farmasi
58
i UJI EFEK EKSTRAK ETANOL 70% BUAH BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L.) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR SKRIPSI Untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan Mencapai Derajat Sarjana Kedokteran Diajukan Oleh : MULYADIN J 500 080 079 Kepada : FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA 2012
description
herbalis
Transcript of farmasi
i
UJI EFEK EKSTRAK ETANOL 70% BUAH BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L.) TERHADAP KADAR GLUKOSA
DARAH TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR
SKRIPSI
Untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan Mencapai Derajat Sarjana Kedokteran
Diajukan Oleh :
MULYADIN J 500 080 079
Kepada :
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2012
ii
SKRIPSI
UJI EFEK EKSTRAK ETANOL 70% BUAH BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L.) TERHADAP KADAR
GLUKOSA DARAH TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR
Yang diajukan Oleh :
MULYADIN
J500080079
Telah disetujui dan dipertahankan di hadapan dewan penguji skripsi
Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta,
Pada hari Sabtu, tanggal 21 Januari 2012
Penguji Nama : Dr. Muhtadi, M.Sc (.......................................) NIK : 761 Pembimbing Utama Nama : dr. EM. Sutrisna, M.Kes (........................................) NIK : 919 Pembimbing Pendamping Nama : dr. Sahilah Ermawati (........................................) NIK : 1240
Dekan FK UMS
Prof. Dr. Bambang Soebagyo, dr., Sp.A (K) NIK. 300.1234
iii
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, sepanjang pengetahuan saya tidak terdapat karya atau pendapat yang
pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali dalam naskah ini dan
disebutkan dalam pustaka.
Surakarta, 10 Januari 2012
Mulyadin
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum wr.wb.
Alhamdulillah, puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas
segala nikmat, karunia, rahmat, dan hidayahNya, sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini. Shalawat dan salam semoga tetap tercurahkan pada
Nabi Muhammad SAW beserta para pengikutnya.
Skripsi ini berjudul “Uji efek ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.) terhadap kadar glukosa darah tikus putih jantan galur
wistar” yang disusun demi memenuhi sebagian syarat untuk memperoleh derajat
Sarjana Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta. Saya harapkan skripsi
ini dapat menambah khasanah ilmu pengetahuan pada umumnya dan pengobatan
herbal pada khususnya.
Keberhasilan penyelesaian skripsi ini tidak terlepas dari doa dan dukungan
berbagai pihak. Maka pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan rasa
terima kasih yang tulus kepada :
1. Prof. Dr. Bambang Subagyo, dr. Sp.A (K), selaku Dekan Fakultas
Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2. dr. Moch Shoim Dasuki, M. Kes selaku ketua tim skripsi.
3. dr. EM. Sutrisna, M. Kes, selaku dosen pembimbing I yang telah
meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan, saran dan masukan dalam
penyusunan skripsi ini.
4. dr. Sahilah Ermawati, selaku dosen pembimbing II yang telah memberikan
saran, kritik dan dukungan dalam penyusunan skripsi ini.
5. Dr. Muhtadi, M.Sc, yang telah meluangkan waktu sebagai penguji dan
memberikan saran serta kritik untuk skripsi ini.
6. Orang tua saya yang selalu mengerti dan mendoakan penulis. Terima kasih.
7. Orang yang selalu ada untuk memotivasi, selalu memberi dukungan, kritik,
dan saran serta bantuan kepada penulis. Terimakasih atas kesabaran dan
ketulusannya untuk senantiasa mendampingi penulis.
v
8. Teman-teman satu bimbingan : Mioz, Riza, Iwan, Ira atas saran, kritik dan
bantuan dalam penyusunan skripsi ini.
9. Teman-teman angkatan 2008 yang tidak bisa penulis sebutkan satu-persatu.
10. Perpustakaan Pusat UMS, FK UMS, dan FK UNS, dimana penulis banyak
menimba ilmu.
11. Semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari atas segala kekurangan skripsi ini, oleh karena itu
penulis sangat mengharapkan kritik dan saran membangun untuk kesempurnaan
skripsi ini. Semoga penelitian ini bermanfaat untuk semuanya.
Surakarta, Januari 2012
Penulis
vi
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL... ................................................................................................... i
LEMBAR PERSETUJUAN............................................................................................ ii
PERNYATAAN .......... ................................................................................................... iii
KATA PENGANTAR. ................................................................................................... iv
DAFTAR ISI ................................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL ........................................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................... ix
ABSTRAK ...................................................................................................................... x
ABSTRACT .................................................................................................................... xi
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah .......................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ................................................................................. 2
C. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 3
D. Manfaat Penelitian ................................................................................... 3
BAB II LANDASAN TEORI
A. Tinjauan Pustaka ..................................................................................... 4
1. Belimbing Wuluh ............................................................................. 4
2. Diabetes Melitus ............................................................................... 6
3. Obat Antidiabetes ............................................................................. 9
4. Ekstrak dan Ekstraksi ....................................................................... 11
5. Uji Efek Antidiabetes ...................................................................... 13
6. Aloksan ............................................................................................ 14
7. Glibenklamid .................................................................................... 15
B. Kerangka Konsep .................................................................................... 16
C. Hipotesis .................................................................................................. 16
BAB III METODELOGI PENELITIAN
A. Jenis Penelitian ........................................................................................ 17
B. Tempat dan Waktu Penelitian ................................................................ 17
vii
C. Subjek Penelitian ..................................................................................... 17
D. Hewan Uji................................................................................................ 17
E. Besar Sampel ........................................................................................... 17
F. Kriteria Restriksi ..................................................................................... 17
G. Identifikasi Variabel Penelitian ............................................................... 18
H. Definisi Operasional Variabel Penelitian ................................................ 18
I. Alat dan Bahan ........................................................................................ 18
J. Cara Kerja................................................................................................ 19
K. Rancangan Penelitian .............................................................................. 22
L. Analisis Data ........................................................................................... 23
M. Jadwal Kegiatan....................................................................................... 23
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman ............................................................................... 24
B. Hasil Penelitian ......................................................................................... 24
C. Pembahasan .............................................................................................. 31
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ............................................................................................... 34
B. Saran ......................................................................................................... 34
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
viii
DAFTAR TABEL
Tabel II.1 : Kadar Glukosa Darah Sewaktu dan Puasa Sebagai Patokan
Penyaring dan Diagnosis DM (mg/dL).
Tabel III.1 : Jadwal Kegiatan
Tabel IV.1 : Hasil Uji Orientasi Dosis Efek Antidiabetes
Tabel IV.2 : Hasil Uji Efek Antidiabetes Tikus Putih
Tabel IV.3 : Hasil Uji Anova Kadar Glukosa Darah Awal Tikus Putih
Tabel IV.4 : Hasil Uji Anova Kelompok Post Aloksan Tikus Putih
Tabel IV.5 : Hasil Uji Anova Kelompok Akhir Tikus Putih
Tabel IV.6 : % Penurunan Kadar Glukosa Darah Uji Antidiabetes
Tabel IV.7 : Hasil Uji LSD Kelompok Akhir Tikus Putih
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 : Determinasi tanaman belimbing wuluh
Lampiran 2 : Surat keterangan tikus
Lampiran 3 : Konversi perhitungan dosis untuk berbagai jenis (spesies) hewan
uji
Lampiran 4 : Dosis pemberian aloksan dan glibenklamid
Lampiran 5 : Hasil uji statistik
Lampiran 6 : Surat rekomendasi penelitian
Lampiran 7 : Surat keterangan telah melakukan penelitian
x
ABSTRAK Mulyadin, J500080079, 2012. Uji Efek Ekstrak Etanol 70% Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar.
Latar Belakang : Buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) merupakan tanaman yang mempunyai efek hipoglikemik, salah satu senyawa yang mempunyai efek hipoglikemik adalah flavonoid. Mekanisme kerjanya adalah meregenerasi kerusakan sel beta dan menstimulasi pelepasan insulin oleh sel beta pankreas sehingga dapat menurunkan kadar glukosa darah. Tujuan Penelitian : Mengetahui efek ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) terhadap kadar glukosa darah tikus putih (Rattus norvegicus). Metode Penelitian : Menggunakan metode uji diabetes aloksan dengan rancangan penelitian pre and post tes group control design. Hewan uji yang digunakan sebanyak 25 ekor tikus putih jantan galur Wistar yang dibagi dalam 5 kelompok perlakuan, yaitu kelompok I: kontrol negatif aquadest, kelompok II: kontrol positif (glibenklamid=0,126mg/200g BB), kelompok III, IV, V: diberikan ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh dengan dosis berturut-turut 20 mg/200 gBB, 40 mg/200 gBB, 80 mg/200 gBB. Hasil Penelitian : Berdasarkan hasil uji Anova kelompok akhir diperoleh nilai probabilitas signifikan (p)= 0,004 dengan demikian p<0,05 maka pada 5 kelompok tersebut minimal terdapat 1 kelompok yang berbeda secara bermakna. Kemudian dilanjutkan dengan uji LSD untuk mengetahui perbandingan tiap kelompok dan diperoleh hasil I:II = 0,001, I:III = 0,010, I:IV = 0,009, I:V = 0,001. Dengan demikian p<0,05. Kesimpulan :. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh, dosis 20 mg/200 grBB, 40 mg/200 grBB, 80 mg/200 grBB mampu menurunkan kadar glukosa darah dengan PKGD (Penurunan Kadar Glukosa Darah) berturut-turut 42.72%, 43.3% dan 58.95%. Kata Kunci : ekstrak, buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.), glukosa darah
xi
ABSTRACT
Mulyadin, J500080079, 2012. Effects Test 70% Ethanol Extract Averrhoa bilimbi L. Against Blood Glucose Levels of Rats White Males Wistar Strain. Background : Averrhoa bilimbi L. is a plant that has hypoglycemic effect. Substance that can reduce blood glucose levels is flavonoid. The mechanism action is regenerate damage beta cell and stimulate secretion insulin of beta cell pancreas. than it can reduce blood glucose levels Research Goals : Determine the effects of extracts Averrhoa bilimbi L. on blood glucose levels of white rats (Rattus norvegicus) compared with glibenclamide. Research Methods : Using aloksan diabetes methods test with pre and post test group control design. It used 25 white male rats Wistar and divided into 5 groups treatment, namely group I : negative control of aquadest, group II : positive control (glibenclamide = 0.126 mg/200 gBW), group III, IV, V: supplied Averrhoa bilimbi L. extract with successive doses of 20 mg / 200 gBW, 40 mg/200 gBW, 80mg/200 gBW. The Results : Based on the results of statistical tests Anova obtained a significant probability value (p) = 0.004 thus p <0.05. So, at any rate there are one group which have significantly different between 5 groups treatment. Then proceed with the LSD test to determine the ratio of each group and obtained the results I: II = 0.001, I: III = 0.010, I: IV = 0.009, I: V = 0.001. Thus p <0.05. Conclusion :. Results showed that 70% ethanol extract of the Averrhoa bilimbi L. a dose of 20 mg/200 gBW, 40 mg/200 gBW, 80 mg/200 gBW capable of lowering blood glucose levels with DBGL (Decrease Blood Glucose Levels) respectively 42.72%, 43.3 % and 58.95%. Keywords : extract, Averrhoa bilimbi L. , blood glucose
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah
Penyakit diabetes melitus atau yang lebih dikenal sebagai penyakit kencing
manis adalah kumpulan gejala yang timbul pada seseorang akibat kadar glukosa
darah (GD) yang tinggi (hiperglikemia). Kadar GD yang tinggi ini disebabkan jumlah
hormon insulin kurang atau jumlah insulin cukup tetapi kurang efektif (resistensi
insulin). Diabetes melitus merupakan salah satu penyakti degeneratif yang jumlahnya
terus meningkat dari tahun ke tahun. Salah satu faktor yang dianggap bertanggung
jawab terhadap peningkatan ini adalah gaya hidup yang kurang sehat, seperti makan
berlebihan, kurang aktifitas fisik dan stres (Subekti, 2007).
