81

158

337

467


8/14

cawan dengan jumlah koloni paling ideal. Meskipun hal ini telah berusaha

diantisipasi dengan duplo cawan, tetap saja kesalahan ini terjadi.

Jumlah koloni yang lebih dari 300 menandakan pengenceran 10 -3 atau 100

kali terlalu rendah untuk sampel tanah. Seandainya sampel ditanamkan dengan

beberapa tingkat pengenceran, akan dapat diperoleh jumlah koloni yang ideal dalam

tingkat pengenceran yang baik.

Sampel pada percobaan ini dilakukan duplo. Artinya untuk melaporkan CFU

atau jumlah satuan pembentuk koloni, data harus diambil dari kedua cawan. Jumlah

koloni dalam sampel dilaporkan dengan menentukan nilai perbandingan CFU/ml

sampel yang tertinggi terhadap yang terendah. Apabila hasil perbandingan kurang

dari sama dengan 2, untuk CFU/ml diambil dari rata-rata kedua cawan, sementara

bila hasil perbandingan lebih dari 2, dilaporkan hanya yang terkecil.

Cawan 1 maupun cawan 2 pada sampel tanah memiliki jumlah koloni lebih

dari 300, sehingga CFU/ml dihitung dan dilaporkan sebagai 300.000 (faktor

pengenceran 1000 kali) CFU/ml dengan tetap menyertakan jumlah yang sebenarnya

dalam tanda kurung.

Akan tetapi, perbedaan jumlah koloni yang terhitung dalam cawan duplo

harus diperhitungkan atau dipertimbangkan dengan cermat. Hal ini disebabkan

jumlah sel yang berdekatan dan teramati seolah-olah sebagai satu koloni seringkali

mengurangi jumlah organisme yang sebenarnya. Selain itu, pada cawan 1 dan 2

(duplo) seringkali menjadi kurang terkait / berhubungan karena begitu sampel

ditanamkan pada medium dan kondisi inkubasi yang berbeda, jumlah sel yang

dihasilkan pun berbeda. Meskipun demikian, metode ini masih disukai sebab

kesalahan penghitungan jumlah sel karena keterlibatan sel mati dapat diabaikan.

Koloni yang terlihat oleh mata telanjang hanyalah sel hidup.

4.2.2 Mikroskop Langsung

Penghitungan jumlah sel dengan metode mikroskopis dilakukan dengan

bantuan bilik hitung Petroff-Hauser (Hemositometer). Hemositometer terdiri dari 9

kotak besar yang masing-masing luasnya 1 mm2.


9/14

Daerah bidang hitung di bawah mikroskop

Perhitungan dilakukan pada 5 daerah hitung diatas. Dibawah mikroskop

terlihat titik-titik kecil pada daerah hitung tersebut. Titik kecil ini bisa jadi adalah sel

hidup saja atau bahkan sel hidup dan sel mati. Jadi memang pada metode ini terdapat

kelemahan dimana sel hidup dan sel mati sulit dibedakan. Pengamatan oleh

praktikan menunjukkan sel-sel yang terpisah dengan baik. Apabilasel bergerombol,

cara mengatasinya adalah dengan menambahkan Na.EDTA dan Tween 80 0,1%

untuk meneceraiberaikan sel-sel tersebut.

Oleh karena perhitungan dilakukan pada 5 kotak sedang, maka setiap kotak

sedang terdiri dari 16 kotak kecil, maka jumlah sel terhitung dibagi 80(16x5), utnutk

mendapatkan rata-rata jumlah sel per kotak kecil. Karena jumlah sel yang ingindiketahui adalah jumlah sel per mm3, maka rata-rata jumlah tersebut dibagi volume 1

kotak kecil yakni luas x tinggi kotak kecil ( 1/400 mm2 x 1/10mm ). Dan karena sampel

yang dihitung sebenarnya merupakan pengenceran 1000 kali, maka untuk mencari

jumlah sel yang sebenarnya harus dikali 1000. Berdasarkan penjelasan di atas

diperoleh persamaan :

