EFEK PEMBERIAN JUS SEMANGKA (Citrullus lanatus)
Transcript of EFEK PEMBERIAN JUS SEMANGKA (Citrullus lanatus)
EFEK PEMBERIAN JUS SEMANGKA (Citrullus lanatus)
TERHADAP ANALISA SPERMA DAN HISTOLOGI
PADA TESTIS TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus)
YANG DIPAPARI MONOSODIUM GLUTAMAT
TESIS
Oleh :
Tengku Muhammad Reza Syahputra
157008007
PROGRAM STUDI MAGISTER BIOMEDIK
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2020
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
EFEK PEMBERIAN JUS SEMANGKA (Citrullus lanatus)
TERHADAP ANALISA SPERMA DAN HISTOLOGI PADA
TESTIS TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus) YANG DIPAPARI
MONOSODIUM GLUTAMAT
Diajukan untuk melengkapi persyaratan memperoleh Gelar Magister Biomedik dalam
Program Studi Magister Ilmu Biomedik pada Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera
Utara
Oleh
Tengku Muhammad Reza Syahputra
157008007
PROGRAM STUDI MAGISTER BIOMEDIK
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2020
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT karena atas limpahan rahmat
dan hidayah-Nya maka penulisan laporan hasil tesis yang berjudul “Efek Pemberian
Jus Semangka (Citrullus lanatus) Terhadap Analisa Sperma dan Histologi Pada Testis
Tikus Wistar (Rattus norvegicus) yang dipapari Monosodium Glutamat” ini dapat
terselesaikan.
Rasa terima kasih tulus tak terhingga penulis sampaikan kepada kedua orangtua
tercinta yaitu bapak dr.H.Tengku Kamajaya, M.Sc.,Sp.And. dan ibu Hj.Esther Novika,
kepada abang-abang yaitu Tengku Muhammad Fauzi, S.Si.,M.Kes., Tengku Muhammad
Fajar,S.T., dan dr.Tengku Larry Arthit, M.Ked(OG),Sp.OG., serta istri Febrina Farisyah
Lubis,S.E.,M.M. yang senantiasa selalu mendoakan dan mendukung penulis untuk dapat
menyelesaikan penulisan Tesis ini.
Selama melakukan penelitian dan penulisan tesis ini, penulis juga banyak
memperoleh bantuan moril dan materil dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan
ini penulis menyampaikan ucapan terima kasih yang tulus kepada :
1. Prof.Dr.dr.Aldy Safruddin Rambe, Sp.S(K) selaku Dekan Fakultas Kedokteran
Universitas Sumatera Utara.
2. Dr.med.dr.Yahwardiah Siregar selaku Ketua Program Studi Magister Biomedik yang
telah banyak membantu penulis sejak kuliah sampai saat ini menyelesaikan tesis.
3. Dr.rer.medic.,dr.Muhammad Ichwan, M.Sc. selaku Sekretaris Program Studi Magister
Biomedik serta selaku dosen pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga, dan
pikiran dalam membimbing dan mengarahkan penulis dalam menyelesaikan tesis ini.
4. dr.Sufitni, M.Kes.,Sp.PA selaku Kepala Laboratorium Terpadu Imunologi serta
selaku dosen pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga, dan pikiran dalam
membimbing dan mengarahkan penulis dalam menyelesaikan tesis ini.
5. Prof.Dr.dr.Rozaimah Z.Hamid, MS,Sp.FK selaku dosen penguji yang turut
menyempurnakan penulisan tesis ini.
6. dr.Muhammad Rusda, M.Ked(OG),Sp.OG(K) selaku dosen penguji yang turut
menyempurnakan penulisan tesis ini.
i UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
7. dr.Tri Widyawati, M.Si, Ph.D selaku Kepala Departemen Farmakologi dan Terapeutik
Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan ijin
penggunaan Laboratorium Farmakologi dan Terapeutik serta seluruh staf
laboratorium yang telah banyak membantu dalam pelaksanaan penelitian hingga
selesai.
8. dr.T.Ibnu Alferally, M.Ked(PA),Sp.PA(K) selaku Kepala Departemen Patologi
Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan ijin
penggunaan Laboratorium Patologi Anatomi serta seluruh staf laboratorium yang
telah banyak membantu dalam pelaksanaan penelitian hingga selesai.
9. Seluruh staf Laboratorium Terpadu yang telah banyak membantu dalam pelaksanaan
penelitian hingga selesai.
10. Teman-teman mahasiswa Magister Biomedik yang telah memberikan dukungan
semangat dan kerjasama dalam penyelesaian tesis ini.
Penulis menyadari bahwa dalam pembuatan laporan hasil ini masih jauh dari
sempurna, untuk itu saran dan kritik yang bersifat membangun sangat diharapkan demi
perbaikan kearah kesempurnaan. Akhir kata penulis sampaikan terima kasih.
Medan, April 2020
Tengku Muhammad Reza Syahputra
ii UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
DAFTAR ISI
Kata Pengantar……………………………………………………………………. i
Daftar Isi…………...………………………………………………………............ iii
Daftar Gambar…………...………………………………………………………... vi
Daftar Tabel…………...………………………………………………………....... viii
Daftar Lampiran…………...……………………………………………………… x
Daftar Singkatan…………...……………………………………………………… xi
Abstrak…………………………………………………………………………….. xii
Abstract……………………………………………………………………………. xiii
BAB 1. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang……………………………………………………….... 1
1.2 Rumusan Masalah.......................................................................... 4
1.3 Tujuan Penelitian…………………………………………….............. 4
1.3.1 Tujuan Umum……………………………………………........... 4
1.3.2 Tujuan Khusus…………………………………………….......... 4
1.4 Hipotesis………………………………………………………………. 4
1.5 Manfaat Penelitian……………………………………………………... 5
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Monosodium Glutamate (MSG)............................................................. 6
2.2 Radikal Bebas......................................................................................... 12
2.3 Malondialdehid (MDA).......................................................................... 13
2.4 Efek MSG Terhadap Testis.............................................................. 15
2.5 Potensi Semangka sebagai Nutraceutical............................................. 20
2.5.1 Klasifikasi…………………………………………….................. 20
2.5.2 Kandungan Semangka……………………………………………. 21
2.5.3 Manfaat Semangka bagi Kesehatan……………………………..... 22
2.6 Likopen sebagai Bahan Aktif dalam Buah Semangka .......................... . 23
2.6.1 Pengertian……………………………………………................... 23
2.6.2 Penyerapan Likopen……………………………………………..... 24
2.6.3 Mekanisme Kerja……………………………………………......... 25
iii UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2.7 Sistem Reproduksi Jantan dan Spermatogenesis.................................... .. 27
2.7.1 Organ Testis……………………………………………................. 27
2.7.2 Sistem Duktus ……………………………………………............. 29
2.7.3 Histologi Testis……………………………………………............ 30
2.7.4 Proses Spermatogenesis………………………………….............. 32
2.8 Kerangka Teori.................................... ………………………………... 34
2.9 Kerangka Konsep................................... ………………………………... 34
BAB 3. METODE PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian...................................................................................... 35
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian.................................................................. 35
3.2.1 Waktu Penelitian............................................................................. 35
3.2.2 Tempat Penelitian............................................................................ 35
3.3 Sampel Penelitian dan Besar Sampel ..................................................... 36
3.4 Identifikasi Variabel Penelitian................................................................ 37
3.4.1 Variabel Bebas (Independen).......................................................... 37
3.4.2 Variabel Terikat (Dependen).......................................................... 37
3.5 Defenisi Operasional............................................................................... 37
3.6 Alat, Bahan, dan Cara Kerja.................................................................... 39
3.6.1 Alat-alat yang Dibutuhkan dalam Penelitian.................................. 39
3.6.2 Bahan-bahan yang Dibutuhkan dalam Penelitian........................... 39
3.6.3 Cara Kerja....................................................................................... 40
3.6.3.1 Pemeliharaan dan Pengelompokkan Hewan Coba.............. 40
3.6.3.2 Perlakuan Hewan Coba....................................................... 42
3.6.3.3 Pembuatan Jus Semangka................................................... 44
3.6.3.4 Prosedur Pengambilan Jaringan Tikus................................ 45
3.6.3.5 Prosedur Pengambilan Sampel Darah Tikus...................... 46
3.6.3.6 Prosedur Pengambilan Sampel Sperma Tikus.................... 47
3.6.3.7 Pengamatan Analisa Sperma............................................... 48
3.6.3.8 Pemeriksaan Kadar MDA di dalam Darah.......................... 49
3.6.3.9 Prosedur Pembuatan Preparat Histologi Testis Tikus.......... 51
3.7 Kerangka Operasional.............................................................................. 53
3.8 Analisis Data............................................................................................ 54
iv UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian...................................................................................... .. 55
4.1.1 Berat Badan..................................................................................... 55
4.1.2 Hasil Pemeriksaan MDA................................................................. 56
4.1.3 Analisa Spermatozoa....................................................................... 56
4.1.4 Berat Testis...................................................................................... 58
4.1.5 Diameter Tubulus Seminiferus........................................................ 59
4.1.6 Lebar Celah Antara Tubulus Seminiferus dengan Sel Spermatogenik 62
4.1.7 Jumlah Sel Leydig........................................................................... 64
4.2 Pembahasan.............................................................................................. 66
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan............................................................................................... 73
5.2 Saran......................................................................................................... 73
DAFTAR PUSTAKA................................................................................... ............. 74
v UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Diagram penggunaan MSG di dunia .................................................……. 6
Gambar 2. Struktur kimia MSG, Glutamate, dan Glutamic Acid ............................ 8
Gambar 3. Gangguan yang disebabkan toksisitas MSG ......................................... 11
Gambar 4. MDA sebagai produk akhir peroksidasi lipid (atas). Reaksi TBA dengan
MDA membentuk warna merah muda (bawah) ....................................... 15
Gambar 5. Ilustrasi buah semangka dan bagian-bagiannya .................................... 21
Gambar 6. Struktur kimia likopen ...................................................................... …… 23
Gambar 7. Proses penyerapan likopen ................................................................. 25
Gambar 8. Mekanisme likopen dalam menghambat ROS ...................................... 26
Gambar 9. Histologi Testis dengan pembesaran 100x (A) dan 400x (B). Tampak
Tubulus Seminiferus (ST), Sel Sertoli (SC), Spermatid (SD), Spermatosit
Primer (PS), Spermatogonia (SG), Sel Leydig (LC) ……………………. 29
Gambar 10. Proses spermatogenesis ..................................................................... …… 33
Gambar 11. Kandang pemeliharaan tikus .............................................................. 40
Gambar 12. Metal gavage needle / sonde lambung 20-24 G (Kiri). Pengukuran sonde
lambung pada tikus (kanan) ..................................................................... 42
Gambar 13. Cara memegang tikus saat pemberian perlakuan menggunakan sonde .... 43
Gambar 14. Cara memasukkan / mendorong sonde lambung .................................. 43
Gambar 15. Pemberian MSG dengan menggunakan sonde ..................................... 44
Gambar 16. Proses pembuatan jus semangka ........................................................ 45
Gambar 17. Pembedahan tikus untuk pengambilan sampel darah dan organ testis….. 46
Gambar 18. Anatomi dan saluran reproduksi testis tikus wistar jantan. Testis (a),
Caput epididimis (b), Cauda epididimis (c), dan Vas deferens (d). Tanda
panah menunjukkan bagian yang dipotong untuk mengisolasi cauda
epididimis. Pembesaran 40x …………………………………………..... 47
Gambar 19. Testis yang akan dipisahkan dari vas deferens (A). Testis kanan-kiri (B).
Pemisahan testis dan vas deferens menggunakan kaca pembesar (C) ….. 48
Gambar 20. Hemositometer Improved Neubauer .................................................. 48
Gambar 21. Bahan-bahan pembuatan reagen TBA ............................................... 50
vi UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 22. Potongan organ yang dimasukkan kedalam cassette (A). Proses dehidrasi
dan clearing yang dilakukan secara otomatis (B) ......................……… 52
Gambar 23. Gambaran mikroskopik histologi testis tikus Wistar kelompok KN (A),
KP (B), P1 (C), P2 (D), dan P3 (E). Tampak tubulus seminiferus
(panah merah) dan sel leydig (panah hijau). Pembesaran 100x .............. 61
Gambar 24. Celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik. Diameter
tubulus seminiferus ditandai dengan garis kuning dan diameter sel
spermatogenik ditandai dengan garis merah .......................................... 62
Gambar 25. Gambaran mikroskopik sel Leydig tikus wistar kelompok KN(A), KP(B),
P1(C), P2(D), dan P3(E). Pembesaran 400x............................................ 64
vii UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Kandungan nutrisi semangka (Citrullus lanatus) segar, per 100 g ....... 22
Tabel 2. Distribusi likopen dalam jaringan ......................................................... 25
Tabel 3. Dosis pemberian MSG dan jus semangka pada kelompok perlakuan ... 41
Tabel 4. Persiapan standar MDA untuk spektrofotometer ................................. 50
Tabel 5. Rata-rata kenaikan berat badan tikus setelah pemberian MSG ............ 55
Tabel 6. Rata-rata kenaikan berat badan tikus setelah pemberian MSG dan jus
semangka .............................................................................................. 55
Tabel 7. Kadar MDA pada serum darah tikus setelah pemberian MSG ............ 56
Tabel 8. Kadar MDA pada serum darah tikus setelah pemberian MSG dan jus
semangka .............................................................................................. 56
Tabel 9. Rata-rata jumlah sel spermatozoa tikus setelah pemberian MSG ........ 57
Tabel 10. Rata-rata jumlah sel spermatozoa tikus setelah pemberian MSG dan jus
semangka .............................................................................................. 57
Tabel 11. Rata-rata motilitas spermatozoa tikus setelah pemberian MSG ........... 58
Tabel 12. Rata-rata motilitas spermatozoa tikus setelah pemberian MSG dan jus
semangka ............................................................................................... 58
Tabel 13. Rata-rata berat testis tikus setelah pemberian MSG …………………… 59
Tabel 14. Rata-rata berat testis tikus setelah pemberian MSG dan jus semangka .. 59
Tabel 15. Rata-rata diameter tubulus seminiferus setelah pemberian MSG .......... 60
Tabel 16. Rata-rata diameter tubulus seminiferus setelah pemberian MSG dan jus
semangka ............................................................................................... 60
Tabel 17. Rata-rata lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik
setelah pemberian MSG ………………………………………………… 63
viii UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Tabel 18. Rata-rata lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik
setelah pemberian MSG dan jus semangka …………………………….. 63
Tabel 19. Rata-rata jumlah sel leydig setelah pemberian MSG ............................. 65
Tabel 20. Rata-rata jumlah sel leydig setelah pemberian MSG dan jus semangka… 65
ix UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
DAFTAR LAMPIRAN
1. Persetujuan Komisi Etik ………………………………………………………… 81
2. Surat Ijin Penelitian Laboratorium Farmakologi dan Terapeutik FK USU ……. 81
3. Surat Ijin Penelitian Laboratorium Terpadu FK USU ………………………….. 81
4. Surat Ijin Penelitian Laboratorium Patologi Anatomi FK USU ………………… 81
5. Hasil Uji Statistik ……………………………………………………………….. 81
x UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
DAFTAR SINGKATAN
MSG = Monosodium Glutamate
ROS = Reactive Oxygen Species
DNA = Deoxyribo Nucleic Acid
MDA = Malondialdehyde
TBA = Thiobarbituric Acid
TEAC = Trolox Equivalent Antioksidan Capacity
FDA = Food Drug Administration
SSP = Susunan Syaraf Pusat
GABA = Gamma Amino Butyric Acid
GAD = Glutamic Acid Decarboxylase
NOS = Nitric Oxide Synthase
BBB = Blood-Brain Barrier
iGluR = ionotropic Glutamate Receptors
mGluR = metabotropic Glutamate Receptors
H2O2 = Hidrogen Peroksida
SOD = Superoxide Dismutase
4-HNE = 4-hydroxynoneal
TBARS = Thiobarbituric Acid Reactive Substance
ATP = Adenosine Tri Phosphat
PUFA = Poly Unsaturated Fatty Acids
DPPH = 1,1-diphenypieryl-hydrozyl
PARP-1 = Poli ADP-ribosa Polimerase 1
MAPK = Mitogen Activated Protein Kinase
GPx = Gluthation Peroxidase
FSH = Follicle Stimulating Hormone
LH = Luteinizing Hormone
GnRH = Gonadotropin Releasing Hormone
xi UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
EFEK PEMBERIAN JUS SEMANGKATERHADAP ANALISA SPERMA
DAN HISTOLOGI TESTISTIKUS WISTARYANG DIPAPARI
MONOSODIUM GLUTAMAT
ABSTRAK
Latar Belakang: MSG merupakan garam dari asam glutamat yang digunakan sebagai
penyedap makanan terutama makanan olahan. Asupan dari MSG dapat melebihi ambang
yang dibenarkan oleh karena kadarnya tidak tercantum pada label kemasan. Penelitian
melaporkan efek MSG pada banyak organ terutama testis yang menyebabkan
oligozoospermia dan histologi testis yang abnormal yang akan berdampak pada kesuburan.
Konsumsi MSG yang berlebihan menyebabkan kerusakan testis akibat stres oksidatif
sehingga terjadinya peroksidasi lipid, dapat ditentukan dengan mengukur kadar MDA dalam
darah. Semangka merupakan buah lokal yang memiliki kandungan antioksidan likopen yang
dapat mencegah kerusakan oksidatif.
Tujuan: Mengetahui efek jus semangka terhadap analisa sperma dan histologi testis tikus
Wistar yang dipapari MSG.
Metode: Pada penelitian eksperimental dengan desain post test only control group ini, 35
ekor tikus Wistar secara acak dibagi menjadi lima kelompok: KN (pellet+aquadest),
KP(MSG 10mg/grBB + aquadest), P1 (MSG 10mg/grBB + jus semangka 25%),
P2 (MSG 10mg/grBB+jus semangka 50%), P3 (MSG 10mg/grBB+jus semangka 100%).
Berat badan tikus ditimbang sebelum dan setelah diberi perlakuan, tikus diberi perlakuan
selama 30 hari lalu dilakukan pengambilan sampel darah untuk pemeriksaan kadar MDA,
testis dan kauda epididimis untuk pemeriksaan analisa sperma dan histologi testis.
Hasil: Kenaikan berat badan kelompok KP lebih rendah dibanding KN sedangkan kelompok
P1, P2, dan P3 lebih rendah kenaikannya dibanding KP, namun masing-masing kelompok
tersebut secara statistik tidak bermakna. Kadar MDA kelompok KP lebih rendah
dibandingkan kelompok lainnya, namun secara statistik terdapat perbedaan yang bermakna
pada kelompok KP dibanding KN. Jumlah dan motilitas sperma kelompok KP menunjukkan
penurunan yang bermakna (sekitar 50%) dibanding KN, pada jumlah sel sperma kelompok
P1, P2, dan P3 tidak berbeda bermakna dibanding KP, pada motilitas sperma kelompok P3
terjadi peningkatan yang bermakna dibanding KP. Berat testis kelompok KP lebih kecil
dibandingkan kelompok lainnya, namun secara statistik berbeda bermakna dibanding KN.
Diameter tubulus seminiferus kelompok KP lebih kecil dibandingkan kelompok lainnya,
namun secara statistik tidak bermakna. Jumlah sel Leydig kelompok KP lebih sedikit
dibandingkan kelompok lainnya dan secara statistik berbeda bermakna.
Kesimpulan: Pemberian MSG secara bermakna menurunkan jumlah dan motilitas sperma,
kadar MDA, berat testis, dan jumlah sel Leydig. Jus semangka dapat mengatasi efek negatif
MSG terhadap jumlah, motilitas sperma dan sel Leydig secara bermakna.
Kata Kunci: Jus semangka, Jumlah dan motilitas sperma, Monosodium glutamat.
xii UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
THE EFFECT OF WATERMELON JUICE ON SPERM ANALYSIS AND
TESTICULAR HISTOLOGY OF WISTAR RATS EXPOSED TO
MONOSODIUM GLUTAMATE
ABSTRACT
Background: MSG is a salt of glutamic acid which is used as a food flavoring, especially
processed foods. Intake of MSG can exceed the justified threshold because the levels are not
listed on the packaging label. Research reports the effects of MSG on many organs,
especially the testes which cause oligozoospermia and abnormal testicular histology which
will have an impact on fertility. Excessive consumption of MSG causes testicular damage due
to oxidative stress so that lipid peroxidation, can be determined by measuring MDA levels in
the blood. Watermelon is a local fruit that contains the antioxidant lycopene which can
prevent oxidative damage.
Aim: to find out the effect of watermelon juice on sperm analysis and testicular histology of
Wistar rats exposed to MSG.
Method: Experimental research design of post test only control group, 35 Wistar rats were
randomly divided into five groups: KN(pellet+aquadest), KP(MSG 10mg/grBB+aquadest),
P1 (MSG 10mg/grBB+watermelon juice 25%), P2 (MSG 10mg/grBB+watermelon juice
50%), P3 (MSG 10mg/grBB+watermelon juice 100%). The body weight of rats was weighed
before and after being treated, rats were treated for 30 days and then blood samples were
taken for examinations of MDA levels, testis and cauda epididymis levels for examination of
sperm analysis and testicular histology.