Diabetes melitus mengakibatkan berbagai komplikasi akut maupun kronik yang
dapat mengenai berbagai jaringan dan organ tubuh. Komplikasi akut diabetes melitus
dapat berupa ketoasidosis diabetik, koma hiperosmolar hiperglikemik non ketokik,
asidosis laktat, hipoglikemik iatrogenik akibat reaksi insulin atau syok insulin, dan
infeksi akut. Sedangkan komplikasi kronis diabetes melitus dapat berupa kelainan
pada organ mata (retinopati diabetik), ginjal (nefropati diabetik), syaraf (neuropati
diabetik), penyakit pembuluh darah koroner dan perifer, infeksi kronik dan ulkus kaki
diabetik. (Schteingart, 2005; Waspadji, 2006).
Diabetes melitus tidak hanya memiliki banyak komplikasi yang mematikan,
insidensinya pun tergolong tinggi. Penelitian epidemiologi telah menunjukkan adanya
kecenderungan peningkatan angka insidensi dan prevalensi diabetes melitus di
berbagai penjuru dunia. World Health Organization (WHO) membuat perkiraan
bahwa pada tahun 2000 jumlah pengidap diabetes di atas umur 20 tahun berjumlah
150 juta orang dan dalam kurun waktu 25 tahun kemudian yaitu pada tahun 2025,
jumlah itu akan membengkak menjadi 300 juta orang. Data terakhir dari WHO (2005)
menunjukkan peningkatan tertinggi jumlah penderita diabetes melitus justru terjadi di
Asia Tenggara. Sedangkan Indonesia akan menempati peringkat 5 dunia dengan
2
jumlah pasien sebanyak 12,4 juta orang pada tahun 2025, naik 2 tingkat dibandingkan
tahun 1995 dimana jumlah pasien sebanyak 4,5 juta orang (Suyono, 2006).
Pengobatan diabetes melitus dapat dilakukan secara medis dengan obat-obatan
modern dan suntikan tetapi karena tingginya biaya pengobatan cara medis ini
terkadang sulit dilakukan. Diabetes melitus juga dapat diatasi dengan pengobatan
alami dengan memanfaatkan tanaman berkhasiat obat. Tanaman berkhasiat obat dapat
diperoleh dengan mudah, dapat dipetik langsung untuk pemakaian segar atau dapat
dikeringkan. Oleh karena itu, pengobatan tradisional dengan tanaman obat menjadi
langkah alternatif untuk mengatasinya (Wijayakusuma, 2004).
Penelitian tentang efek hipoglikemik buah belimbing wuluh sudah pernah
dilakukan. Hasil penelitian tersebut menyatakan air perasan buah belimbing wuluh
peroral dengan dosis 30 ml/kgBB menunjukan efek hipoglikemik yang bermakna
sekitar 55,27% pada mencit diabetes aloksan (Armenia dkk, 2004).
Untuk lebih memberikan bukti ilmiah dari penelitian tersebut, maka dilakukan
penelitian lebih lanjut terhadap efek penurunan kadar glukosa darah dari ekstrak buah
belimbing wuluh, dengan menggunakan penyari etanol senyawa yang tersari adalah
senyawa yang mendekati polar. Sehingga hampir semua senyawa didalam simplisia
dapat tersari dalam pelarut etanol, karena etanol bersifat netral. Berdasarkan latar
belakang di atas, maka peneliti ingin melakukan penelitian dengan judul “Uji Efek
Ekstrak Etanol 70% Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Kadar
Glukosa Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar” yang nantinya dapat dimanfaatkan
sebagai obat antidiabetes di kalangan masyarakat.
B. Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang tersebut dapat dibuat rumusan masalah yaitu: apakah
ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) mempunyai efek
penurunan kadar glukosa darah pada tikus putih jantan galur Wistar?
3
C. Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek ekstrak etanol 70% buah
belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) terhadap penurunan kadar glukosa darah pada
tikus putih jantan galur Wistar.
D. Manfaat Penelitian
1. Aspek teoritis
Penelitian ini dapat memberikan informasi ilmiah mengenai efek ekstrak
etanol 70% buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) terhadap penurunan
kadar glukosa darah pada tikus putih jantan galur Wistar.
2. Aspek aplikatif
a. Penelitian ini dapat dijadikan data awal untuk uji preklinis selanjutnya pada
hewan yang tingkatannya lebih tinggi sampai kepada uji klinis pada
manusia.
b. Sebagai alternatif pilihan pengganti obat-obat kimia jika hasil penelitian ini
dapat menunjukkan efek penurunan kadar glukosa darah yang bermakna.
4
BAB II
LANDASAN TEORI
A. Tinjauan Pustaka
1. Belimbing Wuluh
a. Klasifikasi tanaman
Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) kedudukannya dalam ilmu
taksonomi tumbuhan adalah :
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicolyledonae
Bangsa : Gerantales
Suku : Oxallidaceae
Marga : Averrhoa
Jenis : Averrhoa bilimbi L. (Gembong, 1998).
b. Deskripsi tanaman
Pohon berbentuk tajuk membulat, dengan tinggi 5-10 meter. Batang
berbentuk pokok monopodial, percabangan simpodial, permukaan dengan
tanda bekas daun bentuk ginjal. Daun berjenis majemuk menyirip gasal,
berseling, jumlah anak daun 21-45, anak daun terujung paling besar, anak
daun bulat telur sampai bulat telur memanjang, pangkal berbentuk ginjal,
ujung meruncing, ukuran panjang lebih kurang 2-10 cm, lebar lebih kurang
1-3 cm, ke arah ujung poros lebih besar, warna permukaan hijau muda.
Bunga 11 berupa susunan yang mulai muncul pada benjolan dipermukaan
batang, menggantung, panjang 5-20 cm. Kelopak mempunyai panjang lebih
kurang 6 mm. Mahkota daun tidak atau hampir bergandengan, berbentuk
lancet, panjang 13-20 cm, pangkal yang pucat. Benang sarinya semua fertil,
benang sari di depan daun mahkota kecil 3-4 mm. Putik memiliki bentuk
yang seragam. Buah berbentuk bulat bersegi tumpul, berwarna kuning hijau,
5
asam sampai manis, panjang 4-6,5 cm, sedangkan biji berbentuk elips,
umumnya 2-3 setiap ruang, tanpa selaput biji, ukuran panjang 6-7 mm
(Sudarsono dkk, 2002)
c. Budidaya
Tanaman ini dapat tumbuh alami di dataran Asia beriklim tropis lembab,
dibudidayakan atau liar secara lokal. Biasanya ditanam pada ketinggian
kurang dari 500 m dpl dan pada tanah-tanah yang solumnya tebal dengan
sistem pengairan yang baik. Perbanyakan dapat dilakukan dengan biji dalam
kotak/kantong plastik, dengan cara penyambungan. Penempelan atau
pencangkokan. Kecambah bibit dapat ditanam setelah mencapai ketinggian
30-50 cm dengan jarak tanam 5-7 m. Penyiangan dibawah lingkaran tajuk
penting untuk mematikan gulma. Pupuk perlu diberikan untuk mendapatkan
hasil yang baik. Buah pertama muncul setelah umur 4-5 tahun, dan dapat
berbuah sepanjang tahun. Hama yang penting adalah lalat buah, yang dapat
dikontrol/dicegah dengan membungkus buah, membuang buah yang
terserang, dan membongkar tanah untuk membunuh pupanya (Sudarsono
dkk, 2002).
d. Potensi tanaman
Batang tanaman digunakan untuk mengobati penyakit gondok. Daun
belimbing wuluh yang dilumatkan dapat digunakan untuk mengatasi demam
dan obat luar. Rebusan daun digunakan untuk menanggulangi peradangan
usus besar dan mengobati diabetes melitus, gerusan tangkai muda dan
bawang merah dapat digunakan sebagai obat oles pada sakit gondongan.
Daun untuk mengobati bisul. Cairan dari bunga digunakan untuk obat batuk
dan sariawan. Buah dapat menyebabkan gigi nyeri bila digigit, menurunkan
tekanan darah dan dapat dibuat manisan dan asinan. Buah dapat dibuat selai
untuk penderita sariawan dan memperlancar pengeluaran getah empedu yang
kurang baik (Sudarsono dkk, 2002).
