Hemaglutination Inhibition

Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi

Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya

Malang

Uji HI

Haemagglutination Inhibiton (HI) atau Hambatan Hemagglutinasi:

pengujian yang ditujukan untuk mengetahui titer antibodi, baik antibodi

karena kasus infeksi maupun antibodi hasil vaksinasi.

Hemaglutination Test digunakan untuk mendeteksi adanya antibodi

spesifik. Seperti antibodi terhadap agen infeksi yang mempunyai

hemagglutinin (contoh: ND, EDS, IB, dan AI) identifikasi/ mengetahui

jenis virus.

Tujuan

Mengukur titer antibodi atau antiserum agar diketahui status kekebalan

tubuh setelah dilakukan vaksinasi virus.

Mengidentifikasi suatu virus.

Prinsip

Prinsip uji HI adalah hambatan aglutinasi RBC oleh virus akibat terikatnya

virus tersebut dengan antibodi spesifik.

Netralisasi antibodi oleh antigen spesifik.

Berbeda dengan pengujian HA, pengujian HI menunjukkan hasil positif

apabila terdapat endapan eritrosit. Sedangkan hasil negatif ditunjukkan tanpa

adanya endapan eritrosit.

Proses Hemaglutinasi oleh Antibodi

ALAT &

Bahan

Microplate V bottom

Micropipet

Tabung falkon

Yellow tip

Vaksin ND/ antigen

Serum darah positif ND

RBC ayam 1%

PBS

Langkah Kerja1. Pembuatan RBC 1%

Diambil darah ayam

Dimasukkan tabung EDTA

Disentrifus 2500 rpm 10 menit

Dibuang supernatan

Ditambah PBS dengan perbandingan PBS dan platelet 1:3

Disentrifus lagi (diulang 3-4 kali), tiap sentrifus PBS supernatant dibuang

Sentrifus terakhir: platelet diambil (100%)

Dibuat konsentrasi RBC menjadi 1% diambil 1 ml RBC 10% dan ditambah 9 ml

PBS (V1M1 = V2M2)

2. Pengenceran antigen untuk uji HI

Antigen dibuat standar 4 HA unit

Pengenceran Antigen

Antigen 4 HA unit

Pada Uji HA digunakan untuk mengetahui titer antigen. Titer antigen yang terbentuk, dibuat

standar 4 HAU (titer HA : 4 HAU).

Hasil 4HAU

Contoh:

1. Titer HA yang terbentuk adalah 128 (pengenceran 2-7), maka:27

22= 25 = 32

Jadi perbandingan antara antigen dan PBS yaitu 1:31 (1 bagian antigen dan 31 bagian PBS).

Volume total ag yang dibutuhkan seluruh well = 96 well × 25µl = 2400µl.2400µl32

= 75µl ag + 2325µl PBS.

2. Titer HA yang terbentuk adalah 512 (pengenceran 2-9), maka:29

22= 27 = 128

Perbandingan antigen:PBS = 1:127

25µl ag + 3175µl PBS.

Langkah Kerja Uji HI

1. Microplate diisi PBS 25 µL pada semua well.

2. Diisi serum di sumuran A1. Dilakukan pengenceran sampai sumuran A11 dengan

mengambil 25 µL dari sumuran pertama dan dimasukkan kedua. Diulangi sampai

sumuran A11

3. Ditambah antigen 25 µL di sumuran A1-A12

4. Diinkubasi suhu ruang 30 menit

5. Ditambah RBC 1% sebanyak 25 µL di semua sumuran

6. Diinkubasi 30 menit

7. Dibaca hasil

Titer antibody angka pengenceran tertinggi yang masih mampu menghambat

aglutinasi eritrosit

Skema

Intepretasi Hasil

Uji HI, hasil dinyatakan positif menghambat aglutinasi eritrosit, jika

setelah inkubasi terdapat endapan eritrosit berbentuk titik di tengah

sumuran mikroplet.

Membaca Hasil

Dibaca dari permukaan, dilihat adanya endapan eritrosit

Mikroplate dapat dimiringkan, dan dibaca dari bawah plate

Jika dimiringkan ada aliran sel darah merah (tilt and flow) = hasilnya positif

tilt and flowEndapan eritrosit

Interpretasi Hasil

Hasil positif Hasil negatif

KV : Kontrol Virus

K : Kontrol

Hasil Uji HI

THANK YOU