Result: The weight gain of the KP group was lower than KN while the P1, P2, and P3 groups
had a lower increase than the KP, but each of the groups was statistically not significant.
MDA levels in the KP group were lower than other groups, but statistically there were
significant differences in the KP group compared to KN. The sperm count and motility of the
KP group showed a significant decrease (about 50%) compared to KN, the sperm cell counts
in the P1, P2, and P3 groups were not significantly different from the KP, the sperm motility
of the P3 group had a significant increase compared to the KP. The testicular weight of the
KP group was smaller than that of the other groups, but it was statistically significantly
different from the KN. The seminiferous tubule diameter of the KP group was smaller than
the other groups, but it was not statistically significant. The number of Leydig cells in the KP
group was less than in the other groups and was statistically significantly different.
Conclusion: The administration of MSG significantly reduces sperm count and motility of
sperm, MDA levels, testicular weight, and Leydig cells count. Watermelon juice can
significantly overcome the negative effects of MSG on sperm count, motility and Leydig cells.
Keywords: Watermelon juice, Sperm count and motility, Monosodium glutamate.
xiii UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Monosodium Glutamat (MSG) merupakan garam natrium dari asam glutamat dengan
rumus molekul C5H8NO4Na yang terdiri dari 78% asam glutamat, 22% natrium dan air
(Yonata et al., 2016). Asam glutamat adalah asam amino non-esensial yang berperan penting
dalam metabolisme manusia dan merupakan salah satu asam amino yang banyak ditemukan
di alam. Asam glutamat merupakan komponen utama dari banyak produk makanan
tinggi protein dari hewan seperti daging, ikan, susu, dan keju, terdapat juga pada protein dari
tanaman seperti jamur dan tomat (Ghosh, 2017; Sharma and Deshmukh, 2015;
Tawfik and Al-Badr, 2012).
Monosodium Glutamat merupakan salah satu bahan aditif makanan yang paling banyak
digunakan untuk menambah kenikmatan rasa makanan, terutama pada produk
makanan olahan (Albrahim, 2018). Kandungan MSG dijumpai dalam keripik, agar-agar,
mayones, kue, permen, biskuit, roti, coklat, selai, burger, kentang goreng, pizza, mie dan
di hampir setiap makanan yang disajikan di setiap restoran cepat saji (Abdel et al, 2018;
Ghosh, 2017; Sharma and Deshmukh, 2015). Jumlah kandungan MSG dalam makanan dapat
melebihi kadar yang diperkirakan oleh karena pada sebagian makanan olahan kadar MSG
tidak dicantumkan pada label kemasan dan MSG juga seringkali tersembunyi dengan nama
bahan makanan lain (Calderone, 2016; Erb and Erb, 2003; Ito, 2009). Jumlah asupan MSG
harian rata-rata diperkirakan mencapai hingga 10 gr/hari. Pada kenyataannya jumlah asupan
MSG kemungkinan lebih besar lagi karena pada penelitian tersebut belum memperkirakan
jumlah MSG yang tersembunyi dalam bahan makanan itu sendiri (He et al., 2011).
1 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Beberapa penelitian menjelaskan adanya efek MSG terhadap organ tubuh manusia
seperti otak, ovarium, testis, hepar dan ginjal. Pada dosis rendah MSG menyebabkan
peningkatan berat badan yang signifikan, penurunan fungsi kognitif, tetapi tanpa perubahan
serum atau tingkat serotonin di otak atau perubahan patologis di otak, juga dapat
menyebabkan perubahan degeneratif di otak pada tikus jantan (Abdel et al., 2018). Penelitian
terhadap ovarium mencit yang sedang hamil dengan pemberian MSG 4 mg/grBB didapati
gangguan pada ovarium bahwa berkurangnya praimplantasi sekitar 56,43% (Sufitni et al.,
2019). Pemberian MSG dosis tinggi pada hewan coba membuktikan bahwa MSG dapat
menyebabkan nekrosis pada neuron hipotalamus, nukleus arkuata hipotalamus, kemandulan
pada jantan dan betina, berkurangnya berat hipofisis, anterior, adrenal, tiroid, uterus,
ovarium, dan testis, kerusakan fungsi reproduksi, dan berkurangnya jumlah anak
(Wakidi, 2012).
Konsumsi MSG dalam waktu lama dapat menyebabkan ketidakseimbangan antara
antioksidan dan reactive oxygen species (ROS) yang menyebabkan kerusakan sel akibat
stress oksidatif. Peningkatan produksi radikal bebas dan terjadinya peroksidasi lipid pada
tingkat jaringan menyebabkan perubahan morfologi spermatozoa yang disertai peningkatan
kolesterol testis yang menyebabkan degenerasi sel gonad. Hal ini akan mempengaruhi
motilitas spermatozoa sehingga dengan penurunan motilitas spermatozoa yang juga akan
mempengaruhi terjadinya proses pembuahan (Sharma and Deshmukh, 2015).
Meningkatnya kadar peroksidasi lipid menyebabkan kerusakan jaringan testis, hal ini
paralel dengan penelitian Aitken et al. yang mendapatkan bahwa peningkatan peroksidasi
lipid menyebabkan kerusakan oksidatif pada DNA sperma, mengubah fungsi membran,
merusak motilitas, dan memiliki efek yang signifikan pada perkembangan spermatozoa. Efek
toksik MSG pada parameter fisiologis dan biokimia spermatozoa terkait dengan peningkatan
produksi radikal bebas di organ reproduksi (Hamza and Al-Harbi, 2014).
2 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Peroksidasi lipid dapat ditentukan dengan mengukur molekul malondialdehyde (MDA)
mengikuti tes standar thiobarbituric acid (TBA) (Acharya et al, 2003). Pengukuran MDA
banyak dilakukan sebagai parameter terjadinya peroksidasi lipid (Gupta et al, 2005).
Antioksidan memainkan peran penting dalam perlindungan terhadap peroksidasi lipid.
Antioksidan memiliki efek perlindungan dengan mengurangi atau mencegah
kerusakan oksidatif. Antioksidan mencegah reaksi berantai peroksidasi lipid dalam membran
seluler dengan mengganggu penyebaran radikal lipid. Antioksidan berperan penting dalam
banyak proses biologis yang dapat mengurangi kelainan sel sperma dan motilitas yang
disebabkan oleh bahan-bahan kimia (Hamza and Al-Harbi, 2014).
Di Indonesia banyak sekali bahan-bahan alami yang mempunyai kandungan antioksidan
cukup tinggi. Salah satu bahan alami yang banyak dikenal oleh masyarakat adalah semangka
(Citrullus lanatus). Semangka mengandung lemak, protein dan kalori dalam jumlah rendah,
dan juga mengandung banyak vitamin dan mineral, alkaloid, flavonoid, tannin, dan likopen
(Sharma and Deshmukh, 2015).
Semangka merupakan salah satu sumber makanan yang kaya akan antioksidan likopen.
Asupan satu hingga tiga irisan semangka akan menyediakan antara 6-18 mg likopen dan
0,18-0,54 mmol TEAC (Trolox Equivalent Antioksidan Capacity), yang diduga dapat
melindungi dari penyakit-penyakit terkait stress oksidatif (Pinto et al, 2011).
Likopen merupakan hidrokarbon karotenoid alifatik yang sangat dibutuhkan oleh tubuh
dan salah satu antioksidan yang sangat kuat kemarnpuannya mengendalikan radikal bebas,
dan likopen lebih efisien daripada vitamin E. Konsumsi likopen diyakini dapat meningkatkan
kualitas seks, meningkatkan jumlah sperma, memperbaiki struktur sperma dan meningkatkan
motilitas sperma sehingga dapat meningkatkan fertilitas pria (Anas and Asterina, 2011).
3 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Berdasarkan kajian literatur belum pernah ada penelitian tentang pemberian
jus semangka dan perannya dalam perbaikan toksisitas testis pada tikus yang dipapari oleh
MSG, sehingga penulis tertarik melakukan penelitian ini.
1.2. Rumusan Masalah
Apakah jus semangka dapat mengatasi gangguan terhadap analisa sperma dan
mempengaruhi diameter tubulus seminiferus dan sel Leydig pada histologi testis tikus wistar
(Rattus norvegicus) yang dipapari Monosodium Glutamat (MSG) ?
1.3. Tujuan Penelitian
1.3.1. Tujuan Umum
Mengetahui efek jus semangka terhadap analisa sperma dan histologi testis tikus wistar
(Rattus norvegicus) yang dipapari Monosodium Glutamat (MSG).
1.3.2. Tujuan Khusus
1. Untuk mengetahui tingkat stres oksidatif yang terjadi pada tikus setelah dipapari
dengan MSG.
2. Mengetahui efek pemberian jus semangka terhadap jumlah dan motilitas
spermatozoa tikus yang dipapari MSG.
3. Mengetahui efek pemberian jus semangka terhadap diameter tubulus seminiferus
dan jumlah sel Leydig pada testis tikus yang dipapari MSG.
1.4. Hipotesis
Pemberian jus semangka dapat mencegah penurunan jumlah dan motilitas spermatozoa
serta diameter tubulus seminiferus dan sel Leydig pada histologi testis tikus
yang dipapari MSG.
4 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
1.5. Manfaat Penelitian
Manfaat yang diperoleh dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Manfaat ilmiah.
Memberikan informasi tentang potensi buah semangka dalam mengurangi ataupun
mencegah kerusakan testis tikus akibat efek konsumsi MSG yang berlebihan.
2. Manfaat praktis.
Hasil penelitian dapat memberikan informasi ilmiah kepada masyarakat sehingga
dapat menjadi acuan dalam memahami manfaat buah semangka dalam mengurangi
efek mengonsumsi MSG yang berlebihan.
Meningkatkan ekonomi petani semangka dikarenakan semangka memiliki efek
nutraceutical atau sebagai nutrisi dan bahan pengobatan.
5 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Monosodium Glutamate (MSG)
Monosodium glutamat adalah garam natrium yang mengandung 78% asam glutamat
serta 22 % natrium dan air. MSG diproduksi dengan cara fermentasi pati, gula bit, gula tebu
atau sirup gula. Glutamat memberikan cita rasa umami yang merupakan rasa dasar dari
rasa manis, asin, asam dan pahit (Tawfik and Al-badr, 2012).
Di Asia MSG diproduksi sekitar 95% dari total produksi MSG dunia pada tahun 2014.
Cina salah satu produsen terbesar (65%), konsumen (55%), dan eksportir (44%) dari MSG di
seluruh dunia. Indonesia urutan kedua (16%) eksportir MSG (IHS, 2018).
Gambar 1. Diagram penggunaan MSG di dunia (IHS, 2018)
Rata-rata konsumsi MSG di Indonesia sekitar 0,6 gr/hari, adapun batas konsumsi aman
tidak melebihi 0,12 gr/kgBB/hari. Sekitar empat dari lima penduduk mengonsumsi penyedap
≥ 1 kali dalam sehari (77,3%), tertinggi di Bangka Belitung (87,4%) terendah di Aceh
(37,9%). Kecenderungan penduduk umur ≥ 10 tahun mengkonsumsi bumbu penyedap (MSG)
lebih tinggi dibandingkan konsumsi makanan beresiko tinggi lainnya seperti makanan manis,
asin, dan makanan berlemak (Balitbang Kemenkes RI, 2013; Prawirohardjono et al., 2000).
6 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Taiwan adalah negara yang paling tinggi konsumsi MSG per kapita mencapai 3 g/hari,
di Jepang dan Korea konsumsi MSG sekitar 1,2 - 1,7 g/hari, sedangkan Amerika Serikat
adalah negara yang paling rendah konsumsi MSG per kapita, hanya 0,2 - 0,5 g per hari.
Namun kenyataannya tanpa disadari asupan MSG mencapai hingga rata-rata 10 g/hari
dikarenakan kadar MSG di dalam makanan olahan tidak dicantumkan pada label
(Geha et al., 2000; He et al., 2011).
Batas aman dalam mengonsumsi MSG menurut FDA (Food Drug Administration)
diperkirakan 3 gr/hari (FDA, 2012). Di Amerika Serikat, FDA telah mengkategorikan MSG
sebagai bahan yang aman untuk dikonsumsi, tetapi ada laporan yang menyatakan bahwa
asupan MSG dalam jumlah besar menimbulkan beberapa gejala sementara pada orang yang
sensitif seperti mati rasa pada bagian belakang leher yang secara bertahap menjalar pada
kedua lengan dan punggung, badan lemah, palpitasi dan jantung berdebar, gejala-gejala ini
dikenal dengan Chinese Restaurant Syndrome (Geha et al., 2000; Obayashi and Nagamura,
2016).
Gejala kompleks MSG dimulai dalam waktu 1 jam setelah menelan bolus oral MSG
yang lebih besar dari 3 g tanpa adanya makanan. Konsumsi MSG juga telah dilaporkan
menyebabkan atau memperburuk berbagai kondisi, seperti asma yang tidak stabil,
dermatitis atopik yang parah, dan dalam laporan kasus anekdotal, kemungkinan atrial fibrilasi
dan ventrikel takikardia. Sakit kepala, wajah terbakar, dan sakit perut dilaporkan setelah
tantangan double-blind. Namun, ada perdebatan yang sedang berlangsung tentang prevalensi
reaksi terhadap MSG dan bahkan tentang apakah MSG memang menyebabkan reaksi
tersebut (Geha et al., 2000; Tawfik and Al-Badr, 2012).
Monosodium L-glutamat juga dikenal dengan nama kimia 2-amin pentanedioc atau
2-amino glutamic acid (asam glutamat). Perbedaan struktur asam amino glutamat dan
monosodium glutamat terletak pada gugus karboksil yang mengandung hidrogen pada
7 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
asam amino glutamat yang digantikan oleh natrium pada MSG. MSG memiliki
rumus molekul C5H8NO4Na dengan berat molekul 169,111 g/mol dan titik lebur pada 2250C
serta kelarutan dalam air 74 g/100 ml (Zulkarnain, 2017).
Gambar 2. Struktur Kimia MSG, Glutamate, dan Glutamic Acid (Monti, 2017)
Ionisasi gugus karboksil menimbulkan rangsangan rasa pada papila lidah.
Glutamat tersusun atas 5 atom karbon dan 2 gugus karboksil. Asam amino glutamat dan
MSG mempunyai sifat yang sama yaitu berbentuk tepung kristal berwarna putih yang tidak
berbau dan mudah larut dalam air (Brillianti, 2012). Glutamat dan sodium 5’-monosoisinate
(IMP) adalah 2 asam amino yang diakui sebagai stimulator oral dari nafsu makan dan
metabolisme. Penambahan glutamat dan IMP pada makanan meningkatkan kualitas
rasa umami (Jinap and Hajeb, 2010).
Asam amino glutamat dan glutamin diubah menjadi glutamat di dalam tubuh.
Asam amino yang tadinya berikatan dengan protein makanan, perlahan-lahan dipecahkan dan
diabsorbsi. Proses ini menyebabkan glutamat dihasilkan secara bertahap, hanya glutamat
dalam bentuk bebas yang dapat membangkitkan rasa lezat (Freeman, 2006). Pada MSG,
glutamat tidak berikatan dengan protein tetapi sudah dalam bentuk bebas. Beberapa
percobaan menunjukkan bahwa mengkonsumsi glutamat bebas akan meningkatkan kadar
glutamat di dalam plasma darah secara signifikan (Machrina, 2009).
8 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Dalam tubuh manusia asam glutamat hampir selalu dalam bentuk glutamat, karena
kondisi di dalam tubuh akibat hilangnya atom hidrogen dari asam glutamat, sehingga lebih
sering disebut sebagai glutamat. Glutamat juga diproduksi oleh tubuh manusia dan berikatan
dengan asam amino lainnya membentuk struktur protein (Garret and Grisham, 2007).
Glutamat yang diproduksi oleh neuron dalam tubuh manusia berperan sebagai
neurotransmitter eksitatorik utama yang terdapat di SSP dan terlibat dalam berbagai fungsi
dari otak seperti fungsi kognisi, pembelajaran dan memori (Danbolt, 2001; Smith, 2000).
Sebagaimana halnya neurotransmitter, glutamat juga memiliki mekanisme eliminasi
untuk menyerapnya dari cairan ekstraseluler yang merupakan kerja dari protein transporter
glutamat, termasuk salah satu peranannya untuk keperluan sintesis GABA (Gamma Amino
Butyric Acid) oleh kerja enzim Glutamic Acid Decarboxylase (GAD). GABA merupakan
neurotransmitter inhibitorik utama di sistem saraf pusat. Disamping kerja protein transporter
glutamat, terdapat pula enzim glutamine sintetase yang bekerja mengubah amonia dan
glutamat menjadi glutamin yang tidak berbahaya dan dapat dikeluarkan dari otak. Meskipun
glutamat terakumulasi di otak diusahakan untuk tetap dipertahankan dalam kadar rendah dan
non-toksik. Akumulasi glutamat dalam jumlah yang sangat melimpah di celah sinaps
(celah antara sel saraf) dapat bersifat eksitotoksik bagi otak. Akumulasi glutamat ini
menyebabkan terjadinya overstimulasi reseptor glutamat, neuron dan otak secara
keseluruhan. Stimulasi neuron dalam jangka waktu yang lama oleh asam amino /
neurotransmitter eksitatorik akan menyebabkan kerusakan bahkan kematian neuron. Efek
inilah yang disebut dengan eksitotoksisitas (Ardyanto and Dwi, 2004).
Toksisitas glutamat terbagi menjadi dua yaitu toksisitas glutamat endogen dan eksogen.
Toksisitas glutamat endogen terjadi akibat stimulasi yang berlebihan dari reseptor glutamat
yang menyebabkan neuro degenerative dan kerusakan neuron melalui proses yang disebut
eksitotoksisitas. Reseptor glutamat yang sama, terlalu aktif khususnya NMDA
9 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
menyebabkan ion kalsium meningkat masuk kedalam sel pascasinap (Dubinsky, 1993).
Konsentrasi Ca2+ tinggi mengaktifkan kaskade proses degradasi sel yang melibatkan
protease, lipase, sintase nitrat oksida dan sejumlah enzim struktur selnya menjadi rusak
sehingga menyebabkan kematian sel. Konsumsi atau paparan terhadap eksitotoksin yang
bekerja pada reseptor glutamat dapat menyebabkan eksitotoksisitas dan menyebabkan efek
toksik pada sistem saraf pusat, hal ini akan menjadi masalah bagi sel saraf karena masuk ke
siklus positif feedback kematian sel (Meldrum, 2000). Selain itu peningkatan Ca2+
mengaktifkan sintesa nitric oxide (NOS) dan sintesa yang berlebihan dari NO.
Konsentrasi NO yang meningkat dapat merusak mitokondria, yang menyebabkan
berkurangnya energi dan menambah tekanan oksidatif pada neuron karena NO adalah ROS
(Nicholls, 2009).
Toksisitas glutamat eksogen terjadi dikarenakan glutamat yang terdapat dalam
makanan akan diserap seluruhnya melalui usus dengan transpor aktif spesifik. Selama proses
tersebut, banyak dari glutamat di transaminase serta diubah menjadi komponen lain dengan
pembentukan α-ketoglutarat. Pada saat glutamat dikonsumsi dalam jumlah yang banyak,
konsentrasi di vena portal meningkat sehingga menyebabkan peningkatan metabolisme
glutamat di hati serta dilepasnya glukosa, laktat, glutamin dan asam amino lainnya ke dalam
sirkulasi darah. Pada orang dewasa yang sehat memiliki blood-brain barrier (BBB) yang
efektif untuk mencegah influx pasif dari glutamat dalam plasma. Perubahan kadar dalam
plasma, seperti penyerapan glutamat eksogen yang banyak, hanya menyebabkan sedikit
perubahan konsentrasi dalam otak. Jika terjadi gangguan sistem saraf pusat yang parah, maka
fungsi dari BBB sebagai barrier terganggu (Eisenbrand, 2006).
10 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 3. Gangguan yang disebabkan toksisitas MSG (dimodifikasi dari Niaz et al, 2018)
Metabolisme tubuh terhadap monosodium glutamat yang di tambahkan dalam makanan
dan glutamat alami dalam makanan di metabolisme dengan cara yang sama (Jinap and Hajeb,
2010). Batasan metabolisme MSG adalah 30 mg/kgBB/hari yang berarti penambahan
maksimal dalam sehari 2,5 – 3,5 gram MSG (berat badan 50 – 70 kg) (Ardyanto and Dwi,
2004). Makanan di restoran cina mengandung MSG antara 10 dan 1500 mg per 100 g.
Dosis oral yang mematikan bagi 50% subjek (LD50) pada tikus dan mencit adalah 15.000 –
18.000 mg/kgBB (Sharma and Deshmukh, 2015).
Asam glutamat berfungsi sebagai neurotransmitter rangsangan penting dalam
sistem saraf pusat tetapi juga berfungsi sebagai sumber energi untuk jaringan tertentu dan
seperti yang sebelumnya ditinjau sebagai substrat untuk sintesis glutathionesharma.
Asam glutamat memiliki beberapa jenis reseptor, yaitu ionotropicglutamate receptors
Hipotalamus menyebabkan perubahan
kaskade, mengganggu aksi leptin,
meningkatkan palatabilitas, ↑ insulin,
↑ IL-6, ↑ TNF-α, mengganggu
toleransi glukosa.
