LATAR BELAKANG

Anggota Kelompok :

Nur ChairisaChairunnisaSiti ArafahWulandariDevi ParamitaEkky Nova .HNovitasariHj. SaadahIsnani HayatiFatma sariPuji LastariHelmahriaKelompok 6High Perfomance Liquid Chromatography (HPLC)LATAR BELAKANG

HPLC adalah singkatan dari High Perfomance Liquid Chromatography atau High Pressure Liquid Chromatography, kadang-kadang HPLC diistilahkan LC (Liquid Chromatography) atau di Indonesia diistilahkan KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi).

Ruang lingkup Penggunaan HPLC sering tumpang tindih dengan penggunaan Kromatografi Gas. Namun, masih banyak senyawa organik yang tidak stabil atau tidak dapat menguap bila dianalisa dengan kromatografi gas tanpa suatu modifikasi kimiawi. Sehingga HPLC merupakan pilihan pertama untuk senyawa organik yang tidak stabil atau tidak menguap seperti bahan-bahan farmasi, makanan/minuman, biokimia, kosmetik, serta bahan yang berhubungan dengan lingkungan yang akan lebih sesuai dipisahkan menggunakan HPLC.

HPLC yang modern telah muncul akibat pertemuan dari kebutuhan, keinginan manusia untuk meminimalisasi pekerjaan, kemampuan teknologi, dan teori untuk memandu pengembangan pada jalur yang rasional. Oleh karena itu, pada makalah ini akan dibahas tentang yang merupakan salah satu teknik pemisahan campuran secara modern, yang berkaitan dengan prinsip-prinsip dasar HPLC dan aplikasinya dalam penelitian.

RUMUSAN MASALAH

Bagaimana prinsip kerja dari HPLC?Apa saja jenis-jenis HPLC?Apa saja komponen instrumen HPLC?Apa saja kelebihan dan kekurangan dari HPLC?Bagaimana gangguan HPLC dan cara penanggulangannya ?Bagaimana aplikasi HPLC dalam analisis kimia?

TUJUAN

Mengetahui bagaimana prinsip kerja dari HPLC.Mengetahui jenis-jenis HPLC.Mengetahui komponen instrumen HPLC.Mengetahui kelebihan dan kekurangan dari HPLC.Mengetahui Gangguan pada HPLC dan cara penanggulangannya.Mengetahui aplikasi HPLC dalam analisis kimia.

PRINSIP KERJA HPLCPrinsip dasar dari HPLC adalahpemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannya.

SIMULASIJENIS-JENIS HPLCKromatografi AdsorbsiKromatografi fase terikatKromatografi penukar ionKromatografi Pasangan ionKromatografi Eksklusi UkuranKromatografi AfinitasPrinsip kromatografi adsorpsi yaitu daam pemisahan kromatografi adsorbsi biasanya menggunakan fase normal dengan menggunakan fase diam silika gel dan alumina, meskipun demikian sekitar 90% kromatografi ini memakai silika sebagai fase diamnya. Kromatografi AdsorbsiKebanyakan fase diam kromatografi ini adalah silika yang dimodifikasi secara kimiawi atau fase terikat. Sejauh ini yang digunakan untuk memodifikasi silika adalah hidrokarbon-hidrokarbon non-polar seperti dengan oktadesilsilana, yang paling populer digunakan dan kebanyakan pemisahannya adalah fase terbalik. Kromatografi Fase TerikatMenggunakan fase diam yang dapat menukar kation atau anion dengan suatu fase gerak. Kebanyakan pemisahan kromatografi ion dilakukan dengan menggunakan media air karena sifat ionisasinya.

Kromatografi Penukar IonDapat digunakan untuk pemisahan sampel-sampel ionik dan mengatasi masalah-masalah yang melekat pada metode penukaran ion. Sampel ionik ditutup dengan ion yang mempunyai muatan yang berlawanan.Kromatografi Pasangan IonKromatografi ini disebut juga dengan kromatografi permiasi gel dan dapat digunakan untuk memisahkan atau menganalisis senyawa dengan berat molekul > 2000 dalton.Kromatografi Eksklusi Ukuran

Dalam kromatigrafi ini pemisahan terjadi karena interaksi-interaksi biokimiawi yang sangat spesifik. Kromatografi jenis ini dapat digunakan untuk mengisolasi protein (enzim) dari campuran yang sangat kompleks.Kromatografi AfinitasKOMPONEN INSTRUMEN HPLC

Gambar 2.1. Rangkaian HPLCEluen (Fase gerak)Fase gerak biasanya terdiri dari campuran pelarut yang dapat bercampur yang secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi, yang ditentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampelPompa (Pump)Pompa untuk menjamin proses penghantaran fase gerak berlangsung secara tepat, reprodusibel, konstan, dan bebas dari gangguan.InjektorTempat menginjeksi sampel.Kolom (Column)Sebagai tempat pemisahan komponen-komponen sampel.DetektorSuatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen sampel di dalam kolom (analisis kualitatif) dan menghitung kadamya (analisis kuantitatif). CEPATWaktu analisis umumnya kurang dari 1 jam. RESOLUSIKromatografi Cair mempunyai dua rasa dimana interaksi selektif dapat terjadi. Kemampuan zat padat berinteraksi secara selektif dengan rasa diam dan rasa gerak pada KCKT memberikan parameter tambahan untuk mencapai pemisahan yang diinginkan.SENSITIVITAS DETEKTORDetektor absorbsi UV dapat mendeteksi kadar dalam jumlah nanogram (10-9 gram), detektor Fluoresensi dan Elektrokimia dapat mendeteksi jumlah sampai picogram (10-12 gram).