6
e. Kandungan kimia
Pada umumnya didalam marga Oxalis ditemukan asam oksalat maupun
dalam bentuk kalium oksalat dan ditemukan pula enzim isositrat liase. Dari
hasil pene litan lain terhadap Avverhoa bilimbi L. ditemukan alkaloid,
saponin, kumarin, pektin, dan minyak asitri (Soedibyo, 1998). Senyawa
flavonoid, tanin, asam galat dan asam ferulat juga ditemukan pada belimbing
wuluh (Sudarsono dkk, 2002).
Berdasarkan hasil pemeriksaan uji golongan senyawa aktif buah
belimbing wuluh yang dilakukan oleh Lathifah (2008) menunjukkan bahwa
buah belimbing wuluh mengandung senyawa flavonoid dan triterpenoid.
Flavonoid diduga merupakan senyawa aktif antihiperglikemik yang bekerja
dengan cara merangsang sekresi insulin (Nwachukwu dkk, 2010). Flafonoid
juga dapat meregenerasi kerusakan sel beta pankreas (Dheer dan Bhatnagar,
2010).
2. Diabetes Melitus
a. Definisi
Menurut American Diabetes Assosciation (ADA) 2005 diabetes melitus
merupakan suatu kelompok penyakit metabolik dengan karakteristik
hiperglikemia yang tejadi karena kelainan sekresi insulin, kerja insulin atau
keduanya, sedangkan menurut WHO (1980) diabetes melitus merupakan
suatu kumpulan problema anatomik dan kimiawi yang merupakan akibat
dari sejumlah faktor yaitu defisiensi insulin absolut atau rela tif dan gangguan
fungsi insulin (Perkumpulan Endokrinologi Indonesia (Perkeni), 2006).
b. Klasifikasi
Melihat etiologinya diabetes melitus dapat dibedakan menjadi :
1) DM tipe 1, adanya gangguan produksi insulin akibat penyakit autoimun
atau idiopatik. Tipe ini sering disebut insulin dependent diabetes melitus
atau IDDM karena pasien mutlak membutuhkan insulin.
7
2) DM tipe 2, akibat resistensi insulin atau gangguan sekresi insulin. Pada
tipe 2 ini tidak selalu dibutuhkan insulin, kadang-kadang cukup dengan
diet dan antidiabetik oral. Karenanya tipe ini juga disebut non insulin
dependent diabetes melitus atau IDDM.
3) Jenis lain lagi, misalnya gestasional diabetes melitus, diabetes melitus
pada kehamilan, diabetes melitus akibat penyakit endokrin pankreas
atau akibat penggunaan obat (S uherman, 2009).
c. Manifestasi klinis
Berbagai keluhan dapat ditemukan pada penyandang diabetes melitus.
Kecurigaan adanya diabetes melitus perlu dipikirkan apabila terdapat
keluhan klasik diabetes melitus seperti:
1) Keluhan klasik berupa: poliuria, polidipsia, polifagia, dan penurunan
berat badan yang tidak dapat dijelaskan sebabnya.
2) Keluhan lain berupa: lemah badan, kesemutan, gatal, mata kabur, dan
disfungsi ereksi pada pria, serta pruritus vulvae pada wanita (Perkeni,
2006).
d. Patofisiologis
Diabetes melitus tipe I atau Insulin Dependent Diabetes Melitus
(IDDM) biasanya terjadi pada usia muda maka disebut juga juvenile onset-
diabetes. diabetes melitus tipe 1 hanya 10% dari seluruh kasus diabetes.
Diabetes melitus tipe 1 adalah penyakit autoimun yang ditentukan secara
genetik dengan proses bertahap menuju kerusakan secara imunologik sel-sel
yang memproduksi insulin. Manifestasi klinis diabetes melitus (hiperglikemi
dan ketosis) terjadi jika lebih dari 90% sel-sel beta rusak. Faktor lingkungan
juga berpengaruh, terutama infeksi virus misalnya coxakievirus, mumps,
measles, CMV, rubella, dan infeksi mononukleosis.
Virus tersebut tidak secara langsung menyebabkan kerusakan sel beta
namun lewat pembentukan autoantibodi. Pertama, infeksi memicu kerusakan
jaringan dan peradangan yang berakibat dilepaskannya antigen sel beta dan
8
aktivasi limfosit serta leukosit peradangan pada jaringan. Kedua, virus ini
memproduksi protein yang mirip self antigen dan respon imun yang
seharusnya bereaksi dengan protein virus justru bereaksi silang dengan self
antigen ini. Sedangkan diabetes melitus tipe 2 mencakup lebih dari 90% dari
semua kasus diabetes.
Diabetes melitus tipe 2 ditandai dengan kelainan sekresi insulin dan
kerja insulin. Pada pasien dengan diabetes melitus tipe 2 terdapat kelainan
dalam pengikatan insulin dengan reseptor. Kelainan ini dapat disebabkan
oleh berkurangnya jumlah tempat sel reseptor pada membran sel yang selnya
responsif terhadap insulin atau akibat ketidaknormalan reseptor insulin. Pada
awalnya tampak terdapat resistensi dari sel target terhadap kerja insulin
sehingga terjadi gangguan transpor glukosa menembus membran sel.
Hal ini menyebabkan sel beta terus untuk memproduksi insulin sehingga
insulin dalam darah meningkat, namun tidak dapat mempertahankan
euglikemia karena terjadi resistensi insulin tersebut. Pada akhirnya timbul
kegagalan sel beta memproduksi insulin dengan menurunnya jumlah insulin
yang beredar dan tidak lagi memadai untuk mempertahankan euglikemia.
(Kumar dkk, 2007).
e. Diagnosis
Kriteria diagnostik diabetes melitus :
1) Gejala klasik diabetes melitus + glukosa plasma sewaktu = 200mg/dl
(11,1 mmol/L)
Glukosa plasma sewaktu merupakan hasil pemeriksaan sesaat pada
suatu hari tanpa memperhatikan waktu makan terakhir atau.
2) Gejala klasik diabetes melitus + kadar glukosa plasma puasa = 126
mg/dl (7,0 mmol/L)
Puasa diartikan pasien tidak mendapat kalori tambahan sedikitnya 8 jam
(Perkeni, 2006).
9
Tabel II.1. Kadar Glukosa Darah Sewaktu dan Puasa Sebagai Patokan Penyaring dan Diagnosis DM (mg/dL) Bukan DM Belum pasti
DM DM
Kadar glukosa darah sewaktu (mg/dL)
Plasma vena <100 100-199 =200 Darah kapiler <90 90-199 =200
Kadar glukosa darah puasa (mg/dL)
Plasma vena <100 100-125 =126 Darah kapiler <90 90-99 =100
3. Obat Antidiabetik Oral
Ada 5 golongan obat antidiabetik oral yang dapat digunakan oleh penderita
diabetes melitus antara lain : sulfonilurea, meglitinid, biguanid, penghambat a-
glikosidase, dan tiazolidinedion. Kelima golongan obat ini diberikan pada
diabetes melitus tipe 2 yang tidak dapat dikontrol hanya dengan diet dan latihan
fisik saja (Suherman, 2009).
a. Golongan sulfonylurea
Dikenal 2 generasi Sulfonilurea, obat generasi pertama yaitu :
tolbutamida, klorpropamida dan tolazamida (Tolinase). Sedangkan obat
generasi kedua antara lain : glibenklamida, gliklazida, glipizida, dan
glikidon. Sulfonilurea menstimulasi sel-sel beta dari pulau langerhans,
sehingga meningkatkan sekresi insulin. Selain itu kepekaan sel-sel beta bagi
kadar glukosa darah juga diperbesar melalui pengaruhnya atas protein
transpor glukosa. Obat ini hanya efektif pada penderita NIDDM yang tidak
begitu berat, yang sel betanya masih bekerja cukup baik. Resorpsinya dari
usus umunya lancar dan lengkap, waktu paruhnya berkisar antara 4-5 jam
(tolbutamida, glipizida), 6-7 jam (glibenklamida) sampai 10 jam (glikazida)
atau lebih dari 30 jam (klorpropamida). Efek sampingnya yang terpenting
adalah hipoglikemia yang dapat terjadi secara terselubung. Agak jarang
terjadi gangguan lambung-usus (mual, muntah, diare), sakit kepala, pusing,
10
rasa tidak enak di mulut, juga gangguan kulit alergis. Nafsu makan
diperbesar dan berat badan bisa naik, terutama pada mereka yang tidak
menaati diet (Tjay dan Rahardja, 2003).
b. Meglitinid
Repaglinid dan neteglinid merupakan golongan meglitinid (Suherman,
2009). Kelompok obat terbaru ini bekerja menurut suatu makanisme khusus,
yaitu mencetuskan pelepasan insulin dari pankreas segera sesudah makan,
harus diminum tepat sebelum makan karena resorpsinya cepat, mencapai
kadar darah puncak dalam 1 jam. Insulin yang dilepaskan menurunkan
glukosa darah secukupnya. Ekskresinya juga cepat sekali, dalam waktu 1
jam sudah dikeluarkan dari tubuh (Tjay dan Rahadja, 2003).
Pada pasien dengan gangguan fungsi hepar atau ginjal harus diberikan
secara hati-hati, efek samping utamanya adalah hipoglikemia dan gangguan
saluran cerna, reaksi alergi juga pernah dilaporkan (Suherman, 2009).
c. Biguanid
Mekanisme kerja metformin adalah meningkatkan kepekaan reseptor
insulin, sehingga absorpsi glukosa di jaringan perifer meningkat. Mekanisme
lain yaitu penghambatan glukoneogenesis dalam hati. Efek sampingnya yang
paling sering terjadi berupa gangguan lambung-usus (mual, anorexia, sak it
perut, diare) tetapi umumnya bersifat sementara, yang lebih serius adalah
asidosis asam laktat dan angiopati diabetes terutama pada manula dan
insufisiensi hati atau ginjal. Karena efek samping yang banyak biguanid
ditarik dari peredaran (Tjay dan Rahardja, 2003).
d. Golongan Tiazolidinedion
Troglitazon adalah kelompok obat baru pada tahun 1996 dipasarkan di
Amerika Serikat dan Inggris. Mekanisme kerjanya yaitu meningkatkan
kepekaan insulin jaringan otot, jaringan lemak dan hati. Sebagai efeknya
penyerapan glukosa dijaringan lemak dan otot meningkat. Mekanisme lain
yaitu menurunkan kadar trigliserida/asam lemak bebas dan mengurangi
11
glukoneogenesis dalam hati. Zat ini tidak mendorong pankreas untuk
meningkatkan pelepasan insulin seperti sulfonilurea (Tjay dan Rahadja,
2003).