Rasa seperti terbakar dileher,
kedua lengan dan dada, pusing,
wajah terasa panas dan seperti
ditekan
Gangguan sel stroma dan membran,
hipertrofi sel teka di ovarium, stres
oksidatif, kerusakan DNA,
modifikasi protein
Penyakit Alzheimer, tumor otak,
skizofrenia, demensia, cemas, penyakit
Huntington, multiple sclerosis, penyakit
Parkinson dan epilepsi
Reseptor glutamat
Obesitas
Neurotoksin
Gangguan reproduksi Chinese restaurant syndrome
11 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
(iGluR) dan metabotropic glutamate receptors (mGluR). iGluR secara farmakologi
didefinisikan sebagai NMDA, AMPA dan reseptor kainate, sementara mGluR terdiri dari
delapan reseptor yang berbeda. Semua reseptor ada di seluruh sistem syaraf pusat, terutama
banyak di hipotalamus, hippocampus dan amigdala, dimana syaraf tersebut mengendalikan
aktivitas otonom dan metabolisme. Reseptor glutamat hadir di sistem saraf pusat, mulut,
paru-paru, usus, otot dan lokasi "perifer" lainnya (Meldrum, 2000; Zhu and Gouaux, 2017).
2.2. Radikal Bebas
Reaksi radikal bebas sebenarnya adalah suatu mekanisme biokimia yang normal terjadi
dalam tubuh. Radikal bebas biasanya hanya bersifat intermediat (perantara), kemudian
cepat diubah menjadi substansi lain yang tidak lagi membahayakan tubuh. Misalnya,
hormon prostaglandin dibentuk melalui suatu seri reaksi radikal bebas atau reaksi
detoksifikasi racun yang masuk ke dalam tubuh yang juga mengikutsertakan radikal bebas.
Jika pada kesempatan yang berumur sangat pendek ini, radikal bebas bertemu DNA atau
enzim atau asam lemak majemuk tak jenuh (polyunsaturated fats), maka suatu permulaan
kerusakan sel dapat terjadi (Husaini, 2001).
Senyawa maupun reaksi-reaksi kimia yang cenderung menghasilkan spesies oksigen
reaktif (spesies oksigen yang potensial toksik) disebut pro-oksidan. Radikal bebas adalah
atom/molekul yang pada kulit terluarnya mengandung satu/lebih elektron tak berpasangan.
Tidak semua spesies oksigen reaktif adalah radikal bebas, umpamanya H2O2 (Hidrogen
peroksida) dan singlet oksigen bukan radikal bebas, tetapi termasuk spesies oksigen reaktif.
Dikarenakan adanya kecenderungan mengambil sebuah elektron dan senyawa-senyawa lain
maka spesies oksigen ini sangat reaktif (Lautan, 1997).
12 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Kemampuan menetralisir senyawa oksidan sebenarnya sudah dimiliki oleh tubuh/sel itu
sendiri. Enzim glutation peroksidase, uric acid dan enzim katalase bekerja menetralisir
oksidan hidrogen peroksida. Hidrogen peroksida (H2O2) merupakan salah satu molekul
Reactive Oxygen Species (ROS) dan penyebab terjadinya peroksidasi lipid. Walaupun tubuh
memiliki enzim-enzim antioksidan sendiri, namun kerjanya banyak berada di intrasel
(Goodman, 1995).
Perlindungan tubuh manusia terhadap radikal bebas bervariasi, yaitu saling melengkapi
satu dengan yang lain karena bekerja pada oksidan yang berbeda atau dalam bagian seluler
yang berbeda. Suatu garis pertahanan yang penting adalah sistem enzim, termasuk
superoksida dismutase (SOD), katalase, dan glutation peroksidase. SOD merupakan
golongan enzim antioksidan yang penting dalam pendekomposisian katalitik radikal
superoksida menjadi hidrogen peroksida dan oksigen. Katalase secara spesifik mengkatalisis
dekomposisi hidrogen peroksida. Glutation peroksidase merupakan golongan
enzim antioksidan yang mengandung selenium yang penting dalam mengurangi
hidroperoksida, sebagai contoh: hasil oksidasi lipid (Tuminah, 2000).
2.3. Malondialdehid (MDA)
Stres oksidatif adalah suatu keadaan dimana terjadi pembentukan radikal bebas yang
berlebihan sehingga melebihi kapasitas pertahanan antioksidan. Stres oksidatif disebabkan
adanya beberapa ROS di dalam sel yang tidak dapat distabilkan, sehingga terjadi beberapa
kerusakan biomolekuler termasuk DNA, protein dan lipid. Pada lipid akan terjadi
peroksidasi lipid, dimana peroksidasi lipid merupakan penanda stress oksidatif yang tidak
stabil. Hal ini mengubah suatu bentuk yang komplek menjadi reaktif. Penanda yang umum
digunakan untuk mendeteksi produk peroksidasi lipid antara lain malondialdehyde (MDA),
4-hydroxynoneal (4-HNE), dan 8-iso-Prostaglandin F2-alpha (8-isoprostane).
13 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Beberapa penanda dari stres oksidatif dapat dideteksi dengan mudah dalam suatu sampel
seperti sel, jaringan, urine, dan darah. Dekomposisi peroksidasi lipid dapat diukur dengan
berbagai metode seperti thiobarbituric acid (TBA tes), fluoresensi untuk
malondialdehyde acid, spektrofotometri UV untuk konjugasi, GC-MS, HPCL untuk
isoprostane (Tsikas, 2016).
Peroksidasi lipid dalam bahan pangan akan terdekomposisi menjadi aldehid, keton dan
khususnya MDA. Senyawa-senyawa karbonil ini akan bereaksi dengan gugus amino protein
melalui reaksi amino-karbonil dan pembentukan basa Schiff. Reaksi MDA dengan
rantai samping lisil akan mengakibatkan cross-linking dan polimerisasi protein. Reaksi ini
berdampak pada menurunnya nilai gizi protein dan dapat menimbulkan off-flavour
(Apriyanto, 2002).
Pengukuran kadar MDA merupakan cara pengukuran aktivitas radikal bebas secara
tidak langsung, sebab yang diukur adalah produk dari reaksi radikal bebas bukan pengukuran
radikal bebas secara langsung (Edyson, 2003). Senyawa MDA dapat diukur secara kuantitatif
dengan menggunakan metode Thiobarbituric Acid Reactive Substance (TBARS) assay.
Reaksi yang terjadi antara asam thiobarbiturat (TBA) dan MDA membentuk kromogen
berwarna merah muda yang dapat diukur absorbansinya pada panjang gelombang 532 nm.
14 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 4. MDA Sebagai produk akhir peroksidasi lipid (atas). Reaksi TBA dengan MDA
membentuk warna merah muda (bawah)
2.4. Efek MSG Terhadap Testis
MSG memiliki efek toksik pada testis yang menyebabkan oligozoospermia yang
signifikan dan meningkatkan morfologi sperma yang abnormal dengan bergantung dosis
yang diberikan pada tikus wistar. MSG juga dapat menyebabkan terjadinya peningkatan
kadar Ca2+ dalam intrasel Leydig, peningkatan Ca2+ akan menyebabkan gangguan pada
mitokondria dan mengaktifkan enzim ATPase, phospholipases, endonuklease, dan protease
sehingga terjadinya gangguan pada sintesis ATP dan gangguan pada permeabilitas
membran sel sehingga pada akhirnya akan menyebabkan kematian pada sel Leydig
(Tawfik and Al-Badr, 2012; Salim et al, 2017).
Penelitian terhadap sel Leydig yang dilakukan dengan pemberian MSG pada tikus putih
jantan (Rattus norvegicus) dengan dosis pemberian yang berbeda-beda pada tiap kelompok
yaitu 4 gr/kgBB/hari dan 6 gr/kgBB/hari selama 28 hari, didapatkan hasil pengamatan bahwa
terjadi penurunan jumlah sel Leydig dan kerusakan sel Leydig yang ditandai dengan inti sel
yang piknotik, menjadi padat, berwarna lebih gelap dan batas sel tidak teratur
(Salim et al, 2017).
15 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Penelitian pada jumlah sel Leydig dan sel Sertoli pada tikus putih sebanyak 32 ekor yang
dibagi dalam 2 kelompok, dimana kelompok pertama diberi plasebo aquadest 2x seminggu
secara intraperitoneal, dan MSG 4 g/kgBB, kelompok kedua diberi Dexpanthenol
1000mg/kgBB tikus 2x seminggu secara intraperitoneal selama 14 hari, kemudian
jaringan testis diambil untuk dibuat preparat dan dihitung jumlah sel Leydig dan sel Sertoli.
Suplementasi Dexpanthenol dalam menghambat penurunan jumlah sel Leydig dan sel Sertoli
akibat stres oksidatif karena paparan MSG (Hartati et al, 2018).
Penelitian terhadap mencit jantan dewasa yang disuntikan MSG secara subkutan selama
6 hari dengan dosis 4 mg/grBB dan 8 mg/grBB menyebabkan peningkatan kadar glukosa,
kadar peroksidasi lipid, kadar total glutation dan protein yang terikat glutation.
Hal ini menggambarkan bahwa dengan pemberian MSG 4 mg/grBB dapat menimbulkan
terjadinya stres oksidatif (Ahluwalia et al, 1996).
Penelitian terhadap tikus yang pada makanannya ditambah MSG 10 gr/kgBB/hari,
setelah 45 hari memperlihatkan adanya disfungsi metabolik berupa peningkatan
kadar glukosa darah, triasilgliserol, insulin, dan leptin. Penelitian yang lain menunjukkan
bahwa pada tikus yang dipajankan MSG terjadi gangguan perkembangan testis, sel Sertoli,
dan sel Leydig pada masa prapubertasnya. Ternyata selain menyebabkan gangguan pada
aksis neuroendokrin sistem reproduksi, MSG juga mengakibatkan stres oksidatif yang dapat
menyebabkan gangguan pada sistem reproduksi. Penelitian Pizzi et al. pada anak mencit
jantan dan betina yang baru lahir dilakukan penyuntikan MSG secara subkutan dari hari ke-2
sampai hari ke-11, dengan dosis berangsur-angsur meningkat dari 2,2 – 4,2 mg/kgBB,
diperoleh hasil tanda-tanda infertilitas, seperti berkurangnya berat testis. Ternyata setelah
dewasa, bila mencit jantan dikawinkan dengan mencit betina yang diberi MSG, maka
jumlah kehamilan dan jumlah anak berkurang secara bermakna pada mencit betina yang
diberi MSG. Pada mencit jantan dan betina yang diberi MSG, terjadi penurunan
16 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
berat kelenjar endokrin, yaitu pada kelenjar hipofisis, tiroid, ovarium, dan testis (Wakidi,
2012).
Pemberian MSG pada tikus mengakibatkan penurunan berat kelenjar hipofisis dan testis
juga menurunkan kadar testosteron pada tikus jantan yang organ reproduksinya matang
secara seksual selama 4 bulan. MSG memiliki efek toksik pada testis dengan menyebabkan
oligozoospermia yang signifikan dan meningkatkan morfologi sperma yang abnormal
yang bergantung terhadap dosis pada tikus Wistar jantan (Sharma and Deshmukh, 2015).
Pada penelitian dengan menggunakan tikus jantan yang diberi MSG 4 g/kg BB secara
intraperitonial selama 15 hari dan 30 hari memperlihatkan pengaruhnya berupa penurunan
berat testis, jumlah sperma dan peningkatan jumlah sperma yang rusak atau abnormal
(Nayanatara, 2008).
Menurut penelitian Alalwani, MSG memiliki beberapa efek merusak pada testis
tikus Wistar terutama perubahan histologis dalam lamina tubulus seminiferus dan
jaringan interstisial serta pengelupasan spermatosit dan spermatid pada tikus yang terpapar
MSG. Banyak sel dari berbagai jenis spermatogenesis muncul nekrotik dengan
nuklei pyknotic. Pada tubulus seminiferus, pembuluh darah yang meluas dan
degenerasi vakuolar oleh perluasan dapat berkontribusi pada penyebab infertilitas pria
(Alalwani, 2014).
Ini telah terlibat dalam infertilitas pria dengan menyebabkan perdarahan testis,
degenerasi dan perubahan jumlah dan morfologi sel sperma. Moore melaporkan bahwa MSG
mempengaruhi struktur dan fungsi dari sistem reproduksi pria dan terbukti beracun bagi
testis manusia dan hewan percobaan. Boodnard et al. menyebutkan bahwa pemberian MSG
pada tikus menyebabkan atrofi pada testis dan kematian sel Sertoli dan sel Leydig.
Nayanatara et al. mencatat bahwa MSG mempengaruhi penurunan berat testis, diameter
tubular, jumlah sel sperma dan kelainan morfologi sperma (Sharma and Deshmukh, 2015).
17 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Peroksidasi lipid adalah salah satu proses utama kerusakan oksidatif, yang memainkan
peran penting dalam toksisitas. Oleh karena itu, enzim antioksidan dapat memainkan peranan
penting pada toksisitas MSG. Menurut penelitian Tezcan et al. menyatakan bahwa MDA
adalah salah satu dekomposisi akhir dari peroksidasi lipid dan juga dibentuk sebagai produk
dari reaksi siklooksigenase dalam metabolisme prostaglandin dan ini memastikan temuan
yang menyimpulkan adanya stres oksidatif pada tikus yang diberikan MSG, dimana didapati
kadar MDA yang sangat tinggi (Hamza and Al-Harbi, 2014).
ROS sangat mudah menyebabkan kerusakan pada spermatozoa karena membran sel
sperma mengandung sejumlah besar asam lemak tidak jenuh, sehingga mudah teroksidasi
(peroksidasi lipid) dan sitoplasmanya hanya mengandung sedikit enzim antioksidan yang
dapat menetralisir ROS. Proses peroksidasi lipid akan mengakibatkan berkurangnya aktivitas
dan jumlah sel spermatozoa yang normal (Walczak-Jedrzejowska et al., 2013). Dalam
penelitian sebelumnya, kerentanan spermatozoa terhadap stress oksidatif sebagai konsekuensi
dari banyaknya asam lemak tak jenuh dalam membran plasma sperma dan rendahnya
konsentrasi antioksidan sitoplasma yang diketahui (Hamza and Al-Harbi, 2014).
Istilah peroksidasi lipid umumnya merupakan suatu proses terjadinya degradasi lipid
secara oksidatif. Peroksidasi lipid merupakan proses dimana radikal bebas mengikat elektron-
elektron lipid pada membran sel yang berakibat langsung pada kerusakan sel. Adapun zat
yang terlibat dalam proses peroksidasi lipid antara lain PUFA (Poly Unsaturatted Fatty
Acid), fosfolipid, glikolipid, dan kolesterol. Asam lemak tak jenuh (PUFA) merupakan bahan
yang paling sering terlibat dalam mekanisme oksidasi karena mengandung banyak
ikatan ganda diantara molekulnya (Niki et al, 2005).
Sel yang teroksidasi di testis merupakan sumber ROS bagi organ testis itu sendiri,
sehingga menyebabkan peningkatan stres oksidatif. Jika stres oksidatif berlebih, maka
komunikasi antar sel di testis seperti sel Sertoli, sel Leydig, dan sel spermatogenik lainnya
18 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
dapat mengalami kerusakan. Hal inilah yang secara langsung mengganggu
proses spermatogenesis di tubulus seminiferus, sehingga persentase jumlah
sel spermatogenik yang dihasilkan menurun (Suciati et al, 2014).
Radikal bebas dapat merusak beberapa komponen penting dalam tubuh antara lain:
membran sel, terutama komponen penyusun membran berupa asam lemak tak jenuh yang
merusak bagian dari fosfolipid dan mungkin juga protein bagian dalam, kerusakan protein,
kerusakan DNA, dan peroksidasi lipid. Keadaan stres oksidatif dapat menimbulkan
kerusakan oksidatif mulai dari tingkat sel, jaringan sampai ke organ tubuh.
Beberapa penyakit yang sudah diteliti dan diduga kuat berkaitan dengan aktifitas
radikal bebas mencakup lebih dari 50 jenis penyakit, salah satu diantaranya adalah infertilitas
(Hodgson and Levi, 2000). Dalam jaringan seperti testis dengan tingkat metabolisme dan
replikasi sel yang tinggi, stress oksidatif dapat dengan mudah terjadi (Pryor et al., 2006).
MSG juga dapat mempengaruhi fungsi reproduksi pria (Alalwani et al., 2014). Dalam
penelitiannya MSG menyebabkan beberapa perubahan histopatologis seperti
spermatogenic arrest, edema, dan hipospermia. Ini mungkin terkait dengan efek oksidatif
MSG pada membran sel testis dan juga jaringan testis. Kerusakan oksidatif terutama terjadi
melalui produksi ROS seperti anion superoksida, peroksida, dan dapat merusak lipid, protein,
dan DNA. Oleh karena itu, dapat menyebabkan hilangnya aktivitas enzimatik dan
integritas struktural enzim dan mengaktifkan proses peradangan. Disarankan bahwa
efek toksik dari MSG menyebabkan perubahan integritas struktural membran bagian dalam
mitokondria, yang mengakibatkan penurunan kadar GSH mitokondria dan peningkatan
pembentukan hidrogen peroksida oleh rantai transpor elektron mitokondria. Stres oksidatif
berperan penting dalam menyebabkan pembentukan sperma yang abnormal, fungsi, jumlah
sel sperma dan infertilitas pria (Hamza and Al-Harbi, 2014).
19 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Menurut penelitian El-Wessemy, kelompok yang diberikan MSG berhubungan dengan
penghambatan testosteron yang menyebabkan penghentian spermatogenesis.
Penelitian sebelumnya telah menjelaskan mekanisme dimana MSG menghambat
spermatogenesis dalam percobaannya. Reseptor glutamat dijumpai dalam jaringan yang
berbeda seperti hipotalamus, limpa, timus, hati, ginjal, sistem endokrin, dan ovarium.
Hasil penelitian ini didukung dengan penelitian lain yang membuktikan adanya transporter
glutamat fungsional dan reseptor di testis tikus. Salah satu mekanisme mungkin merupakan
efek langsung dari MSG melalui reseptor glutamat dan transporter pada sel epitel
tubulus seminiferus (Hamza and Al-Harbi, 2014).
Pada penelitian Zarghami et al. (2005) menunjukkan bahwa pria yang mengalami
asthenozoospermic, kadar MDA di dalam semen menunjukkan terjadi peningkatan
dibandingkan pria yang normozoospermic, serta berkorelasi dengan penurunan
motilitas spermatozoa.
2.5. Potensi Semangka sebagai Nutraceutical
2.5.1. Klasifikasi
Klasifikasi tanaman semangka menurut Erhirhie and Ekene (2013) sebagai berikut :
Kingdom : Plantae Familli : Cucurbitaceae
Phylum : Embryophyta Genus : Citrullus
Class : Magnoliophyta Spesies : Citrullus lanatus.
Ordo : Cucurbitales
Semangka berasal dari daerah tropis dan subtropis, tanaman semusim ini tumbuh
merambat dapat ditemukan dari dataran rendah sampai kurang lebih 1000 mdpl. Salah satu
penghasil buah semangka terbesar di Indonesia adalah Sumatera Utara (Zulkarnain, 2017).
20 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Semangka berbentuk bola sampai oval, besar bervariasi dengan panjang 20-30 cm,
diameter 15-20 cm, dengan berat sekitar 4 kg sampai 20 kg. Kulit buahnya tebal dan
berdaging, licin, warna yang bervariasi seperti hijau tua, kuning agak putih, atau hijau muda
bergaris-garis putih. Daging buah warnanya merah, jingga, kuning, bahkan ada yang putih.
Biji berbentuk memanjang, pipih, warnanya hitam, putih, kuning, atau cokelat kemerahan.
Terdapat juga semangka tanpa biji (Dalimartha, 2003).
Gambar 5. Ilustrasi buah semangka dan bagian-bagiannya
2.5.2. Kandungan Semangka
Semangka adalah salah satu spesies dengan kandungan air yang tinggi sekitar 92% dari
berat total. Tanaman ini kaya akan flavonoid, alkaloid, saponin, glikosid, tannin dan fenol.
Semangka memiliki zat bernutrisi seperti vitamin A 3%, Thiamine (Vit. B1), Riboflavin
(Vit. B2), Niacin (Vit. B3), Asam Pantothenic (B5), vitamin B6 dan Folat (Vit. B9) yang
berkisar antara 1-3%, Vitamin C 14%. Komposisi mineral seperti kalsium 1%, Besi 2%,
Magnesium 3%, Fosfor 2%, Kalium 2% dan Seng 1%. Semangka (Citrullus lanatus) secara
alami juga kaya akan L-citrulline, bervariasi dalam jumlah dari 0,7 hingga 3,6 mg/g dalam
kondisi buah segar (Sharma and Deshmukh, 2015) dan karotenoid yang memiliki kandungan
likopen yang berfungsi sebagai antioksidan serta kandungan gula sekitar 6% berdasarkan
berat (fruktosa : rasio glukosa 1:0,55). Semangka sudah diketahui memainkan peran yang
efektif dalam mengurangi stress oksidatif melalui fitokimia lycopene (Imen et al, 2011;
Meroni and Raikos, 2018; Pinto et al, 2011).