KELEBIHAN HPLCKOLOM YANG DAPAT DIGUNAKAN KEMBALIBanyak analisis yang bisa dilakukan dengan kolom yang sma sebelum dari jenis sampel yang diinjeksi, kebersihan dari solven dan jenis solven yang digunakan.IDEAL UNTUK ZAT BERMOLEKUL BESAR DAN BERIONIKDengan tipe eksklusi dan penukar ion ideal sekali untuk mengalissis zat zat dengan volatilitas rendah.MUDAH RECOVERY SAMPELUmumnya setektor yang digunakan dalam KCKT tidak menyebabkan destruktif (kerusakan) pada komponen sampel yang diperiksa, oleh karena itu komponen sampel tersebut dapat dengan mudah sikumpulkan setelah melewati detector.

Harga sebuah alat HPLC cukup mahal.Sering ada larutan standar yang tertinggal di injektor.Pada kolom dengan diameter rata-rata partikel fase diam dengan ukuran 5 dan 3 mikrometer sela-sela partikel lebih mudah tertutup oleh kotoran, jadi harus seringkali dicuci dan kemurnian larutan harus dijaga.

KEKURANGAN HPLCGangguan yang terjadi dibedakan menjadi dua yaitu : gangguan sistem garis dasar seperti noise (derau), drift (melayang), spiking (berpaku), wander (menyimpang) dan shift (bergeser) ,sedangkan gangguan bentuk puncak seperti Puncak lebih kecil dari yang diharapkan, Tailing (puncak), Fronting (puncak mengandung), Puncak berubah bentuk (cigar top, round top, flat top), Puncak membelah (split), Puncak negatif.GANGGUAN PADA HPLC DAN CARA PENANGGULANGANNYA

APLIKASI HPLCPenetapan secara Simultan Campuran Parasetamol dan Ibuprofen dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.

Tujuan :untuk menentukan kadar parasetamol dan ibuprofen dengan fasa gerak asetonitril menggunakan metoge KCKT.

Hasil :Metode KCKT dapat digunakan untuk menentukan kadar parasetamol dan ibuprofen dengan fasa gerak asetonitril fosfat 0,05 M pH 4,5 yakni kadar parasetamol 107,00%, dengan simpangan baku dan koefisien variasi berturut-turut adalah 0,58 dan 0,54% sedangkan ibuprofen 104,76%. dengan simpangan baku dan koefisien variasi berturut-turut adalah 0,51 dan 0,48%. Dengan penambahan natrium heksan sulfonat 0,075%, laju alir 0,5 mL/menit dan panjang gelombang deteksi 215 nm. Dan di dapat waktu retensi parasetamol 4,89 menit dan ibuprofen 7,11 menit.

Tujuan : untuk menganalisis kandungan Asam amino di dalam Rumput Laut Sargassumcrassifolium J. Agardh, menggunakan metode KCKT.

Hasil :Dengan menggunakan metode KCKT didapat bahwa talus Sargassum crassifolium J. Agardh memiliki komposisi nutrisi sebagai berikut:Kadar protein sebesar 5,19%Kadar abu (mineral) sebesar 36,93%. kadar vitamin A sebesar 489,55 g RE/100 g dan vitamin C sebesar 49,01 mg/100 g; kadar lemak sebesar 1,63%.kadar alginat sebesar 37,91%.

Analisis Komposisi Nutrisi Rumput Laut Sargassumcrassifolium J. Agardh Pada prinsipnya kerjaHPLCdengan GC adalah sama yaitu pemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannyaHPLC dapat dikelompokkan berdasarkan sifat fase diam yaitu: Kromatografi Adsorbsi, Kromatografi fase terikat, Kromatografi penukar ion, Kromatografi Pasangan ion, Kromatografi Eksklusi Ukuran, dan Kromatografi Afinitas.Bagian bagian yang terdapat pada instrumen HPLC yaitu seperti : Eluen (Fase Gerak), Pompa (Pump), Injektor, Kolom (Column), Detektor.Kelebihan Krogmatografi Cair Tingkat Tinggi, antara lain cepat, resolusi, sensitivitas detektor, kolom yang dapat digunakan kembali, ideal untuk zat bermolekul besar dan berionik, mudah recovery sampel.KESIMPULANKekurangan HPLC antara lain harga sebuah alat HPLC cukup mahal, sering ada larutan standar yang tertinggal diinjektor, pada kolom dengan diameter rata-rata partikel fase diam dengan ukuran 5 dan 3 mikrometer sela-sela partikel lebih mudah tertutup oleh kotoran, jadi harus seringkali dicuci dan kemurnian larutan harus dijaga.5.Terdapat berbagai macam gangguan pada HPLC, diantaranya gangguan sistem garis dasar dan bentuk puncak.6. HPLC biasa diaplikasikan untuk penelitian-penelitian, diantaranya Penetapan secara Simultan Campuran Parasetamol dan Ibuprofen serta Analisis Komposisi Nutrisi Rumput Laut Sargassumcrassifolium J. Agardh.

SESI DISKUSI !!!SESI DISKUSI !!!HPLCTERIMAKASIH ...