Pada pemberian oral absorpsi tidak dipengaruhi makanan, berlangsung ±
2 jam. Metabolismenya di hepar. Efek samping antara lain; peningkatan
berat badan, edema, menambah volume plasma dan memperburuk gagal
jantung kongestif (Suherman, 2009).
e. Penghambat Enzim a-glikosidase
Akarbose dan miglitol termaksud dalam golongan obat ini. Mekanisme
kerjanya yaitu menghambat penguraian di/polisakarida menjadi
monosakarida, maka glukosa dilepaskan lebih lambat dan absorpsinya ke
dalam darah juga kurang cepat, lebih rendah dan merata sehingga
memuncaknya kadar gula darah dihindarkan. Efek samping yang bersifat
dose-dependent antara lain; malabsorpsi, flatule, diare dan abdominal
bloating (Tjay dan Rahadja, 2003).
4. Ekstrak dan Ekstraksi
a. Definisi
Dalam buku Farmakope Indonesia Edisi 4 disebutkan bahwa ekstrak
adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif
dari simplisia nabati atau simplisia hewani dengan menggunakan pelarut
yang sesuai (Kementrian Kesehatan RI (Kemenkes RI), 2000).
Ekstraksi adalah penarikan zat pokok yang diinginkan dari bahan
mentah obat dan menggunakan pelarut yang dipilih dimana zat yang
diinginkan larut. Bahan mentah obat yang berasal dari tumbuh-tumbuhan
atau hewan tidak perlu diproses lebih lanjut kecuali dikumpulkan atau
dikeringkan. Ekstrak mengandung berbagai macam unsur, tergantung pada
obat yang digunakan dan kondisi dari ekstraksi (Ansel, 1989).
12
b. Cairan Penyari
Farmakope Indonesia menetapkan bahwa sebagai cairan penyari adalah
air, etanol, etanol-air atau eter (Kemenkes RI, 1986).
Pemilihan cairan penyari harus mempertimbangkan banyak faktor.
Cairan penyari yang baik harus memenuhi kriteria berikut :
1) Selektivitas
2) Kemudahan bekerja dan proses dengan cairan tersebut
3) Ekonomis
4) Ramah lingkungan
5) Keamanan (Kemenkes RI, 2000).
Etanol dipertimbangkan sebagai penyari karena: lebih selektif, kapang
dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% ke atas, tidak beracun, netral,
absorpsinya baik, etanol dapat bercampur dengan air pada segala
perbandingan, panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit. Untuk
meningkatkan penyarian biasanya menggunakan campuran etanol dan air.
Perbandingan jumlah etanol dan air tergantung pada bahan yang disari.
Etanol dapat melarutkan alkaloid basa, minyak menguap, glikosida,
kurkumin, kumarin, antrakinon, flavonoid, steroid, damar dan klorofil.
Lemak, malam, tanin dan saponin hanya sedikit larut. Dengan demikian zat
pengganggu yang terlarut hanya sedikit (Kemenkes RI, 1986).
Etanol tidak menyebabkan pembengkakan membran sel dan
memperbaiki stabilitas bahan obat terlarut. Keuntungan lain dari etanol
mampu mengendapkan albumin dan menghambat kerja enzim. Etanol (70%)
sangat efektif dalam menghasilkan jumlah bahan aktif yang optimal, dimana
bahan pengganggu hanya skala kecil yang turun kedalam cairan
pengekstraksi (Kemenkes RI, 1986).
13
c. Metode ekstraksi
Metode dasar dari ekstraski adalah maserasi dan perkolasi. Biasanya
metode ekstraksi dipilih berdasarkan beberapa faktor seperti sifat dari bahan
mentah obat dan daya penyesuaian dengan tiap macam metode ekstraksi dan
kepentingan dalam proses memperoleh ekstrak yang sempurna atau
mendekati sempurna dari obat (Ansel, 1989).
Metode maserasi (macerase = mangairi, melunakan) adalah cara
ekstraksi yang paling sederhana (Ansel, 1989). Maserasi dilakukan dengan
merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan
menembus dinding sel dan masuk dalam rongga sel yang mengangdung zat
aktif dan akan terlarut karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan
zat aktif dalam sel dengan yang di luar sel. Maka larutan yang terpekat akan
terdesak keluar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan
konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Keuntungan cara
penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan peralatan sederhana
dan mudah diusahakan (Kemenkes RI, 1986).
5. Uji Efek Antidiabetes
a. Metode uji toleransi glukosa dan metode uji diabetes aloksan
Uji efek antidiabetes dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu metode
uji toleransi glukosa dan metode uji diabetes aloksan.
1) Metode uji toleransi glukosa
Prinsip metode ini yaitu hewan yang telah dipuasakan kurang
kurang lebih 20-24 jam diberikan larutan glukosa peroral setengah jam
sesudah pemberian sediaan obat yang diuji. Pada awal percobaan
sebelum pemberian obat, dilakukan pengambilan cuplikan darah
masing-masing hewan uji untuk dihitung kadar glukosa darah awal.
Kemudian glukosa darah dihitung kembali pada waktu-waktu tertentu
(Kelompok Kerja Ilmiah (KKI), 1993).
14
2) Metode uji diabetes aloksan
Prinsip dari metode ini yaitu induksi diabetes dilakukan pada
mencit yang diberi suntikan aloksan monohidrat dengan dosis 70 mg/kg
BB. Penyuntikan dilakukan secara intravena pada ekor mencit.
Perkembangan hiperglikemia diperiksa tiap hari. Pemberian obat
antidiabetik secara oral dapat menurunkan kadar glukosa darah
dibandingkan terhadap mencit positif (KKI, 1993).
b. Pengukuran kadar glukosa darah secara enzimatik
Pada metode enzimatik , glukosa ditentukan kadarnya secara enzimatik
yaitu dengan penambahan enzim glukosa oksidase (GOD). Pereagen yang
digunakan menggunakan pereagen GOD-PAP. Absorbansi ? dan Warna
absorbansi metode enzimatik intensitasnya pada ? 500 nm dengan warna
merah (dari H2O2 yang terbentuk + peroksidase). Dengan prinsip dasar
glukosa dioksidasi oleh oksigen dengan katalis enzim glukosa oxidase
(GOD) akan membentuk asam glukonik dan hidrogen peroksida (H2O2).
Dengan adanya oksigen atau udara, glukosa dioksidasi oleh enzim menjadi
asam glukuronat disertai pembentukan H2O2. Kadar glukosa darah
ditentukan berdasarkan intensitas warna yang terjadi, diukur secara
spektrofotometri (KKI, 1993).
6. Aloksan
Aloksan merupakan bahan kimia yang digunakan untuk menginduksi
diabetes pada binatang percobaan. Efek diabetogeniknya bersifat antagonis
dengan glutathion yang bereaksi dengan gugus SH nya. Mekanisme aksi dalam
menimbulkan perusakan yang selektif belum diketahui dengan jelas. Beberapa
hipotesis tentang mekanisme aksi yang telah diajukan antara lain : pembentukan
khelat terhadap Zn, interferensi dengan enzim-enzim sel serta deaminasi dan
dekarboksilasi asam amino. Perusakan sel pankreas secara selektif oleh aloksan
belum banyak diketahui. Penelitian terhadap mekanisme kerja aloksan secara
invitro menunjukkan bahwa aloksan menginduksi pengeluaran ion kalsium dari
15
mitokondria yang mengakibatkan proses oksidasi sel terganggu. Keluarnya ion
kalsium dari mitokondria ini mengakibatkan gangguan homeostasis yang
merupakan awal dari kematian sel. Aloksan lazim digunakan karena zat kimia ini
menimbulkan hiperglikemik yang permanen dalam 2-3 hari (Suharmiati, 2003).
Dari hasil penelitian Azizah dan Munawaroh (2009), tikus diabetes yang
diinduksi aloksan 150 mg/kgBB secara intraperitoneal (ip), pada hari kedua
setelah induksi aloksan kadar glukosa darahnya sudah meningkat (diabetes).
7. Glibenklamid
Dikenal 2 generasi sulfonilurea, generasi 1 terdiri dari tolbutamid, tolazamid,
asethoheksimid dan kloropropamid. Generasi 2 yang potensi hipoglikemik lebih
besar antara lain gliburid (glibenklamid), glipizid, gliklazid dan glimepirid.
Gliburid (glibenklamid) potensinya 200x lebih kuat dari talbutamid, masa
paruhnya sekitar 4 jam, metabolismenya di hepar, pada pemberian dosis tunggal
hanya 25% metabolismenya diekskresi melalui urin, sisanya melalui empedu.
Mekanisme kerja golongan obat ini sering disebut insulin secretagogues,
kerjanya merangsang sekresi insulin dari granul sel-sel ß langehans pankreas
(Suherman, 2009). Dosis Glibenklamid 5 mg, dosis total 15 mg/hari, dosis
tunggal maksimal 10 mg (Ikatan Apoteker Indonesia (IAI), 2010). Waktu
mencapai konsentrasi maksimal dalam darah (T max) glibenklamid adalah 3 jam
(Prashanth dkk, 2011).
16
B. Kerangka Konsep
C. Hipotesis
Berdasarkan tinjauan pustaka di atas maka hipotesis penelitian ini adalah :
Terdapat efek penurunan kadar glukosa darah pada tikus putih jantan galur wistar
yang diberi ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.).
Transport glukosa darah terganggu
Kadar glukosa darah naik
Kadar glukosa darah turun
Insulin level ?