21 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Tabel 1. Kandungan nutrisi Semangka (Citrullus lanatus) segar, per 100 g,
(Sumber: dimodifikasi dari USDA National Nutrient Database 2018)
Zat gizi Nilai /
100 g Satuan Zat gizi
Nilai /
100 g Satuan
Vitamin
Energi
Protein
Lemak
Karbohidrat
Serat
Glukosa
30
0.61
0.15
7.55
0.4
6.20
kkal
g
g
g
g
g
Vitamin C
Thiamin
Riboflavin
Niacin
Asam Pantotenat
Vitamin B-6
8.1
0.033
0.021
0.178
0.221
0.045
mg
mg
mg
mg
mg
mg
Minerals Vitamin A 569 IU
Kalsium
Zat besi
Magnesium
Fosfor
7
0.24
10
11
mg
mg
mg
mg
Vitamin E
Karoten
Cryptoxanthin- β
Lutein+zeaxanthin
0.05
303
78
8
mg
µg
µg
µg
Natrium 1 mg Likopen 4532 µg
Zink
Tembaga
Mangan
0.10
0.042
0.038
mg
mg
mg
Pada penelitian Adetutu (2015), bahwa 100 g semangka yang di jus kemudian
di ekstrak dengan bahan metanol, penilaian antioksidan menggunakan DPPH
(1,1-diphenypieryl-hydrozyl) dan hidrogen peroksida radikal maka didapatkan 100 g ekstrak
semangka yang memiliki kandungan 4537 µg likopen (Adetutu et al, 2015).
2.5.3. Manfaat Semangka bagi Kesehatan
Membantu meningkatkan konsentrasi arginine dalam darah. Mengurangi nyeri otot
karena mengandung sitrulin yang dapat mempercepat pelepasan asam laktat dari otot.
Bersifat mengenyangkan, air dan kalium dapat menurunkan tekanan darah, anti oksidan dan
vit. C membantu tubuh mempertahankan kesehatan, merangsang air seni yang baik untuk
ginjal, dapat membantu menurunkan demam dan mencegah sariawan dengan kandungan air
yang banyak (Edwards, 2003; Jessimy, 2018).
22 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Edwards (2003) mengemukakan bahwa semangka kaya akan sumber likopen,
karotenoid yang sangat penting karena peran antioksidannya dan bermanfaat bagi kesehatan.
Penelitian bertujuan memeriksa kandungan likopen dari jus semangka segar, dengan metode
crossover studi selama 19 minggu, didapatkan hasil penelitiannya bahwa konsentrasi likopen
dalam plasma secara signifikan meningkat dari 18 hingga 20 mg likopen perhari dari
jus semangka.
2.6. Likopen sebagai Bahan Aktif dalam Buah Semangka
2.6.1. Pengertian
Likopen adalah fitokimia hidrokarbon tak jenuh ganda, dengan rantai lurus yang terdiri
dari 2 ikatan rangkap tak terkonjugasi dan 11 ikatan rangkap terkonjugasi (Bacanli et al.,
2017).
Gambar 6. Struktur kimia Likopen (Bacanli et al., 2017)
Likopen merupakan senyawa flavonoid dari kelompok karotenoid yang berfungsi
sebagai antioksidan yang efektif, dan juga pigmen merah yang terdapat pada tumbuhan
baik buah maupun sayur seperti pepaya, tomat, paprika, dan semangka. Fungsi pigmen merah
tersebut untuk menyerap cahaya selama fotosintesis dan membantu melindungi tanaman
terhadap kerusakan akibat sinar matahari (Bacanli et al., 2017). Likopen yang berfungsi
sebagai antioksidan serta terkonjugasi dalam menangkal radikal bebas, ROS dan oksida nitrat
(Petyev, 2016).
23 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Kebutuhan likopen pada saat ini belum ada angka pasti mengenai asupan harian
likopen, hal ini tergantung dari populasi yang diteliti. Menurut Lucarini (2006) dalam
Strory et al. (2010), rata-rata orang Italia mengkonsumsi 14,3 mg per hari, total karotenoid
likopen merupakan bagian terbesar dari karotenoid dalam makanan Italia, dengan asupan
rata-rata 7,4 mg/hari (Porrini and Riso 2005, dalam Strory et al, 2010). Asupan likopen
harian rata-rata di Amerika Serikat berkisar 6,6-10,5 mg/hari untuk pria dan 5,7-10,4 mg/hari
untuk wanita. Asupan likopen harian dari berbagai negara yang dilaporkan rata-rata adalah
1,1 mg/hari di Inggris, 1,6 mg/hari di Australia, 4,8 mg/hari di Perancis, dan 4,9 mg/hari
di Belanda. Sedangkan menurut Rao et al. (2002) merekomendasikan asupan harian rata-rata
likopen sebanyak 5-10 mg/hari. Pendapat Pinto (2011) bahwa dosis yang lebih tinggi dari
20-30 mg/hari tidak seefektif dosis yang lebih rendah karena penyerapan yang terbatas.
Likopen dapat meningkatkan kualitas jumlah sel sperma, memperbaiki struktur
sperma dan meningkatkan motilitas sperma sehingga dapat meningkatkan fertilitas pria.
Hal ini diperkuat dengan penelitian yang dilakukan pada pria infertil di India yang hasilnya
menyatakan bahwa pria yang mengonsumsi makanan yang kaya likopen dengan kadar
likopen 20 mg, 2 kali dalam sehari selama 3 bulan berturut-turut akan meningkatkan
jumlah sperma sekitar 67%, struktur sperma akan mengalami perbaikan sebanyak 63% dan
motilitas sperma meningkat sebesar 73% (Anas and Asterina, 2011).
2.6.2. Penyerapan Likopen
Penyerapan likopen dari sumber makanan berkisar antara 10-30 % pada manusia dan
sisanya di ekskresikan. Sebagian besar penyerapan karotenoid termasuk likopen,
terjadi bersamaan dengan lemak, setelah dimetabolisme oleh enzim lipase pankreas di dalam
duodenum dan di emulsi garam empedu, misel yang mengandung likopen masuk ke dalam
mukosa usus melalui difusi pasif, setelah dicerna likopen masuk lagi ke aliran darah melalui
24 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
sistem limfatik. Penyerapan likopen terakumulasi secara tidak merata di berbagai jaringan
yaitu hati, testis dan kelenjar adrenal, akan tetapi penyerapan likopen juga dipengaruhi oleh
umur, jenis kelamin, merokok, alkohol, dan kadar lemak dalam darah (Holzapfel et al., 2013;
Rao et al., 2006).
Tabel 2. Distribusi Likopen dalam jaringan (dimodifikasi dari Elumalai, 2015)
Gambar 7. Proses penyerapan likopen (dimodifikasi dari Naz, 2014)
2.6.3. Mekanisme kerja
Mekanisme kerja likopen sebagai antioksidan yaitu sebagai antioksidan sekunder yang
menunda, memperlambat serta mencegah proses stres oksidasi. Likopen merupakan
antioksidan yang sangat kuat, memberikan pertahanan terhadap kerusakan sel yang
disebabkan oleh ROS. Ikatan ganda likopen terkonjugasi dan tidak terkonjugasi membuatnya
sangat reaktif terhadap kerusakan akibat stres oksidatif. Likopen memiliki efek
Jaringan (nmol/g berat basah)
Hati
Ginjal
Adrenal
Testis
Ovarium
Jaringan Adiposa
Paru-paru
Kolon
Payudara
Kulit
1.28-5.72
0.15-0.62
1.9-21.6
4.34-21.4
0.25-0.28
0.2-1.3
0.22-0.57
0.31
0.78
0.42
Semangka Akumulasi
likopen
Hati, Prostat,
dan Kelenjar
Adrenal
Saluran
Pencernaan
Disimpan di
organ dalam
jaringan Adiposa
Absorpsi melalui
mekanisme yang
diperantarai
Chylomicron
Proses
pencernaan
Masuk ke
aliran darah Likopen dalam
bentuk Cis
25 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
melalui mekanisme molekuler pleiotropik, termasuk regulasi transkripsi, kontrol siklus sel,
apoptosis, keseimbangan hormon, peradangan, angiogenesis, dan metastasis (Prayoga, 2015).
Likopen tidak memiliki cincin beta-ionon dan karenanya tidak memiliki
aktivitas provitamin A. Namun, 11 ikatan ganda terkonjugasi dan tidak terkonjugasi dalam
likopen membuatnya sangat reaktif terhadap oksigen dan radikal bebas. Likopen telah
diusulkan untuk melindungi terhadap kanker melalui berbagai cara termasuk penurunan
oksidasi lipid, penghambatan proliferasi sel kanker, apoptosis, peningkatan komunikasi
celah-junctional, gangguan dalam jalur pensinyalan reseptor faktor pertumbuhan insulin, dan
perkembangan siklus sel. Studi praklinis dan uji klinis menunjukkan bahwa likopen memiliki
efek anti tumor in vitro dan in vivo yang kuat, menunjukkan peran pencegahan dan
terapi potensial untuk likopen.
Gambar 8. Mekanisme Likopen dalam menghambat ROS (Yong Kim et al., 2015)
Mekanisme likopen dalam mencegah stres oksidatif pada membran sel dengan cara
stres oksidatif memicu induksi ROS di membran sel. Kemudian ROS mengarah pada
fosforilasi ATM (ataksia telangiectasia bermutasi serine / threonine protein kinase) dan
jalur pensinyalan terkait apoptosis (p38 dan JNK), menghasilkan augmentasi fosforilasi p53.
Selain itu, ROS memecah keseimbangan antara Bax dan Bcl2, menghasilkan
26 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
induksi apoptosis melalui pembelahan PARP-1 (Poli ADP-ribosa Polimerase 1) dan
Caspase-3. Likopen menekan apoptosis yang diinduksi stres oksidatif melalui akt-MnSOD.
Selain itu, likopen menurunkan fosforilasi MAPK (Mitogen Activated Protein Kinase) terkait
apoptosis (p38 dan JNK). Efek likopen ini pada stres oksidatif menginduksi
penurunan fosforilasi jalur pensinyalan ATM-p53 dan perlindungan pembelahan PARP-1 dan
caspase-3, menghasilkan pencegahan apoptosis dan augmentasi kelangsungan hidup pada
membran sel (Yong Kim et al., 2015).
Aktivitas enzim antioksidan yang lebih tinggi (SOD dan CAT) pada tikus yang diberi
semangka mendukung bahwa konsumsi semangka meningkatkan kapasitas antioksidan yang
lebih tinggi dan mengurangi stres oksidatif. Sebuah penelitian menemukan peningkatan
signifikan yang serupa pada SOD dan peroksidasi lipid yang lebih rendah dengan konsumsi
jus semangka pada tikus dengan kerusakan oksidatif yang diinduksi. Likopen dan antioksidan
lain seperti β-karoten dalam semangka dapat berkontribusi pada peningkatan
kapasitas antioksidan.
2.7. Sistem Reproduksi Jantan dan Spermatogenesis
2.7.1. Organ Testis
Testis merupakan gonad jantan yang terbentuk selama gestasi sebagai respon terhadap
sintesis androgen oleh mudigah jantan. Androgen primer adalah testosteron, pada manusia
sintesisnya di mulai pada usia kehamilan 8 minggu. Selama masa gestasi dini, testis janin
terletak di dalam rongga abdomen. Pada usia gestasi sekitar 6 bulan, testis turun dari rongga
abdomen melalui kanalis inguinalis ke dalam kantong eksternal, yang disebut skrotum.
Pembuluh darah, saraf, dan corda penunjang juga ikut turun dari rongga abdomen secara
bersamaan, setelah itu lubang kanalis bagian abdomen tertutup. Skrotum terletak di sebelah
dorsal penis dan suhu pada skrotum lebih rendah daripada suhu tubuh karena letaknya
27 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
di luar abdomen. Hal ini memberikan kondisi optimum bagi spermatogenesis, atau
pembentukan sel spermatozoa (Corwin, 2008).
Selama masa perkembangan embrio, jaringan gonad pada individu betina
berdiferensiasi menjadi ovarium, sedangkan pada jantan menjadi testis. Pada semua spesies,
testis berkembang di dekat ginjal, yaitu pada daerah krista genitalis primitif. Pada mammalia,
testis mengalami penurunan yang cukup jauh, pada kebanyakan spesies berakhir pada
skrotum. Pada burung, testis tidak mengalami penurunan, tetap tinggal pada posisi di sekitar
daerah testis itu berasal. Fungsi testis ada 2 macam yaitu menghasilkan hormon seks jantan
disebut androgen dan menghasilkan gamet jantan disebut sperma (Nalbandov, 1990).
Sel spermatozoa dihasilkan di tubulus seminiferus yang merupakan lebih dari
90 persen dari massa testis. Tubulus-tubulus tersebut sangat berliku-liku, setiap testis
memiliki tubulus-tubulus yang panjangnya mencapai jarak bermil-mil bila direntangkan.
Struktur histologi tubulus berubah secara cepat dengan bertambahnya umur.
Pada jantan usia muda struktur tubulus masih sederhana, epitelium lembaga hanya terdiri atas
sel spermatogonia dan sel Sertoli. Pada jantan usia yang lebih tua, sel spermatogonia tumbuh
menjadi spermatosit primer, yang setelah meiosis pertama tumbuh menjadi
spermatosit sekunder haploid. Selanjutnya spermatosit sekunder haploid menjadi spermatid,
yang setelah mengalami sederetan transformasi disebut spermiogenesis, kemudian tumbuh
menjadi satu sel spermatozoa yang terdiri dari bagian kepala, bagian tengah (badan) serta
bagian ekor (Nalbandov, 1990).
Fungsi testis lainnya yang penting adalah sekresi hormon seks jantan. Bukti-bukti yang
menunjukkan bahwa hanya sel Leydig yang terdapat pada jaringan interstisial yang
mensekresi hormon androgen, tetapi belum dapat dijelaskan secara spesifik karena adanya
sedikit kemungkinan bahwa komponen-komponen tubulus seminiferus mungkin
berperan serta pada fungsi ini. Spesies yang berbeda ataupun spesies yang sama terdapat
28 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
perbedaan perkembangan yang besar pada sel Leydig. Sel Leydig ditemukan pada semua
mammalia, tetapi terdapat perbedaan antarspesies tentang banyaknya jumlah sel Leydig yang
dapat ditemukan. Pada babi dan tikus, sel Leydig ini berkembang sangat baik dan kumpulan
sel-sel Leydig yang cukup luas berada hampir di seluruh bagian dari volume total testis.
Pada manusia dan sapi, sel-sel Leydig jauh lebih sedikit dan tidak membentuk kumpulan-
kumpulan yang besar seperti yang terjadi pada spesies lain. Sekresi hormon androgen oleh
sel Leydig dikontrol oleh hormon-hormon pituitari, dan tingkat sekresinya tergantung pada
tingkat fungsional kelenjar pituitari (Nalbandov, 1990).
Gambar 9. Histologi Testis dengan pembesaran 100x (A) dan 400x (B). Tampak Tubulus
Seminiferus (ST), Sel Sertoli (SC), Spermatid (SD), Spermatosit Primer (PS), Spermatogonia
(SG), Sel Leydig (LC) (Alalwani, 2014)
2.7.2. Sistem Duktus
Sistem duktus pada jantan sebagian besar berasal dari sistem duktus Wolff pada
ginjal mesonefrik yang sebagian dari sistem Muller, pada betina hampir seluruhnya
digunakan untuk pembentukan duktus-duktusnya. Pada jantan tetap bertahan sebagai
rudimen pada prostat, yakni dalam bentuk utrikel prostatic (uterus jantan atau
uterus maskulinus) (Nalbandov, 1990).
A B
29 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Tubulus mesonefrik berkembang menjadi vas eferen, duktus mesonefrik menjadi
epididimis, sedangkan vas deferen dan vesikula seminalis dibentuk terakhir dari
evaginasi duktus. Sisa-sisa dari sistem duktus yang lain (uretra prostatic, membranosa dan
kavernosa) berkembang dari sinus urogenitalis seperti halnya dengan 2 kelenjar
aksesori jantan yang lain, yaitu kelenjar prostat dan kelenjar Cowper (kelenjar bulbo-uretra).
Duktuli efrensia menjadi berkelok-kelok, dan duktuli berasal dari rete testis. Duktuli tersebut
secara bergantian dibatasi oleh kelompok sel-sel epitelium berbentuk tinggi dan rendah yang
memiliki silia yang tidak dapat bergerak. Secara berangsur-angsur duktuli tersebut bersatu,
membentuk duktus tunggal yang berkelok-kelok serta membentuk bagian kepala, badan, dan
ekor epididimis, yang dibatasi oleh sel-sel epitelium berbentuk kompleks semu
berukuran tinggi dan memiliki stereosilia yang dapat bergerak (Nalbandov, 1990).
Epididimis merupakan saluran reproduksi jantan yang berfungsi menghasilkan
kelenjar reproduksi jantan, dan juga merupakan tempat penyimpanan sel spermatozoa
sementara sebelum dikeluarkan. Sel spermatozoa yang terdapat di dalam epididimis
merupakan sel tunggal dengan membran selnya mengandung kadar fosfolipid yang tinggi.
Senyawa lipid yang terdapat pada membran sel spermatozoa mengandung asam lemak
tidak jenuh yang sangat rentan mengalami oksidasi terutama oleh karena adanya induksi dari
senyawa-senyawa radikal bebas atau ROS. Selain lipid, kadar ROS yang tinggi dapat juga
mengoksidasi protein dan DNA (Sanocka et al, 2004).
2.7.3. Histologi Testis
Tubulus seminiferus mengandung banyak sel epitel germinativum yang berukuran
kecil sampai sedang yang dinamakan spermatogonia, yang terletak dalam dua sampai tiga
lapisan sepanjang pinggir luar epitel tubulus. Sel-sel ini terus mengalami proliferasi untuk
memperbanyak kembali sel-sel tersebut, sebagian dari sel tersebut berdiferensiasi melalui
30 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
stadium-stadium definitif perkembangan untuk membentuk sel spermatozoa
(Guyton and Hall, 2008).
Epitel tubulus seminiferus berada tepat di bawah membran basalis yang dikelilingi
oleh jaringan ikat fibrosa yang disebut jaringan peritubular yang mengandung serat-serat
jaringan ikat, sel-sel fibroblas dan sel otot polos yang disebut dengan sel mioid. Kontraksi
sel mioid ini dapat mengubah diameter tubulus seminiferus dan membantu pergerakan
sel spermatozoa. Setiap tubulus ini dilapisi oleh epitel berlapis majemuk (Junqueira, 2007).
Tubulus seminiferus merupakan tubulus yang bermuara di suatu saluran rete testis.
Irisan tubulus seminiferus memperlihatkan adanya epitel germinal, terdiri dari dua macam sel
yaitu sel spermatogenik dan sel non spermatogenik. Epitel germinal terdiri dari
spermatogonium, spermatosit dan spermatid. Sel spermatogenik terdiri dari 6-8 lapis sel yang
berada pada membran basalis. Sel spermatogenik adalah derivat gamet yang terdiri dari
spermatogonia, spermatosit, spermatid dan spermatozoa. Sel non spermatogenik disebut
dengan sel Sertoli yang terletak diantara sel-sel spermatogenik, puncak mencapai
lumen tubulus tingginya setebal epitel germinal. Epitel germinal ini disebut dengan
epitel seminiferus yang dikelilingi jaringan fibrosa konektivus yang tipis. Sel Sertoli
merupakan sel non spermatogenik yang berperan memberikan dukungan dan nutrisi
dalam perkembangan sel spermatozoa (Yatim and Wildan, 1994).
Tubulus seminiferus mengandung jaringan interstisial yang disebut dengan sel leydig
yang berukuran besar. Sel leydig merupakan sel yang memberikan gambaran mencolok
untuk jaringan tersebut. Sel Leydig letaknya berkelompok memadat pada daerah segitiga
yang terbentuk oleh susunan-susunan tubulus seminiferus. Sel Leydig tersebut
berukuran besar dengan sitoplasma sering bervakuola secara mikroskopis. Inti selnya
mengandung butir-butir kromatin kasar dan anak inti yang jelas. Umumnya pula dijumpai sel
yang memiliki dua inti. Sitoplasma sel banyak dengan benda-benda inklusi seperti titik lipid,
31 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
dan pada manusia juga mengandung kristaloid berbentuk batang. Celah di antara
tubulus seminiferus dalam testis diisi kumpulan jaringan ikat, saraf, pembuluh darah dan
limfe (Junqueira, 2007).
2.7.4. Proses Spermatogenesis
Pada waktu lahir atau menetas, jantan memiliki tubulus yang tidak berlumen dan
dibatasi oleh lapisan tunggal epitelium bernukleus kecil. Waktu jantan mencapai usia dewasa,
dalam tubulus secara perlahan terbentuk lumen dan epitelium lembaga (muasal) tumbuh dari
satu menjadi berlapis-lapis seperti terlihat pada hewan jantan dewasa. Dalam tubulus ini
dapat ditemukan semua tipe sel lembaga (spermatogonia, spermatosit primer serta sekunder,
dan spermatozoa). Diantara individu dan spesies terdapat variasi yang sangat besar mengenai
umur dimulainya spermatogenesis dan kecepatan perkembangannya. Spermatogenesis
berkembang paling cepat pada spesies yang jantannya mencapai kedewasaan seksual
relatif awal. Hewan yang berumur pendek (ayam) proses spermatogenesisnya berlanjut dan
tidak berkurang sampai mati, dan sebagian besar tubulus tampaknya berfungsi secara normal
sepanjang hidup. Pada mammalia umur panjang (manusia, babi, sapi) spermatogenesis
berlanjut sepanjang hidup, tetapi melewati umur pertengahan tubulus secara normal yang
lambat-laun akan mengalami atrofi, sampai akhirnya hanya sedikit yang menunjukkan
aktivitas spermatogenik (Nalbandov, 1990).
