36

LAMPIRAN

37

Lampiran 1. Contoh Kromatogram Kurva Baku Benzalkonium Klorida

a. Larutan Baku Benzalkonium Klorida 20 µg/mL

b. Larutan Baku Benzalkonium Klorida 40 µg/mL

c. Larutan Baku Benzalkonium Klorida 60 µg/mL

38

d. Larutan Baku Benzalkonium Klorida 80 µg/mL

e. Larutan Baku Benzalkonium Klorida 100 µg/mL

f. Larutan Baku Benzalkonium Klorida 120 µg/mL

39

Lampiran 2. Contoh Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida Replikasi

6 kali

a. Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida Replikasi 1

b. Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida Replikasi 2

c. Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida Replikasi 3

40

d. Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida Replikasi 4

e. Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida Replikasi 5

f. Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida Replikasi 6

41

Lampiran 3. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Benzalkonium Klorida

dengan Metode Standard Addition Method

1. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 80% dari target

kadar analit dalam sampel

a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)

1) Luas puncak benzalkonium klorida = 158494

2) Kadar benzalkonium klorida berdasarkan persamaan garis Y =

9566,71x+ 62336,33 adalah 10,051 µg/mL

b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)

1) Luas puncak benzalkonium klorida = 100494

3) Kadar benzalkonium klorida berdasarkan persamaan garis Y =

9566,71x+ 62336,33 adalah 3,989 µg/mL

c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)

1) Luas puncak total analit 1 = 196826

Luas puncak total analit 2 = 196962

Luas puncak total analit 3 = 196905

2) Berdasarkan persamaan garis Y = 9566,71x+ 62336,33 maka :

Kadar total analit 1 = 14,058 µg/mL

Kadar total analit 2 = 14,072 µg/mL

Kadar total analit 3 = 14,066 µg/mL

42

2. Perhitungan perolehan kembali

a. Analit 1

% perolehan kembali = x 100% = 100,457 %

b. Analit 2

% perolehan kembali = x 100% = 100,813 %

c. Analit 3

% perolehan kembali = x 100% = 100,664 %

43

Lampiran 4. Perhitungan LOD dan LOQ Benzalkonium Klorida

X Xi² i- ( i- )² Yi Yc (Yi-Yc) (Yi-Yc)²

20 400 -50 2500 246149 253670,5 -7521,53 56573413,54

40 1600 -30 900 448368 445004,7 3363,27 11311585,09

60 3600 -10 100 643588 636338,9 7249,07 52549015,86

80 6400 10 100 831639 827673,1 3965,87 15728124,86

100 10000 30 900 1033480 1019007 14472,67 209458176,9

120 14400 50 2500 1218811 1210342 8469,47 71731922,08

70 36400

7000

417352238,4

Dari persamaan Y = 9566,71x + 62336,33 maka Yc dapat dihitung :

1. Y = 9566,71x + 62336,33

Y = 9566,71 (20) + 62336,33

Y = 253670,5

2. Y = 9566,71x + 62336,33

Y = 9566,71 (40) + 62336,33

Y = 445004,7

3. Y = 9566,71x + 62336,33

Y = 9566,71 (60) + 62336,33

Y = 636338,9

4. Y = 9566,71x + 62336,33

Y = 9566,71 (80) + 62336,33

Y = 827673,1

5. Y = 956671x + 62336,33

Y = 956671 (100) + 62336,33

Y = 1019007

44

6. Y = 9566,71x + 62336,33

Y = 9566,71 (120) + 62336,33

Y = 1210342

7. Persamaan kurva baku : Y = 9566,71x + 62336,33 (r = 0,999877)

= (417352238,4/4)½

= 10214,6

= 10214,6 x

= 10214,6 x 0,930949

= 9509,275

45

Perhitungan LOD

Nilai Y pada batas deteksi ditentukan dengan persamaan Y = YB + 3 SB

Y = nilai intersept (a) pada persamaan kurva kalibrasi

SB = simpangan baku intersept (a) (Sa)

Y = 62336,33 + 3 (9509,275)

= 62336,33 + 28527,825

= 90864,1

Maka nilai LOD :

Y = 9566,71x + 62336,33

90864,1 = 9566,71x + 62336,33

X = 2,982 µg/mL

Perhitungan LOQ :

Dihitung berdasarkan rumus Y = YB + 10 SB

Y = 62336,33 + 10 (9509,275)

= 62336,33 + 95092,75

= 157429,1

Maka nilai LOQ :

Y = 9566,71x + 62336,33

157429,1 = 9566,71 + 62336,33

X = 9,940 µg/mL

46

Lampiran 5. Contoh Perhitungan Kadar Benzalkonium Klorida dalam

Sediaan Obat Tetes Mata

Persamaan regresi linier kurva baku adalah

Y = BX + A

Y = 9566,71x + 62336,33

Replikasi 1

Y = 9566,71x + 62336,33

158494 = 9566,71x + 62336,33

X = 10,051 µg/mL

Sehingga kadar benzalkonium klorida dalam 1 mL pada sediaan tetes mata adalah

X = 20,103 µg/mL x 10 mL

= 201,03 µg/mL / 1000

= 0,201 mg

% Kadar benzalkonium klorida dalam sediaan obat tetes mata

= x 100% = 100,5 %

47

Lampiran 6. Contoh Perhitungan Presisi Benzalkonium Klorida dalam

Sediaan Obat Tetes Mata

Persamaan regresi linier kurva baku adalah

Y = BX + A

Y = 9566,71x + 62336,33

Replikasi 1

Y = 9566,71x + 62336,33

1022570 = 9566,71x + 62336,33

X = 100,37µg/mL

Replikasi 2

Y = 9566,71x + 62336,33

1021383 = 9566,71x + 62336,33

X = 100,25µg/mL

48

Lampiran 7. Dokumentasi Penelitian

49

Lampiran 8. Certificate Of Analysis Benzalkonium Klorida

50

Lampiran 9. Surat Keterangan telah Menyelesaikan Penelitian