EFEK PAPARAN PROFILIN Toxoplasma gondii TERHADAP KADAR ...repository.ub.ac.id/8040/1/Lanisa...
Transcript of EFEK PAPARAN PROFILIN Toxoplasma gondii TERHADAP KADAR ...repository.ub.ac.id/8040/1/Lanisa...
EFEK PAPARAN PROFILIN Toxoplasma gondii TERHADAP KADAR
REACTIVE OXYGEN SPECIES (ROS) PADA TIKUS Rattus Norvegicus
STRAIN WISTAR
(STUDI HUBUNGAN INFEKSI Toxoplasma gondii DENGAN OBESITAS)
TUGAS AKHIR
Untuk Memenuhi Persyaratan
Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
Oleh:
Lanisa Hapsari
NIM 145070107111020
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2017
DAFTAR ISI
Halaman
Judul ................................................................................................................ i
Lembar Pengesahan ........................................................................................ iii
Pernyataan Keaslian Tulisan ........................................................................... iv
Kata Pengantar ................................................................................................ v
Abstrak ............................................................................................................. vii
Abstract ............................................................................................................ viii
Daftar Isi ........................................................................................................... ix
Daftar Tabel ...................................................................................................... xii
Daftar Gambar ................................................................................................. xiii
Daftar Lampiran ................................................................................................ xiv
Daftar Singkatan ............................................................................................... xv
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang .................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ............................................................................ 4
1.3 Tujuan Penelitian .............................................................................. 4
1.4 Manfaat Penelitian ............................................................................ 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Obesitas ............................................................................................ 6
2.2 Toxoplasma gondii ........................................................................... 10
2.2.1 Morfologi dan Klasifikasi .................................................... 10
2.2.2 Daur Hidup ......................................................................... 11
2.2.3 Manifestasi Klinis ............................................................... 13
2.2.4 Pemeriksaan ...................................................................... 14
2.2.5 Pengobatan ....................................................................... 15
2.2.6 Hubungan Obesitas dengan Toxoplasma gondii ............... 15
2.3 Hubungan profilin Toxoplasma gondii dengan Obesitas .................. 16
2.4 Reactive Oxygen Species ................................................................ 17
BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN
3.1 Kerangka Konsep Penelitian ........................................................... 23
3.2 Hipotesis Penelitian ......................................................................... 23
BAB IV METODE PENELITIAN
4.1 Rancangan Penelitian ...................................................................... 24
4.2 Subjek Penelitian ............................................................................. 24
4.3 Variabel Penelitian ........................................................................... 25
4.4 Lokasi dan Waktu Penelitian ............................................................ 26
4.5 Bahan dan Alat/Instrumen Penelitian ............................................... 26
4.5.1 Alat dan Bahan Pemeliharaan Tikus ................................. 26
4.5.2 Alat dan Bahan Pengukuran Kadar ROS ......................... 27
4.6 Definisi Operasional Variabel ........................................................... 27
4.7 Prosedur Penelitian .......................................................................... 28
4.7.1 Pemeliharaan Tikus ........................................................... 28
4.7.2 Pembedahan Tikus ............................................................ 29
4.7.3 Pengukuran Kadar ROS .................................................... 29
4.8 Analisis Data ..................................................................................... 30
BAB V HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA
5.1 Hasil Penelitian ................................................................................ 32
5.2 Analisis Data .................................................................................... 35
5.2.1 Uji T Berpasangan Berat Badan ...................................... 37
5.2.2 Uji Normalitas ANOVA Berat Badan ................................ 38
5.2.3 Uji Homogenitas ANOVA Berat Badan ............................ 39
5.2.4 Uji One Way ANOVA Berat Badan.................................... 40
5.2.5 Uji Pengujian Berganda Berat Badan ............................... 41
5.2.6 Uji Normalitas ANOVA Kadar ROS .................................. 41
5.2.7 Uji Homogenitas ANOVA Kadar ROS .. ............................ 42
5.2.8 Uji One Way ANOVA Kadar ROS ...................................... 43
5.2.9 Uji Pengujian Berganda Kadar ROS.. ............................... 44
5.2.10 Uji T Berpasangan Kadar ROS ........................................ 45
BAB VI PEMBAHASAN
6.1 Pembahasan Hasil Penelitian .......................................................... 47
6.2 Implikasi terhadap Bidang Kedokteran ............................................ 50
6.3 Keterbatasan Penelitian ................................................................... 51
BAB VII PENUTUP
7.1 Kesimpulan ...................................................................................... 52
7.2 Saran ............................................................................................... 52
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 53
LAMPIRAN ........................................................................................................ 57
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1. Klasifikasi overweight dan obesitas berdasarkan WHO .................. 6
Tabel 2.2. Klasifikasi overweight dan obesitas untuk orang Indonesia
menurut Depkes RI ............................................................................. 7
Tabel 5.1 Uji Normalitas untuk Uji T Berpasangan ............................................ 37
Tabel 5.2 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 1 Kali Injeksi .............. 37
Tabel 5.3 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 2 Kali Injeksi .............. 38
Tabel 5.4 Uji Normalitas Berat Badan ................................................................ 39
Tabel 5.5 Uji Homogenitas Berat Badan ............. .............................................. 39
Tabel 5.6 Uji ANOVA Berat Badan .......................... .......................................... 40
Tabel 5.7 Uji Normalitas Kelompok 1 Kali Injeksi ............................................... 42
Tabel 5.8 Uji Normalitas Kelompok 2 Kali Injeksi .............................................. 42
Tabel 5.9 Uji Homogenitas Kelompok 1 Kali Injeksi .......................................... 43
Tabel 5.10 Uji Homogenitas Kelompok 2 Kali Injeksi ......................................... 43
Tabel 5.11 Uji ANOVA Kelompok 1 Kali Injeksi ................................................. 44
Tabel 5.12 Uji ANOVA Kelompok 2 Kali Injeksi ................................................. 44
Tabel 5.13 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 15 μg/mL............ 45
Tabel 5.14 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 30 μg/mL............ 45
Tabel 5.15 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 45 μg/mL............ 45
Tabel 5.16 Uji T Berpasangan Kelompok 2 Kali Injeksi Dosis 15 μg/mL............ 46
Tabel 5.17 Uji T Berpasangan Kelompok 2 Kali Injeksi Dosis 30 μg/mL............ 46
Tabel 5.18 Uji T Berpasangan Kelompok 2 Kali Injeksi Dosis 45 μg/mL............ 46
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Siklus Hidup Toxoplasma gondii .................................................. 12
Gambar 2.2 Alur Profilin Menyebabkan Inflamasi ............................................. 17
Gambar 2.3 Jalur Pembentukan ROS ............................................................... 22
Gambar 5.1 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin ........... 33
Gambar 5.2 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin ........... 33
Gambar 5.3 Rerata Kadar ROS pada Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin ............. 34
Gambar 5.4 Rerata Kadar ROS pada Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin .............. 35
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Keterangan Layak Etik .................................................................. 57
Lampiran 2 Data Rerata Berat Badan Tikus ..................................................... 58
Lampiran 3 Data Rerata Kadar ROS ................................................................ 58
Lampiran 4 Hasil Analisa Data ......................................................................... 59
Lampiran 5 Dokumentasi Kegiatan ................................................................... 73
DAFTAR SINGKATAN
BMI : Body Mass Index
WHO : World Health Organization
EASO : European Association for the Study of Obesity
TLR-11 : Toll-Like-Receptor 11
IL-12 : Interleukin 12
Sel NK : Sel Natural Killer
IFN-ɣ : Interferon gamma
LPL : Lipoprotein lipase
ROS : Reactive Oxygen Species
MCR-4 : Melanocortin 4
TNFα : Tumor Necrosis Factor Alpha
IL-6 : Interleukin 6
CSF : Cerebrospinal Fluid
IgM : Imunoglobulin M
IgG : Imunoglobulin G
ADP : Adenosin Difosfat
ATP : Adenosin Trifosfat
TgPRF : Toxoplasma gondii Profilin
NADP : Nikotinamida Adenina Dinukleotida
NADPH : Nikotinamida Adenosin Dinukleotida Hidrogen
DNA : Deoxyribo Nucleic Acid
LDL : Low-Density Lipoprotein
SOD : Superoxide Dismutase
CAT : Catalase
GPx : Glutathione Peroxidase
NO : Nitrit Oksida
ELISA : Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
ANOVA : Analisis Varians
EFEK PAPARAN PROFILIN Toxoplasma gondii TERHADAP KADAR
ROS (REACTIVE OXYGEN SPECIES) PADA TIKUS RATTUS
NORVEGICUS STRAIN WISTAR
(STUDI HUBUNGAN INFEKSI Toxoplasma gondii DENGAN OBESITAS)
Lanisa Hapsari, Sudjari, Sri Poeranto, Danik Agustin, Agustin Iskandar,
Dearikha Karina M
ABSTRAK Profilin merupakan protein pada Toxoplasma gondii yang telah terbukti dapat meningatkan ekspresi TLR-11 untuk meningkatkan sekresi IL-12. IL-12 akan mengaktivasi sel NK dan dan sel T. Selanjutnya akan dihasilkan IFN ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel. Proses inflamasi ini akan menimbulkan stress oksidatif, yaitu keadaan dimana terjadi peningkatan oksidan dan penurunan antioksidan. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek paparan profilin Toxoplasma gondii terhadap kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental laboratoris dengan rancangan true experimental-post test control group design. Sampel yang digunakan adalah 64 tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar jantan yang dibagi dalam 4 kelompok besar yaitu 1 kali injeksi dengan diet normal, 1 kali injeksi dengan diet hiperkalori, 2 kali injeksi dengan diet normal dan 2 kali injeksi dengan diet hiperkalori. Injeksi profilin dilakukan secara intraperitoneal dengan 3 dosis yaitu 15 μg/mL, 30 μg/mL, 45 μg/mL. Pada minggu ke 15 kadar ROS diperiksa menggunakan ELISA. Analisis data dengan uji One-Way ANOVA tidak didapatkan perbedaan makna rerata kadar ROS (p1injeksi=0.119; p2injeksi=0.245).Uji post-hoc Tukey membuktikan tidak terdapat perbedaan ROS dari semua kelompok (p>0.005). Selanjutnya dilakukan uji T berpasangan pada kelompok diet normal dan diet hiperkalori, namun hasilnya tidak signifikan pada semua kelompok (0,71 untuk kelompok 1 kali injeksi dengan dosis 15 μg/mL, 0,894 dengan dosis 30 μg/mL dan 0,848 dengan dosis 45 μg/mL. Untuk kelompok dengan 2 kali injeksi, 0,415 dengan dosis 15 μg/mL, 0,313 dengan dosis 30 μg/mL dan 0,125 dengan dosis 45 μg/mL. Kesimpulan dari penelitian ini adalah paparan profilin Toxoplasma gondii tidak memberikan efek terhadap kadar ROS pada tikus rattus Noervegicus Strain Wistar. Kata kunci: profilin; Toxoplasma gondii; hiperkalori; obesitas; inflamasi; ROS.
THE EFFECT OF Toxoplasma gondii’s PROFILIN EXPOSURE ON ROS
(REACTIVE OXYGEN SPECIES) LEVEL IN RATTUS NORVEGICUS
STRAIN WISTAR RATS
(STUDIES OF Toxoplasma gondii’s INFECTION WITH OBESITY)
Lanisa Hapsari, Sudjari, Sri Poeranto, Danik Agustin, Agustin Iskandar,
Dearikha Karina M
ABSTRACT
Profilin is a protein in Toxoplasma gondii that has been shown to alert the expression of TLR-11 to enhance IL-12 secretion. IL-12 will activate NK and T cells. Furthermore, IFN ɣ will be generated which plays a role in activating phagocytic cells and inflammation of cells. This inflammatory process will lead to oxidative stress, a state where there is an increase in oxidants and decreased antioxidants. This study was conducted to determine the effect of Toxoplasma gondii profilin exposure on levels of Reactive Oxygen Species (ROS) in Rattus Norvegicus Strain Wistar rat. This research uses laboratory experimental method with true experimental-post test control group design. The samples were 64 Rattus Norvegicus Strain Wistar male rats were divided into 4 large groups, 1 injection with normal diet, 1 injection with hypercalory diet, 2 injection with normal diet and 2 injections with hyperkalori diet. Profilin injection was done intraperitoneally with 3 doses of 15 μg / mL, 30 μg / mL, 45 μg / mL. At week 15 the ROS level is checked using ELISA. Data analysis with One-Way ANOVA test was not found difference mean on ROS’s mean level (p1injection = 0.119; p2injection= 0.245) .Tukey post-hoc test proved no difference of ROS from all group (p> 0.005). Paired T tests were followed in the normal diet group and hypercalory diet, but the results were not significant in all groups (0.71 for group 1 injection with 15 μg / mL doses, 0.894 with 30 μg / mL and 0.848 doses of 45 μg / For groups with 2 injections, 0.415 with a dose of 15 μg / mL, 0.313 with a dose of 30 μg / mL and 0.125 with a dose of 45 μg / mL.The conclusions of this study were exposure to Toxoplasma gondii profilin did not have an effect on ROS levels in rat Wistar rodus Noervegicus Strain.