Seringkali individu tertentu mampu menghasilkan spermatozoa hidup dan mampu
mengadakan penangkaran jauh sebelum sebagian besar anggota spesies yang lain atau
anggota populasi yang lain dapat melakukannya. Kedewasaan seksual pada anak laki-laki dan
mammalia lain yang terjadi terlalu awal mungkin lebih umum daripada yang diperkirakan.
Spermatogenesis sempurna, dengan sel sperma dalam epididimis tampak pada testis seekor
domba berumur 72 hari, dan sperma yang motil dapat ditemukan pada ayam Leghorn 62 hari.
32 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Umur kedewasaan seksual bersifat genetik, dan tampak dari kenyataan bahwa terdapat
perbedaan besar antara hewan domestik (sapi perah, sapi Brown Swiss) mencapai kedewasaan
empat sampai enam bulan lebih lambat dibanding sapi Jersey atau Guernsey. Kenyataannya
telah terbukti, bahwa pada semua bangsa hewan domestikasi, dapat dilakukan seleksi dengan
tujuan untuk hewan dengan kedewasaan seksual awal atau lambat (secara sadar atau tidak)
(Nalbandov, 1990).
Pada jantan penangkar musiman testis mengalami regresi sepenuhnya selama
diluar musim penangkaran, dan epitelium lembaga kembali pada keadaan seperti yang
umumnya terdapat pada hewan jantan yang belum dewasa secara seksual. Pada saat itu
tubulus seminiferus kehilangan lumennya dan dibatasi oleh spermatogonia kecil satu lapis.
Pada kebanyakan mammalia, testis bermigrasi dari skrotum ke rongga tubuh, dan
tetap tinggal di sini sampai sesaat sebelum dimulainya musim penangkaran berikutnya,
kemudian mereka mengalami perubahan yang sama seperti yang terjadi ketika mencapai
pubertas, dan terulang lagi pada setiap permulaan musim penangkaran berikutnya
(Nalbandov, 1990).
Gambar 10. Proses Spermatogenesis
33 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2.8. Kerangka Teori
2.9. Kerangka Konsep
Variabel Independen Variabel Dependen
Kenaikan Berat Badan,
Stres Oksidatif, Analisa Sperma,
Berat Testis, Histologi Testis
Peroksidasi lipid
Stress Oksidatif
Jumlah Sel
Sperma
Kerusakan Membran Sel
Motilitas Sel
Sperma
Monosodium
Glutamat (MSG)
Asam Glutamat
Reactive Oxygen Species
(ROS) ↑
Jus
Semangka
Histologi Testis
Jus Semangka
34 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1. Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan eksperimental dengan rancangan post test only control group
dengan cara membandingkan hasil observasi pada kelompok perlakuan (eksperimen) dengan
kelompok kontrol di akhir penelitian.
3.2. Waktu Dan Tempat Penelitian
3.2.1. Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret sampai Agustus 2019.
3.2.2. Tempat Penelitian
a. Laboratorium Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas
Sumatera Utara, sebagai tempat dimulainya proses aklimatisasi, pemberian
perlakuan selama 30 hari dan pembedahan hewan coba, serta sebagai tempat
pemeriksaan analisa sperma tikus.
b. Laboratorium Terpadu Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara untuk
pemeriksaan kadar MDA.
c. Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara
untuk pembuatan dan pembacaan preparat histologi testis.
35 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3.3. Sampel Penelitian dan Besar Sampel
Penelitian ini menggunakan sampel hewan tikus wistar jantan (Rattus norvegicus),
dengan kriteria sampel: tikus Wistar jantan dewasa (usia 8 – 12 minggu), berat 150 - 200 gr,
aklimatisasi selama 7 hari sebelum perlakuan tikus tidak sakit, aktivitas normal, dan belum
pernah digunakan untuk penelitian.
Pengambilan sampel dilakukan secara acak dengan metode simple random sampling
yang memenuhi kriteria sampel.
Besar sampel penelitian ini dihitung menggunakan rumus Federer (Federer, 1963)
Keterangan t = banyak kelompok perlakuan
r = jumlah replikasi
Maka besar sampel yaitu :
(t-1) (r-1) ≥ 15
(5 – 1) (r-1) ≥ 15
4 (r-1) ≥ 15
r-1 ≥ 4 r ≥ 5
Berdasarkan hasil perhitungan menggunakan rumus Federer maka jumlah sampel
minimal perkelompok adalah 5 ekor. Dilakukan penambahan drop out sebesar 20% dari
jumlah sampel minimal dan penambahan sampel berdasarkan jumlah sampel penelitian yang
diperbolehkan secara statistik dan tidak melanggar prinsip 3 R (Reduction, Replacement,
Refinement) dalam penelitian hewan coba, maka jumlah sampel yang digunakan menjadi
7 ekor tikus untuk setiap kelompok. Jadi jumlah seluruh hewan coba yang dibutuhkan
sebanyak 35 ekor.
(t-1) (r-1) ≥ 15
36 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Pemilihan sampel dan pengelompokkannya dilakukan menggunakan metode simple
random sampling, setiap 35 ekor sampel yang memenuhi kriteria akan diberi nomor, untuk
kemudian diambil secara acak oleh peneliti dan dibagi menjadi 5 kelompok yang sama besar.
3.4. Identifikasi Variabel Penelitian
3.4.1. Variabel Bebas (Independen)
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah Jus Semangka.
3.4.2. Variabel Terikat (Dependen)
Kenaikan Berat Badan
Stres Oksidatif
Berat Testis
Analisa Sperma yaitu: Jumlah sel sperma dan Motilitas sel sperma
Histologi testis yaitu: Diameter Tubulus Seminiferus, Jumlah Sel Leydig, dan
Lebar Celah antara Tubulus Seminiferus dengan Sel Spermatogenik.
3.5. Definisi Operasional
Variabel Definisi
Operasional
Cara Ukur Alat Ukur Hasil Ukur
Skala
Ukur
Analisa
sperma
Pengamatan jumlah
dan motilitas sel
spermatozoa.
a. Jumlah
spermatozoa :
dihitung
berdasarkan
lapangan pandang
yang dibagi 5.
b. Motilitas :
persentase jumlah
sel sperma yang
bergerak aktif
yang diamati
pada 100 sel
sperma dalam
kamar hitung.
Diamati dari 5 kamar
hitung yang diberi
tanda ABCDE lalu
dihitung.
Improved
Neubauer
Mikroskop
cahaya
dengan
pembesaran
100x dan
400x.
a. juta/ml
b. % motilitas
Rasio
37 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Histologi
Testis
Histologi testis
terdiri dari :
a. Diameter tubulus
seminiferus
b. Jumlah sel leydig
c. Lebar Celah
antara tubulus
seminiferus dan
sel
spermatogenik.
Jaringan testis diwarnai
dengan pewarnaan
Hematoxylin Eosin
(HE).
a. Diameter Tubulus
Seminiferus:
diperoleh dengan
cara mengukur
diameter 5 tubulus
seminiferus dari 5
lapangan pandang
yang berbeda.
b. Jumlah sel leydig:
dihitung dari 5
lapangan pandang
yang berbeda.
c. Lebar celah:
diperoleh dengan
cara mengukur
diameter tubulus
dikurangi diameter
sel spermatogenik
dari 5 lapangan
pandang yang
berbeda.
Mikroskop
cahaya
dengan
pembesaran
100x dan
400x.
a. µm
b. Rata-rata
jumlah sel
c. µm
Rasio
Stres
Oksidatif Keadaan dimana
terjadi
pembentukan
radikal bebas
berlebihan, yang
menyebabkan
terjadinya
peroksidasi lipid.
Kadar MDA pada
plasma diukur dengan
menggunakan metode
TBARS dengan
absorbansi cahaya yang
dibaca pada panjang
gelombang 535 nm.
Spektrofoto-
meter merk
Thermo
Scientific
µmol/l Rasio
Jus
Semangka
Sari buah
semangka yang
diambil bagian dari
daging buah yang
berwarna merah.
Dilakukan
pengenceran
dengan konsentrasi
100%, 50%, dan
25%.
Jus semangka yang
didapat dibagi menjadi
3 konsentrasi dengan
cara pengenceran
menggunakan air biasa.
Gelas ukur
Konsentrasi
100%, 50%,
25%
Ordinal
38 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3.6. Alat, Bahan, dan Cara Kerja
3.6.1. Alat-alat yang dibutuhkan dalam penelitian
Kandang tikus serta kawat penutupnya, tempat makanan dan botol minuman.
Jarum oral (gavage) untuk cekok tikus, spuit 3 cc, sarung tangan, timbangan
digital, dan sekam kayu.
Blender, pisau, plastik pembungkus, saringan teh dan saringan kopi.
Mesin tissue processing otomatis (merek Leica TP 1020), Waterbath, Object
glass, dan deck glass.
Alat bedah minor dan bak bedah, gelas arloji, tabung Vacutainer, cawan petri,
batang pengaduk, beker glass, vortex, oven, tabung ependorf®, alat sentrifuse
ependorf®, spektrofotometer UV Genesys
®, sarung tangan, masker,
kertas milli, Pot untuk tempat organ testis, mikropipet, deck glass, dan
Hemositometer Improved Neubauer.
Mikroskop binokuler dan Mikroskop camera.
3.6.2. Bahan-bahan yang dibutuhkan dalam penelitian
MSG merek Ajinomoto yang diproduksi oleh PT. Ajinomoto Indonesia.
Buah semangka yang diperoleh dari pasar tradisional lokal.
Pakan standar tikus berupa pellet 552 produksi PT. Charoen Pokphan Medan
yang dicampur jagung kasar dengan perbandingan 1 : 1.
2-Thiobarbituric acid (Merck), Tetramethoxypropane 99%,
Trichloroacetic acid 10%, Acetic acid glacial, Sodium hydroxyde (NaOH), dan
aquadest untuk pemeriksaan MDA.
Ketamin, xylazin, dan aquadest.
Formalin buffer 10%, NaCl 0,9%, Alkohol 70%-80%-96%, Xylol, parafin cair,
Methanol, glyserin, dan Hematoxylin eosin.
39 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3.6.3. Cara Kerja
3.6.3.1. Pemeliharaan dan Pengelompokan Hewan Coba
Tikus dipelihara dalam kandang plastik (ukuran 30 x 20 x 10 cm) dengan
anyaman kawat sebagai penutup kandang, dasar kandang dilapisi sekam kayu setebal
1-1,5 cm dan diganti setiap tiga hari, ditempatkan dalam ruangan yang memiliki
ventilasi dan mendapat cahaya matahari secara tidak langsung. Sebelum perlakuan,
tikus di aklimatisasi selama seminggu. Pemberian minum dilakukan setiap hari secara
ad libitum dan pakan yang diberikan berupa pellet 552 produksi PT. Chaeron Pokphan
Medan. Cahaya, kelembaban, dan suhu ruangan berada pada kondisi alamiah.
Gambar 11. Kandang pemeliharaan tikus
Sebelum perlakuan, terlebih dahulu dilakukan penimbangan berat badan tikus.
Perlakuan diberikan sesuai dengan kelompok masing-masing. Tikus dibagi secara acak
dalam 5 kelompok, masing-masing kelompok 7 ekor. Tiap kelompok diberi kode
kelompok KN, KP, P1, P2, dan P3.
1. Kelompok KN: kelompok kontrol tanpa diberi MSG, hanya diberi aquadest sebanyak
5 ml/ekor/hari dan pellet dengan cara ad libithum selama 30 hari.
40 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2. Kelompok KP: kelompok kontrol positif yang diberi MSG 10 mg/grBB/hari dengan
cara dicekok menggunakan jarum oral (gavage) setiap hari dan diberi aquadest
sebanyak 5 ml/ekor/hari serta pellet dengan cara ad libithum selama 30 hari.
3. Kelompok P1: kelompok perlakuan yang diberi MSG 10 mg/grBB/hari dengan cara
dicekok menggunakan jarum oral (gavage) dan dilanjutkan dengan pemberian jus
semangka 25% serta pellet diberikan setiap hari selama 30 hari.
4. Kelompok P2: kelompok perlakuan yang diberi MSG 10 mg/grBB/hari dengan cara
dicekok menggunakan jarum oral (gavage) dan dilanjutkan dengan pemberian jus
semangka 50% serta pellet diberikan setiap hari selama 30 hari.
5. Kelompok P3: kelompok perlakuan yang diberi MSG 10 mg/grBB/hari dengan cara
dicekok menggunakan jarum oral (gavage) dan dilanjutkan dengan pemberian jus
semangka 100% serta pellet diberikan setiap hari selama 30 hari.
Tabel 3. Dosis pemberian MSG dan jus semangka pada kelompok perlakuan
Kelompok Dosis
KN
KP
P1
P2
P3
Kontrol air + pellet.
Kontrol (MSG 10 mg/grBB)
MSG (10 mg/grBB/hari) + Jus semangka 25%
MSG (10 mg/grBB/hari) + Jus semangka 50%
MSG (10 mg/grBB/hari) + Jus semangka 100%
Pakan diberikan sejak tikus di aklimatisasi, berupa pelet dicampur jagung kasar
dengan perbandingan 1:1 diberikan setiap pagi jam 09.00 dan sore jam 16.00 sebanyak
2,5-5 gr/tikus serta air minum ad libitum dari Perusahaan Air Minum (PAM).
41 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3.6.3.2. Perlakuan Hewan Coba
Kelompok perlakuan diberikan sesuai dosis masing-masing. Prosedur
pemberian MSG menggunakan sonde adalah sebagai berikut (Andrews and McErlane,
2015).
a. Lakukan pengukuran panjang sonde dari luar tubuh tikus, dimulai dari oral cavity
sampai processus xiphoideus (bagian kaudal dari sternum), kemudian ditandai bagian
sonde dengan menggunakan spidol.
Gambar 12. Metal gavage needle / sonde lambung 20-24 G (Kiri). Pengukuran Sonde
lambung pada tikus (Kanan) (Andra and Mcerine, 2015)
b. Spuit di isi dengan bahan dan volume yang sesuai. Bagian luar sonde dibersihkan
untuk menyingkirkan benda asing yang melekat di bagian tersebut.
c. Tikus dipegang secara perlahan dan tahan dengan posisi tegak. Pegang atau tarik
bagian kulit disekitar punggung tikus, sehingga bagian tungkai depan menjadi lurus
ke arah luar dan kepala juga leher menjadi terbatas pergerakannya (imobilisasi).
Pastikan tikus masih tetap dapat bernafas secara bebas.
42 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 13. Cara memegang tikus saat pemberian perlakuan menggunakan sonde
(Andra and Mcerine, 2015)
d. Sonde diselipkan di ujung sisi kiri mulut tikus tepat di belakang gigi depan dan
di depan gigi molar I (diastema), sepanjang langit-langit mulut tikus secara perlahan
menuju bagian sisi kiri tikus (akan dirasakan hard palate saat sonde ditarik kembali).
e. Saat sonde telah berada dibelakang mulut (biasanya tikus akan muntah atau tercekik),
secara perlahan tarik kepala kebelakang (menuju spinal) sekaligus menekan sonde
secara perlahan. Hal ini memungkinkan posisi esofagus dalam keadaan tegak lurus
terhadap lambung. Pada posisi yang tepat sonde seharusnya terdorong dengan
sendirinya akibat gaya gravitasi.
f. Sonde diputar searah jarum jam secara perlahan saat melewati epiglotis menuju
esofagus. Sonde dimasukkan sampai bagian yang telah ditandai mencapai mulut.
Gambar 14. Cara memasukkan/mendorong sonde lambung (Andra and Mcerine, 2015)
g. Ketika sonde telah berada pada posisi yang tepat, pastikan tikus bernafas dengan
normal. Jika sonde berada pada trakea, tikus akan kesusahan untuk bernafas.
Setelah tikus bernafas dengan normal, injeksikan dosis minimal (~0,05 ml), jika
43 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
tidak ada perubahan usaha bernafas maka injeksikan cairan secara perlahan (lebih dari
2-3 detik) untuk mencegah cairan kembali ke esofagus.
h. Sonde dikeluarkan secara perlahan sehingga tidak ada substansi yang terbawa keluar
kembali ke esofagus atau kerongkongan.
Gambar 15. Pemberian MSG dengan menggunakan sonde
3.6.3.3. Pembuatan Jus Semangka
Buah semangka di cuci bersih untuk menghilangkan kotoran serta
residu insektisida. Setelah di cuci bersih potong buah semangka lalu pisahkan bagian
merah dan putih dari semangka, selanjutnya ditimbang bagian merah semangka
sebanyak 10.000g atau sama dengan 544,32 mg likopen. Semangka dihaluskan dengan
blender selama 45 detik kemudian di saring menggunakan saringan kasar dan halus serta
dipress untuk memisahkan air dengan ampasnya sehingga diperoleh jus semangka.
Setelah itu jus semangka di simpan dalam freezer dengan suhu -200C.
Sebelumnya sudah dipisahkan untuk per hari sebanyak 235,2/ml, pada saat pemberian
jus semangka di keluarkan terlebih dahulu ± 4 jam dengan suhu ruangan (tidak boleh
dipanaskan) agar jus semangka mencair, saat pemberian masukkan kedalam 3 gelas
masing-masing sebanyak 20 ml. Gelas pertama sebagai dosis I dengan
konsentrasi 100%, gelas kedua di tambahkan aquades sebanyak 20 ml sebagai dosis II
dengan konsentrasi 50% selanjutnya diambil 20 ml dari gelas kedua ditambahkan
aquades 20 ml sebagai dosis III dengan konsentrasi 25%.
44 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 16. Proses pembuatan jus semangka
3.6.3.4. Prosedur pengambilan jaringan tikus
Prosedur pengambilan jaringan dilakukan melalui tahap persiapan, pembedahan,
dan sanitasi. Pada tahap persiapan, disiapkan pot yang sudah diberi label sesuai dengan
nomor perlakuan tikus yang akan dilakukan pembedahan. Pot organ di isi dengan
formalin buffer 10% untuk menyimpan organ. Disiapkan peralatan bedah seperti
gunting bedah, pinset, gelas arloji, cawan petri, papan bedah, pins, beker glass.
Tahap pembedahan, tikus dibunuh dengan cara dibius menggunakan
larutan ketamin / xylazin dengan dosis 0,1 ml / 100 gr BB tikus. Tikus diposisikan pada
papan bedah menggunakan pins dan di bedah mulai dari bagian perut sampai ke dada
dan kebawah menggunakan gunting bengkok. Darah tikus diambil menggunakan
45 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
jarum suntik kemudian organ testis diambil dan dibersihkan dari kotoran yang
menempel, jaringan lemak dibuang menggunakan gunting, lalu dicuci menggunakan
NaCl 0,9% sampai bersih. Secara makroskopik diamati, lalu organ testis dipisahkan dari
kauda epididimis dan ditimbang berat testis. Setelah testis ditimbang lalu dimasukkan
kedalam pot berisi formalin buffer 10%.
Gambar 17. Pembedahan tikus untuk pengambilan sampel darah dan organ testis
Tahap sanitasi dilakukan dengan cara memasukkan bangkai dan sisa jaringan
tikus yang tidak terpakai dalam kantong plastik yang akan dibuang. Tempat kerja
melakukan pembedahan dibersihkan dan semua peralatan bedah yang terpakai
dibersihkan.
3.6.3.5. Prosedur Pengambilan Sampel Darah Tikus
Setelah berat badan tikus ditimbang pada hari ke 31 kemudian tikus dibunuh
dengan cara dibius menggunakan ketamin / xylazin dengan dosis 0,1ml / 100grBB tikus.
Tikus dibedah dan langung dilakukan pengambilan sampel darah dengan cara
cardiac puncture sebanyak ± 5 ml. Sampel darah dimasukkan kedalam
tabung Vacutainer dan kemudian di sentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm selama
15 menit untuk mendapatkan serum. Setelah diperoleh serum, kemudian dipindahkan ke
tabung eppendorf lalu sampel serum tersebut yang akan digunakan disimpan dalam suhu
-200C sampai digunakan untuk pemeriksaan MDA.
46 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3.6.3.6. Prosedur Pengambilan Sampel Sperma Tikus
Untuk mendapatkan sel spermatozoa di dalam sekresi kauda epididimis
dilakukan dengan cara yang telah dimodifikasi sebagai berikut: organ testis yang didapat
beserta epididimis sebelah kanan diambil dan diletakkan ke dalam cawan petri yang
berisi NaCl 0,9 %. Di bawah mikroskop bedah dengan pembesaran 40 kali,
kauda epididimis dipisahkan dengan cara memotong bagian proksimal korpus epididimis
dan bagian distal vas deferens. Selanjutnya kauda epididimis dimasukkan ke dalam
gelas arloji yang berisi 1 ml NaCl 0,9 % hangat (37oC), kemudian bagian
proksimal kauda dipotong sedikit dengan gunting lalu kauda ditekan dengan perlahan
hingga sekresi/cairan epididimis keluar dan tersuspensi dengan NaCl 0,9 %.