Regenerasi sel ß pankreas dan
sekresi insulin oleh sel ß pancreas ditingkatkan
Insulin level ?
Ekstrak etanol 70% buah
belimbing wuluh
Flavonoid
Induksi aloksan
Tikus
Transport glukosa darah efektif
Sel ß pancreas rusak
Sel ß pancreas yang rusak
17
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis Penelitian
Penelitian ini menggunakan desain penelitian eksperimental, dengan
menggunakan metode pre and post test control group design.
B. Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan September sampai dengan bulan
November tahun 2011 di Laboratorium Biomedik III Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
C. Subjek Penelitian
Subjek pene litian ini adalah buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) yang
diperoleh di daerah Gemolong, Klaten Tengah, Jawa Tengah pada bulan Agustus
2011.
D. Hewan Uji
Penelitian menggunakan tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Wistar,
dengan usia kurang lebih 2-3 bulan dengan berat badan 150-200 gram.
E. Besar Sampel
Besar sampel pada penelitian ini adalah 25 tikus yang dibagi dalam 5 kelompok.
F. Kriteria Restriksi
1. Kriteria inklusi
a. Tikus putih jantan galur Wistar.
b. Sehat dan mempunyai aktivitas normal.
c. Berumur 2-3 bulan.
d. Berat badan 150-200 gram.
18
2. Kriteria eksklusi
a. Tikus sakit saat penelitian berlangsung.
b. Tikus mati saat penelitian berlangsung.
G. Identifikasi Variabel Penelitian
1. Variabel bebas pada penelitian ini adalah ekstrak buah belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.).
Skala variabel : Rasio
2. Variabel terikat pada penelitian ini adalah kadar glukosa darah.
Skala variabel : Rasio
3. Variabel luar
a. Terkendali : Makanan, Penyakit pankreas, Umur dan berat badan, Jenis
kelamin (hormonal), strain.
b. Tidak terkendali : Stres dan faktor genetik
H. Definisi Operasional Variabel Penelitian
1. Ekstrak belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.)
Ekstrak buah belimbing wuluh adalah buah belimbing wuluh yang telah
dikeringkan kemudian diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan cairan
penyari yaitu etanol 70%.
2. Kadar glukosa darah
Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan dengan mengambil darah tikus
putih (Rattus norvegicus) sebanyak 1 ml kemudian dihitung kadar glukosa
darahnya dengan metode enzimatik .
I. Alat dan Bahan
1. Alat yang digunkan
a. Spuit
b. Mikrokapiler
c. Tabung reaksi 5 ml
19
d. Pipet pasteur, pipet berskala
e. Spuit needle feeding
f. Alat dan tabung sentrifuge
g. Perangkat pereaksi glukosa
h. Spektrofotometer
2. Bahan yang digunakan
a. Buah belimbing wuluh
b. GOD PAP reagen
c. Aloksan monohydrat
d. Alkohol 70%
e. Aquadest
J. Cara Kerja
1. Cara pengambilan darah
a) Pipa kapiler yang telah dilapisi heparin ditusukkan pada ekor tikus putih.
b) Darah yang keluar lewat pipa kapiler ditampung dalam tabung ependop yang
dipegang miring. Darah dialirkan lewat dinding tabung ependop untuk
menghindari terjadinya hemolisis.
c) Setelah itu darah ( kurang lebih 1 ml) di sentrifuge selama 15-20 menit (4000
rpm) dan diambil serumnya.
d) 10 µL serum + 100 µL reagen glukosa diinkubasi selama 10 menit pada suhu
25 ºC, kemudian dibaca pada spektrofotometer.
2. Uji Orientasi dosis :
a) Siapkan 21 hewan uji (tikus putih jantan galur Wistar)
b) Semua hewan uji diadaptasikan selama 1 minggu
c) Bagi masing-masing tikus ke dalam 2 kelompok, kelompok A dan kelompok
B. Kelompok A adalah kelompok kontrol (6 tikus) yang dibagi menjadi 2
kelompok yaitu kontrol positif (A1) dan kontrol negatif (A2) masing-masing
3 tikus, sedangkan kelompok B adalah kelompok perlakuan yang dibagi
menjadi kelompok dosis 1 untuk kelompok B1, kelompok dosis 2 untuk
20
kelompok B2, kelompok dosis 3 untuk kelompok B3, kelompok dosis 4
untuk kelompok B4, dan kelompok dosis 5 untuk kelompok B5
d) Tikus dipuasakan 16 jam kemudian ukur glukosa darah awal tikus
e) Kelompok A dan B di induksi dengan aloksan Monohidrat secara I.P 30
mg/200g BB.
f) Setelah hari ke dua, masing-masing tikus kelompok B diberi ekstrak buah
belimbing wuluh peroral setiap hari selama 7 hari dengan dosis :
- dosis 1 untuk kelompok B1 = 5 mg/200g
- dosis 2 untuk kelompok B2 = 10 mg/200g
- dosis 3 untuk kelompok B3 = 20 mg/200g
- dosis 4 untuk kelompok B4 = 40 mg/200g
- dosis 5 untuk kelompok B5 = 80 mg/200g
sedangkan tikus A1 diberi glibenkalamid dosis 0,126/200g BB peroral dan
A2 diberi aquades dosis 2 ml/200g BB peroral.
g) Setelah 7 hari perlakuan, ukur kadar glukosa darah tikus.
3. Uji antidiabetes :
a) Pembuatan ekstrak belimbing wuluh dilakukan di laboratorium biomedik III
FK UMS.
b) Subjek penelitian dibagi secara acak dalam 5 kelompok, masing-masing
terdiri atas 5 ekor tikus putih yang terdiri dari : Kelompok kontrol negatif
(-), kelompok kelompok kontrol positif (+), kelompok I sebaga i kelompok
perlakuan dosis 1, kelompok II sebagai kelompok perlakuan dosis 2 dan
kelompok III sebagai kelompok perlakuan dosis 3.
c) Pertama-tama semua subjek penelitian (semua kelompok) diadaptasikan
selama 1 minggu dalam lingkungan laboratorium. Masing-masing tikus
diambil darahnya dan dihitung kadar glukosa Darah awal (GD1).
d) Semua kelompok diinduksi dengan aloksan 30 mg/200g BB secara IP.
e) Tikus dipuasakan selama 16 jam sebelum pengukuran kadar glukosa darah
hari ke dua . Masing-masing tikus di ukur glukosa darahnya (GD2).
21
f) Kelompok kontrol negatif (-) diberi aquades, kelompk kontrol positif (+)
diberi glibenklamid peroral dosis 0,126 mg/200g BB. Kelompok I,
Kelompok II dan Kelompok III diberi ekstrak etanol 70% buah belilmbing
wuluh dosis 1, dosis 2 dan dosis 3 dengan menggunakan spuit needle feeding
peroral selama 7 hari berturut-turut.
g) Tikus dipuasakan selama 16 jam setelah perlakuan selama 7 hari, semua
subjek penelitian diambil darahnya untuk diukur kadar glukosa darah dan
didapat kadar glukosa darah akhir (GD3).
22
K. Rancangan Penelitian
Rancangan eksperimental pre and post test control group design.
* Keterangan :
a. N adalah jumlah sampel yaitu 25 ekor tikus putih
b. GD1 adalah kadar gula darah tikus sebelum diinjeksi dengan aloksan (gula darah
pre aloksan)
N = 25
GD1 hari ke-0
Induksi Aloksan
Kontrol (-) Kelompok I Kontrol (+) Kelompok II
GD2 hari ke 2
Diberi
aquades
selama 7 hari
Diberi
glibenklamid
dosis 0,126
mg/200g BB
Diberi ekstrak
buah
belimbing
wuluh dosis 1
selama 7 hari
Diberi ekstrak
buah
belimbing
wuluh dosis 2
selama 7 hari
GD3 setelah 7
hari perlakuan
Bandingkan
Bandingkan
Kelompok III
Diberi ekstrak
buah
belimbing
wuluh dosis 3
selama 7 hari
23
c. GD2 adalah kadar gula setelah diinjeksi dengan aloksan (gula darah post
aloksan)
d. dosis 1, dosis 2 dan dosis 3 didapat dari uji orientasi dosis
e. GD3 adalah kadar gula darah setelah diberi perlakuan selama 7 hari (gula darah
akhir)
f. GD3 untuk kelompok kontrol positif dihitung 3 jam setelah pemberian obat.
L. Analisis Data
Data yang didapat dari 5 kelompok dianalisis secara statistik dengan
menggunakan uji statistik. Langkah pertama yakni melakukan uji normalitas
distribusi dengan uji Shapirowilk dilanjutkan dengan uji Homogenecity of Variance
untuk menguji homogenitas dari varian data tiap kelompok. Selanjutnya untuk
mengetahui perbedaan kadar gula darah antar kelompok digunakan uji post-hoc.
M. Jadwal Kegiatan
Tabel III.1. Jadwal Kegiatan
Kegiatan
Tahun 2011 Tahun 2012
Bulan Bulan 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 01
Penyusunan Proposal Penelitian
Ujian Proposal
Revisi Proposal
Penelitian
Analisis Data
Penyusunan skripsi
Ujian Skripsi
Revisi Skripsi
24
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman dilakukan untuk identifikasi tanaman sehingga
menghindari kesalahan dalam pengambilan tanaman. Kebenaran tanaman merupakan
syarat yang harus dipenuhi dalam uji farmakologis terhadap tanaman tersebut.
Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu
Pendidikan (FKIP) Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Hasil determinasi tanaman belimbing wuluh adalah sebagai berikut :
1b, 2b, 3b, 4b, 6b, 7b, 9b, 10b, 11b, 12b, 13b, 14a, 15b, 197b, 208b, 219b, 220b,
224b, 225b, 227b, 229b, 230b, 234b, 235b, 236b, 237b,
238a ... ? Familia : Oxalidaceae
1a ....... ? Genus : Averrhoa
1b ....... ? Species : Averrhoa bilimbi L.
(Steenis, 2005; Tjitrosoepomo, 2007).