Keywords: profilin; Toxoplasma gondii; hypercalory; obesity; inflammation; ROS.
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Obesitas didefinisikan sebagai keadaan abnormal atau kadar lemak
berlebihan yang mengganggu kesehatan seseorang. Body Mass Index
(BMI) adalah sebuah pengukuran sederhana untuk mengklasifikasikan
obesitas. WHO mendefiniskan obesitas sebagai BMI yang lebih atau
sama dengan 30 kg/m2 (World Health Organization, 2016). Pada tahun
2014, WHO melaporkan bahwa jumlah penderita obesitas mencapai 600
juta orang, dua kali lebih besar dari tahun 1980 yang hanya 300 juta
orang. Angka ini terus meningkat dari tahun ke tahun. Dari data yang
dikumpulkan oleh European Association for the Study of Obesity (EASO),
2.8 juta orang tiap tahunnya meninggal karena penyakit yang
berhubungan dengan obesitas. Peringkat pertama sejumlah 44% karena
diabetes diikuti 23% karena penyakit jantung (EASO, 2013).
Di sisi lain, prevalensi penyakit infeksi di negara berkembang masih
tinggi dan disebutkan bahwa terdapat hubungan antara infeksi dengan
obesitas. Selain faktor jumlah diet tinggi lemak yang berlebihan, aktivitas
fisik yang kurang, dan faktor genetik, ternyata beberapa penyakit seperti
hipotiroid, Cushing Syndrome, dan sindrom polikistik ovarium juga
memiliki andil terhadap naiknya angka obesitas (Balentine, 2015).
Penelitian oleh Desruisseaux (2007) juga menyebutkan bahwa ditemukan
pula hubungan antara Chaga’s Disease akibat infeksi Trypanosoma cruzi
yang target sel intraselulernya adalah sel adiposa sehingga terjadi
disfungsi adiposit yang menyebabkan terjadinya obesitas. Bahkan infeksi
virus yakni Adenovirus-36 (Adv36) yang sangat sering didapatkan pada
orang yang menderita flu disertai batuk dan bersin juga dapat membuat
pasien menjadi obesitas (Atkinson, et al., 2015)
Toxoplasma gondii merupakan penyebab kedua kematian di
Amerika Serikat yang dikarenakan foodborne ilness, atau penyakit yang
disebabkan makanan yang terkontaminasi oleh organisme. Setiap
tahunnya, Toxoplasma gondii menginfeksi lebih dari 1.1 juta orang di
Amerika Serikat (Jeffrey, et al., 2014). Orang sehat yang terinfeksi
Toxoplasma gondii biasanya asimptomatis pada fase awalnya, karena
sistem imun menjaga agar parasit tidak sampai menimbulkan gejala
penyakit. Gejala saat penyakit mulai muncul biasanya ringan seperti flu
dan kekauan otot yang akan hilang dalam beberapa minggu atau bulan.
Walau gejala mulai hilang, Toxoplasma gondii masih tetap ada dalam
bentuk inaktif dan bisa aktif saat imun seseorang mulai turun (Centers for
Disease Control and Prevention, 2013). Untuk menginvasi sel inang,
Toxoplasma gondii memiliki zat yang disebut profilin yang mampu
berikatan dengan TLR-11 sehingga menginduksi diekspresikannya IL-12.
IL-12 merupakan sitokin yang sebagian besar dihasilkan oleh sel fagositik
sebagai respon terhadap infeksi bakteri dan parasit intraseluler. IL-12
akan menstimulasi pembentukan sel NK (Natural Killer) dan sel T dari IFN-
ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel fagositik dan sel inflamasi
(Trinchieri, 1995).
Jika inflamasi akibat infeksi Toxoplasma gondii terjadi pada sel
adiposit, maka dapat menyebabkan disfungsi sel. Hal ini dapat
menyebabkan terjadinya obesitas. Selanjutnya pada pasien obesitas akan
terjadi peningkatan produksi ROS (Reactive Oxygen Species) atau radikal
bebas. Terdapat beberapa penyebab seperti peningkatan asam lemak
bebas, oksidasi mitokondria yang berlebihan dan distress retikulum
endoplasma (Sanchez, et al., 2011).
Selanjutnya hasil penelitian dari Iskandar, dkk (2011) menyebutkan
bahwa terdapat perbedaan kadar profilin yang bermakna antara individu
obese dengan individu yang sehat. Pada individu obese terdapat
peningkatan kadar profilin yang memicu peningkatan inflammatory
cytokine seperti IL-6 dan IL-12 yang merupakan petanda awal terjadinya
disfungsi adiposit pada individu obese. Selanjutnya Iskandar, dkk (2012)
juga melaporkan bahwa terdapat perbedaan kadar profilin Toxoplasma
gondii, adiponektin dan omentin yang bermakna antara individu obese
yang disertai sindroma metabolik dengan individu obese tanpa sindroma
metabolik. Hal tersebut mendukung dugaan bahwa infeksi Toxoplasma
gondii menjadi salah satu penyebab obesitas. Akan tetapi patomekanisme
yang jelas masih belum ditemukan secara pasti. Sehingga perlu dilakukan
penelitian untuk mengetahui hubungan dari infeksi Toxoplasma gondii
terhadap kadar ROS pada tikus obese.
1.2 Rumusan Masalah
Bagaimana efek paparan profilin Toxoplasma gondii terhadap
kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada tikus Rattus
Norvegicus Strain Wistar ?
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Untuk mengetahui efek paparan profilin Toxoplasma gondii
terhadap kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada tikus
Rattus Norvegicus Strain Wistar.
1.3.2 Tujuan Khusus
1. Untuk mengetahui kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada
tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar normal
2. Untuk mengetahui kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada
tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar yang diberi paparan
profilinToxoplasma gondii
3. Untuk mengetahui kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada
tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar yang diberi paparan profilin
Toxoplasma gondii dan diinduksi diet hiperkalori
4. Untuk menganalisa efek paparan profilin Toxoplasma gondii
terhadap kadar ROS pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar.
1.4 Manfaat Penelitian
1.4.1 Manfaat Akademis
Memberi pengetahuan mengenai obesitas yang diinduksi
oleh infeksi Toxoplasma gondii dengan mengukur kadar Reactive
Oxygen Species serta menjadi acuan untuk pengembangan ilmu
kedokteran bagian parasitologi.
1.4.2 Manfaat Praktis
Mengetahui keterkaitan Toxoplasma gondii terhadap
obesitas dengan mengukur kadar Reactive Oxygen Species.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Obesitas
Obesitas merupakan suatu penyakit multifaktorial, yang terjadi
akibat akumulasi jaringan lemak yang dapat mengganggu kesehatan.
Obesitas terjadi jika ukuran dan jumlah sel lemak bertambah. Bila
seseorang bertambah berat badannya, maka ukuran sel lemak akan
bertambah pula dan jumlahnya juga bertambah banyak. Cara menghitung
obesitas adalah menggunakan BMI (Body Mass Index) yaitu membagi
berat badan dalam kilogram dengan tinggi badan dalam meter yang
dikuadratkan (WHO, 2016).
Tabel 2.1. Klasifikasi overweight dan obesitas berdasarkan WHO
Klasifikasi BMI(kg/m2)
Normal 18.50 - 24.99
Overweight ≥ 25.00
Pra-obes 25.00 - 29.99
Obes ≥ 30.00
Obes kelas I 30.00 - 34.99
Obes kelas II 35.00 - 39.99
Obes kelas III ≥ 40.00
Sumber : WHO, 2004
Di Indonesia, menurut Departemen Kesehatan Republik Indonesia,
kriteria yang digunakan untuk overweight atau kelebihan berat badan
tingkat ringan adalah jika BMI 25,1-27 kg/m2, untuk obesitas jika BMI > 27
kg/m2.
Tabel 2.2. Klasifikasi overweight dan obesitas untuk orang Indonesia menurut Depkes RI
Kategori BMI (kg/m2)
Kurus Kekurangan BB tingkat berat < 17,0
Kekurangan BB tingkat ringan 17,0 – 18,4
Normal 18,5 – 25,0
Gemuk Kelebihan BB tingkat ringan (Berat Badan
lebih)
25,1 – 27,0
Kelebihan BB tingkat berat (Obesitas) >27,0
Sumber: Depkes RI 1994 dalamSupariasa, 2001.
BMI hanya digunakan untuk mengukur kegemukan, sebagai
dampak dari perubahan pola hidup, kebiasaan konsumsi makanan cepat
saji yang tinggi kadar lemak dan protein, serta rendah karbohidrat. BMI
tidak dapat membedakan otot dengan lemak dan tidak dapat
menunjukkan distribusi lemak di dalam tubuh yang merupakan faktor
penentu utama risiko gangguan metabolisme yang berkaitan dengan
kelebihan berat badan. Pola penyebaran lemak tubuh tersebut dapat
diestimasikan dengan mengukur lingkar pinggang. Lingkar pinggang
diukur pada titik yang tersempit. Menurut WHO, resiko seseorang
mengalami gangguan kesehatan akan meningkat jika lingkar pinggangnya
lebih dari 88 cm untuk wanita dan 102 cm untuk pria. Namun untuk
hubungan yang lebih kuat antara penyebaran lemak dengan resiko
gangguan kesehatan, maka harus dilakukan pengukuran lemak di perut.
Lokasi yang dipilih adalah perut karena penumpukan lemak di perut lebih
beresiko terhadap kesehatan daripada di tempat lain (Racette, et al.,
2003). Hal ini disebabkan karena abdomen mempunyai komposisi lemak
subkutan maupun viseral yang lebih tinggi sehingga meningkatkan resiko
munculnya hipertensi, penyakit jantung, dan diabetes (Health Status,
2016).
Obesitas merupakan hasil perubahan pada genetik, lingkungan,
pola hidup, aktivitas, psikologi, sosial dan budaya seseorang yang
mengarah pada ketidakseimbangan energi serta terbentuknya akumulasi
lemak yang berlebihan. Obesitas menunjukkan bahwa pola hidup dan
lingkungan (misalnya pola hidup yang pasif namun intak makanan
berlebihan) memegang peran paling penting dalam peningkatan jumlah
masyarakat yang mengalami obese pada 2 dekade terakhir (Racette, et
al, 2003). Pada pola hidup yang pasif, akan terjadi penurunan massa otot
dan peningkatan adipositas sehingga kadar lemak di dalam tubuh orang
yang mengalami obese akan lebih dari normal (Guyton, 2007).
Obesitas biasanya terjadi turun-temurun dalam keluarga. Namun
peran genetik yang pasti untuk menimbulkan obesitas masih sulit
ditemukan karena anggota keluarga umumnya memiliki kebiasaan makan
dan pola aktivitas fisik yang sama. Akan tetapi, bukti terkini menunjukkan
bahwa 20-25% kasus obesitas dapat disebabkan faktor genetik. Gen
dapat berperan dalam obesitas dengan menyebabkan kelainan satu atau
lebih jaras yang mengatur pusat makan dan pengeluaran energi serta
penyimpanan lemak. Penyebab monogenik (gen tunggal) dari obesitas
adalah mutasi MCR-4, yaitu penyebab monogenik tersering untuk
obesitas yang ditemukan sejauh ini, defisiensi leptin kongenital, yang
diakibatkan mutasi gen, yang sangat jarang dijumpai dan mutasi reseptor
leptin, yang juga jarang ditemui. Semua bentuk penyebab monogenik
tersebut hanya terjadi pada sejumlah kecil persentase dari seluruh kasus
obesitas. Banyak variasi gen sepertinya berinterakasi dengan faktor
lingkungan untuk mempengaruhi jumlah dan distribusi lemak (Guyton,
2007).
Faktor lain penyebab obesitas adalah perilaku makan yang kurang
baik. Perilaku makan yang kurang baik disebabkan oleh beberapa sebab,
diantaranya adalah karena faktor lingkungan dan sosial. Hal ini terbukti
dengan meningkatnya prevalensi obesitas di negara maju. Sebab lain
yang menyebabkan perilaku makan kurang baik adalah psikologis, dimana
perilaku makan dijadikan sebagai sarana untuk mengurangi stress atau
biasa disebut acting out. Perilaku makan yang tidak baik pada masa
kanak-kanak sehingga nantinya saat dewasa terjadi kelebihan nutrisi juga
memiliki kontribusi dalam obesitas. Hal ini didasarkan karena kecepatan
pembentukan sel-sel lemak yang baru meningkat pada awal kehidupan.
Makin besar kecepatan penyimpanan lemak, makin besar pula jumlah sel
lemak. Oleh karena itu, jika obesitas terjadi pada anak-anak, maka
kemungkinan besar akan tetap obesitas pada dewasanya nanti (Guyton,
2007).
Dari segi hormonal terdapat leptin, insulin, kortisol dan peptida
usus. Leptin adalah sitokin yang menyerupai polipeptida yang dihasilkan
oleh adiposit yang bekerja melalui aktivasi reseptor hipotalamus. Kadar
leptin yang tinggi akan mengakibatkan penurunan jumlah makanan yang
dikonsumsi. Insulin adalah anabolik hormon. Insulin diketahui
berhubungan langsung dalam penyimpanan dan penggunaan energi pada
sel adiposa. Sedangkan kortisol adalah glukokortikoid yang bekerja dalam
mobilisasi asam lemak yang tersimpan pada trigliserida, hepatic
glukoneogenesis dan proteolisis (Wilborn et al., 2005).