Suspensi spermatozoa yang telah diperoleh dapat digunakan untuk pengamatan
kualitas sel spermatozoa yang meliputi: jumlah, motilitas, kecepatan gerak, dan
morfologi spermatozoa (Fauzi, 2008).
Gambar 18. Anatomi dan saluran reproduksi testis tikus wistar jantan. Testis (a), Caput
epididimis (b), Cauda epididimis (c), dan Vas deferens (d). Tanda panah menunjukkan
bagian yang dipotong untuk mengisolasi cauda epididimis. Pembesaran 40x (Fauzi, 2008)
47 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 19. Testis yang akan dipisahkan dari vas deferens (A). Testis kanan-kiri utuh (B).
Pemisahan testis dan vas deferens menggunakan kaca pembesar (C).
3.6.3.7. Pengamatan Analisa Sperma
Pengamatan analisa sperma dilakukan sebagai berikut :
a. Jumlah sel spermatozoa
Suspensi spermatozoa yang telah diperoleh terlebih dahulu dihomogenkan dan
dibiarkan terlebih dahulu selama 15 menit pada suhu kamar. Selanjutnya diambil
sebanyak 10 µl sampel dan dimasukkan pada kamar hitung Hemositometer Improved
Neubauer serta ditutup dengan deck glass. Di bawah mikroskop cahaya dengan
perbesaran lensa objektif 40 kali, hemositometer diletakkan dan dihitung jumlah sel
spermatozoa pada kotak / bidang A,B,C,D, dan E.
Gambar 20. Hemositometer Improved Neubauer
A B C
22
48 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Hasil perhitungan jumlah sel spermatozoa kemudian dimasukkan ke dalam rumus
penentuan jumlah sel spermatozoa / mL suspensi sekresi kauda epididimis sebagai
berikut :
N = jumlah spermatozoa yang dihitung pada kotak A,B,C,D,dan E
b. Motilitas spermatozoa
Suspensi spermatozoa yang diperoleh terlebih dahulu dihomogenkan dan
dibiarkan terlebih dahulu selama 15 menit pada suhu kamar. Selanjutnya diambil
sebanyak 10 µl dan diteteskan suspensi ini pada kamar hitung Improved Neubauer
kemudian diamati di bawah mikroskop cahaya dengan perbesaran lensa objektif 40 kali.
Gerakan sel spermatozoa diamati dan dikategorikan menjadi dua yaitu
sel spermatozoa motil (bergerak) dan non motil (tidak bergerak). Biasanya empat sampai
enam lapangan pandang yang harus diperiksa untuk mendapat 100 sel spermatozoa
secara berurutan yang kemudian diklasifikasi sehingga menghasilkan persentase setiap
kategori motilitas.
3.6.3.8. Pemeriksaan Kadar MDA di dalam Darah
Pemeriksaan kadar MDA di dalam darah dilakukan menurut Rao et al dalam
Hsieh et al (2006) yang telah dimodifikasi sebagai berikut :
Reagensia
1. 2-Thiobarbituric acid (Merck ; Cat. No.1.08180.0025 )
2. 1,1,3,3-Tetramethoxypropane 99 % (Sigma ; Cat. No. 108383) 500 µM
3. Asam Asetat Glasial
4. Sodium hydroxide (NaOH)
5. Aquadest
Jumlah spermatozoa = N : 2 x 105 spermatozoa / mL supensi
49 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Persiapan Regensia
1. TBA/Buffer Reagent
TBA/Buffer Reagent terdiri dari : 0,067 g 2-thiobarbituric acid dilarutkan
dalam 10 mL aquadest, selanjutnya ditambah 0,05 g sodium hidroxyde dan 10 mL
asam asetat glasial.
Gambar 21. Bahan-bahan pembuatan reagen TBA
2. Standar MDA
Sebanyak 250 µL 1,1,3,3-tetramethoxypropane (Malondialdehyde bis) 500 µM
dilarutkan dalam 750 µL aquadest untuk memperoleh larutan stok MDA 125 µM.
Selanjutnya dari larutan stok MDA 125 µM dilarutkan dalam aquadest dan dibuat
4 seri standar MDA yang dapat dilihat pada tabel dibawah ini :
Tabel 4. Persiapan standar MDA untuk spektrofotometer
Nomor
standard
Konsentrasi
MDA (µM)
Volume MDA
standard (µL) Volume pelarut (µL)
1
2
3
4
30
18
9
0
300
180
90
0
0
120
210
300
Prosedur Uji
1. Sebanyak 200 µl sampel (suspense serum) atau standar MDA dimasukkan dalam
tabung ependorf yang masing-masing telah diberi label.
2. Ditambahkan 0,5 mL aquadest pada masing-masing tabung.
50 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3. Kemudian ditambahkan 0,5 ml TBA/Buffer Reagent
4. Selanjutnya masing-masing tabung diinkubasi di dalam oven dengan suhu 95oC
selama 60 menit
5. Setelah diinkubasi, masing-masing tabung di keluarkan dari oven dan setelah
dingin masing-masing tabung disentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm
selama 10 menit.
6. Supernatan diambil untuk selanjutnya dianalisis dengan spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 535 nm.
3.6.3.9. Prosedur Pembuatan Preparat Histologi Testis Tikus
a) Sampel organ testis tikus diambil dan dicuci dengan NaCl fisiologis,
kemudian difiksasi dengan larutan formalin buffer 10% (0,1 mol/L
Phospat Buffer saline) PH 7, selama 6-48 jam.
b) Dilakukan dehidrasi secara bertahap, dengan menggunakan alkohol 70%
selama 10 menit, alkohol 80%, 90%, 96% masing-masing selama 60 menit,
kemudian dengan alkohol absolut selama 30 menit.
c) Clearing atau penjernihan menggunakan xylol 1, 2, dan 3 selama 1 jam,
setelah itu dilakukan Infiltrasi (penyusupan) parafin dengan parafin cair 1, 2,
dan 3 pada suhu 60-70oC masing-masing selama 1 jam. Pada penelitian ini
menggunakan mesin tissue prosescing otomatis dengan merk Leica TP 1020.
51 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 22. Potongan organ yang dimasukkan ke dalam cassette (A). Proses
dehidrasi dan clearing yang dilakukan secara otomatis (B).
d) Embedding (parafinisasi) yaitu pembuatan blok parafin dengan cara
penanaman jaringan dalam kaset dan didinginkan, kemudian dilakukan
proses sectioning (pemotongan), dengan menggunakan mikrotom setebal
5μm dan selanjutnya dimasukkan ke dalam wadah penampung atau
waterbath.
e) Dilanjutkan dengan proses mounting dengan meletakkan sediaan di atas
object glass dan diolesi dengan glyserin. Proses terakhir adalah staining atau
pewarnaan dengan hematoksilin eosin.
f) Pewarnaan dengan hematoksilin eosin dilakukan secara bertahap yaitu
preparat di deparafinisasi dalam xylol, kemudian dimasukkan dalam alkohol
96%, 90%, 80%, 70%, 50% dan akuades, lalu dimasukkan dalam
larutan hematoksilin eosin selama 1 menit.
g) Preparat ditutup dengan menggunakan deck glass, kemudian diamati
tubulus seminiferus dan sel leydig di bawah mikroskop dengan pembesaran
40x, 100x dan 400x.
A B
52 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3.7. Kerangka Operasional
Tikus
(n=7)
MSG
10 mg/grBB/hari
+ Jus semangka
25%
(n=7)
MSG
10 mg/grBB/hari
dan Aquadest
5ml
(n=7)
Aquadest
5 ml dan
pellet
Aklimatisasi ± 1 minggu
Randomisasi kedalam 5 kelompok
Kelompok KN Kelompok KP
Terminasi
Pengambilan Sampel Darah Analisa Sperma
Jumlah sel
spermatozoa
Persentase
Motilitas
Spermatozoa
Pemeriksaan MDA
(n=7)
MSG
10 mg/grBB/hari
+ Jus semangka
50%
Kelompok P1 Kelompok P2 Kelompok P3
(n=7)
MSG
10 mg/grBB/hari
+ Jus semangka
100%
Perlakuan selama 30 hari
Jaringan Testis
Pewarnaan HE
Diameter Tubulus Seminiferus,
Jumlah Sel Leydig, Lebar celah.
53 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
3.8. Analisis Data
Semua data dipresentasikan dalam bentuk nilai rata-rata dengan simpang baku
(rata-rata ± SD). Dilakukan uji normalitas data menggunakan uji Shapiro Wilk. Jika data
berdistribusi normal dilakukan uji ANOVA. Jika terdapat perbedaan yang bermakna
dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey untuk melihat perbedaan antara kelompok kontrol
dari masing-masing perlakuan. Apabila distribusi data tidak normal maka digunakan uji
Kruskall Wallis. Semua analisis data dilakukan dengan menggunakan Prism Graphpad
versi 8. Dalam penelitian ini, hanya rata-rata perbedaan p<0,05 yang dianggap bermakna
(signifikan).
54 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil Penelitian
4.1.1. Berat Badan
Berdasarkan data berat badan tikus pada awal dan akhir perlakuan didapatkan
rata-rata kenaikan berat badan tikus seperti yang ditampilkan pada tabel 5 dan 6.
Pada uji normalitas didapatkan bahwa nilai rata-rata kenaikan berat badan tikus terdistribusi
normal maka dilakukan uji-t dan ANOVA untuk menguji perbedaan antar kelompok.
Tabel 5. Rata-rata kenaikan berat badan tikus setelah pemberian MSG
Kelompok Kenaikan berat badan (gram)
X ± SD
Nilai p*
KN 53,0 ± 14,9 0,64
KP 49,0 ± 16,7
* uji t-test
Tabel 6. Rata-rata kenaikan berat badan tikus setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok Kenaikan berat badan (gram)
X ± SD
Nilai p*
KP 49,0 ± 16,7 0,14
P1 36,0 ± 22,6
P2 27,6 ± 20,5
P3 28,0 ± 14,1
* uji ANOVA
Pada tabel 5 ditampilkan bahwa nilai rata-rata kenaikan berat badan tikus
yang diberikan MSG (kelompok KP) lebih rendah dibandingkan kelompok yang tidak
diberikan MSG (kelompok KN), namun secara statistik tidak bermakna.
Pada tabel 6 dapat dilihat bahwa nilai rata-rata kenaikan berat badan pada kelompok
yang mendapatkan MSG + jus semangka (P1, P2, dan P3) lebih rendah dibandingkan dengan
kelompok KP, namun secara statistik tidak bermakna.
55 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
4.1.2. Hasil Pemeriksaan MDA
Dari penelitian yang telah dilakukan diperoleh kadar MDA pada serum darah tikus
seperti yang ditampilkan pada tabel 7 dan 8. Pada uji normalitas didapatkan bahwa
nilai kadar MDA terdistribusi normal, maka selanjutnya dilakukan uji-t dan ANOVA untuk
menguji perbedaan antar kelompok.
Tabel 7. Kadar MDA pada serum darah tikus setelah pemberian MSG
Kelompok MDA (µmol/ml)
X ± SD
Nilai p*
KN 1,20 ± 0,23 0,01
KP 0,93 ± 0,08
* uji t-test
Pada tabel 7 kadar MDA pada tikus kelompok KP lebih rendah dibandingkan
kelompok KN, dan hasil uji statistik terdapat perbedaan yang bermakna pada kelompok KP
dibandingkan kelompok KN.
Tabel 8. Kadar MDA pada serum darah tikus setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok MDA (µmol/ml)
X ± SD
Nilai p*
KP 0,93 ± 0,08 0,09
P1 0,97 ± 0,13
P2 1,11 ± 0,17
P3 1,03 ± 0,13
*uji ANOVA
Pada tabel 8 ditunjukkan bahwa hasil uji statistik nilai kadar MDA serum antar
kelompok tidak berbeda bermakna namun dapat dilihat adanya tren peningkatan kadar MDA
pada kelompok yang mendapat perlakuan MSG+Jus Semangka.
4.1.3. Analisa Spermatozoa
Pada analisa spermatozoa, dilakukan pemeriksaan terhadap parameter jumlah dan
motilitas spermatozoa. Pada penghitungan terhadap jumlah sel spermatozoa tikus maka
diperoleh rata-rata jumlah sel sperma tikus seperti yang ditampilkan pada tabel 9 dan 10.
56 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Pada uji normalitas didapatkan bahwa nilai rata-rata jumlah sel spermatozoa tikus pada
kelompok KN dan KP terdistribusi normal sehingga dilakukan uji-t. Sementara pada tabel 10,
kelompok P2 tidak terdistribusi normal sehingga dilakukan uji Kruskal Wallis untuk menguji
perbedaan antar kelompok.
Tabel 9. Rata-rata jumlah sel spermatozoa tikus setelah pemberian MSG
Kelompok Jumlah Spermatozoa (juta/mL)
X ± SD
Nilai p*
KN 24,14 ± 3,26 0,002
KP 11,86 ± 7,83
*uji t-test
Tabel 10. Rata-rata jumlah sel spermatozoa tikus setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok Jumlah Spermatozoa (juta/mL)
X ± SD
Nilai p*
KP 11,86 ± 7,83 0,63
P1 8,50 ± 3,06
P2 11,36 ± 2,48
P3 10,29 ± 3,99
*uji Kruskal Wallis
Pada kelompok KP dijumpai penurunan jumlah sel spermatozoa yang bermakna
(sekitar 50 %) dibandingkan kelompok KN (tabel 9). Pemberian perlakuan dengan jus
semangka ternyata tidak menunjukkan peningkatan jumlah sel spermatozoa tikus yang
diberikan MSG (tabel 10).
Hasil pemeriksaan terhadap motilitas spermatozoa tikus ditampilkan pada tabel 11 dan
12. Dari uji normalitas didapatkan bahwa nilai rata-rata motilitas spermatozoa tikus
terdistribusi normal pada semua kelompok maka dilakukan uji-t dan ANOVA untuk menguji
perbedaan antar kelompok.
Pada kelompok KP terjadi penurunan nilai rata-rata motilitas spermatozoa
(sekitar 50%) dibandingkan kelompok KN. Dari hasil uji statistik dengan uji-t terdapat
perbedaan yang bermakna pada kelompok KP dibandingkan kelompok KN (tabel 11).
57
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Tabel 11. Rata-rata motilitas spermatozoa tikus setelah pemberian MSG
Kelompok Motilitas Spermatozoa (%)
X ± SD
Nilai p*
KN 73.43 ± 11.07 0,0007
KP 36.71 ± 18.26
* uji t-test
Tabel 12. Rata-rata motilitas spermatozoa tikus setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok Motilitas Spermatozoa (%)
X ± SD
Nilai p*
KP 36.71 ± 18.26 0,003
P1 27.57 ± 10.53
P2 45.43 ± 12.53
P3 56.14 ± 8.59#
* uji ANOVA, # uji post hoc Tukey p<0,05 dibandingkan KP
Pada tabel 12 ditampilkan nilai rata-rata motilitas spermatozoa pada kelompok KP, P1,
P2, dan P3, dapat dilihat bahwa terdapat perbedaan yang bermakna pada kelompok yang
mendapatkan jus semangka dibandingkan dengan KP (p=0,003). Peningkatan motilitas
spermatozoa juga berbanding lurus dengan konsentrasi jus semangka yang diberikan.
Pada kelompok P2 dan P3 dijumpai nilai rata-rata motilitas spermatozoa yang semakin tinggi
dibandingkan kelompok KP. Kelompok P2 terjadi peningkatan motilitas spermatozoa
sebesar 20% dan kelompok P3 peningkatan motilitas spermatozoa sebesar 35% dibandingkan
kelompok KP. Dengan menggunakan uji post hoc Tukey, didapati bahwa hanya pada
konsentrasi jus semangka 100% (kelompok P3) yang memberikan peningkatan motilitas
spermatozoa yang bermakna dibandingkan dengan KP (p<0,05).
4.1.4. Berat Testis
Setelah dilakukan penimbangan terhadap semua sampel testis tikus didapatkan
rata-rata berat testis tikus seperti yang ditampilkan pada tabel 13 dan 14. Pada uji normalitas
terhadap semua kelompok didapatkan bahwa nilai rata-rata berat testis tikus terdistribusi
normal maka dilakukan uji-t dan ANOVA untuk menguji perbedaan antar kelompok.
58 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Tabel 13. Rata-rata berat testis tikus setelah pemberian MSG
Kelompok Berat Testis (gram)
X ± SD
Nilai p*
KN 1,348 ± 0,066 0,04
KP 1,228 ± 0,119
* t-test
Tabel 14. Rata-rata berat testis tikus setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok Berat Testis (gram)
X ± SD
Nilai p*
KP 1,228 ± 0,119 0,59
P1 1,263 ± 0,072
P2 1,271 ± 0,185
P3 1,320 ± 0,094
*uji ANOVA
Nilai rata-rata berat testis kelompok KP lebih kecil dibandingkan kelompok KN, dan
secara hasil uji statistik terdapat perbedaan yang bermakna (tabel 13). Pada kelompok P1, P2,
dan P3 nilai rata-rata berat testis semakin meningkat setelah pemberian jus semangka pada
tikus, tetapi dari hasil uji statistik tidak terdapat perbedaan yang bermakna pada kelompok
tersebut (tabel 14).
4.1.5. Diameter Tubulus Seminiferus
Pengukuran diameter tubulus seminiferus berdasarkan atas penelitian oleh
Wongkar (2014). Pengukuran diameter tubulus seminiferus dilakukan dengan cara mengukur
jarak terpanjang dan jarak terpendek dari tubulus seminiferus yang bentuknya bulat atau
dianggap bulat pada sediaan jaringan testis dengan pembesaran yang sama (100x).
Jumlah tubulus yang diukur adalah 5 tubulus dari masing-masing sediaan jaringan testis
kemudian dihitung nilai rata-ratanya. Setelah dilakukan pengukuran diameter tubulus
seminiferus didapatkan rata-rata diameter tubulus seminiferus seperti yang ditampilkan pada
tabel 15 dan 16. Pada uji normalitas didapatkan bahwa nilai rata-rata diameter tubulus
59 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
seminiferus terdistribusi normal maka dilakukan uji-t dan ANOVA untuk menguji perbedaan
antar kelompok.
Tabel 15. Rata-rata diameter Tubulus Seminiferus setelah pemberian MSG
Kelompok Diameter Tubulus Seminiferus (µm)
X ± SD
Nilai p*
KN 232.59 ± 16.19 0,36
KP 218.24 ± 36.49
*uji t-test
Pada tabel 15 rata-rata diameter tubulus seminiferus kelompok KP lebih kecil
dibandingkan kelompok KN, tetapi hasil uji statistik tidak terdapat perbedaan yang bermakna
antara kelompok tersebut.
Tabel 16. Rata-rata diameter Tubulus Seminiferus setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok Diameter Tubulus Seminiferus (µm)
X ± SD
Nilai p*
KP 218.24 ± 36.49 0,33
P1 230.55 ± 10.45
P2 234.33 ± 21.06
P3 240.78 ± 14.07
*uji ANOVA
Hasil pengukuran diameter tubulus seminiferus menunjukkan bahwa kelompok KP
yang diberi perlakuan MSG memiliki diameter tubulus seminiferus yang lebih kecil
dibandingkan kelompok lainnya. Secara statistik nilai rata-rata diameter tubulus seminiferus
tidak terdapat perbedaan yang bermakna pada masing-masing kelompok, namun dapat dilihat
pada tabel 16 bahwa ada perbaikan nilai rata-rata diameter tubulus seminiferus pada
kelompok perlakuan setelah pemberian jus semangka.
Gambaran histologi testis tikus Wistar kelompok KN tampak tubulus seminiferus
dengan gambaran mikroskopik yang baik dan susunan lapisan sel spermatogenik yang
normal dan sesuai dengan tingkat perkembangannya dari membran basalis ke arah
lumen tubulus. Jumlah sel leydig pada kelompok KN tampak padat diantara tubulus-tubulus
kelompok lainnya.
60 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Gambar 23. Gambaran mikroskopik histologi testis tikus Wistar kelompok KN (A),
KP (B), P1 (C), P2 (D), dan P3 (E). Tampak tubulus seminiferus (panah merah) dan
sel leydig (panah hijau). Pembesaran 100x.
Tikus Wistar pada kelompok KP dijumpai gambaran tubulus seminiferus yang kosong,
hanya tampak spermatogonia pada membran basalis dan tidak terlihat perkembangan
sel-sel spermatogenik. Lapisan spermatogonia tampak jarang pada membran basalis
tubulus seminiferus dan jumlah sel leydig pada kelompok KP terlihat lebih sedikit
dibandingkan dengan kelompok lainnya. Pada kelompok KP jelas memperlihatkan
fokus-fokus tubulus seminiferus yang mengalami atrofi. Namun tidak semua
tubulus seminiferus pada sediaan testis kelompok KP terlihat atrofi, masih ada
tubulus seminiferus yang berisi sel-sel spermatogenik sesuai dengan tingkat
perkembangannya walaupun kepadatan sel-selnya secara kualitatif berbeda dengan yang
tampak pada kelompok KN.