B. Hasil Penelitian
1. Randemen
Randemen dilakukan untuk mengetahui perbandingan antara simplisia (buah
belimbing wuluh) dengan ekstrak.
Perhitungan :
Berat kering bahan = 350 gr
Hasil ekstraksi = 42,77 gr
Randemen = 42.77 = 0.122
350
1 gram buah belimbing wuluh kering ˜ 0.122 gram ekstrak kental.
25
2. Hasil uji efek antidiabetes
Tabel IV.1. Hasil Uji Orientasi Dosis Efek Antidiabetes
Kelompok Kadar Glukosa Darah
Awal (mg/dL) Post Aloksan
(mg/dL) Akhir (mg/dL)
Kontrol positif (glibenklamid) 87.33 ± 20.23 236.33 ± 58.9 115.33 ± 46.23 Dosis 5 mg/200 g BB 76 ± 28.65 237.33 ± 64.79 197.67 ± 55.9
Dosis 10 mg/200 g BB 83.67 ± 40.48 238.33 ± 51.05 194.67 ± 57.32 Dosis 20 mg/200 g BB 92.33 ± 19.92 263.67 ± 42.74 181 ± 16.29 Dosis 40 mg/200 g BB 75.33 ± 50.32 267.67 ± 114.85 170 ± 33.6
Dosis 80 mg/200 g BB 83 ± 21.22 260.67 ± 47.22 168 ± 20.33
Penurunan (%) 50.57
15.28 16.56 22.42
27.14 27.99
Tabel. IV. 1. menunjukkan rata-rata kadar glukosa darah awal, post aloksan
dan akhir. Kelompok perlakuan dan kelompok kontrol positif mengalami
penurunan dibandingkan dengan kadar glukosa darah post aloksan, penurunan
kadar glukosa darah dihitung dengan menggunakan rumus :
(%) PKGD = kadar glukosa kontrol (-) – kadar glukosa kelompok x 100%
kadar glukosa kontrol (-)
Penurunan kadar glukosa darah berbeda tiap kelompok sesuai dosis yang
diberikan, maka dapat dikatakan bahwa ada efek antidiabetes pada kelompok
kontrol positif dan kelompok perlakuan, dan pada penelitian ini dosis yang
paling berefek adalah 80 mg/200 g BB dengan % PKGD (penurunan kadar
glukosa darah) sebesar 27,99% dan selanjutnya untuk penelitian uji efek
26
antidiabetes digunakan dosis 20 mg/200g BB, 40 mg/200 g BB dan 80 mg/200 g
BB.
3. Hasil uji efek antidiabetes
Tabel IV.2. Hasil Uji Efek Antidiabetes Tikus Putih
Kelompok Awal (mg/dL)
Post Aloksan (mg/dL)
Akhir (mg/dL)
Kelompok Kontrol Negatif (aquadest)
108 332 250 110 280 248 84 320 547
100 191 602 89 223 256
Kelompok Konrol Positif
(Glibenklamid)
102 198 170 95 297 164 89 316 157 79 210 145 93 222 92
Kelompok Dosis 20 mg/200 g BB
117 356 200 87 325 290 99 285 195 86 290 126 94 301 283
Kelompok Dosis 40 mg/200 g BB
70 310 264 83 291 241 91 262 141
88 275 252 80 322 179
Kelompok Dosis 80 mg/200 g BB
103 244 156 63 290 163 96 316 131 96 223 146 111 331 185
27
Tabel IV.2. menunjukan kadar glukosa darah 5 kelompok : yaitu kelompok
kontrol negatif, kelompok kontrol positif, kelompok perlakuan dosis 20mg/200 g
BB, 40mg/200 g BB dan 80 gm/200 g BB sebelum diinduksi aloksan (kadar
glukosa darah awal), kadar glukosa darah setelah diinduksi aloksan (kadar
glukosa darah post aloksan) dan kadar glukosa darah setelah perlakuan 7 hari
(kadar glukosa darah akhir).
4. Analisis data
Data hasil pengukuran kadar glukosa serum darah tikus kemudian dianalisa
menggunakan uji statistik dengan menggunakan software program SPSS versi 16
for windows.
Uji statistik yang digunakan yaitu :
a. Uji statistik Shapiro-Wilk untuk menguji distribusi data yang di dapat
b. Uji statistik Test of Homogenecity of Variance untuk menguji homogenitas
dari varian data tiap kelompok.
c. Uji statistik One-way Anova untuk menguji rata-rata perbandingan data tiap
kelompok.
d. Uji statistik LSD (Least Significant Difference), untuk menguji signifikansi
dari perbedaan rata-rata antar kelompok perlakuan.
5. Hasil analisis statistik
a. Uji distribusi data
Uji distribusi data dilakukan pada kelima kelompok awal dengan
menggunakan Uji Saphiro-Wilk digunakan untuk mengetahui distribusi data
kelompok kecil, yang kurang dari 50 sampel. Hasil analisis Saphiro-Wilk
didapatkan p = 0, 981. Nilai p tersebut > 0,05 maka dapat disimpulkan
bahwa distribusi data yang ada normal. Hasil penghitungan lengkap
disajikan pada lampiran.
28
b. Hasil uji Test of Homogenecity of Variance
Uji homogenitas varian dilakukan pada kelima kelompok awal
menggunakan Levene test. Hasil analisis menunjukkan Levene test p = 0,630
dimana nilai p tersebut > 0,05 maka dapat disimpulkan bahwa varian data
yang ada homogen. Hasil penghitungan lengkap disajikan pada Lampiran.
Karena data homogen dan berdistribusi normal, maka analisis data dapat
dilanjutkan dengan uji Anova.
c. Hasil uji Anova
Tabel IV.3. Uji Anova Kadar Glukosa Darah Awal Tikus Putih
Kelompok N Mean (mg/dL) Sig Kontrol negative 5 98.20 ± 14.22
0.318 Kontrol positif 5 91.60 ± 10.52
Dosis 1 5 96.60 ± 15.62 Dosis 2 5 82.40 ± 10.11 Dosis 3 5 93.8 ± 22.72
Hasil uji Anova didapatkan kadar glukosa darah awal tikus putih tidak
berbeda secara bermakna dengan p = 0,318 (>0,05).
Tabel IV.4. Hasil uji Anova Kelompok Post Aloksan Tikus Putih
Kelompok N Mean Sig Kontrol negative 5 269.20 ± 75.76
0.307 Kontrol positif 5 248.60 ± 66.99 Dosis 1 5 311.40 ± 36.4
Dosis 2 5 292 ± 30.5 Dosis 3 5 285.20 ± 65.73
Hasil uji Anova didapatkan kadar glukosa darah post aloksan tikus putih
tidak berbeda secara bermakna dengan p = 0,307 (>0,05).
29
Tabel IV. 5. Hasil Uji Anova Kelompok Akhir Tikus Putih
Kelompok N Mean sig Kontrol negatif 5 380.60 ± 221.13
0. 004 Kontrol positif 5 145.60 ± 38.96 Dosis 1 5 218.80 ± 84.95 Dosis 2 5 215.40 ± 65.75 Dosis 3 5 156.20 ± 24.95
Pada tabel IV. 5. Hasil uji Anova didapatkan kadar glukosa darah akhir
tikus putih berbeda secara bermakna dengan p = 0,004 (<0,05). maka
didapatkan kesimpulan bahwa minimal terdapat 1 kelompok yang memiliki
kadar glukosa darah yang berbeda, untuk mengetahui kelompok mana yang
berbeda secara bermakna maka dilakukan uji LSD (Least Significant
Difference).
Tabel IV. 6. % Penurunan Kadar Glukosa Darah Uji Antidiabetes
Kelompok % Penurunan Kontrol positif 61.74 Dosis 1 42.51 Dosis 2 43.40
Dosis 3 58.95
Tabel IV. 6. menunjukan % penurunan kadar glukosa darah pada uji
efek antidiabetes dimana penurunan tertinggi pada kelompok kontrol positif
diikuti dosis 3, dosis 2 dan dosis 1.
d. Uji LSD (Least Significant Difference)
Tabel IV. 7. Hasil Uji LSD Kelompok Akhir Tikus Putih
Kelompok P Keterangan I-II 0,001 Berbeda signifikan I-III 0,010 Berbeda signifikan I-IV 0,009 Berbeda signifikan I-V 0,001 Berbeda signifikan
30
Uji LSD dilakukan untuk menguji signifikansi dari perbedaan rata-rata
antar kelompok dan didapatkan :
- I – II, p: 0,001 sehingga terdapat perbedaan kadar glukosa darah yang
signifikan antara kelompok kontrol negatif dan kelompok kontrol
positif.
- I – III, p : 0,010 sehingga terdapat perbedaan kadar glukosa darah yang
signifikan antara kelompok kontrol negatif dan kelompok dosis 1.
- I – IV, p : 0,009 sehingga terdapat perbedaan kadar glukosa darah yang
signifikan antara kelompok kontrol negatif dan kelompok dos is 2.