Faktor terakhir penyebab obesitas adalah dampak dari penyakit
lain. Penyakit-penyakit yang dapat menyebabkan obesitas adalah
hypogonadism, Cushing syndrome, hypothyroidism, insulinoma,
craniophryngioma dan gangguan lain pada hipotalamus. Beberapa
hipotesa menyatakan bahwa berat badan seseorang diregulasi baik oleh
endokrin dan komponenen neural. Berdasarkan hipotesa tersebut, maka
jika terdapat sedikit ketidakseimbangan pada regulasi ini, akan
mempunyai efek pada berat badan (Flier et al, 2005).
Obesitas merupakan penyakit kronis multifaktor. Obesitas dapat
didefinisikan sebagai meningkatnya akumulasi lemak di tubuh. Jaringan
lemak bukan hanya trigliserida pada organ tertentu, namun kini penelitian
terbaru menemukan bahwa jaringan lemak putih berperan pada
pembentukan beberapa zat bioaktif, yakni adipokin atau adipositokin.
Adipokin atau adipositokin merupakan hormon yang disekresikan jaringan
lemak yang fungsinya untuk mempertahankan homeostasis. Pada
obesitas, akan menginduksi produksi dari sitokin pro-inflamasi seperti
TNFα dan interleukin-6 (IL-6) sehinga jumlahnya akan meningkat.
Selanjutnya, TNFα dan interleukin-6 (IL-6) akan memproduksi Reactive
Oxygen Species (ROS) sehingga menimbulkan stress oksidatif serta
menimbulkan resistensi terhadap insulin (Sanches, et al., 2011).
2.2 Toxoplasma gondii
Toksoplasmosis adalah suatu penyakit yang disebabkan oleh
Toxoplasma gondii, merupakan penyakit parasit pada manusia dan juga
pada hewan. Hospes definitif dari Toxoplasma gondii adalah golongan
Felidae, sedangkan manusia berperan sebagai hospes perantaranya.
Manusia dapat terkena infeksi parasit ini dengan cara didapat (Aquired
toxoplasmosis) maupun diperoleh semenjak dalam kandungan
(Congenital toxoplasmosis). Gejalanya seringkali asimptomatis sehingga
Toksoplasmosis sangat susah untuk dideteksi secara dini (Chahaya,
2003).
2.2.1 Morfologi dan Klasifikasi
Toxoplasma gondii merupakan protozoa obligat intraseluler,
terdapat dalam tiga bentuk yaitu takizoit (bentuk proliferatif), kista (berisi
bradizoit) dan ookista (berisi sporozoit). Bentuk takizoit menyerupai bulan
sabit dengan ujung yang runcing dan ujung lain agak membulat. Ukuran
panjang 4-8 mikron, lebar 2-4 mikron dan mempunyai selaput sel, satu inti
yang terletak di tengah bulan sabit dan beberapa organel lain seperti
mitokondria dan badan golgi. Bentuk ini terdapat di dalam tubuh hospes
perantara seperti burung dan mamalia termasuk manusia dan kucing
sebagal hospes definitif. Takizoit ditemukan pada infeksi akut dalam
berbagai jaringan tubuh. Takizoit dapat memasuki tiap sel yang berinti.
Kista dibentuk di dalam sel hospes bila takizoit yang membelah telah
membentuk dinding. Ukuran kista berbeda-beda. Kista dalam tubuh
hospes dapat ditemukan seumur hidup terutama di otak, otot jantung, dan
otot bergaris. Di otak bentuk kista lonjong atau bulat, tetapi di dalam otot
bentuk kista mengikuti bentuk sel otot. Kista ini merupakan stadium
istirahat dari T. gondii. Menurut Levine (1990), pada infeksi kronis kista
dapat ditemukan dalam jaringan organ tubuh dan terutama di otak.
Ookista berbentuk lonjong, berukuran 11-14 x 9-11 mikron. Ookista
mempunyai dinding, berisi satu sporoblas yang membelah menjadi dua
sporoblas. Pada perkembangan selanjutnya ke dua sporoblas membentuk
dinding dan menjadi sporokista. Masing-masing sporokista tersebut berisi
4 sporozoit yang berukuran 8 x 2 mikron dan sebuah benda residu
(Chahaya, 2003).
2.2.2 Daur Hidup
Daur hidup T. gondii melalui dua siklus yaitu siklus enteroepitel
yang berada di tubuh hospes definitif dan siklus ekstraintestinal yang
berada di tubuh hospes perantara. Pada siklus ekstraintestinal, ookista
yang keluar bersama tinja kucing belum bersifat infektif. Setelah
mengalami sporulasi, ookista akan berisi sporozoit dan menjadi bentuk
yang infektif. Manusia dan hospes perantara lainnya akan terinfeksi jika
ookista tertelan. Di dalam ileum, dinding ookista akan hancur sehingga
sporozoit keluar. Sporozoit-sporozoit ini menembus mukosa ileum dan
mengikuti aliran darah dan limfa menuju berbagai organ tubuh seperti
otak, mata, hati dan jantung. Sporozoit bebas akan membentuk
pseudokista setelah berada dalam sel organ-organ tersebut. Pseudokista
tersebut berisi endozoit atau yang lebih dikenal sebagai takizoit. Takizoit
akan membelah. Kecepatan membelah takizoit ini akan melambat dan
kemudian terbentuk kista yang mengandung bradizoit. Bradizoit dalam
kista biasanya ditemukan pada infeksi menahun atau infeksi laten
(Yaudza, 2011).
Gambar 2.1. Siklus Hidup Toxoplasma gondii. Ookista yang keluar bersama tinja kucing akan mengalami sporulasi dan berisi sporozoit yang infektif. Jika tertelan manusia, dinding ookista akan hancur sehingga sporozoit bebas. Sporozoit ini akan menembus ileum dan mengikuti aliran darah (CDC, 2016).
Manusia dapat terinfeksi Toxoplasma gondii melalui daging
mentah atau kurang matang yang mengandung kista Toxoplasma gondii.
Atau bahkan dapat pula tertelan ookista setelah kontak langsung dengan
hewan yang membawa ookista. Selain itu pada pasien yang menerima
transplantasi organ tubuh, jika pendonor pernah terinfeksi Toxoplasma
gondii, maka resiko terinfeksi juga tinggi. Kasus yang sering muncul terjadi
karena infeksi kongenital, yaitu melalui plasenta (Chahaya, 2003).
2.2.3 Manifestasi klinis
Toksoplasmosis dapat dibagi menjadi toksoplasmosis akuisita
(dapatan) dan toksoplasmosis kongenital. Keduanya sebagian besar
adalah asimptomatis atau tidak menimbulkan gejala. Pada awalnya
bersifat akut dan jika tidak ditangani dengan baik akan menjadi kronik atau
laten. Gejalanya lebih sering tidak spesifik dan sulit dibedakan dengan
penyakit lain. Toksoplasmosis dapatan biasanya tidak diketahui karena
memang asimptomatis. Jika seorang ibu yang sedang hamil mendapat
infeksi primer, ada kemungkinan bahwa 50% akan melahirkan anak
dengan toksoplasmosis kongenital. Gejala yang dijumpai pada orang
dewasa maupun anak-anak umumnya ringan. Gejala klinis yang paling
sering dijumpai pada toksoplasmosis dapatan adalah limfadenopati dan
rasa lelah, disertai demam dan sakit kepala (Gandahusada, 2003).
Pada infeksi akut, limfadenopati sering dijumpai pada kelenjar
getah bening daerah leher bagian belakang. Gejala tersebut biasanya
disertai demam, mialgia dan malaise. Pada kulit, akan muncul ruam
makulopapuler yang mirip kelainan kulit pada demam titus. Pada jaringan
paru dapat terjadi pneumonia interstisial. Gambaran klinis toksoplasmosis
kongenital dapat bermacam-macam. Ada yang tampak normal pada waktu
lahir dan gejala klinisnya baru timbul setelah beberapa minggu sampai
beberapa tahun. Ada gambaran eritroblastosis, hidrops fetalis dan triad
klasik yang terdiri dari hidrosefalus, korioretinitis dan perkapuran
intrakranial atau tetrad sabin yang disertai kelainan psikomotorik
(Gandahusada, 2003).
Toksoplasmosis kongenital dapat menunjukkan gejala yang sangat
berat dan dapat menyebabkan kematian pada penderitanya karena
parasit telah tersebar luas di berbagai organ penting dan juga pada sistem
saraf penderita. Gejala susunan syaraf pusat sering meninggalkan gejala
sisa, misalnya retardasi mental dan gangguan motorik. Kadang-kadang
hanya ditemukan sikatriks pada retina yang dapat kambuh pada masa
anak-anak, remaja atau dewasa. Korioretinitis karena toksoplasmosis
pada remaja dan dewasa biasanya akibat infeksi kongenital. Akibat
kerusakan pada berbagai organ, maka kelainan yang sering terjadi
bermacam-macam jenisnya. Kelainan pada bayi dan anak-anak akibat
infeksi pada ibu selama kehamilan trimester pertama, dapat berupa
kerusakan yang sangat berat sehingga terjadi abortus atau lahir mati atau
bayi dilahirkan dengan kelainan seperti ensefalomielitis, hidrosefalus,
kalsifikasi serebral dan korioretinitis. Pada anak yang lahir prematur,
gejala klinis lebih berat dari anak yang lahir cukup bulan, dapat disertai
hepatosplenomegali, ikterus, limfadenopati, kelainan susunan syaraf pusat
dan lesi mata (Yaudza, 2011).
2.2.4 Pemeriksaan
Karena gejala dari Toxoplasmosis seringkali asimptomatis dan
sangat umum, maka untuk menegakkan diagnosis langsung harus
dilakukan uji laboratorium.
Spesimen. Berupa darah, sputum, sumsum tulang, CSF dan eksudat
Pemeriksaan mikroskopik. Hapusan yang diwarnai dengan teknik Giemsa
dapat memperlihatkan organisme. Jika tampak kista terutama dari
spesimen otak atau sistem saraf pusat yang lain, menunjukkan infeksi
kronis
Inokulasi. Seringkali digunakan untuk menegakan diagnosa definitif.
Berbagai spesimen diinokulasi secara intraperitoneal ke mencit yang tidak
terinfeksi. Lalu mencit diobservasi selama 6 minggu, kemudian darahnya
diuji untuk memeriksa antibodi spesifik. Diagnosis ditegakkan jika
terdapat kista
Serologi. Untuk memeriksa antibodi IgM dan IgG anti Toxoplasma gondii.
(Jawetz, et al, 2008).
2.2.5 Pengobatan
Untuk infeksi akut cukup diresepkan kombinasi pirimetamin dan
sulfadiazin atau trisulfapirimidin. Dapat pula ditambah obat lain seperti
spiramisin, klindamisin, trimetoprimsulfametoksazol dan berbgai obat
sulfonid lainnya. Untuk pasien yang sedang hamil dapat diberikan
spiramisin (Rovamycin) yang harus diteruskan sampai melahirkan
(Jawetz, et al, 2008).
2.2.6 Hubungan Obesitas dengan Toxoplasma gondii
Pada individu yang mengalami obesitas, ditemukan terjadinya
penurunan status pertahanan imun dibandingkan dengan individu yang
berat badannya normal. Terdapat perbedaan jumlah leukosit dan
komponennya serta aktivitas monosit pada oxidative burst. Pada pasien
obesitas, sel mononuklear akan memicu keluarnya agen proinflamasi
yang mengakibatkan terjadinya proses inflamasi kronik. Hal ini
menyebabkan terjadi penurunan status imun pada individu yang obesitas
sehingga resiko terjadinya infeksi lebih besar, salah satunya dapat terjadi
infeksi dari Toxoplasma gondii (Milner, 2012).
2.3 Hubungan profilin Toxoplasma gondii dan obesitas
Profilin merupakan protein actin-binding kecil yang mempengaruhi
sitoskeleton aktin. Profilin sendiri dapat ditemukan pada seluruh kingdom
eukariot. Profilin berinteraksi dengan beberapa molekul seperti
fosfatidilinositol-4,5-bifosfat (PtdIns(4,5)), protein yang mengandung
prolin, dan protein yang berkaitan dengan aktin. Interaksi ini akan
menghubungkan profilin dengan transduksi sinyal sehingga nantinya akan
terjadi reorganisasi dari sitoskeleton aktin (Gibbon, 2000).
Sitoskeleton aktin berperan penting dalam motilitas sebuah sel dan
bentuk dari sebuah sel (Bitko, et al, 2003). Sedangkan profilin mempunyai
kemampuan untuk mempengaruhi perkembangan dari aktin filamen
dengan menjadikan dirinya sebagai persediaan monomer aktin. Dari
kompleks profilin dan aktin akan dihasilkan aktin yang dapat
mempengaruhi polimerisasi filamen aktin pada berbagai sel (Kwiatkowski,
et al, 1987).