A B
C D E
61 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Tikus Wistar pada kelompok yang diberikan jus semangka (P1, P2, dan P3) pada
sediaan testisnya tampak tubulus seminiferus dengan gambaran mikroskopik yang hampir
sama dengan kelompok KN. Susunan lapisan sel-sel spermatogenik pada kelompok ini
tampak normal dan sesuai dengan tingkat perkembangannya dari membran basalis ke arah
lumen tubulus sehingga tampak tubulus seminiferus tidak mengalami atrofi. Kepadatan
sel leydig secara kualitatif pada kelompok ini terlihat lebih padat dibandingkan kelompok
KP.
4.1.6. Lebar Celah Antara Tubulus Seminiferus dengan Sel Spermatogenik
Pengukuran lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik
(gambar 24) diperoleh dengan menggunakan rumus berikut:
Gambar 24. Celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik.
Diameter tubulus seminiferus ditandai dengan garis kuning dan diameter
sel spermatogenik ditandai dengan garis merah.
Lebar Celah = (Diameter Tubulus – Diameter Sel Spermatogenik) : 2
D
62 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Setelah dilakukan pengukuran lebar celah antara tubulus seminiferus dengan
sel spermatogenik, didapatkan rata-rata lebar celah pada masing-masing kelompok seperti
yang ditampilkan pada tabel 17 dan 18. Pada uji normalitas didapatkan bahwa nilai rata-rata
lebar celah terdistribusi normal maka selanjutnya dilakukan uji-t dan ANOVA untuk menguji
perbedaan antar kelompok.
Tabel 17. Rata-rata lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik
setelah pemberian MSG
Kelompok Lebar celah antara tubulus
seminiferus dengan sel
spermatogenik (µm)
X ± SD
Nilai p*
KN 9.92 ± 4.87 0,006
KP 18.99 ± 5.24
*uji t-test
Tabel 18. Rata-rata lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik
setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok Lebar celah antara tubulus
seminiferus dengan sel
spermatogenik (µm)
X ± SD
Nilai p*
KP 18.99 ± 5.24 0,003
P1 16.53 ± 5.77
P2 11.18 ± 3.43#
P3 10.59 ± 2.49#
*uji ANOVA #uji post hoc Tukey p<0,05 dibandingkan KP
Nilai rata-rata lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik
kelompok KP lebih besar sekitar 45% dibandingkan kelompok KN, dan secara statistik
terdapat perbedaan yang bermakna (tabel 17). Pada kelompok yang diberikan jus semangka
(P1, P2, dan P3) nilai rata-rata lebar celahnya semakin mengecil dan mendekati
kelompok KN, secara statistik terdapat perbedaan yang bermakna dibandingkan kelompok
KP (tabel 18). Penghitungan lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik
63 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
dilakukan untuk menilai tubulus seminiferus yang mengalami atrofi akibat nekrosis sel-sel
spermatogenik.
4.1.7. Jumlah Sel Leydig
Sel Leydig normal memiliki nukleus tunggal yang berbentuk bulat dan anak inti
(nukleolus) yang gelap terletak ditengahnya, sedangkan sel Leydig tidak normal ditandai
dengan inti sel yang piknotik, menjadi padat, berwarna lebih gelap, dan batas sel
tidak teratur. Pengamatan gambaran mikroskopik terhadap jumlah sel interstisial (Leydig)
dilakukan secara kualitatif dengan cara melihat kumpulan sel Leydig yang berada diantara
3 sampai 4 tubulus seminiferus pada 5 lapangan pandang yang berbeda dengan
pembesaran 400x kemudian diinterpretasikan pada hasil gambaran mikroskopik
masing-masing kelompok.
Gambar 25. Gambaran mikroskopik sel Leydig tikus wistar kelompok KN(A), KP(B),
P1(C), P2(D), dan P3(E). Pembesaran 400x.
A B
C D E
64 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Setelah dilakukan penghitungan jumlah sel Leydig maka didapatkan rata-rata jumlah
sel Leydig pada masing-masing kelompok seperti yang ditampilkan pada tabel 19 dan 20.
Pada uji normalitas didapatkan bahwa nilai rata-rata jumlah sel Leydig terdistribusi normal
maka dilakukan uji-t dan ANOVA untuk menguji perbedaan antar kelompok.
Tabel 19. Rata-rata jumlah sel leydig setelah pemberian MSG
Kelompok Jumlah Sel Leydig
X ± SD
Nilai p*
KN 25.94 ± 3.1 0,017
KP 21.14 ± 3.4
* uji t-test
Tabel 20. Rata-rata jumlah sel leydig setelah pemberian MSG dan jus semangka
Kelompok Jumlah Sel Leydig
X ± SD
Nilai p*
KP 21.14 ± 3.4 0,0004
P1 24.77 ± 2.0
P2 26.03 ± 1.9#
P3 27.71 ± 2.4#
* uji ANOVA # uji post hoc Tukey p<0,05 dibandingkan KP
Jumlah sel Leydig pada kelompok yang diberikan MSG (KP) terjadi penurunan
sekitar 20% dibandingkan kelompok yang tidak diberikan MSG (KN), dan secara statistik
terdapat perbedaan yang bermakna (tabel 19). Nilai rata-rata jumlah sel Leydig pada
kelompok P1, P2, dan P3 secara statistik terdapat perbedaan yang bermakna dibandingkan
kelompok KP (tabel 20).
Hasil pengamatan secara mikroskopis terhadap jumlah sel Leydig menunjukkan bahwa
pemberian MSG dengan dosis 10 mg/grBB menyebabkan menurunnya jumlah sel Leydig,
sedangkan pada kelompok P1, P2, dan P3 setelah diberikan jus semangka mengalami
peningkatan jumlah sel Leydig sejalan dengan konsentrasi jus semangka yang diberikan.
65 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Rata-rata jumlah sel Leydig kelompok P1 meningkat sebesar 15%, kelompok P2 meningkat
sebesar 20%, dan kelompok P3 meningkat sebesar 25% dibandingkan kelompok KP.
4.2. Pembahasan
Pada penelitian ini didapati adanya peningkatan berat badan tikus pada semua kelompok
pada akhir penelitian. Kenaikan rata-rata berat badan tikus pada kelompok yang mendapatkan
MSG kelihatan lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol, meskipun
tidak bermakna secara statistik. Setelah pemberian jus semangka, kenaikan berat badan tikus
yang mendapatkan jus semangka juga lebih kecil dibandingkan dengan kelompok yang
mendapatkan MSG, meskipun tidak berbeda bermakna secara statistik. Hal ini sejalan dengan
penelitian Lum (2019) dimana konsumsi semangka tidak menaikkan berat badan secara
signifikan, oleh karena semangka memiliki volume air dan serat yang tinggi sehingga
menimbulkan rasa kenyang tanpa adanya penambahan kalori yang besar.
Konsumsi semangka juga meningkatkan hormon adiponektin yang juga berperan dalam
pengaturan berat badan (Lum et al., 2019).
Pada penelitian ini ditemukan kadar MDA serum yang lebih rendah dan
berbeda bermakna pada kelompok KP (p=0,01) dibandingkan kelompok KN. Kadar MDA
pada kelompok KP juga lebih rendah dibandingkan kelompok P1, P2, dan P3 setelah
diberikan jus semangka, tetapi hasil uji statistik tidak berbeda bermakna. Profil kadar MDA
pada penelitian ini berlawanan dengan penelitian yang lain, seperti halnya penelitian
Pavlovic et al. (2007) pemberian MSG merangsang terbentuknya peroksidasi lipid pada
membran sel yang disebabkan oleh ROS sehingga menyebabkan kadar MDA yang
meningkat (Pavlovic et al., 2007). Sebagian besar literatur menyebutkan bahwa pemberian
MSG dapat menimbulkan terjadinya stres oksidatif, dimana stres oksidatif disebabkan karena
adanya ROS didalam sel yang tidak dapat distabilkan, sehingga terjadi beberapa kerusakan
66 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
biomolekuler termasuk DNA, protein dan lipid. Pada lipid akan terjadi peroksidasi lipid yang
ditandai dengan terbentuknya senyawa MDA yang merupakan penanda stress oksidatif
(Ahluwalia et al., 1996; Tsikas, 2016). Namun hasil penelitian ini sejalan dengan
Mondal et al. yang menemukan penurunan fungsi ovarium dan uterus pada tikus betina
dengan kadar MDA yang juga menurun setelah dipapari dengan MSG. Menurunnya
kadar MDA ini kemungkinan disebabkan oleh karena terjadinya peningkatan produksi
antioksidan endogen berupa Superoxide Dismutase (SOD), Gluthation Peroxidase (GPx) dan
Catalase (Mondal et al, 2017).
Pada penelitian ini pemberian MSG 10 mg/grBB dan jus semangka menunjukkan
perbedaan yang bermakna secara statistik dalam hal jumlah dan motilitas sel spermatozoa,
berat testis, lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik, dan jumlah
sel Leydig. Jumlah sel spermatozoa pada kelompok KP lebih sedikit dibandingkan
kelompok KN dengan tingkat perbedaan yang bermakna terhadap kelompok KP (p=0,002)
dibandingkan dengan kelompok KN.
Sel spermatozoa yang dihasilkan di testis dalam perkembangannya sangat dipengaruhi
oleh beberapa hormon reproduksi yaitu gonadotropin, FSH (Follicle-Stimulating Hormone),
LH (Luteinizing Hormone), dan testosteron. FSH merangsang spermatogonium untuk
melakukan mitosis dan meiosis, sedangkan LH merangsang sel Leydig untuk menghasilkan
hormon testosteron yang berfungsi sebagai pematangan sel spermatozoa.
Berdasarkan beberapa penelitian sebelumnya, mekanisme yang berperan dalam hal
diameter tubulus seminiferus yang lebih kecil, jumlah lapisan sel-sel spermatogenik yang
lebih sedikit dan jumlah sel Leydig yang berkurang secara kualitatif dikarenakan adanya
efek neurotoksin yang ditimbulkan MSG pada sistem hipotalamus-hipofisis-Gonad
(Gong et al., 1995; Giovambattista et al., 2003). Dampak MSG dalam menimbulkan
kerusakan pada nukleus arkuata di hipotalamus mengakibatkan terjadinya penurunan
67 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
hormon reproduksi. Nukleus arkuata memiliki neuron yang mensekresikan
GnRH (Gonadotropin Releasing Hormone). Adanya lesi pada daerah ini akan mengganggu
sekresi GnRH yang menyebabkan penurunan sekresi hormon gonadotropin, LH, dan FSH
sehingga fungsi reproduksi testis dan proses spermatogenesis tidak dapat berlangsung baik
(Bilondatu et al., 2016). Pada penelitian yang dilakukan Franca et al., dengan memberikan
MSG 4 mg/grBB dapat menurunkan kadar FSH dan LH (Franca et al., 2006).
Penurunan jumlah sel Leydig akan mempengaruhi kadar hormon testosteron yang dihasilkan,
sehingga dapat mempengaruhi proses spermatogenesis. Di dalam tubuh terdapat 2 jenis
testosteron yaitu testosteron plasma/serum dan testosteron intratestikular. Kadar kedua
testosteron berbeda, dimana kadar testosteron intratestikular 3 kali lebih tinggi dibandingkan
dengan kadar testosteron serum. Testosteron yang berperan penting dalam mempengaruhi
spermatogenesis adalah testosteron intratestikular (Jarow et al, 2005).
Pada hasil penelitian ini juga didapati bahwa MSG dapat menurunkan jumlah sel leydig.
Dapat dilihat bahwa terjadi penurunan yang bermakna dari jumlah sel Leydig pada
kelompok KP dibandingkan kelompok KN. Hal ini sejalan dengan penelitian Suryadi (2007)
yang menyatakan bahwa tidak adanya rangsangan hormon gonadotropin terhadap
sel interstisial (Leydig) diakibatkan terganggunya sistem hipotalamus-hipofisis-gonad akibat
MSG akan menyebabkan terjadinya penurunan sekresi hormon gonadotropin, LH, dan FSH.
Penurunan hormon LH menyebabkan menurunnya stimulasi terhadap sel interstisial (Leydig)
sehingga dapat menurunkan aktivitas sel Leydig dalam proses pembelahan maupun dalam
mensintesis hormon testosteron. Akibatnya jumlah sel Leydig menjadi lebih sedikit dan
diameter intinya menjadi lebih kecil (Suryadi et al., 2007).
Jumlah sel Leydig yang lebih sedikit pada kelompok KP dapat juga terjadi akibat
degenerasi sel-sel Leydig melalui mekanisme apoptosis atau kematian pada beberapa sel
tanpa diikuti secara seimbang proses pembelahan atau penambahan sel Leydig yang baru.
68 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Apoptosis atau kematian pada beberapa sel Leydig yang diakibatkan pemberian MSG dapat
disebabkan terjadinya peningkatan kadar Ca2+ dalam intrasel leydig, peningkatan Ca2+
dapat menyebabkan gangguan pada mitokondria dan mengaktifkan enzim ATPase,
phospholipase, endonuklease, dan protease sehingga terjadinya gangguan pada sintesis
ATP (Adenosin Triphosphate) dan gangguan pada permeabilitas membran sel
(Tawfik and Al-Badr, 2012; Salim et al., 2017).
Penurunan jumlah sel Leydig tersebut dapat menyebabkan kadar testosteron
intratestikular menurun. Hal ini berpengaruh terhadap penurunan spermatogenesis yang
ditandai dengan penurunan jumlah sel spermatozoa yang bermakna pada kelompok KP
dibandingkan kelompok KN. Efek negatif MSG terhadap testis dapat terjadi secara langsung
melalui transporter dan reseptor glutamat yang ada di testis yang dapat menimbulkan
penghambatan terhadap spermatogenesis (Alalwani, 2014). Pemberian jus semangka
pada penelitian ini tidak menunjukkan adanya perbaikan jumlah sel spermatozoa pada tikus
yang dipapari MSG. Hal ini kemungkinan disebabkan karena konsentrasi zat aktif yang
terkandung dalam jus semangka tidak mencukupi untuk mengatasi efek MSG dengan
dosis tinggi. Diperlukan kajian lanjutan dengan memberikan semangka dalam bentuk
ekstraksi sehingga konsentrasi zat aktif yang diberikan cukup tinggi.
Pada penelitian ini motilitas spermatozoa kelompok KP lebih sedikit dibandingkan
kelompok KN, dan secara statistik terdapat perbedaan yang bermakna. Pemberian MSG
menyebabkan terjadinya peningkatan kadar kalsium dan gangguan pada mitokondria
sehingga mengaktifkan enzim ATPase, hal ini menimbulkan gangguan sintesis ATP dan
gangguan permeabilitas membran sel (Tawfik and Al-Badr, 2012; Salim et al., 2017).
Penurunan motilitas spermatozoa pada kelompok yang diberikan MSG (KP) dapat terjadi
akibat gangguan sintesis ATP yang dapat menyebabkan gangguan pada motilitas
sel spermatozoa.
69 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Pada kelompok P1, P2, dan P3 yang diberikan jus semangka, motilitas spermatozoa
semakin meningkat sesuai dengan konsentrasi jus semangka yang diberikan.
Motilitas spermatozoa yang meningkat dapat terjadi karena tikus diberi perlakuan berupa
jus semangka yang berfungsi sebagai antioksidan dan diharapkan dapat mengurangi
kerusakan akibat radikal bebas yang berlebihan tersebut. Pada penelitian sebelumnya bahwa
antioksidan likopen yang terdapat didalam buah semangka dapat meningkatkan motilitas
spermatozoa (Anas and Asterina, 2011). Kandungan likopen dalam buah semangka memiliki
kekuatan antioksidan yang lebih baik daripada vitamin C dan E (Bagiada et al, 2005).
Likopen sebagai antioksidan mempunyai kemampuan untuk mencegah kerusakan sel-sel
tubuh akibat radikal bebas dengan mengurangi efek toksik dari ROS (Sulistyowati, 2006).
Disamping itu, likopen juga memberikan efek melalui pengaturan komunikasi antar sel
(gap junction communication), modulasi ekspresi gen, regulasi siklus sel dan memperkuat
sistem imun (Durairajanayagam, et al. 2014).
Aktivitas sel-sel spermatogenik selama proses spermatogenesis sangat tinggi yaitu
terjadi perubahan-perubahan morfologi dan biokimia untuk membentuk sel spermatozoa.
Aktivitas tersebut bergantung pada sumber energi (glukosa) yang merupakan substrat penting
untuk sel-sel spermatogenik. Terjadinya peningkatan sel-sel spermatogenik disebabkan
karena transpor glukosa ke dalam sel-sel spermatogenik tidak terhambat, sehingga sel-sel
tersebut mendapatkan suplai energi yang cukup. Apabila terjadi hambatan transpor glukosa
ke dalam sel-sel spermatogenik maka dapat menyebabkan terhambatnya sintesis protein.
Namun peran zat aktif likopen dalam meningkatkan transpor glukosa dan sintesis protein
masih belum diketahui dengan pasti (Anas and Asterina, 2011).
Pada penelitian ini dari gambaran mikroskopik, rata-rata diameter tubulus seminiferus
menunjukkan diameter yang paling kecil pada kelompok KP dibandingkan kelompok
lainnya, namun secara statistik rata-rata diameter tubulus seminiferus tidak
70 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
berbeda bermakna. Pengamatan gambaran mikroskopik pada tubulus seminiferus
menunjukkan pemberian MSG pada kelompok KP terjadi hambatan dalam proses
spermatogenesis yang menyebabkan gangguan perkembangan sel-sel spermatogenik,
sehingga pada gambaran mikroskopik kelompok KP memperlihatkan tubulus seminiferus
dengan susunan sel-sel spermatogenik yang berkurang dan tidak sesuai tingkat
perkembangannya. Pada kelompok P1 memperlihatkan sediaan testis dengan gambaran
tubulus seminiferus yang tidak jauh berbeda dengan kelompok KP, namun pada kelompok ini
beberapa tubulus seminiferus didapati juga gambaran dengan susunan sel-sel spermatogenik
yang tampak sesuai dengan keadaan yang normal.
Gangguan pada perkembangan sel-sel spermatogenik dapat disebabkan menurunnya
sekresi FSH yang merangsang pertumbuhan sel-sel spermatogenik, sehingga pada
tubulus seminiferus mengalami atrofi, terlihat pada kelompok KP dengan tubulus seminiferus
yang lapisan sel-sel spermatogenik lebih sedikit dibandingkan kelompok lainnya. Lapisan
sel-sel spermatogenik ini memberi pengaruh pada ukuran diameter tubulus seminiferus.
Dengan berkurangnya lapisan sel-sel spermatogenik akibat penekanan pada proses
spermatogenesis menyebabkan dorongan sel spermatozoa dari dalam tubulus seminiferus
menjadi berkurang sehingga diameter tubulus seminiferus juga ikut mengecil. Hal ini sejalan
dengan penelitian Bilondatu et al. (2016) dan Sugeng et al. (2010) yang menyatakan bahwa
gangguan perkembangan spermatozoa mengakibatkan penurunan pada diameter
tubulus seminiferus, dan menurut Anindita et al. (2008) yang menyatakan bahwa
peningkatan proses spermatogenesis dapat meningkatkan diameter tubulus seminiferus dan
berat testis.
Hasil pengamatan terhadap berat testis dan lebar celah antara tubulus seminiferus
dengan sel spermatogenik pada penelitian ini menunjukan bahwa berat testis pada kelompok
KP lebih ringan dibandingkan kelompok lainnya dan pada lebar celah antara tubulus
71
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
seminiferus dengan sel spermatogenik pada kelompok KP menunjukkan bahwa
lebar celahnya lebih besar dibandingkan kelompok lainnya. Hal ini sesuai dengan
pengamatan secara mikroskopik pada kelompok KP yang tampak gangguan proses
spermatogenesis didalam tubulus seminiferus. Pengamatan yang dilakukan terhadap
variabel tersebut menunjukkan bahwa kemungkinan terjadinya atrofi pada
tubulus seminiferus.
Gangguan pada sistem reproduksi jantan yang ditimbulkan akibat pemberian MSG
tidak hanya disebabkan oleh karena efek MSG secara langsung terhadap testis melalui
reseptor dan transporter glutamat yang ada pada testis, namun juga melalui mekanisme
kerusakan yang mengganggu sistem hipotalamus-hipofisis-gonad. Namun bagaimana
mekanisme kerusakan yang ditimbulkan ini masih belum dapat dijelaskan dengan rinci dan
masih membutuhkan bukti-bukti penelitian ilmiah selanjutnya (Gill et al., 2000;
Takarada et al., 2004).
72 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
Pada penelitian ini diperoleh kesimpulan sebagai berikut:
1. Pemberian MSG 10 mg/gr BB secara bermakna mengurangi jumlah dan motilitas
spermatozoa, kadar MDA serum, berat testis, dan jumlah sel leydig, serta memperbesar
lebar celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik.
2. Pemberian jus semangka dengan konsentrasi 100% dapat membuat lebih besar persentase
motilitas spermatozoa dan jumlah sel leydig secara bermakna, serta memperkecil lebar
celah antara tubulus seminiferus dengan sel spermatogenik pada tikus yang dipapari MSG.