1mm

Daerah

hitung

= Rata-rata sel x pengenceran

Volume kotak kecil


10/14

= ( Jumlah sel terhitung/80 ) x 1000

Luas x tinggi

= ( Jumlah sel terhitung/80 ) x 1000

1/400 mm2 x 1/10mm

= Jumlah sel terhitung x 400 x 10 x 1000

80 x mm3


11/14

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Cara perhitungan jumlah sel dapat dilakukan dengan hitungan mikroskopik (secara

langsung) dan hitungan cawan (Total Plate Count). Berdasarkan metode TPC diperoleh

1,25x105 CFU/ml untuk sampel bakteri air dan 3,0x105 CFU/ml untuk sampel bakteri

tanah. Sedangkan untuk metode mikroskopis diperoleh 32,5x107 sel/ml untuk bakteri air

pada media NA. Pengenceran yang dilakukan pada praktikum ini adalah 10-3 dan masih

terlalu rendah untuk sampel bakteri tanah.

5.2 Saran

Penanaman sampel mikrobasebaiknya dilakukan dalam paling sedikit tiga tingkat

pengenceran dan penggunaan colony counter ataupuncounter elektronis sangat dianjurkan

untuk menghindari kesalahan matematis dalam penghitungan jumlah sel.


12/14

DAFTAR PUSTAKA

Hadioetomo, Ratna Sri. 1990. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. Jakarta : PT Gramedia

Pustaka Utama.

Schlegel, Hans G. 1994. Mikrobiologi Umum. Edisi Keenam. Yogyakarta : UGM Press.

Sutedjo. 1991. Mikrobiologi Tanah. Jakarta : Rineka Cipta.

Waluyo, Lus. 2007. Mikrobiologi Umum. Malang : UMM Press.


13/14

LAMPIRAN

Metode Perhitungan :

a) Total Plate Count

Jumlah mikroorganisme = Jumlah koloni terhitung x 1 CFU/ml

Pengenceran

b) Mikroskopis Langsung

Jumlah sel = Banyaknya sel terhitung x 4000 x pengenceran sel/ml

80

Analisa Data :

a) Total Plate Count

a.1 Sampel air NA P1

Koloni / ml = 81 x 1/10-3 CFU/ml = 81.000 CFU/ml

a.2 Sampel air NA P2

Koloni / ml = 158 x 1/10-3

CFU/ml = 158.000 CFU/ml

Perbandingan :

Koloni / ml NA P2 158.000 CFU/ml

Koloni / ml NA P1 81.000 CFU/ml

Nilai perbandingan hasil tertinggi dan terendah dari cawan duplo < 2, maka jumlah

koloni air pada media NA adalah rata-rata P1 dan P2 :

NA P1 + NA P2 81.000 + 158.000 CFU/ml = 1,2 x 105 CFU/ml

2 2

a.3 Sampel tanah NA P1


dilaporkan : 3,0 x 10

5

CFU/ml ( 3,4 x 10

5

CFU/ml )

a.4 Sampel tanah NA P2

= = 1,95

= = 119.500


14/14


dilaporkan : 3,0 x 105 CFU/ml ( 4,7 x 105 CFU/ml )

Perbandingan :

Koloni / ml NA P2 3,0 x 105 CFU/ml

Koloni / ml NA P1 3,0 x 105 CFU/ml

Hasil perbandingan < 2, sehingga jumlah koloni bakteri tanah pada media NA

adalah rata-rata P1 dan P2 :

NA P1 + NA P2 300.000 + 300.000

2 2

b) Mikroskop Langsung

Jumlah sel bakteri air pada NA P2 = 503 / 80 x 4000 x 10-3

= 2,515 x 107 sel/ml

= 2,5 x 107 sel/ml

= = 1

= = 300.000 = 3,0 x 105 CFU/ml

LAporan enumerisasi

Documents

Transcript of LAporan enumerisasi