Profilin memicu polimerisasi aktin dengan menukar ADP ke ATP
pada aktin monomer dan mengantarkan ATP-aktin menuju filamen yang
tumbuh. Protozoa apicomplexan seperti Toxoplasma gondii menginvasi
sel host menggunakan aktin yang berperan pada pergerakan sel. Toll-like-
receptor (TLR) 11 merangsang sistem imun innate menggunakan
Toxoplasma gondii profilin (TgPRF). Struktur kristal dari TgPRF
menunjukkan bahwa permukaan parasit mengandung acidic loop, yang
diikuti oleh β-hairpin yang panjang. Penelitian menunjukkan bahwa TLR11
berhubungan dengan sekresi interleukin (IL)-12. Percobaan penambahan
acidic loop dan β-hairpin dari Toxoplasma gondii pada profilin bakteri akan
mengaktifkan signaling dari TLR11 sehingga sekresi IL-12 juga akan
meningkat (Kucera, et al., 2010). IL-12 merupakan sitokin yang sebagian
besar dihasilkan oleh sel fagositik sebagai respon terhadap bakteri dan
parasit intraseluler. IL-12 akan mengaktivasi sel NK dan dan sel T.
Selanjutnya akan dihasilkan IFN ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel
fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014). Selain itu profilin juga
berfungsi untuk menstimulasi gliding motility (untuk migrasi melewati
barier biologis) dan mengakibatkan virulensi di mencit (Plattner, et al.,
2008).
Gambar 2.2 Alur Profilin Menyebabkan Inflamasi. Profilin dari Toxoplasma gondii akan merangsang TLR11 yang akan meningkatkan sekresi IL12. IL12 akan mengaktivasi sel NK dan sel T. Selanjutnya akan dihasilkan IFN ɣ yang berperan dalam mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014).
2.4 Reactive Oxygen Species
ROS merupakan representasi katagori molekul yang luas yang
merupakan turunan dari oksigen radikal dan nonradikal. Turunan oksigen radikal
meliputi ion OH, superoksida, nitric oxide, dan peroxyl, sedangkan turunan dari
oksigen yang non-radikal meliputi ozone, singlet oksigen, lipid peroksida, dan
hydrogen peroksida. Turunan oksigen non-radikal selanjutnya akan mengambil
bagian dalam kaskade reaksi yang menghasilkan radikal bebas. Selain derivate
oksigen, radikal bebas juga dapat berasal dari derivate nitrogen seperti nitric
oxide, peroksi nitrit, dan ion nitroksil yang juga merupakan subklas dari ROS.
Berbagai macam ROS tersebut dapat bersumber dari dalam tubuh (intrinsik) atau
dari luar tubuh (ekstrinsik) (Widayati, 2012).
Radiasi sinar rontgen maupun sinar ultraviolet merupakan sumber
pembentukan ROS yang cukup penting, karena sinar-sinar tersebut dapat
melisiskan air menjadi radikal . Selain itu ion logam seperti Fe2+, Co2+ dan Cu+
juga dapat bereaksi dengan oksigen atau hydrogen peroksida (H2O2) yang
nantinya akan menghasilkan radikal . Nitrit oksida, suatu senyawa yang penting
untuk relaksasi pembuluh darah, selain merupakan senyawa radikal bebas, juga
dapat bereaksi dengan superoksida menghasilkan peroksinitrit, yang nantinya
juga akan membentuk radikal. Sumber ROS yang lain adalah berasal hasil
respiratory burst dari makrofag yang sudah teraktifkan. Aktivasi makrofag ini
dapat menyebabkan peningkatan penggunaan glukosa melalui lintasan pentose
fosfat yang dipakai untuk mereduksi NADP menjadi NADPH, dan peningkatan
penggunaan oksigen yang dipakai untuk mengoksidasi NADPH guna
menghasilkan superoksida dan halogen radikal sebagai agen yang sitotoksik
untuk membunuh mikroorganisme yang telah difagosit (Widayati, 2012).
Oksidasi terhadap koenzim flavin tereduksi di dalam mitokondria dan
rangkaian transport elektron dalam mikrosom berlangsung melalui beberapa
tahapan, radikal flavin semiquanon akan distabilkan oleh protein pengikat yang
membentuk radikal oksigen (superoksida) sebagai hasil sementara atau
sampingan. Meskipun hasil akhirnya bukanlah radikal bebas, namun karena sifat
radikal yang tidak dapat diprediksi, diperkirakan terdapat kebocoran radikal
bebas, sebanyak 3 – 5% dari 30 mol oksigen yang dikonsumsi setiap hari atau
sebanyak 1.5 mol ROS. Jadi pembentukan ROS di dalam mitokondria selain oleh
kebocoran elektron kronis dari rantai pernafasan normal, juga dipicu oleh
respiratory burst intra-mitokondrial, sitoplasma, maupun ROS yang berasal dari
luar. Sedangkan di dalam, mitokondria superoksida dikonversi menjadi hidrogen
peroksida yang dapat menyebar dan kemudian dikonversi menjadi radikal . Oleh
karena itu produksi ROS dalam mitokondria menjadi hal penting dalam berbagai
patogenesis penyakit (Widayati, 2012).
ROS merupakan molekul yang tidak berpasangan sehingga molekulnya
bersifat sangat tidak stabil dan sangat reaktif. ROS hanya dapat bertahan dalam
hitungan millisecond (10-9 – 10-12) sebelum bereaksi dengan molekul lain untuk
menjadi stabil. Diketahui terdapat berbagai macam ROS, namun yang paling
banyak dipelajari karena efeknya yang berbahaya dan merusak adalah
superoksida (. O- ), hydroxyl (. OH), dan perhydroxyl (. O2H). Kerusakan jaringan
akibat serangan ROS dikenal dengan stres oksidatif, sedangkan faktor yang
dapat melindungi jaringan terhadap ROS disebut antioksidan. Berbagai jaringan
yang dapat mengalami kerusakan akibat ROS di antaranya adalah Deoxyribo
Nucleic Acid (DNA), lipid, dan protein. Interaksi ROS dengan basa dari DNA
dapat merubah struktur kimia DNA, dan apabila tidak direparasi akan
menyebabkan mutasi yang akan diturunkan, terutama bila terjadi pada DNA sel
germinal baik di dalam ovarium maupun testis. Sedangkan kerusakan DNA pada
sel somatik dapat mengarah pada inisiasi keganasan (Widayati, 2012).
Reaksi ROS terhadap lipid tidak jenuh membran sel dan plasma
lipoprotein menyebabkan pembentukan lipid peroksida (malondialdehyde) yang
secara kimia dapat memodifikasi protein dan basa asam nukleat. Selain itu ROS
secara kimia juga dapat memodifikasi langsung asam amino dalam protein,
sehingga tidak lagi dikenal sebagai milik sendiri (self) tetapi sebagai benda asing
yang tidak dikenali (nonself) oleh sistem imun. Antibodi yang dihasilkan juga
akan bereaksi silang dengan protein dari jaringan normal, sebagai awal dari
munculnya berbagai penyakit autoimun. Modifikasi kimia dalam protein dan
lemak pada lipoprotein (LDL) menyebabkan LDL tidak lagi dapat dikenali oleh
reseptor LDL liver, akibatnya LDL tidak dapat dibersihkan oleh liver. Sebaliknya,
LDL akan diambil oleh reseptor makrofag, yang kemudian membuat makrofag
mempunyai ukuran lebih besar dan menginfiltrasi lapisan pembuluh darah di
bawah endothelium, terutama bila sudah terjadi kerusakan endothelium
sebelumnya. Infiltrasi LDL tersebut kemudian ditutup oleh akumulasi kolesterol
yang tidak teresterifikasi. Keadaan ini mengarah pada perkembangan plak
aterosklerosis, sehingga pembuluh darah menjadi tersumbat. Selain itu
kerusakan tirosin residu dalam protein akibat ROS juga dapat mengarah pada
pembentukan dihidroxyphenilalanin yang selanjutnya mampu bereaksi secara
nonenzimatik untuk membentuk radikal bebas baru (Widayati, 2012).
Obesitas merupakan penyakit kronis yang multifaktor. Obesitas
didefinisikan sebagai meningkatnya akumulasi lemak tubuh. Jaringan
adiposa tidak hanya sebagai penyimpan trigliserida, tapi juga mempunyai
fungsi sebagai penghasil sebuah bioaktif yaitu adipokin. Adipokin atau
adipositokin merupakan hormon yang disekresikan jaringan lemak yang
fungsinya untuk mempertahankan homeostasis. Pada obesitas, akan
menginduksi produksi dari sitokin pro-inflamasi seperti TNFα dan
interleukin-6 (IL-6) sehinga jumlahnya akan meningkat. Selanjutnya, TNFα
dan interleukin-6 (IL-6) akan memproduksi Reactive Oxygen Species
(ROS) sehingga menimbulkan stress oksidatif serta menimbulkan
resistensi terhadap insulin. Sedangkan adipokin yang lain yaitu leptin
berfungsi sebagai pengatur jumlah makanan yang dikonsumsi seseorang,
sehingga memiliki efek langsung pada berat badan. Leptin mempengaruhi
kerja sistem limbik dengan menstimulasi dopamin, menimbulkan rasa
kenyang (Sanchez, et al., 2011).
Semua adipokin tersebut dapat meningkatkan produksi ROS, prosesnya
disebut oxidative stress. Terdapat beberapa mekanisme mengenai obesitas yang
menimbulkan stres oksidatif. Pertama adalah melalui oksidasi asam lemak di
mitokondria dan peroksisom yang dapat menghasilkan ROS melalui reaksi
oksidasi.
Selain itu konsumsi oksigen yang berlebihan pada penderita obesitas
juga akan membentuk radikal bebas di rantai pernafasan di mitokondria.
Penggunaan oksigen oleh otot selama aktivitas fisik maksimal dapat meningkat
sekitar 100–200 kali dibandingkan saat istirahat (Chevion et al., 2003). Saat
fosforilasi oksidatif di dalam mitokondria, oksigen direduksi oleh sistem transport
elektron mitokondria untuk membentuk adenosin trifosfat (ATP) dan air. Selama
proses fosforilasi oksidatif ini sekitar 2% molekul oksigen dapat berikatan dengan
elektron tunggal yang bocor dari karier elektron pada rantai pernafasan,
sehingga membentuk radikal superoksida (O2 . ). Radikal superoksida yang
terbentuk ini akan membentuk hidrogen peroksida (H2O2) dan hidroksil reaktif
(OH. ) dengan cara berinteraksi dengan logam transisi reaktif seperti tembaga
dan besi (Singh, 1992).
Dengan terjadinya peningkatan jumlah jaringan adiposa, akan terjadi
penurunan aktivitas enzim antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD),
catalase (CAT), dan glutathione peroxidase (GPx). Terjadinya peningkatan
produksi ROS dan penurunan kadar antioksidan akan memberikan dampak
seperti disfungsi endotel yang ditandai dengan penurunan bioavailabilitas
vasodilator seperti nitrit oksida (NO) dan peningkatan faktor kontraksi dari
endotel yang akhirnya dapat menyebabkan terjadinya aterosklerosis (Sanchez,
et al., 2011).
Gambar 2.3 Jalur Pembentukan ROS. Terdapat beberapa jalur pembentukan ROS; i) Pada pasien obesitas, terjadi High Metabolic Load yaitu ketidakteraturan dari metabolisme karbohidrat dan lipid yang menyebabkan oksidasi mitokondria berlebihan dan dapat berujung pada peningkatan generasi ROS. Selain itu kadar asam lemak bebas yang tinggi juga dapat mempengaruhi fungsi mitokondria yang berpotensi menghasilkan generasi ROS; ii) Inflamasi. Jika terjadi inflamasi kronis, maka sitokin proinflamasi (TNF, IL-6) akan meningkat dan terdapat infiltrasi
makrofag. Sitokin pro-inflamasi bekerja melalui reseptor membran untuk mengaktifkan oksidase
NADPH (NOX4), untuk mempercepat pembentukan ROS mitokondria, dan untuk menginduksi tekanan retikulum endoplasma (ER); iii) ER (Endoplasmic reticulum) distress yang terjadi pada jaringan adiposa pada obesitas. Seperti mitokondria, ER disfungsional bisa menjadi sumber sekaligus konsekuensi peningkatan generasi ROS; iv) Disregulasi endokrin: regulasi endokrin yang terganggu dapat menyebabkan perubahan tingkat hormon yang beredar (pada diabetes tipe 2, peningkatan kadar insulin yang disirkulasikan merupakan respons kompensasi yang umum terhadap resistensi insulin perifer) (Sanchez, et al., 2011)
BAB III
KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN
3.1 Kerangka Konsep Penelitian
Infeksi Toxoplasma gondii
Profilin dari Toxoplasma gondii berikatan dengan TLR-11
Meningkatkan ekspresi adipositokin proinflamasi yaitu IL-12
IL-12 mengaktivasi sel NK menghasilkan IFN-ɣ
Proses fagositosis
Proses inflamasi
Destruksi parasit
Terjadi inflamasi pada berbagai jaringan termasuk jaringan adiposa
Disfungsi adiposa menyebabkan terjadinya obesitas
Asam lemak bebas berlebihan meningkatkan jalur oksidasi
asam lemak
Penurunan aktivitas enzim antioksidan
High Metabolic Load karena metabolisme karbohidrat dan lipid
meningkat
Peningkatan kadar ROS
Mempengaruhi Variabel yang diteliti
Toxoplasma gondii memiliki profilin yang berperan untuk berikatan
dengan TLR-11. Adanya peningkatan ekspresi profilin akan meningkatkan
ekspresi IL-12 sebagai akibat ikatan profilin dengan TLR-11 pada
membran adiposit. IL-12 merupakan sitokin yang sebagian besar
dihasilkan oleh sel fagositik sebagai respon terhadap bakteri dan parasit
intraseluler. Sekresi IL-12 akan mengaktivasi pembentukan sel NK dan
dan sel T. Selanjutnya akan memicu produksi IFN-ɣ yang berperan dalam
mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014). Salah satu
proses inflamasi juga terjadi di jaringan adiposa, sehingga menyebabkan
disfungsi adiposa yang menyebabkan terjadinya obesitas.