3. Pemberian jus semangka tidak dapat memperbanyak jumlah sel spermatozoa pada tikus
yang dipapari dengan MSG.
4. Pemberian jus semangka tidak secara signifikan membuat lebih lebar diameter
tubulus seminiferus pada tikus yang dipapari dengan MSG.
5.2. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk mengukur kadar enzim antioksidan seperti:
Superoksida Dismutase (SOD) dan Glutation Peroksidase untuk menelaah kapasitas
antioksidan endogen di dalam tubuh.
2. Perlu dilakukan penelitian lanjutan terhadap ekstrak semangka yang di standarisasi
berdasarkan kadar likopen.
3. Perlu dilakukan pemeriksaan profil hormon reproduksi seperti FSH, LH, Testosteron, dan
GnRH untuk membuktikan mekanisme kerja MSG terhadap sistem endokrin reproduksi.
73 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
DAFTAR PUSTAKA
Abdel Moneim, W.M., Yassa, H.A., Makboul, R.A. and Mohamed, N.A. 2018. Monosodium
Glutamate Affects Cognitive Functions in Male Albino Rats. Egypt J Forensic Sci,
p.8-9.
Acharya, U.R., Acharya, S. and Mishra, M. 2003. Lead Acetate Induced Cytotoxicity
in Male Germinal Celss of Swiss Mice. Ind Health, 41: 291-294.
Adetutu, A., Olorunnisola, O. and Owoade, O. 2015. Nutritive Values and Antioxidant
Activity of Citrullus lanatus Fruit Extract. J Nutr Food Sci, 6: 1056–1064.
Ahluwalia, P., Tewari, K. and Choudhary, P. 1996. Studies on the Effects of
Monosodium Glutamate (MSG) on Oxidative Stress in Erithrocytes of
Adult Male Mice. Toxicol Lett, 84; 161-5.
Alalwani, A.D. 2014. Monosodium Glutamate Induced Testicular Lesions in Rats
(Histological Study). Middle East Fertil Soc J. Vol. 19(4), 274-280.
Albrahim, T. and Binobead, M.A. 2018. Roles of Moringa oleifera Leaf Extract in Improving
the Impact of High Dietary Intake of Monosodium Glutamate-Induced Liver Toxicity,
Oxidative Stress, Genotoxicity, DNA Damage, and PCNA Alterations in Male Rats.
Oxid Med Cell Longev, 1-11.
Anas, E. and Asterina. 2011. Efek Pemberian Jus Tomat (Lycopersicum pyriporme) Terhadap
Spermatogenesis pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) Jantan Dewasa
Hyperkolesterolemia. MKA. No.1 Vol.35.
Anindita, K. and Sutyarso. 2008. Pengaruh Pemberian Vitamin C Terhadap Berat Testis,
Jumlah Sel Leydig, dan Diameter Tubulus Seminiferus Mencit (Mus musculus)
Jantan Dewasa yang Diinduksi Monosodium Glutamate. Digital Repository Unila.
Universitas Lampung.
Apryanto, A. 2002. Pengaruh Pengolahan Terhadap Nilai Gizi. Makalah Seminar Online
Kharisma Ke-2. Available at : http://www.kharisma.de/files/home/makalah_anton.pdf
Ardyanto and Dwi, T. 2004. MSG dan Kesehatan: Sejarah, Efek dan Kontroversinya.
INOVASI, 1 (XVI). hlm. 52-56.
Bacanli, M., Basaran, N. and Basaran, A.A. 2017. Lycopene: Is it Beneficial to Human
Health as an Antioxidant?. Turk J Pharm Sci, 14(3): 311-318.
Bagiada, A., Arcana, and Mahasucipta. 2005. Peran Antioksida Untuk Mencegah Beberapa
Kelainan Jaringan Tubuh. MKI; 55(6):455-8.
Balitbang Kemenkes RI. 2013. Riset Kesehatan Dasar; RISKESDAS. Jakarta: Balitbang
Kemenkes RI.
74 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Bilondatu, R.S.S., Durry, M. and Lintong, P. 2016. Gambaran Histopatologik Testis Tikus
Wistar (Rattus norvegicus) Setelah Pemberian Monosodium Glutamate (MSG).
Jurnal e-Biomedik (eBm), Vol. 4. Nomor 2.
Brilliantina, L. 2013. Pengaruh Pemberian Monosodium Glutamat pada Induk Tikus hamil
Terhadap Berat Badan dan Perkembangan Otak Anaknya pada Usia 7-14 Hari.
UI Library. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Calderone, L. 2016. Here’s how food companies sneak MSG into foods.
https://www.businessinsider.com/msg-goes-by-many-different-names-2016-1/?IR=T
(accessed May 12, 2019)
Corwin, E.J. 2008. Buku Saku Patofisiologi. Jakarta: EGC. hlm. 521-539.
Dalimartha, S. 2003. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid 3: Jakarta: Penerbit Puspasuara.
Cetak 1.
Danbolt, N.C. 2001. Glutamate as a Neurotransmitter-an Overview. Prog. Neurobiol;
65: 1-105.
Durairajanayagam, D., Agarwal, A., Ong, C. and Prashast, P. 2014. Lycopene and Male
Infertility. Asian J Androl; 16(3): 420-425.
Edyson. 2003. Pengaruh Pemberian Kombinasi Vitamin C dan E Terhadap
Aktivitas Superoxide Dismutase (SOD) dan Kadar Malondialdehyde (MDA) pada
Eritrosit Rattus norvegicus galur wistar yang Diinduksi L-tiroksin. J Biosains,
vol. 5(3) : 40-48.
Edwards, A.J., Vinyard, B.T., Wiley, E.R., Brown, E.D., Collins, J.K. et al. 2003.
Consumption of Watermelon Juice Increases Plasma Concentrations of Lycopene and
β-Carotene in Humans. J Nutr. vol.133(4): 1043–1050.
Eisenbrand, G. 2006. The Potential Involvement of Glutamate Ingestion in Chronic
Neurodegenerative Disease. Mol Nutr Food Res; 50(12): 1239-43.
Erb, J.E. and Erb, T.M. 2003. The slow poisoning of America. Virginia Beach: VA Paladins
Press.
Erhirhie, E.O. and Ekene, N.E. 2013. Medicinal Values on Citrullus lanatus (Watermelon).
IJRPBS : 4(4), 1305–1312.
Fauzi, T.M. 2008. Pengaruh Pemberian Timbal Asetat dan Vitamin C Terhadap Peroksidasi
Lipid dan Kualitas Spermatozoa di dalam Sekresi Epididimis Mencit albino
(Mus musculus L) Strain BALB/C. [Thesis]. Medan: Universitas Sumatera Utara.
Program Pascasarjana.
Federer, W. 1963. Experimental Design, Theory and Application. New York, Mac Millan.
75 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Franca, L.R., Suescun, M.O., Miranda, J.R., Giovambattista, A., Perello, M. et al. 2006.
Testis Structure and Function in a Nongenetic Hyperadipose Rat Model at Prepubertal
and Adult Ages. Endocrinology, 147, 1556-63.
Garret, R. and Grisham, C. 2007. Biochemistry, 4th
edition. Virginia: Brooks/Cole,
Cengage learning: 776-779.
Ghosh, S.K. 2017. Studies on Monosodium L-Glutamate (MSG): Harmful Effects of
Prolonged and High Dose Administration of MSG on Animal Body. WJPPS; 6(4):
500–503.
Gill, S., Mueller, R., Mcguire P., and Pulido O. 2000. Potential target sites in peripheral
tissues for excitatory neurotransmission and excitotoxicity. Toxicol Pathol; 28: 277-
84.
Giovambattista, A., Suescun, M., Nessralla, C., Franca, L., Spinedi, E., and Calandra, R.
2003. Modulatory Effects of Leptin on Leydig Cell Function of Normal and
Hyperleptinemic Rats. Neuroendocrinology; 78:270-9.
Gong, S.L., Xia, F.Q., Wei, J., Li, X.Y., Sun, T.H. et al. 1995. Harmful Effects of MSG on
Function of Hypothalamus-pituitary-target Gland System. Biomed Environ Sci.;
8:310-7.
Goodman, S. 1995. Ester-C® : Vitamin C Generasi III. Cetakan ketiga. Penerbit Gramedia
Pustaka Utama. hlm 97-100.
Gupta, S., Pandey, R., Katyal, R., Aggarwal, H.K., Aggarwal, R.P. and Aggarwal, S.K. 2005.
Lipid Peroxide Levels and Antioxidant Status in Alcoholic Liver Disease. Indian J
Clin Biochem; 20 (1) : 67-71.
Guyton, A.C. and Hall, J.E. 2008. Fungsi Reproduksi Hormonal Pria. Fisiologi Kedokteran
alih bahasa Irawati et al. ed 11. Jakarta: EGC. hlm.1055.
Hamza, R.Z. and AL-Harbi, M.S. 2014. Monosodium Glutamate Induced Testicular Toxicity
and the Possible Ameliorative Role of Vitamin E or Selenium in Male Rats.
Toxicol Rep. 1037-1045.
Hartati, S.M., Pangkahila, W. and Aman, IGM. 2018. Pemberian Dexpanthenol
Intraperitoneal Menghambat Penurunan Jumlah Sel Leydig dan Sel Sertoli pada
Testis Tikus Putih (Rattus norvegicus) galur Wistar yang Dipapar Monosodium
Glutamate. IJAAM. Vol. 2(1): 9-13.
He, K., Du, S., Xun, P., Sharma, S., Wang, H. et al. 2011. Consumption of Monosodium
Glutamate in Relation to Incidence of Overweight in Chinese adults: China Health
and Nutrition Survey (CHNS). Am J Clin Nutr; 93(6):1328-36.
Hodgson, E. and Levi, P.E. 2000. A Textbook of Modern Toxicology. New York:
McGraw-Hill Companies, Inc. 207-10.
76 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Holzapfel, N.P., Holzapfel, B.M., Champ, S., Feldthusen, J., Clements, J. et al. 2013.
The Potential Role of Lycopene for the Prevention and Therapy of Prostate Cancer :
from Molecular Mechanisms to Clinical Evidence. Int J Mol Sci; 14(7): 14620–46.
Husaini, M.A. 2001. Gizi, Proses Penuaan dan Umur Panjang. CDK; 73 : 22-25.
IHS. Monosodium Glutamate (MSG). 2018. Chemical economics handbook: html
https://www.ihsmarkit.com/products/monosodium-glutamate-chemicaleconomics-
handbook.html (accessed March 17, 2019)
Ingels, D. 2003. Consumption of Watermelon Juice can Increases Blood Concentrations of
Lycopene and Beta-carotene. J Nutr. 133:1043-50.
Ito, M. 2009. Domestic and overseas food products business FY 2008-2010 medium term
plan. Available from: http://www.ajinomoto.com/ir/pdf/08July02-food-E.pdf
Jarow, J.P., Chen, H., Rosner, W., Trentacoste, S. and Zirkin, B.R. 2005. Assesment of
Androgen Environment Within the Human Testis: Minimally Invasive Method to
Obtain Intratesticular Fluid. J Androl; 22(4):640-5.
Jinap, S. and Hajeb, P. 2010. Glutamate. Its Application In Food and Contribution to Health.
Appetite. 55(1): 1-10
Junqueira, L.C. and Carneiro. 2007. Histologi Dasar : Teks & Atlas, Penerjemah: Jan
Tambayong, editor. Frans Dany, Edisi 10, Jakarta : EGC. Terjemahan dari: Basic-
histologi : text & atlas.
Kim, J.Y., Lee, J., Han, Y., Lee, J.H., Bae, I. et al. 2015. Pretreatment with Lycopene
Attenuates Oxidative Stress-Induced Apoptosis in Human Mesenchymal Stem Cells.
Biomol Ther; Vol.23(6): 517-24.
Lautan, J. 1997. Radikal Bebas pada Eritrosit dan Leukosit. CDK, 116 : 49-51.
Lum, T., Connolly, M., Marx, A., Beidler, J., Hooshmand, S. et al. 2019. Effects of Fresh
Watermelon Consumption on the Acute Satiety Response and Cardiometabolic Risk
Factors in Overweight and Obese Adults. Nutrients, 11;595.
McErlane, S. and Andrews, K. 2015. Oral Dosing (Gavage) in Adult Mice and Rats SOP.
Canadian Council on Animal Care guidelines; 1–7.
Meldrum, B.S. 2000. Glutamate and Glutamine in the Brain Glutamate as a Neurotransmitter
in the Brain : Review of Physiology and Pathology 1, 8, 1007–15.
Meroni, E. and Raikos, V. 2018. Lycopene in Beverage Emulsions: Optimizing Formulation
Design and Processing Effects for Enhanced Delivery. Beverages; Vol.4(14): 1-10.
Mondal, M., Sarkar, K., Nath, P.P. and Paul, G. 2017. Monosodium Glutamate Suppresses
the Female Reproductive Function by Impairing the Functions of Ovary and Uterus in
Rat. Environ Toxicol; p.1-11.
77 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Monti, P. 2017. Monosodium glutamate - The Molecule that Enhances Taste in Food.
[Archived version]. figshare. diaksestanggal 7 April 2019.
Nalbandov, A.V. 1990. Fisiologi Reproduksi pada Mammalia dan Unggas. Cetakan 1.
Edisi ketiga. Universitas Indonesia, Jakarta. hlm 41-53, 247-265.
Nayanatara, A., Vinodini, N., Damadar, G., Ahemed, B., Ramaswamy, C. et al. 2008. Role
of Ascorbic Acid in Monosodium Glutamate Mediated Effect on Testicular Weight,
Sperm Morphology and Sperm Count in Rat Testis. J. Chin. Clin. Med., Vol. 3(1).
p.1-5.
Niaz, K., Zaplatic, E. and Spoor, J. 2018. Guest editorial : Extensive Use of
Monosodium Glutamate : a Threat to Public Health? Exp Clin Sci J; 17:273–278.
Niki, E., Yoshida, Y., Saito, Y. and Noguchi, N. 2005. Lipid Peroxidation: Mechanisms,
Inhibition, and Biological Effects. BBRC. 338(1): 668-76.
Pavlovic, V., Pavlovic, D., Kocic, G., Sokolovic, D., Jevtovic-Stoimenov, T., et al. 2007.
Effect of Monosodium Glutamate on Oxidative Stress and Apoptosis in Rat Thymus.
Mol Cell Biochem; 303: 161-166.
Petyaev, I.M. 2016. Lycopene Deficiency in Aging and Cardiovascular Disease.
Oxid Med Cell Longev. Vol.3:1-6.
Pinto, M.P., Nunes dos Santos, C., Henriquesa, C., Lima, G. and Quedas, F. 2011. Lycopene
Content and Antioxidant Capacity of Portuguese Watermelon Fruits. EJEAFChe;
10(4): 2090-2097.
Prawirohardjono, W., Dwiprahasto, I., Astuti, I., Hadiwandono, S., Kristin, E. et al. 2000.
The Administration to Indonesians of Monosodium L-Glutamate in Indonesian
Foods : An Assessment of Adverse Reactions in a Randomized Double-Blind,
Crossover, Placebo-Controlled Study. J Nutr; 130: 1074–1076.
Prayoga, P.R. 2015. The Effect of Tomato (Lycopersicum esculentum Mill.) to Amount,
Motility, and Morphology of Spermatozoa in Cigarettes Induced Infertility Patients.
J Majority. Vol. 4 Nomor 5.
Pryor, W.A., Houk, K.N., Foote, C.S., Fukuto, J.M., Ignarro, L.J. et al. 2006. Free Radical
Biology and Medicine: it’s a gas, man!. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol.
291: R491-511.
Rao, A.V., Ray, M.R. and Rao, L.G. 2006. Lycopene. Adv Food Nutr Res. Vol.51:99-164.
Salim, L., Nawangsari, Ilmiawan, M.I. and Pratiwi, S.E. 2017. Pengaruh Penghentian
Monosodium Glutamat terhadap Jumlah Sel Leydig Tikus Putih (Rattus norvegicus)
Jantan Dewasa. J Cereb, Vol. 3 No.3.
Sanocka, D. and Kurpiz, M. 2004. Reactive Oxygen Species and Sperm Cells.
Reprod Biol Endocrinol; 2 (12) : 1–7.
78 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Sharma, V. and Deshmukh, R. 2015. Ajimomoto (MSG): A Fifth Taste Or A Bio Bomb.
EJPMR; 2(2): 381-400.
Smith, Q.R. 2000. Glutamate and Glutamine in the Brain : transport of glutamate and
other amino acids at the blood-brain barrier. American Society for Nutritional
Sciences. J Nutr. 130: 1016-22.
Suciati, T., Ismono, D. and Iwan, J. 2014. Pengaruh Likopen Terhadap Gambaran
Tubulus Seminiferus dan Kualitas Sperma Mencit (Mus musculus L.) yang Terpapar
Asap Rokok. Jurnal Anatomi dan Fisiologi Hewan. Vol.1(1).
Sufitni, Feriyawati, L., Pane, Y.S. and Lelo, A. 2019. The Effect of Torbangun Leaves Tea
on MSG-Induced Fetal Development Disorder in Mice. SUMEJ; Vol.2(1): 34-38.
Sugeng, S.I., Tiono, H. and Anandaputri, V.N. 2010. Pengaruh Pasta Tomat
(solanum lycopersicum) Terhadap Diameter Tubulus Seminiferus Mencit
(Mus musculus) galur DDY yang Terpajan Asap Rokok Berfilter. J Med. 10:47-54.
Sukmaningsih, A.A., Ermayanti, I.G.A.M., Wiratmini, N.I. and Sudatri, N.W. 2011.
Gangguan Spermatogenesis setelah Pemberian Monosodium Glutamate pada Mencit
(Mus musculus L). J Biol, Des;(2):15.
Sulistyowati, Y. 2006. Pengaruh Pemberian Likopen Terhadap Status Antioksidan
(Vitamin C, vitamin E dan Gluthathion Peroksidase) Tikus (Rattus norvegicus galur
Sprague Dawley) Hiperkolesterolemik. [Thesis]. Semarang: Program Studi
Magister Ilmu Biomedik.
Suryadi, E., Iryani, D. and Suryono, S.K. 2007. Perubahan Sel-sel Leydig Tikus Putih Jantan
Dewasa Setelah Pemberian Monosodium Glutamat Oral. JAI. Vol.1(1):120-32.
Takarada, T., Hinoi, Balcar, V., Taniura, H. and Yoneda, Y. 2004. Possible Expression of
Functional Glutamate Transporters in the Rat Testis. J Endocrinol; 181:233-44.
Tawfik, M.S. and Al-Badr, N. 2012. Adverse Effects of Monosodium Glutamate on Liver
and Kidney Functions in Adult Rats and Potential Protective Effect of Vitamins C
and E. FNS; 3: 651-659.
Tlili, I., Hdider, C., Lenucci, M.S., Riadh, I., Jebari, H. et al. 2011. Bioactive Compounds
and Antioxidant Activities of Different Watermelon (Citrullus lanatus) Cultivars as
Affected by Fruit Sampling Area. J Food Compos. Anal. Vol.24(3): 307–314.
Tsikas, D. 2016. Assesment of Lipid Peroxidation by Measuring Malondialdehyde (MDA)
and Relatives in Biological Samples: Analytical and Biological Challenges.
Anal Biochem; 524: 13-30.
Tuminah, S. 2000. Radikal Bebas dan Antioksidan : Kaitannya Dengan Nutrisi dan Penyakit.
CDK; 128 : 49-50.
USDA. 2018. National Nutrient Database for Standard Reference. Release 1 April, 2018.
Full Report (All Nutrients), Watermelon. 1–7.
79 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Wakidi, R.F. 2012. Efek Protektif Vitamin C dan E Terhadap Mutu Sperma Mencit Jantan
Dewasa yang di Pajan dengan Monosodium Glutamat. [Thesis]. Medan:
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Walczak-Jedrzejowska, R., Wolski, J.K. and Slowikowska-Hilczer, J. 2013. The Role of
Oxidative Stress and Antioxidants in Male Fertility. Cent European J Urol; 66(1):
60-7.
WHO. 1987. Laboratory Manual for the Examination of Human Semen and Semen-cervical
mucus interaction. Cambridge university press, Melbourne, 31: p.7-11.
Winarsih, H. 2007. Antioksidan Alami dan radikal Bebas. Edisi V. Yogyakarta: Kanisius.
hlm.49-50.
Yatim and Wildan. 1994. Reproduksi dan Embryologi. Bandung: Penerbit Tarsito. Ed.3:
hlm.323.
Yonata, A. and Iswara, I. 2016. Efek Toksik Konsumsi Monosodium Glutamate. J Majority;
Vol.5(3): 100–4.
Zarghami, N. and Khosrowbeygi, A. 2005. Seminal Plasma Levels of 15-F2α-Isoprostane,
Malondialdehyde and Total Homocysteine in Normozoospermic and
Asthenozoospermic Males. Indian J Clin Biochem; 20(2): 86-91.
Zhu, S. and Gouaux, E. 2017. Structure and Symmetry Inform Gating Principles of
Ionotropic Glutamate Receptors. Neuropharmacology; 112: 11-5.
Zulkarnain. 2017. Budidaya buah-buahan tropis. Edisi 1.Cetakan 1. Deepublish. Yogyakarta.
80 UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA