Prosedur analitikMetode kromatografiInjektor di operasikan terpisah dan volume injeksi adalah 1 uL. Suhu injector adalah 240 C. ultra heluin kemurnian tinggi (99,99%) digunakan sebagai gas pembawa di aliran konstan 1,2 mL per menit. Suhu awal oven GC 60 C didiamkan selama 1 menit, kemudan meningkat 30C permenit sampai di capai suhu akhir 310C. didiamkan 3 menit pada suhu akhir. Total waktu yang di capai selama satu injeksi adalah 12,33 menit. Suhu tetap di pertahankan 280 C. Metana kemurnian tinggi (99,99%) digunakan sebagai reagen pada tekanan 3,8 x 10 -4 Torr mengalir 3,25 mL/ menit. sumber ion MS berada pada temperatur 250 C dan suhu quadrupole 106 C. tegangan multiplayer electron diset pada 400 V dibawah tegangan NCI.Detertor ,ass selective chemical ionization mementoring ion negative NCI dan beroperasi dalam MODE ion monitoring (SIM). Ppelarut delay 9.10 menit. Beberapa ion dimonitoring dandigunakan untuk kuantitatif : untuk flunitrazepam m/z 459 dan 441. Waktu tinggal untuk ion adalah 20 ms.

Presisi dan akurasiKuntitas flinitrazepam dilakukan dengan menggunakan metode internal standar. Sebuah kurva standar empat titik terpisah disiapkan dengan D5 diazepam sebagai internal standar. Rasio luas puncak ditentukan sebgai control kemudian dihitung menggunakan kurva standar variabilitas intra hari ditentukan dengan menganalisis enam control terendah (34 pg/mg flunitrazepam) dan enam control tertinggi (12 pg/mg flunitrazepam) di satu hari. Variabilitas Inter hari ditentukan selama lima minggu. Nilai konsentrasi sampel dan standar deviasi diukur berdasarkan variabilitas populasi hari intra dan harii inter. Persentase kooefisien variasi ditentukan dengan menggunakan standar deviasi. Persen relative ditenntukan dengan menggunakan persamaan berikut. (Konsentrasi sampel konsentrasi teoritis)/ konsentrasi teoritis x 100 % HasilAktu retensi flunitrazepam dan D5 diazepam muncul sekitar 9,81; 9,43; dan 9,30 menit. Kromatogram mencatat pada waktu 9.10 sampai 10.50. kurva standar dari flunitrazepam adalah linier dalam konsentrasi analisis(2.5 pg/mg to 15 pg/mg untuk flunitrazepam dan 0.5 pg/mg sampai 20 pg/mg untuk 7-aminoflunitrazepam. Kolerasi koefisien dari kurva standar flunitrazepam adalah 0.988 dan 0.999. batas deteksi adalah 0.5 pg/mg .Table 4 dan 5 menggambarkan akurasi dan presisi dari flunitrazepam. Intra hari variability ditentukan berdasarkan analisis 6 kontrol rendah dan 6 kontrl tinggi dalam satu hari. Inter hari ditentukan dalam jangka waktu 5 minggu. Sebelum pemberian obat semua sampel rambut menunjukkan reaksi negative. Table 6 untuk 7-amminoflunitrazepam.7-aminno fluntirazepam terdeteksi setelah 28 hari setelah pemberian Rohypnol dalam 5 relawan. 7-aminoflunitrazepam terdeteksi setelah 24 jam setelah flunitrazepam .Dalam dua kasus (subject 6 dan 10) 7-aminoflunitrazepam muncul di rambut setelah 14 hari pemakaian obat. Sedangkan (subject 2 dan 7)muncul 21 hari setelah pemberian (0,5-2,7 pg/mg) (table 6)Fakta penelitian : penelitian berakhir pada 28 hari .

2 mg dosis rohypnol diberikan kepada tiap orang sebelum langkah ini.