- I – V, p : 0,001 sehingga terdapat perbedaan kadar glukosa darah yang
signifikan antara kelompok kontrol negatif dan kelompok dosis 3
- II – III p : 0,214 sehingga tidak terdapat perbedaan kadar glukosa darah
yang signifikan antara kelompok kontrol positif dan kelompok dosis 1
- II – VI p : 0,235 sehingga tidak terdapat perbedaan kadar glukosa darah
yang signifikan antara kelompok kontrol positif dan kelompok dosis 2
- II – V p : 0,854 sehingga tidak terdapat perbedaan kadar glukosa darah
yang signifikan antara kelompok kontrol positif dan kelompok dosis 3
- III – IV p : 0,953 sehingga tidak terdapat perbedaan kadar glukosa darah
yang signifikan antara kelompok dosis 1 dan kelompok dosis 2
- III – V p : 0,285 sehingga tidak terdapat perbedaan kadar glukosa darah
yang signifikan antara kelompok kontrol dosis 1 dan kelompok dosis 3
- IV – V p : 0,311 sehingga tidak terdapat perbedaan kadar glukosa darah
yang signifikan antara kelompok kontrol dosis 2 dan kelompok dosis 3
II-III 0,214 Tidak berbeda II-IV 0,235 Tidak berbeda II-V 0,854 Tidak berbeda III-IV 0,953 Tidak berbeda III-V 0,285 Tidak berbeda IV-V 0,311 Tidak berbeda
31
Keterangan :
I = kelompok kontrol negatif
II = kelompok kontrol positif
III = kelompok dosis 20 mg/200 g BB
IV = kelompok dosis 40 mg/200 g BB
V = kelompok dosis 80 mg/200 g BB
C. Pembahasan
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan lima kelompok. Kelompok I
sebagai kontrol negatif (aquadest), kelompok II sebagai kontrol positif
(glibenklamid), kelompok perlakuan dosis I, dosis II, dan dosis III. Ketiga dosis
tersebut didapatkan dari uji orientasi, dimana didapatkan dosis I = 20mg/200g BB,
dosis II = 40mg/200g BB, dan dosis III = 80mg/200g BB. Pengukuran kadar glukosa
darah awal (GD1) dilakukan pada hari pertama. Hal ini penting untuk menyingkirkan
kelainan/penyakit yang dapat mempengaruhi kadar glukosa darah dan dijadikan
sebagai kadar glukosa darah tanpa perlakuan. Hasil uji Anova terhadap kadar glukosa
darah tikus putih (Rattus norvegicus) sebelum percobaan menunjukan tidak adanya
perbedaan yang bermakna pada semua kelompok sehingga dapat diketahui bahwa
terdapat keseragaman kadar glukosa darah tikus putih kelima kelompok.
Induksi diabetes dilakukan dengan pemberian aloksan monohidrad dengan dosis
150mg/kg BB. Menurut lenzen (2008), aloksan sering digunakan sebagai penginduksi
diabetes pada penelitian terkait diabetes karena bekerja secara selektif merusak sel
beta pankreas. Pengukuran kadar glukosa darah post aloksan (GD2) dilakukan pada
hari ketiga. Hal ini untuk mengatahui kadar glukosa darah setelah diinduksi aloksan
yang mengakibatkan keadaan hiperglikemia. Pemberian aloksan menyebabkan kadar
glukosa darah tikus meningkat signifikan.
Semua kelompok post aloksan diharapkan memiliki kadar glukosa darah yang
tidak berbeda secara signifikan sebelum perlakuan dimulai sehingga dapat diamati
efek penurunan kadar glukosa darah setelah perlakuan pada semua kelompok. Hasil
32
uji Anova pada kelompok post aloksan menunjukan tidak ada perbedaan kadar
glukosa darah yang bermakna antar kelompok perlakuan (GD2). Setelah itu, semua
kelompok diberi perlakuan selama 7 hari. Pemeriksaan kadar glukosa darah akhir
(GD3) dilakukan pada hari kedelapan kecuali kelompok kontrol positif, pada
penelitian ini kelompok kontrol positif diukur kadar glukosa darah setelah 3 jam
pemberian perlakuan, hal ini dikarenakan karena waktu yang dibutuhkan obat
glibenklamid untuk mencapai kadar maksmimum/kadar puncak dalam darah (t max)
adalah 3 jam (Prashanth dkk, 2011).
Kadar glukosa darah terus meningkat pada kontrol negatif, hal ini disebabkan
karena aquadest tidak memiliki efek menurunkan glukosa darah atau bersifat netral.
Peningkatan glukosa darah disebabkan karena efek aloksan masih bekerja pada
pengukuran (GD3). Penurunan kadar glukosa darah yang signifikan terjadi pada
kelompok kontrol positif (glibenklamid), perlakuan dosis 20mg/200g BB, dosis
40mg/200g BB, dan dosis 80mg/200g BB. Kelompok kontrol positif memberikan
efek penurunan signifikan. Menurut Suherman (2007), penurunan kadar glukosa
darah ini disebabkan oleh sifat farmakodinamik glibenklamid yang merangsang sel
beta pankreas mensekresi insulin meskipun sel beta pankreas telah dirusak dengan
pemberian aloksan tetapi sifat dari perusakan pankreas adalah parsial sehingga masih
terdapat sel beta pankreas yang masih dapat mensekresi insulin dan menjaga kadar
euglikemia. Penurunan kadar glukosa darah terjadi kemungkinan karena kandungan
flavonoid dalam buah belimbing wuluh (Soedibyo, 1998). Flavonoid diduga bekerja
dengan cara meregenerasi dan merangsang pelepasan insulin oleh sel beta pankreas
(Dheer dan Bhatnagar, 2010).
Pada penelitian ini menggunakan teknik penyarian maserasi dengan penyari
etanol 70% yang bersifat semipolar dimaksudkan sebagai cara untuk menarik zat-zat
yang bersifat polar dan non polar yang terkandung dalam buah belimbing wuluh.
Penelitian Armenia dkk (2004), menyatakan bahwa pemberian jus buah belimbing
wuluh pada tikus putih dapat menurunkan kadar glukosa darah. Hasil penelitian
tersebut menunjukan perbedaan yang bermakna. Perbedaan penelitian ekstrak etanol
33
70% buah belimbing wuluh dengan penelitian pemberian jus buah belimbing wuluh
adalah buah belimbing wuluh tidak di jus tapi di ekstrak karena dengan mengekstrak
buah belimbing wuluh dapat disimpan dalam jangka waktu lama, jika dalam bentuk
jus harus membuat setiap hari. Ekstraksi dapat menarik zat-zat yang terkandung
dalam buah belimbing wuluh dan pada penelitian Armenia dkk (2004), belum
menggunakan teknik penyarian untuk mengambil zat-zat spesifik yang dapat
mempengaruhi kadar glukosa darah.
Menurut penelitian Lathifah (2008), dalam buah belimbing wuluh mengandung
senyawa flavonoid yang diduga berfungsi meregenerasi dan merangsang pelepasan
insulin oleh sel beta pankreas (Dheer dan Bhatnagar, 2010). Pada penelitian Armenia
dkk (2004), dosis yang dibutuhkan untuk menurunkan kadar glukosa darah adalah
30ml/kg BB yang diberikan selama 5 hari dengan hasil % PKGD (penurunan kadar
glukosa darah ) sebesar 55, 27% sedangkan pada penelitian ini dosis terbesar yang
dibutuhkan untuk menurunkan kadar glukosa darah yaitu 20 g/50kg BB yang
diberikan selama 7 hari dengan hasil % PKGD sebesar 58,95%. Pada penelitian lain,
pemberian suplemen pektin buah belimbing wuluh sebanyak 2 ml dan 4 ml dapat
menurunkan kadar kolesterol total serta dapat mencegah timbulnya lesi aterosklerosis
pada arteria koronaria dan aorta (Syahruman dkk, 1998). Menurut penelitian Prastyan
(2008), ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh dosis 200mg/kgBB, 400mg/kBB
dan 800mg/kgBB mempunyai efek terhadap penurunan kadar kolesterol pada serum
darah tikus. Kelemahan dalam penelitian ini adalah kurangnya variasi dosis sehingga
belum diketahui dosis jenuh dari ekstrak buah belimbing wuluh tersebut. Selain itu
tidak diketahui secara pasti mekanisme penurunkan kadar glukosa darah tikus put ih
serta senyawa aktif yang berperan sebagai antidiabetik dalam ekstak etanol 70% buah
belimbing wuluh, juga belum diketahui pasti kelompok/jenis senyawa yang memiliki
aktifitas antidiabetes pada buah belimbing wuluh.
34
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Kesimpulan yang dapat ditarik dari hasil penelitian ya ng telah dilakukan adalah
sebagai berikut :
1. Ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) dosis 100
mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB mempunyai efek penurunan kadar
glukosa darah pada tikus putih jantan galur wistar yang diinduksi dengan
aloksan.
2. Persentase penurunan kadar glukosa darah ekstrak etanol 70% buah belimbing
wuluh dosis 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, dan 400 mg/kgBB berturut-turut
adalah 42.72%, 43.3% dan 58.95%.
B. Saran
Saran untuk penelitian yang telah dilakukan adalah sebagai berikut :
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang efek penurunan kadar glukosa
darah ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) dalam
variasi dosis yang lebih banyak agar diperoleh efek penurunan kadar glukosa
yang optimal.
2. Penelitian selanjutnya sebaiknya menggunakan waktu perlakuan yang lebih lama
agar efek regenerasi sel beta pankreas lebih dapat dilihat.
3. Perlu dilakukan identifikasi senyawa aktif dari buah belimbing wuluh (Averrhoa
bilimbi L.) yang dapat berefek dalam menurunkan kadar glukosa darah.
4. Perlu dilakukan uji ketoksikan untuk mengetahui tingkat keamanan penggunaan
ekstrak buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.).
DAFTAR PUSTAKA
Ansel H. C., 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi IV. Jakarta: Penerbit Universitas Indonesia. pp:605-7.
Armenia, Megawati, dan Rusdi., 2004. Efek Penurunan Gula Darah Air Perasan Buah Belimbing Wuluh Pada Mencit Diabetes Yang Diinduksi Aloksan Dan Mencit Yang Dibebani Glukosa. Jurnal sains dan teknologi farmasi. Vol 9:62-9
Azizah T. S. dan Munawaroh, R., 2009. Interaksi Quercetin Dengan Tolbutamid: Kajian Terhadap Perubahan Kadar Glukosa Darah Pada Tikus Jantan Yang Dinduksi Aloksan. Jurnal Penelitian Sains & Teknologi. Vol 10:2
Dheer R. dan Bhatnagar P., 2010. A study of the Antidiabetic Activity of Barleria prionitis Linn. Indian Journal of Pharmacology. Vol 42 (2): 70-3.
Gembong T., 1998. Taksonomi Tumbuhan Spermatophyta. Yogyakarta: UGM Press
Ikatan Apoteker Indonesia, 2010. Informasi Spesialis Obat Indonesia Vol 45. Jakarta: Penerbit IAI. pp: 269
Kelompok Kerja Ilmiah, 1993. Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik, Pengembangan Dan Pemanfaatan Obat Bahan Alam. Jakarta: yayasan Pengembangan Obat Bahan Alam Phyto Medica. pp: 15-7.