Terdapat beberapa mekanisme mengenai obesitas yang
menimbulkan stress oksidatif. Pertama adalah melalui oksidasi asam
lemak di mitokondria dan peroksisom yang dapat menghasilkan ROS
melalui reaksi oksidasi. Oksidasi asam lemak yang terjadi di mitokondria
akan menghasilkan NADH yang selanjutnya juga dapat memproduksi
ROS. Selain itu konsumsi oksigen yang berlebihan pada penderita
obesitas juga akan membentuk radikal bebas di rantai pernafasan di
mitokondria. Selanjutnya adalah dengan meningkatnya inflamasi jaringan
adiposa, aktivitas enzim antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD),
catalase (CAT), dan glutathione peroxidase (GPx) ditemukan menurun
(Sanchez, et al., 2011).
3.2 Hipotesis Penelitian
Paparan profilin Toxoplasma gondii menyebabkan peningkatan
kadar ROS pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar.
BAB IV METODE PENELITIAN
4.1 Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium
dengan rancangan true eksperimental-post test only control group design
yang bertujuan untuk mengetahui dan membandingkan beberapa
kelompok perlakuan. Penelitian ini menggunakan tikus Rattus Norvegius
Strain Wistar dewasa.
4.2 Subjek Penelitian
Sebagai sampel penelitian digunakan 64 ekor tikus Rattus
Norvegicus Strain Wistar jantan berusia 12-20 minggu dengan berat
badan 50-100 gram yang diadaptasikan berupa diletakkan dalam
kandang berisi sekam dan diberi pakan normal selama dua minggu di
Laboratorium Farmakologi FKUB sebelum diberi perlakuan. Selanjutnya
dilakukan pengukuran dengan kriteria sebagai berikut :
Kriteria inklusi :
a) Tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar sehat
b) Jantan
c) Umur 12-20 minggu
d) Berat badan 50-100 gram
Penelitian ini menggunakan 13 kelompok yaitu :
a) Kontrol
b) 1 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet normal
c) 1 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet normal
d) 1 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet normal
e) 1 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet hiperkalori
f) 1 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet hiperkalori
g) 1 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet hiperkalori
h) 2 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet normal
i) 2 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet normal
j) 2 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet normal
k) 2 kali injeksi profilin dosis 15 μg/mL dengan diet hiperkalori
l) 2 kali injeksi profilin dosis 30 μg/mL dengan diet hiperkalori
m) 2 kali injeksi profilin dosis 45 μg/mL dengan diet hiperkalori
Menurut rumus Federer untuk menentukan jumlah sampel yang
dibutuhkan pada uji eksperimen adalah :
(t-1)(r-1) ≥ 15
(13-1)(r-1) ≥ 15
r-1 ≥ 15/12
r ≥ 2,25
Maka jumlah sampel yang dibutuhkan untuk tiap kelompok perlakuan
adalah minimal 3.
4.3 Variabel Penelitian
Variabel Bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah pemberian Profilin
Toxoplasma gondii.
Variabel Terikat
Variabel terikat dalam penelitian ini adalah kadar Reactive Oxygen
Species (ROS) pada tikus Rattus Norvgicus Strain Wistar.
4.4 Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Parasitologi Fakultas
Kedokteran Brawijaya pada bulan Maret sampai Agustus 2017.
4.5 Bahan dan Alat/Instrumen Penelitian
4.5.1 Alat dan Bahan Pemeliharaan Tikus
Bahan yang digunakan dalam pemeliharaan tikus adalah sebagai
berikut :
a) Profilin Toxoplasma gondii yang merupakan rekombinan didapat
dari plasmid E.coli
b) Diet standart (pars 30 gram dan tepung terigu 10 gram)
c) Diet hiperkalori (kuning telur bebek 30 gram, minyak babi 180
gram, pars 600 gram, tepung terigu 200 gram)
Alat yang digunakan dalam pemeliharaan tikus adalah sebagai
berikut :
a) Sekam
b) Kandang
c) Spuit 1 cc untuk injeksi profilin
d) Timbangan tikus
e) Timbangan analitik
4.5.2 Alat dan Bahan Pembedahan Tikus
Alat dan bahan yang digunakan saat pembedahan tikus adalah
sebagai berikut :
a) Ketamin 50 mg/ml
b) Spuit 5 cc
c) Vacutainer
d) Sentrifuge
e) Eppendorf
4.5.2 Alat dan Bahan Pengukuran Kadar ROS
Kadar ROS pada tikus dihitung menggunakan ELISA kit dari
Bioassay Technology Laboratory. Alat dan bahan yang digunakan
adalah :
a) Eppendorf
b) Micropipet
c) Yellow tip
d) Sterile water
e) ELISA kit
4.6 Definisi Operasional Variabel
1. Model tikus obesitas diberikan diet hiperkalori yaitu kuning telur bebek 30
gram, minyak babi 180 gram, pars 600 gram, tepung terigu 200 gram
selama 14 minggu (Nascimento, 2006)
2. Profilin Toxoplasma gondii diberikan secara injeksi intraperitoneal
3. Pemeriksaan kadar ROS dengan ELISA kit ROS akan dilaksanakan pada
minggu ke 15
4.7 Prosedur Penelitian
4.7.1 Pemeliharaan Tikus
a) Tikus yang datang diadaptasi selama 2 minggu
b) Pakan tikus disesuaikan dengan kelompoknya. Terdapat
kelompok diet normal dan diet hiperkalori
c) Setiap minggu dilakukan penimbangan berat badan tikus
d) Pada tanggal 30 Maret 2017, dilakukan injeksi profilin pertama
secara intraperitoneal
Tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar jantan diadaptasi 2 minggu
Selanjutnya diinjeksi profilin intraperitoneal dengan dosis 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL.
Selanjutnya diinjeksi profilin intraperitoneal dengan dosis 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL.
Diberi pakan normal peroral selama 14 minggu bersamaan
dengan pemberian
profilin
Kontrol negatif hanya diberi pakan peroral
selama 14
minggu
Berat badan diukur setiap minggu
Pemeriksaan ROS dilakukan pada minggu ke 15
Diberi diet hiperkalori selama 14 minggu bersamaan dengan
pemberian profilin
Diberi pakan normal peroral selama 14 minggu bersamaan
dengan pemberian
profilin
Diberi diet hiperkalori selama 14 minggu bersamaan dengan
pemberian profilin
Minggu ke 10, diinjeksi profilin intraperitoneal kedua dengan dosis
15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL.
e) Pada tanggal 20 Juni 2017 dilakukan injeksi profilin kedua pada
kelompok 2 kali injeksi secara intraperitoneal
4.7.2 Pembedahan Tikus
Pembedahan tikus dilakukan mulai 18 Juli 2017 sampai 26 Juli
2017
a) Dilakukan pembiusan menggunakan ketamin 50 mg sebanyak
0,4 – 0,5 ml
b) Dilakukan pembedahan untuk mengambil sampel plasma darah
c) Plasma darah yang telah diambil dilakukan sentrifugasi dengan
kecepatan 3000 rpm selama 10 menit
d) Sampel yang sudah disentrifugasi diambil serumnya untuk
dipindahkan ke dalam eppendorf
e) Serum yang telah dimasukkan ke dalam eppendorf disimpan di
freezer (-2 sampai -8)
4.7.3 Pengukuran Kadar ROS
Pengukuran kadar ROS dilakukan pada 25 Agustus 2017
a) Menyiapkan larutan standart
b) Menambahkan 50 mikroliter sampel serum dan 10 mikroliter
antibodi anti-ROS ke dalam well
c) Tutup plate dengan penutup dan diinkubasi selama 60 menit
pada suhu 37
d) Sambil menunggu, siapkan Washing Buffer
e) Lakukan pencucian sebanyak 5 kali mengunakan Washing
Buffer. Keringkan setiap melakukan pencucian
f) Tambahkan Solution A dan Solution B. Lalu diinkubasi dalam
keadaan gelap dengan suhu 37 selama 10 menit
g) Tambahkan Stop Solution
h) Setelah didiamkan selama 30 menit, lakukan pembacaan kadar
ROS
4.8 Analisis Data
Analisis data yang paling awal adalah melakukan Uji T
berpasangan untuk mengetahui perbedaan berat badan tikus sebelum
dan sesudah perlakuan.
Selanjutnya, dilakukan uji ANOVA untuk mengetahui perbedaan
berat badan tikus dengan jumlah kelompok lebih dari 2. Sebelum
melakukan uji ANOVA, data tersebut harus memenuhi asumsi, yaitu
homogen dan distribusinya normal. Untuk menguji homogenitas data,
dilakukan uji Levene (Levene Test Homogenity of Variance). Sedangkan
untuk menentukan distribusi data yang normal dilakukan uji Kolmogorov-
Smirnov karena jumlah sampel lebih dari 50. Jika data terbukti homogen
dan distribusi normal, maka bisa dilanjutkan melakukan uji ANOVA. Jika
uji One-Way ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan, maka
dilannjutkan dengan Post Hoc Test (Tukey Test) yang merupakan analisis
lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk melihat adanya perbedaan
yang lebih spesifik.
Begitu pula untuk menentukan kadar ROS, maka dilakukan uji
ANOVA untuk mengetahui perbedaan rata-rata kadar ROS dengan jumlah
kelompok lebih dari 2. Sebelum melakukan uji ANOVA, data tersebut
harus memenuhi asumsi, yaitu homogen dan distribusinya normal. Untuk
menguji homogenitas data, dilakukan uji Levene (Levene Test
Homogenity of Variance). Sedangkan untuk menentukan distribusi data
yang normal dilakukan uji Kolmogorov-Smirnov karena jumlah sampel
lebih dari 50. Jika data terbukti homogen dan distribusi normal, maka bisa
dilanjutkan melakukan uji ANOVA. Jika uji One-Way ANOVA menunjukkan
hasil yang signifikan, maka dilannjutkan dengan Post Hoc Test (Tukey
Test) yang merupakan analisis lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk
melihat adanya perbedaan yang lebih spesifik.
Selanjutnya dilakukan Uji T berpasangan untuk kelompok dengan
diet normal dan diet hiperkalori. Uji ini untuk melihat perbedaan kadar
ROS pada tikus dengan diet normal dan diet hiperkalori.
BAB V
HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA
5.1 Hasil Penelitian
Penelitian efek paparan profilin Toxoplasma gondii terhadap kadar
ROS pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar dilakukan selama 4
bulan, mulai Maret 2017 sampai Juli 2017. Pada minggu pertama setelah
inkubasi yaitu tangal 30 Maret 2017, dilakukan injeksi profilin pertama
dengan 3 dosis, yaitu 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL. Selanjutnya
pada 20 Juni 2017, dilakukan injeksi profilin kedua pada kelompok terpilih
dengan dosis yang sama seperti injeksi pertama. Berikut adalah rerata
berat badan selama 14 minggu :
Gambar 5.1 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin. Pada gambar ditunjukkan bahwa semua tikus mengalami kenaikan berat badan
Gambar 5.2 Rerata Berat Badan Tikus Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin. Pada gambar ditunjukkan bahwa semua tikus mengalami kenaikan berat badan
0
50
100
150
200
250
300
Hari 1 Hari 30 Hari 60 Hari 90 Hari 120
Be
rat
Bad
an (g
ram
)
Waktu
Kenaikan Berat Badan Tikus 1 kali Injeksi
Diet normal, prof 15
Diet normal, prof 30
Diet normal, prof 45
Diet hiperkalori, prof 15
Diet hiperkalori, prof 30
Diet hiperkalori, prof 45
0
50
100
150
200
250
300
350
Hari 1 Hari 30 Hari 60 Hari 90 Hari 120
Ber
at
Bad
an (g
ram
)
Waktu
Kenaikan Berat Badan Tikus 2 Kali Injeksi
Diet normal, prof 15
Diet normal, prof 30
Diet normal, prof 45
Diet hiperkalori, prof 15
Diet hiperkalori, prof 30
Diet hiperkalori, prof 45
Dari tabel 5.1 dan 5.2 maka dapat dilihat bahwa berat badan setiap
kelompok perlakuan mengalami peningkatan walaupun tidak sesuai
dengan penambahan dosis maupun jenis diet yang dikonsumsi.
Pada minggu ke 14, mulai tanggal 18 Juli 2017 sampai 26 Juli 2017
dilakukan pembedahan untuk mengambil plasma darah tikus yang
nantinya akan disentrifugasi dan serumnya diambil untuk pemeriksaan
kadar ROS menggunakan ELISA kit. DSetelah dilakukan penghitungan
rata-rata kadar ROS pada kelompok perlakuan, didapatkan hasil sebagai
berikut :
Gambar 5.3 Gambar Rerata Kadar ROS pada Kelompok 1 Kali Injeksi Profilin. Kadar ROS yang paling tinggi adalah pada kelompok dengan diet normal dan injeksi profilin 45 μg/mL.
502
540.18
559.27
538.97545.03
549.27
Diet normal,prof 15
Diet normal,prof 30
Diet normal,prof 45
Diet hiperkalori,prof 15
Diet hiperkalori,prof 30
Diet hiperkalori,prof 45
Kadar ROS Tikus 1 kali Injeksi
Gambar 5.4 Gambar Rerata Kadar ROS pada Kelompok 2 Kali Injeksi Profilin. Kadar ROS paling tinggi adalah pada kelompok dengan diet hiperkalori dan injeksi profilin 30 μg/mL.
Dari tabel 5.3 dan 5.4 dapat ditemukan bahwa kadar ROS pada
masing-masing kelompok menampilkan perbedaan. Dan dapat pula
ditemukan bahwa kadar ROS tikus yang diinjeksi profilin Toxoplasma
gondii sebanyak 1 kali lebih tinggi daripada yang 2 kali. Sedangkan kadar
ROS yang paling tinggi ditemukan pada kelompok dengan 1 kali injeksi
profilin dengan dosis 45 μg/mL namun dengan diet normal.
5.2 Analisis Data
Hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan bantuan program
SPSS versi 16. Hasil analisis yang didapatkan berupa output program
yang disertakan pada bagian Lampiran. Adapun penjelasan berdasarkan
output tersebut dijelaskan sebagai berikut.
Pengujian statistik yang digunakan adalah uji One-Way ANOVA.
Berikut ini adalah langkah-langkah yang harus dilakukan dalam
melakukan analisis data.
1. Melakukan Uji T berpasangan untuk mengetahui perbedaan rata-rata
berat badan tikus sebelum dan sesudah perlakuan
420.86 444374.91
477.09 479.82 457.82
Diet normal,prof 15
Diet normal,prof 30
Diet normal,prof 45
Diet hiperkalori,prof 15
Diet hiperkalori,prof 30
Diet hiperkalori,prof 45
Kadar ROS Tikus 2 kali Injeksi
2. Memeriksa syarat untuk uji One-Way ANOVA untuk berat badan tikus,
yaitu uji distribusi data untuk melihat normalitas data dan uji homogenitas
ragam data. Apabila distribusi tidak normal dan tidak homogen, maka uji
One-Way ANOVA tidak dapat dilakukan dan diganti dengan uji
nonparametrik khususnya uji Kruskal-Wallis.
3. Melakukan uji One-Way ANOVA, untuk mengetahui berat badan
kelompok yang dibandingkan memiliki perbedaan yang signifikan
4. Analisa Post Hoc Test mengunakan uji Tukey dilakukan jika uji One-Way
ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan. Post Hoc Test merupakan
analisis lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk melihat adanya
perbedaan yang lebih spesifik antar kelompok perlakuan terhadap berat
badan tikus.
5. Memeriksa syarat untuk uji One-Way ANOVA untuk kadar ROS yaitu uji
distribusi data untuk melihat normalitas data dan uji homogenitas ragam
data. Apabila distribusi tidak normal dan tidak homogen, maka uji One-
Way ANOVA tidak dapat dilakukan dan diganti dengan uji nonparametrik
khususnya uji Kruskal-Wallis.
6. Melakukan uji One-Way ANOVA, untuk mengetahui kadar ROS kelompok
yang dibandingkan memiliki perbedaan yang signifikan
7. Analisa Post Hoc Test mengunakan uji Tukey dilakukan jika uji One-Way
ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan. Post Hoc Test merupakan
analisis lanjutan dalam uji One-Way ANOVA untuk melihat adanya
perbedaan yang lebih spesifik antar kelompok perlakuan terhadap kadar
ROS.
8. Melakukan Uji T berpasangan untuk kelompok diet normal dan diet
hiperkalori untuk melihat perbedaan kadar ROS pada tikus yang diberi
diet normal dan diet hiperkalori.
5.2.1 Uji T Berpasangan
Uji T berpasangan dilakukan untuk mengetahui perbedaan rata-rata
berat badan tikus sebelum dan sesudah diinjeksi. Uji ini dilakukan pada
kelompok 1 kali dan 2 kali injeksi. Sebelum melakukan uji T berpasangan,
maka dilakukan uji normalitas pada distribusi data.
Tabel 5.1 Uji Normalitas untuk Uji T Berpasangan
Pada data berat badan, karena melihat perbedaan rata-rata berat
badan pada 13 kelompok, maka yang digunakan adalah data Saphiro-
Wilk karena jumlah data yang kurang dari 50. Pada kolom Sig.
Didapatkan angka 0.306 untuk berat badan sebelum perlakuan dan
0.669 untuk berat badan setelah perlakuan. Karena kedua data nilai
signifikannya p>0.05, maka dapat ditarik kesimpulan bahwa data
perbedaan rerata berat badan adalah normal dan dapat dilakukan uji T
berpasangan.
Tabel 5.2 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 1 Kali Injeksi
Pada kolom Sig. diperoleh nilai signifikan sebesar 0.000 dengan
selisih 36. Karena nilai p<0.005 dan perbedaan berat badan lebih dari
Tests of Normality
.227 12 .089 .922 12 .306
.199 12 .200* .952 12 .669
BB sbl
BB ssd
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Kolmogorov-Smirnova
Shapiro-Wilk
This is a lower bound of the true significance.*.
Lil liefors Significance Correctiona.
Paired Samples Test
-117.4583 16.75089 6.83852 -135.0373 -99.8794 -17.176 5 .000BB sbl - BB ssdPair 1
Mean Std. Deviation
Std. Error
Mean Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
Paired Differences
t df Sig. (2-tailed)
2, maka terdapat perbedaan rerata berat badan yag signifikan sebelum
dan sesudah perlakuan pada kelompok tikus 1 kali injeksi.
Tabel 5.3 Uji T Berpasangan Rerata Berat Badan Tikus 2 Kali Injeksi
Pada kolom Sig. diperoleh nilai signifikan sebesar 0.001 dengan
selisih 78. Karena nilai p<0.005 dan perbedaan berat badan lebih dari
2, maka terdapat perbedaan rerata berat badan yag signifikan sebelum
dan sesudah perlakuan pada kelompok tikus 2 kali injeksi.
5.2.2 Uji Normalitas ANOVA Berat Badan
Sebelum melakukan pengujian dengan menggunakan uji ANOVA,
maka dilakukan pengujian asumsi kenormalan data. Distribusi normal
merupakan distribusi teoritis dari variabel random yang kontinu. Kurva
yang menggambarkan distribusi normal adalah kurva normal yang
berbentuk simetris. Untuk menguji apakah sampel penelitian
merupakan jenis distribusi normal maka digunakan pengujian
Kolmogorov-Smirnov karena jumlah sampel lebih dari 50. Data
dikatakan memiliki distribusi normal jika nilai signifikansi (p-value) lebih
besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050.
Berdasarkan hasil pengujian distribusi normal data penelitian
menggunakan metode Kolmogorov-Smirnov, terlihat bahwa data yang
diuji yaitu data hasil ROS menunjukkan nilai signifikansi (p-value)
0,200. Hal tersebut menunjukkan bahwa nilai signifikansi (0,200) lebih
besar dari alpha yang digunakan (0,050) sehingga dapat disimpulkan
Paired Samples Test
-120.4000 37.25630 15.20982 -159.4981 -81.3019 -7.916 5 .001BB sbl - BB ssdPair 1
Mean Std. Deviation
Std. Error
Mean Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
Paired Differences
t df Sig. (2-tailed)
bahwa data penelitian yang diuji simetris mengikuti distribusi normal,
dengan kata lain asumsi normalitas data terpenuhi.
Tabel 5.4 Uji Normalitas Berat Badan
5.2.3 Uji Homogenitas ANOVA Berat Badan
Tahap selanjutnya sebelum melakukan uji ANOVA adalah data
harus homogen. Untuk menguji homogenitas data, maka dilakukan Uji
Homogenitas ragam data dengan menggunakan uji Levene (Levene
Test Homogenity of Variance). Dasar pengambilan keputusan yang
digunakan adalah dengan menggunakan nilai signifikansi (p-value).
Data dapat dikatakan memiliki homogenitas jika nilai signifikansi (p-
value) lebih besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050
Berdasarkan hasil analisis yang dilakukan didapatkan nilai
signifikansi (p-value) sebesar 0,518 Hal tersebut menunjukkan bahwa
nilai signifikansi (0,518) lebih besar dari alpha yang digunakan (0,050).
Sehingga dapat disimpulkan bahwa ragam data antar perlakuan yang
diamati adalah homogen, dengan kata lain asumsi homogenitas ragam
terpenuhi.
Tests of Normality
.076 65 .200* .967 65 .081Berat BadanStatistic df Sig. Statistic df Sig.
Kolmogorov-Smirnova
Shapiro-Wilk
This is a lower bound of the true significance.*.
Lil liefors Significance Correctiona.
Tabel 5.5 Uji Homogenitas Berat Badan
Karena data yang didapat memiliki distribusi yang normal dan
homogen, maka syarat untuk melakukan pengujian Uji One-Way
ANOVA telah terpenuhi.
5.2.4 Uji One-Way ANOVA Berat Badan
Jika data sudah memenuhi asumsi distribusi normal dan homogen,
maka dapat dilanjutkan ke uji ANOVA. Uji One-Way ANOVA
mempunyai tujuan untuk mengetahui perbedaan yang signifikan antara
kelompok perlakuan terhadap berat badan. Dasar pengambilan
keputusan berdasarkan hipotesis yang diajukan adalah dengan
menggunakan nilai signifikansi (p-value), di mana p-value yang lebih
kecil dari alpha (0,05) menunjukkan bahwa paling tidak terdapat dua
kelompok yang mempunyai rerata ROS yang berbeda maknanya
Tabel 5.6 Uji ANOVA Berat Badan
Berdasarkan hasil analisis uji One-Way ANOVA tersebut diperoleh
nilai signifikansi (p-value) sebesar 0,507 Hal tersebut menunjukkan
bahwa nilai signifikansi (0,507) lebih besar dari alpha (0,05). Sehingga
Test of Homogeneity of Variances
Berat Badan
.937 12 52 .518
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
ANOVA
Berat Badan
24726.017 12 2060.501 .949 .507
112875.4 52 2170.680
137601.4 64
Between Groups
Within Groups
Total
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan bermakna berat
badan tikus.
5.2.5 Uji Pengujian Berganda (Multiple Comparisons) Berat Badan
Dengan ditemukannya pengaruh signifikan pada perlakuan antar
kelompok terhadap kadar ROS, maka dilakukan pengujian lebih lanjut
untuk mengetahui perbedaan yang lebih spesifik antara perlakuan
kepada kelompok terhadap kadar ROS. Metode post hoc test
dilakukan sebagai uji pembandingan berganda (Multiple Comparison)
menggunakan uji Tukey.
Hasil uji post hoc dapat dilihat pada Lampiran. Tidak terdapat
perbedaan kadar ROS pada semua kelompok karena p>0.005.
5.2.6 Uji Normalitas ANOVA Kadar ROS
Sebelum melakukan pengujian dengan menggunakan uji ANOVA,
maka dilakukan pengujian asumsi kenormalan data. Distribusi normal
merupakan distribusi teoritis dari variabel random yang kontinu. Kurva
yang menggambarkan distribusi normal adalah kurva normal yang
berbentuk simetris. Untuk menguji apakah sampel penelitian
merupakan jenis distribusi normal maka digunakan pengujian
Kolmogorov-Smirnov karena jumlah sampel lebih dari 50. Data
dikatakan memiliki distribusi normal jika nilai signifikansi (p-value) lebih
besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050.
Berdasarkan hasil pengujian distribusi normal data penelitian
menggunakan metode Kolmogorov-Smirnov, terlihat bahwa data yang
diuji yaitu data hasil ROS menunjukkan nilai signifikansi (p-value)
0,059 untuk kelompok 1 kali injeksi dan 0,755 untuk kelompok 2 kali
injeksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa nilai signifikansi (0,059 dan
0,755) lebih besar dari alpha yang digunakan (0,050) sehingga dapat
disimpulkan bahwa data penelitian yang diuji simetris mengikuti
distribusi normal, dengan kata lain asumsi normalitas data terpenuhi.
Tabel 5.7 Uji Normalitas Kelompok 1 Kali Injeksi
Tabel 5.8 Uji Normalitas Kelompok 2 Kali Injeksi
5.2.7 Uji Homogenitas ANOVA Kadar ROS
Tahap selanjutnya sebelum melakukan uji ANOVA adalah data
harus homogen. Untuk menguji homogenitas data, maka dilakukan Uji
Homogenitas ragam data dengan menggunakan uji Levene (Levene
Test Homogenity of Variance). Dasar pengambilan keputusan yang
digunakan adalah dengan menggunakan nilai signifikansi (p-value).
Tests of Normality
.149 35 .048 .941 35 .059ROS
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Kolmogorov-Smirnova
Shapiro-Wilk
Lil liefors Significance Correctiona.
Tests of Normality
.059 34 .200* .979 34 .755ROSStatistic df Sig. Statistic df Sig.
Kolmogorov-Smirnova
Shapiro-Wilk
This is a lower bound of the true significance.*.
Lil liefors Significance Correctiona.
Data dapat dikatakan memiliki homogenitas jika nilai signifikansi (p-
value) lebih besar dari alpha yang digunakan yaitu 0,050
Berdasarkan hasil analisis yang dilakukan didapatkan nilai
signifikansi (p-value) sebesar 0,137 untuk kelompok 1 kali injeksi dan
0,595 untuk kelompok 2 kali injeksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa
nilai signifikansi (0,137 dan 0,595) lebih besar dari alpha yang
digunakan (0,050). Sehingga dapat disimpulkan bahwa ragam data
antar perlakuan yang diamati adalah homogen, dengan kata lain
asumsi homogenitas ragam terpenuhi.
Tabel 5.9 Uji Homogenitas Kelompok 1 Kali Injeksi
Tabel 5.10 Uji Homogenitas Kelompok 2 Kali Injeksi
Karena data yang didapat memiliki distribusi yang normal dan
homogen, maka syarat untuk melakukan pengujian Uji One-Way
ANOVA telah terpenuhi.
5.2.8 Uji One-Way ANOVA Kadar ROS
Jika data sudah memenuhi asumsi distribusi normal dan homogen,
maka dapat dilanjutkan ke uji ANOVA. Uji One-Way ANOVA
mempunyai tujuan untuk mengetahui perbedaan yang signifikan antara
Test of Homogeneity of Variances
ROS
1.795 6 28 .137
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
Test of Homogeneity of Variances
ROS
.777 6 27 .595
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
kelompok perlakuan terhadap kadar ROS. Dasar pengambilan
keputusan berdasarkan hipotesis yang diajukan adalah dengan
menggunakan nilai signifikansi (p-value), di mana p-value yang lebih
kecil dari alpha (0,05) menunjukkan bahwa paling tidak terdapat dua
kelompok yang mempunyai rerata ROS yang berbeda maknanya
Tabel 5.11 Uji ANOVA Kelompok 1 Kali Injeksi
Tabel 5.12 Uji ANOVA Kelompok 2 Kali Injeksi
Berdasarkan hasil analisis uji One-Way ANOVA tersebut diperoleh
nilai signifikansi (p-value) sebesar 0,119 untuk kelompok 1 kali injeksi
dan 0,245 untuk kelompok 2 kali injeksi. Hal tersebut menunjukkan
bahwa nilai signifikansi (0,119 dan 0,245) lebih besar dari alpha (0,05).
Sehingga dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan makna
rerata kadar ROS.
ANOVA
ROS
110296.2 6 18382.696 1.885 .119
273059.0 28 9752.107
383355.2 34
Between Groups
Within Groups
Total
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
ANOVA
ROS
52944.444 6 8824.074 1.415 .245
168415.0 27 6237.592
221359.4 33
Between Groups
Within Groups
Total
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
5.2.9 Uji Pengujian Berganda (Multiple Comparisons) Kadar ROS
Dengan ditemukannya pengaruh signifikan pada perlakuan antar
kelompok terhadap kadar ROS, maka dilakukan pengujian lebih lanjut
untuk mengetahui perbedaan yang lebih spesifik antara perlakuan
kepada kelompok terhadap kadar ROS. Metode post hoc test
dilakukan sebagai uji pembandingan berganda (Multiple Comparison)
menggunakan uji Tukey.
Hasil uji post hoc dapat dilihat pada Lampiran. Tidak terdapat
perbedaan kadar ROS pada semua kelompok karena p>0.005.
5.2.10 Uji T Berpasangan Kadar ROS
Uji T berpasangan ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan kadar
ROS pada tikus yang diberi diet normal dan diet hiperkalori. Uji T
berpasangan ini dilakukan pada masing-masing dosis yaitu 15 μg/mL,
30 μg/mL, dan 45 μg/mL serta pada masing-masing jumlah injeksi,
yaitu 1 kali injeksi dan 2 kali injeksi.
Tabel 5.13 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 15 μg/mL
Tabel 5.14 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 30 μg/mL
Independent Samples Test
1.792 .218 -.397 8 .701 -36.9700 93.01753 -251.469 177.52882
-.471 6.781 .653 -36.9700 78.51942 -223.862 149.92201
Equal variances
assumed
Equal variances
not assumed
ROSF Sig.
Levene's Test for
Equality of Variances
t df Sig. (2-tailed)
Mean
Difference
Std. Error
Difference Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
t-test for Equality of Means
Independent Samples Test
3.968 .082 -.137 8 .894 -4.8487 35.31967 -86.29597 76.59863
-.167 5.937 .873 -4.8487 29.04752 -76.10857 66.41124
Equal variances
assumed
Equal variances
not assumed
ROSF Sig.
Levene's Test for
Equality of Variances
t df Sig. (2-tailed)
Mean
Difference
Std. Error
Difference Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
t-test for Equality of Means
Tabel 5.15 Uji T Berpasangan Kelompok 1 Kali Injeksi Dosis 45 μg/mL
Tabel 5.16 Uji T Berpasangan Kelompok 2 Kali Injeksi Dosis 15 μg/mL
Tabel 5.17 Uji T Berpasangan Kelompok 2 Kali Injeksi Dosis 30 μg/mL
Tabel 5.18 Uji T Berpasangan Kelompok 2 Kali Injeksi Dosis 45 μg/mL
Dari data diatas, nilai signifikan p pada masing-masing
kelompok >0,005 yaitu 0,71 untuk kelompok 1 kali injeksi dengan
dosis 15 μg/mL, 0,894 dengan dosis 30 μg/mL dan 0,848 dengan
dosis 45 μg/mL. Sedangkan untuk kelompok dengan 2 kali injeksi,
0,415 dengan dosis 15 μg/mL, 0,313 dengan dosis 30 μg/mL dan
0,125 dengan dosis 45 μg/mL. Sehingga dari uji T berpasangan ini
Independent Samples Test
.212 .657 .198 8 .848 10.0001 50.55574 -106.582 126.58183
.190 5.708 .856 10.0001 52.61340 -120.355 140.35543
Equal variances
assumed
Equal variances
not assumed
ROSF Sig.
Levene's Test for
Equality of Variances
t df Sig. (2-tailed)
Mean
Difference
Std. Error
Difference Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
t-test for Equality of Means
Independent Samples Test
.221 .653 -.867 7 .415 -56.2270 64.88060 -209.645 97.19119
-.870 6.669 .414 -56.2270 64.60193 -210.535 98.08055
Equal variances
assumed
Equal variances
not assumed
ROSF Sig.
Levene's Test for
Equality of Variances
t df Sig. (2-tailed)
Mean
Difference
Std. Error
Difference Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
t-test for Equality of Means
Independent Samples Test
.477 .510 -1.077 8 .313 -35.8178 33.24832 -112.489 40.85297
-1.077 7.797 .314 -35.8178 33.24832 -112.837 41.20149
Equal variances
assumed
Equal variances
not assumed
ROSF Sig.
Levene's Test for
Equality of Variances
t df Sig. (2-tailed)
Mean
Difference
Std. Error
Difference Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
t-test for Equality of Means
Independent Samples Test
.013 .912 -1.712 8 .125 -82.9090 48.43240 -194.594 28.77633
-1.712 7.929 .126 -82.9090 48.43240 -194.769 28.95065
Equal variances
assumed
Equal variances
not assumed
ROSF Sig.
Levene's Test for
Equality of Variances
t df Sig. (2-tailed)
Mean
Difference
Std. Error
Difference Lower Upper
95% Confidence
Interval of the
Difference
t-test for Equality of Means
menunjukkan hasi yang tidak signifikan, yaitu tidak terdapat
perbedaan antara kelompok dengan diet normal dan diet hiperkalori.
BAB VI
PEMBAHASAN
6.1 Pembahasan Hasil Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek paparan profilin
Toxoplasma gondii terhadap kadar Reactive Oxygen Species (ROS) pada
tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar. Terdapat 2 kelompok perlakuan
utama, yaitu kelompok yang diinjeksi 1 kali dan yang diinjeksi 2 kali.
Injeksi profilin dilakukan intraperitoneal sesuai dosis yang sudah
ditentukan yaitu 15 μg/mL, 30 μg/mL, dan 45 μg/mL. Pada minggu ke 15
setelah injeksi, dilakukan pembedahan untuk pengambilan plasma tikus
yang nantinya akan disentrifugasi dan serumnya digunakan untuk
penghitungan kadar ROS. Kadar ROS dihitung dengan metode ELISA.
Profilin Toxoplasma gondii yang digunakan merupakan ekstrak dari
takizoid Toxoplasma gondii dengan strain tertentu yang RNA profilinnya
dipecah dan diligasi ke dalam vector pET30a(+) serta diubah menjadi
Eschericia coli DH5a yang akan diambil plasmidnya dan diperbanyak
(Yuan, et al., 2015). Proses tersebut dilakukan di Amerika dan hasil
profilin rekombinannya diimpor ke Indonesia.Cara ekstraksi yang bersifat
molekuler ini dipakai karena reaktif terhadap antibodi telah dibuktikan
pada hewan coba kelinci dan gen yang dikode spesifik gen profilin
Toxoplasma gondii sehingga dapat menunjang hipotesis lebih kuat.
Toxoplasma gondii memiliki profilin yang berperan untuk berikatan
dengan TLR-11 untuk meningkatkan ekspresi dari IL-12. IL-12 merupakan
sitokin yang sebagian besar dihasilkan oleh sel fagositik sebagai respon
terhadap bakteri dan parasit intraseluler. IL-12 akan mengaktivasi sel NK
dan dan sel T. Selanjutnya akan terbentuk IFN ɣ yang berperan dalam
mengaktivasi sel fagositik dan inflamasi sel (Yarovinsky, 2014). Salah satu
proses inflamasi juga terjadi di jaringan adiposa, sehingga menyebabkan
disfungsi adiposa yang menyebabkan terjadinya obesitas.
Terdapat beberapa mekanisme mengenai obesitas yang
menimbulkan stress oksidatif. Pertama adalah melalui oksidasi asam
lemak di mitokondria dan peroksisom yang dapat menghasilkan ROS
melalui reaksi oksidasi. Oksidasi asam lemak yang terjadi di mitokondria
akan menghasilkan NADH yang selanjutnya juga dapat memproduksi
ROS. Selain itu konsumsi oksigen yang berlebihan pada penderita
obesitas juga akan membentuk radikal bebas di rantai pernafasan di
mitokondria. Selanjutnya adalah dengan meningkatnya jaringan adiposa,
aktivitas enzim antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD), catalase
(CAT), dan glutathione peroxidase (GPx) ditemukan menurun (Sanchez,
et al., 2011) sedangkan kadar ROS akan meningkat.
Dari data hasil pengukuran ROS pada tabel 5.2 dan tabel 5.3, kadar
ROS ditemukan paling tinggi justru pada kelompok dengan 1 kali injeksi.
Pada kelompok dengan 2 kali injeksi baik diet normal maupun diet
hiperkalori, kadar ROS justru lebih rendah. Hasil penelitian ini berlawanan
dengan hipotesa penelitian. Hal ini bertentangan dengan landasan teori
yang menyatakan bahwa kadar ROS akan meningkat jika dosis profilinnya
juga meningkat.
Pertama, penelitian ini ingin membandingkan kadar ROS pada 2
kelompok perlakuan, yakni yang hanya 1 kali injeksi profilin dan 2 kali
injeksi profilin. Pada kelompok 1 kali injeksi, kadar ROS naik karena
terdapat stress oksidatif yang diakibatkan proses inflamasi oleh sel NK
(Natural Killer) dan sel T dari IFN-gamma. Stress oksidatif merupakan
akibat dari ketidakseimbangan antara kadar oksidan dengan anti oksidan
(Agarwal et al., 2005). Karena tubuh mempunyai sistem homeostasis yang
selalu berusaha membuat keadaan seimbang, maka saat kadar ROS naik,
tubuh akan mengeluarkan enzim antioksidan sebagai bentuk pertahanan
sekaligus penjaga agar tetap seimbang (Poljsak, 2013). Enzim antioksidan
sendiri adalah senyawa yang mampu menurunkan aktivitas stress
oksidatif dalam tubuh dengan memberikan elektron kepada senyawa yang
merupakan oksidan (Winarsi, 2007). Beberapa contoh dari enzim
antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), dan
katalase. Maka saat injeksi ke dua kadar ROS lebih rendah karena enzim-
enzim antioksidan sudah dikeluarkan saat injeksi pertama dan mulai
mengeliminasi ROS yang telah diproduksi pada injeksi pertama.