Kementrian Kesehatan RI 1986. Sediaan Galenik . Jakarta: Depkes RI. pp: 6-8; 10.
Kementrian Kesehatan RI 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta : Depkes RI. pp: 5; 9.
Kumar V., Cotran R.S., dan Robbins S.L., 2007. Buku Ajar Patologi Robbins Edisi ke 7, Volume 1 . Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. pp: 719-24.
Lathifah Q. A., 2008. Antibakteri Pada Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Dengan Variasi Pelarut. [skripsi]. Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam Negeri (UIN) Malang. Malang.
Lenzen S., 2008. The mechanisms of alloxan- and treptozotocin- induced diabetes Diabetologia. Vol 51:216–226
Ngatidjan, 1991. Petunjuk Laboratorium: Metode Laboratorium Dalam Toksikologi. Yogyakarta: FK UGM. pp: 94.
Nwachukwu D. C., Okwuosa C.N., Achukwu P.U., Azubieke N., Eze G., 2010. Investigation of the Anti-Hyperglycaemic Effect of the Leaf Extracts of Solanum Dulcamara in Diabetic Rats. Indian Journal of Novel Drug delivery. Vol 2: 138-43
Perkumpulan Endokrinologi Indonesia. 2006. Konsensus Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Melitus Tipe 2 di Indonesia. Jakarta. pp: 1; 4-7.
Prashanth S., Kumar A.A., Madhu B., Rama N,. dan Sagar J. V. 2011. Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Drug Interactions of carbamazepine and glibenclamide in Healthy Albino Wistar Rats. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. Vol 2 (1): 7-10
Prastyan E., 2008. Uji Efek Ekstrak Etanol 70% Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Penurunan Kadar Kolesterol Pada Serum Darah Tikus [skripsi]. Fakultas Kedokteran. Universitas Muhammadiyah Surakarta (UMS). Surakarta
Pusat Pemeriksaan Obat dan Makanan 2009. Informasi Spesialis Obat Indonesia. Jakarta : PT. ISTI Penerbitan Jakarta. pp: 236.
Schteingart D. E., 2005. Pankreas : Metabolisme Glukosa dan Diabetes Melitus. Dalam: Price, S. A dan Wilson, L. M. Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-proses Penyakit. Jakarta: EGC. pp: 1267-9.
Soedibyo B. R. A. M., 1998. Alam Sumber Kesehatan Manfaat dan Kegunaan. Jakarta: Balai Pustaka. pp: 81.
Subekti I., 2007. Tetap Sehat dengan Diabetes Melitus. Dalam: Darmowidjojo, B. Hidup Sehat dengan Diabetes. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. pp: 23.
Sudarsono P. N., Gunawan D., Wahyuono S., Donatus I.A., Purnomo, 2002. Tumbuhan Obat II : Hasil Penelitian, Sifat-Sifat, dan Penggunaan. Yogyakarta: Pusat Studi Obat Tradisional UGM. pp: 15-7.
Suharmiati, 2003. Pengujian Bioaktivitas Anti Diabetes Melitus Tumbuhan Obat. Cermin Dunia Kedokteran. Vol 9: 140
Suherman S. K., 2007. Insulin dan Antidiabetik Oral. Dalam : Gunawan, S.G. Farmakologi dan Terapi. Edisi 5. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. pp: 485; 489-93.
Suyono S., 2006. Diabetes melitus di Indonesia. Dalam : Sudoyo, A,W, Setiyohadi, B, Alwi, I, Simadibrata, M, Setiati, S. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Edisi
IV Jilid III. Jakarta: Pusat Penerbitan Departemen Ilmu Penyakit Dalam FKUI. pp: 1852-6.
Syahruman, Tusihadi T., Rahmat S.A, Wahyudi M., dan Nugroho W., 1998. Pemberian Ektrak Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Dalam Upaya Mencegah Ateroskelrosis. Buletin Penalaran Mahasiswa UGM. Vol 4 (1): 3-6
Tjay T. H., dan Rahardja K., 2003. Obat-Obat Penting Khasiat Penggunaan dan Efek Sampingnya Edisi 4. Jakarta: Alex Media Komputindo. pp: 702-3.
Tjitrosoepomo, G. 2007. Taksonomi Tumbuhan Spermatophyta. Yogyakarta: UGM Press.
Van Steenis, C.G.G.J. 2005. Flora. Jakarta : PT. Pradnya Paramita.
Waspadji S., 2006. Komplikasi Kronik Diabetes: Mekanisme Terjadinya, Diagnosis dan Strategi Pengelolaan. Dalam : Sudoyo, A.W, Setiyohadi, B, Alwi, I, Simadibrata, M, Setiadi, S. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Edisi IV Jilid III. Jakarta : Pusat Penerbitan Departemen Ilmu Penyakit Dalam FKUI. pp: 1884-6.
Waspadji S., 2006. Kaki Diabetes. Dalam : Sudoyo AW, Setiyohadi B, Alwi I, Simadibrata M, Setiadi S. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Edisi IV Jilid III. Jakarta : Pusat Penerbitan Departemen Ilmu Penyakit Dalam FKUI. pp: 1911.
Wijayakusuma H., 2004. Bebas Diabetes Mellitus Ala Hembing. Jakarta: Puspa Swara.
Lampiran 1.
Lampiran 2.
Lampiran 3 : Konversi perhitungan dosis untuk berbagai jenis (spesies) hewan uji.
Mencit
20 g
Tikus
200 g
Marmot
400 g
Kelinci
1,5 kg
Kucing
2 kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
Mencit
20 g 1,0 7,0 12,25 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9
Tikus
200 g 0,14 1,0 1,74 3,9 4,2 9,2 17,8 56,0
Marmot
400 g 0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5
Kelinci
1,5 kg 0,04 0,25 0,44 1,0 1,08 2,4 4,5 14,2
Kucing
2 kg 0,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0
Kera
4 kg
0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1
Anjing
12 kg 0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1
Manusia
70 kg 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,076 0,16 0,32 1,0
(Ngatidjan, 1991)
Lampiran 4 : Dosis pemberian aloksan dan glibenklamid
1. Perhitungan dosis
a. Dosis Aloksan
Dosis pada tikus putih 200 gr intraperitonial : 150mg/kg (Azizah dan
Munawaroh, 2009).
Perhitungan :
150/1000 = X/200
X = (150 x 200)/1000
X = 30000/1000
X = 30
- Ket : X = dosis untuk tikus dengan BB 200gr
Dosis pemberian pada tikus = 30mg/200g BB
30 mg aloksan dilarutkan kedalam 2,5 ml aquabidest sehingga di dapat 2,5
ml/200gr BB.
b. Dosis glibenklamid
Dosis terapi untuk Glibenklamid untuk manusia 5mg/hari (50 kg)
Konversi dosis manusia (70 kg) ke tikus (200gr) : 0,018
Dosis terapi Glibenklamid pada tikus : 0,018 x 5 mg x 70/50
: 0,126 mg/200g BB
Dosis pemberian pada tikus = 0,126mg/200g BB
Lampiran 5 : Hasil uji statistik
A. Tes Normalitas dan varian data
1. kadar glukosa darah awal
2. kadar glukosa darah post aloksan
3. kadar glukosa darah akhir
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
kadar gluksosa awal .071 25 .200* .987 25 .981
kadar glukosa pos aloksan .132 25 .200* .940 25 .150
kadar glukosa akhir .207 25 .007 .741 25 .000
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
B. Tes Homogenitas
1. kadar glukosa darah awal
2. kadar glukosa darah post aloksan
3. kadar glukosa darah akhir
Test of Homogeneity of Variances
Levene Statistic df1 df2 Sig.
kadar gluksosa awal .655 4 20 .630
kadar glukosa pos aloksan 2.603 4 20 .067
kadar glukosa akhir 22.655 4 20 .000
C. Uji Anova kadar glukosa darah
1. kadar glukosa darah awal
2. kadar glukosa darah post aloksan
3. kadar glukosa darah akhir
ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
kadar gluksosa awal Between Groups 769.040 4 192.260 1.261 .318
Within Groups 3049.200 20 152.460
Total 3818.240 24
kadar glukosa pos
aloksan
Between Groups 11257.040 4 2814.260 1.291 .307
Within Groups 43596.000 20 2179.800
Total 54853.040 24
kadar glukosa akhir Between Groups 176828.240 4 44207.060 5.445 .004
Within Groups 162363.200 20 8118.160
Total 339191.440 24
D. Tes LSD kadar glukosa darah akhir
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
kadar glukosa akhir
LSD
(I) kelompok
(J) kelompok
Mean
Difference (I-J) Std. Error
Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
kontrol negatif kontrol positif 235.000 * 56.985 .001 116.13 353.87
dosis 1 161.800 * 56.985 .010 42.93 280.67
dosis 2 165.200 * 56.985 .009 46.33 284.07
dosis 3 224.400 * 56.985 .001 105.53 343.27
kontrol positif kontrol negatif -235.000 * 56.985 .001 -353.87 -116.13
dosis 1 -73.200 56.985 .214 -192.07 45.67
dosis 2 -69.800 56.985 .235 -188.67 49.07
dosis 3 -10.600 56.985 .854 -129.47 108.27
dosis 1 kontrol negatif -161.800 * 56.985 .010 -280.67 -42.93
kontrol positif 73.200 56.985 .214 -45.67 192.07
dosis 2 3.400 56.985 .953 -115.47 122.27
dosis 3 62.600 56.985 .285 -56.27 181.47
dosis 2 kontrol negatif -165.200 * 56.985 .009 -284.07 -46.33
kontrol positif 69.800 56.985 .235 -49.07 188.67
dosis 1 -3.400 56.985 .953 -122.27 115.47
dosis 3 59.200 56.985 .311 -59.67 178.07
dosis 3 kontrol negatif -224.400 * 56.985 .001 -343.27 -105.53
kontrol positif 10.600 56.985 .854 -108.27 129.47
dosis 1 -62.600 56.985 .285 -181.47 56.27
dosis 2 -59.200 56.985 .311 -178.07 59.67
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Lampiran 6.
Lampiran 7