Namun pada uji ANOVA menunjukkan hasil yang tidak signifikan,
yaitu tidak terdapat perbedaan makna rerata kadar ROS antar kelompok 1
kali injeksi dan 2 kali injeksi. Hal ini dikarenakan kemungkinan adanya
pengaruh dari variabel lain selain frekuensi dan dosis injeksi, yaitu diet
yang dikonsumsi.
Maka selanjutnya dilakukan uji T berpasangan untuk tikus dengan
diet normal dan diet hiperkalori untuk mengetahui perbedaan kadar ROS
yang disebabkan oleh perbedaan diet. Namun nilai p semua kelompok
yang >0,005 menunjukkan hasil yang tidak signifikan, yaitu tidak terdapat
perbedaan kadar ROS pada tikus dengan diet normal dan diet hiperkalori.
Sehingga dari uji statistik yang sudah dilakukan, dapat ditarik
kesimpulan bahwa tidak terjadi perubahan kadar ROS yang bermakna
pada semua kelompok tikus coba. Selanjutnya bahwa frekuensi injeksi,
dosis profilin, dan diet yang diberikan juga tidak mempengaruhi kadar
ROS pada tikus secara signifikan.
Hal ini kemungkinan disebabkan karena pengukuran kadar ROS
hanya dilakukan pada minggu ke 15, yaitu sekitar hari ke 105. Padahal
untuk mengukur kadar ROS yang signifikan, lebih baik ditentukan fase
yang sedang terjadi terlebih dahulu melalui PCR. Untuk fase
toksoplasmosis akut, terjadi sekitar hari ke 5 sampai 7 setelah infeksi.
Sedangkan fase kronis toksoplasmosis, terjadi sekitar hari ke 45 setelah
infeksi. Pada fase akut, didapatkan peningkatan kadar GSH dan GPx
sehingga menimbulkan penurunan ROS. Selanjutnya pada fase kronis,
kadar GSH dan GPx akan menurun sehingga didapatkan peningkatan
kadar ROS. Pada penelitian ini, kadar ROS yang diukur hanya 1 kali yaitu
pada hari ke 105, sehingga sangat memungkinan sudah terjadi
peningkatan dan penurunan yang berulang kali pada kadar ROS sehingga
menyebabkan hasil yang tidak signifkan (Bahrami, et al., 2016).
Penyebab lain yang menimbulkan hasil tidak signifikan adalah
metode pengukuran ROS yang kurang sesuai. Radikal bebas memiliki
waktu paruh yang sangat pendek, sehingga susah diperiksa di
laboratorium (Poljsak, 2013). Sedangkan sampel serum dari penelitian ini
disimpan hingga hampir 1 bulan. Sehingga sangat memungkinkan terjadi
kesalahan dalam hasil ROS yang dikarenakan waktu penyimpanan yang
terlalu lama.
6.2 Implikasi terhadap Bidang Kedokteran
Penelitian ini diharapkan dapat menambah wawasan tentang
hubungan infeksi profilin Toxoplasma gondii terhadap kadar ROS sebagai
proses terjadinya inflamasi di dalam tubuh. Peningkatan kadar ROS pada
infeksi Toxoplasma gondii dapat menginduksi proses stress oksidatif
sehingga terbentuk ROS, namun dalam penelitian ini belum ditemukan
hubungan antara dosis profilin dengan kadar ROS
6.3 Keterbatasan Penelitian
Kelompok kontrol yang dilakukan penelitian ini adalah tikus yang
hanya diberi pakan normal. Seharusnya dibuat juga kelompok tikus kontrol
yang pakannya adalah hiperkalori, sehingga bisa mengetahui hubungan
dari diet hiperkalori dengan kadar ROS secara lebih pasti.
BAB VII
PENUTUP
7.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil analisa dan pembahasan yang telah dilakukan
pada bab sebelumnya, maka dapat ditarik kesimpulan bahwa paparan
profilin Toxoplasma gondii tidak memberikan efek terhadap kadar ROS
pada tikus Rattus Norvegicus Strain Wistar.
7.2 Saran
Saran-saran yang dapat diberikan untuk penelitian selanjutnya
adalah :
1. Ditambahkan kelompok kontrol positif, yaitu tikus yang hanya diberi diet
hiperkalori. Sehingga jika terdapat kelompok ini, dapat mengukur
perubahan kadar ROS secara lebih pasti menggunakan uji ANOVA.
2. Dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai dosis profilin yang dapat
menyebabkan peningkatan kadar ROS. Karena dalam penelitian ini, dosis
profilin yang diujikan memberikan hasil yang tidak memiliki hubungan
terhadap kadar ROS.
3. Seharusnya ditentukan fase yang sedang terjadi melalui PCR, yaitu akut
toksoplasmosis atau kronis toxoplasmosis karena setiap fasenya memiliki
mekanisme masing-masing dalam pembentukan maupun eliminasi dari
kadar ROS sebagai salah satu hasil dari stress oksidatif
4. Proses pengukuran kadar ROS pada serum harus dilakukan sesegera
mungkin untuk mencegah perubahan kadar ROS karena waktu paruh
ROS sangat pendek.
DAFTAR PUSTAKA
1. Anonymous. 2013. European Association for Study Obesity. Obesity facts
and figures (Online), (http://easo.org/education-portal/obesity-facts-
figures/, diakses 2 Oktober 2016).
2. Anonymous. 2013. Centers for Disease Control and Prevention.
Parasites-Toxoplasmosis (Toxoplasma infection), (Online).
(https://www.cdc.gov/parasites/toxoplasmosis/, diakses 2 Oktober 2016).
3. Anonymous. 2016. Health Status. The Hidden Dangers of Your Excess
Abdominal Fat (Online), (www.healthstatus.com, diakses 20 Oktober
2017).
4. Anonymous. 2016. WHO. Obesity and overweight (Online),
(http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs311/en/, diakses 2 Oktober
2016).
5. Atkinson R.L., Dhurandhar N.V., Allison D.B., Bowen R.L., Israel B.A.,
Albu J.B., Augustus A.S. Human adenovirus-36 is associated with
increased body weight and paradoxical reduction of serum
lipids. Interntional Journal of Obesity. 2005;29:281–286.
6. Bahrami Somayeh, Ali Shahriari, Mehdi Tavalla, Somayeh Azadmanesh,
Hossein Hamidinejat. Blood Levels of Oxidant/Antioxidant Parameters in
Rats Infected with Toxoplasma gondii. Oxidative Medicine and Cellular
Longevity. 2016.
7. Balentine. 2015. Medicine Net. Obesity (Online),
http://www.staff.science.uu.nl/~ooste108/ExpC/website7/v3/obesitypage3.
html, diakes 2 Oktober 2016)
8. Bitko Vira, Anja Oldenburg, Nicolle E. Garmon, Sailen Barik. Profilin is
required for viral morphogenesis, synctium formation, and cell-specific
stress fiber induction by respiratory synctial virus. BMC Mirobiology.
2003;3:9.
9. Brooks Geo F., Janet S. Butel, Stephen A. Morse. 2004. Jawetz, Melnick
& Adelberg: Mikrobiologi Kedokteran. Huriawati Hartanto, et al.
(penerjemah), 2008, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal.699-
700.
10. Chahaya Indra. Epidimiologi “Toxoplasma gondii”. Jurnal Fakultas
kesehatan Mayarakat Universitas Sumatera Utara, 2003, 1-2.
11. Chevion, S., Moran, D.S., & Heled, Y., 2003, Serum antioxidant stress
and cell injury after severe physicaal exercise. Proceedings of The United
State of America. 100 (9) : 5119-5123.
12. Desruisseaux, S. M., Nagajyothi, Maria, E. T., Herbert, B. T., and Phillip,
E. S. Adipocyte, Adipose Tissue, and Infectious Disease. Infection and
Immunity. 2007;75 No. 3: 1066-1078.
13. Furukawa S., Fujita T., Shimabukuro M., Iwaki M., Yamada Y., Nakajima
Y, et al. Increased oxidative stress in obesity and its impact on metabolic
syndrome. The Journal of Clinical Investigation. 2004;114 (12):1752-61.
14. Gandahusada, S., Ilahude, H.H., dan Pribadi, W., 2003. Parasitologi
Kedokteran. Edisi ke-3. Jakarta: FKUI.
15. Gibbon B. C., Staiger C. J. Profilin. Actin: a Dynamic Framework for
Multiple Plant Cell Functions. 2000;45–65.
16. Guyton, A.C., dan Hall, J.E., 2007. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi
11. Jakarta: EGC, 917-918.
17. Huang De, Chenchen Li, Huafeng Zhang. Hypoxia and cancer cell
metabolism. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2014;46(3).
18. Iskandar Agustin, Muhammad Rasjad Indra, Satuman. 2011. Profilin
sebagai biomarker disfungsi adiposit (Studi hubungan disfungsi adiposit
dengan infeksi Toxoplasma gondii pada individu obese). (Abstract).
19. Iskandar Agustin, Muhammad Rasjad Indra, Satuman, Novi Khila Firani,
Titin Andri Wihastuti. The levels of Toxoplasma gondii profilin and
adiponectin in obese patients complicated with or without metabolic
syndrome as compared to non-obese patients. Asian Pacific Journal of
Tropical Disease. 2016; 6(4): 265-268.
20. Jones Jeffrey L, Monica E. Parise, Anthony E. Fiore. Neglected Parasitic
Infections in the United States : Toxoplasmosis. The American Journal of
Tropical Medicine and Hygien. 2014;90(5):794-799.
21. Kucera K., Koblansky AA., Saunders LP., Frederick KB., De La Cruz EM.,
Ghosh S., et al. Structure-based analysis of Toxoplasma gondii profilin: a
parasite-specific motif is required for recognition by Toll-like receptor 11.
Journal of Molecular Biology. 2010;5;403(4):616-29
22. Milner JJ, Beck MA. Micronutrients, immunology and inflammation The
impact of obesity on the immune response to infection. The Proceedings
of the Nutrition Society. 2012;71(2):298-306
23. Nascimento, A., & Costa, A. (2006). Overweight induced by high-fat diet
delays rat cutaneous wound healing. British Journal of Nutrition, 96(6),
1069-1077
24. Plattner, F., Yarovinsky, F., Romero S., Didry D., Carlier M.F., Sher A.,
Soldatifavre D. Toxoplasma Profilin is essential for host cells invasion and
TLR-11-dependent induction of an Interleukin-12 Response. Cell Host
Microbe. 2008;3 (2): 77-87
25. Poljsak, B., Šuput, D. and Milisav, I. Achieving the balance between ROS
and antioxidants: When to use the synthetic antioxidants. Oxidative
Medicine and Cellular Longevity. 2013:1--11, 956792
26. Racette SB., Deusinger SS., Deusinger RH. Obesity: overview of
prevalence, etiology, and treatment. Journal of the American Physical
Therapy Association. 2003;83(3):276-88
27. Reeves Gloria M., Sara Mazaheri, Soren Snitker, Patricia Langenberg,
Ina Giegling, Annette M. Hartmann, et al. A Positive Association between
T. Gondii Seropositivity and Obesity. Frontiers in Public Health. 2013;
1:73.
28. Sanchez Alba Fernandez, Eduardo Madriqal-Santillan, Mirandeli Bautista,
Jaime Essquivel Soto, Angel Morales Gonzalez, Cesar Esquivel Chirino,
Irene Durante Montiel, et al. Inflammation, Oxidative Stress, and Obesity.
International Journal of Molecular Sciences. 2011;12(5):3117-3132.
29. Sudjari, M. Rasjad Indra, Hendra Susanto, Lulik Inggarwati. 2010. Profilin
menginduksi ekspresi TLR-11, IL-6, dan TNF- sebagai kandidat prediktor
disfungi adiposit akibat infeksi Toxoplasma gondii (Abstract). Jurnal
Kedokteran Brawijaya, 26(2);91-95.
30. Sugondo, S., 2007. Obesitas. Dalam : Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam
Jilid III Edisi IV. Jakarta : Pusat Penerbitan IPD FKUI, 1919-1924.
31. Trinchieri G. Interleukin-12: a proinflammatory cytokine with
immunoregulatory functions that bridge innate resistance and antigen-
specific adaptive immunity. Annual Review of Immunology. 1995;13:251-
76.
32. Weaver JU. Classical endocrine diseases causing obesity. Frontiers of
Hormone Research. 2008,36:212-28
33. Widayati E. Oksidasi biologi, radikal bebas, dan antioksidan. Jurnal
Fakultas Kedokteran Universitas Sultan Agung, 2012.
34. Wilborn Colin, Jacqueline Beckham, Bill Campbell, Travis Harvey, Melyn
Galbreath, Paul La Bounty. Obesity: Prevalence, Theories, Medical
Consequences, Management, and Research Directions. Journal of the
International Society of Sports Nutritions. 2005; 2(2): 4–31.
35. Witke W., Sutherland J.D., Sharpe A., Arai M., Kwiatkowski D.J. Profilin I
is essential for cell survival and cell division in early mouse
development. Proceeding of the National Academy of Sciences of The
United States of America. 2001;98:3832–3836.
36. Yarovinsky Felix. Innate immunity to Toxoplasma gondii infection. Nature
Reviews of Immunology. 2014;14:109-121.
37. Yaudza N. Toxoplasma gondii. Digital Library Universitas Sumatera
Utara. 2011.