BIOTRANSFORMASI TOKSIKAN DAN EFEK TOKSIKAN

DISUSUN OLEH :

ASIH LARASATI ( H31112002 ) NINI ASTUTI ALWI ( H31112019 )

JURUSAN KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS HASANUDDIN2013

C. BIOTRANSFORMASI TOKSIKAN DAN EFEK TOKSIKANBIOTRANSFORMASI TOKSIKANSuatu toksikan diserap melalui berbagai jalur. Setelah diabsorpsi, toksikan terdistribusi ke berbagai bagian tubuh termasuk organ ekskresi sehingga siap dikeluarkan dari tubuh. Banyak zat kimia yang mengalami biotransformasi atau transformasi metaholit di dalam tubuh. Tempat yang terpenting untuk proses ini adalah hati, meskipun proses ini juga terjadi di paru-paru, lambung, usus, kulit dan ginjal. Crosby (1998) membagi mekanisme reaksi biotransformasi toksikan ke dalam dua jenis utama yaitu :a. Reaksi fase I (Reaksi Penguraian), yaitu: pemutusan hidrolitik, oksidasi dan reduksi. Umumnya reaksi fase I mengubah bahan yang masuk ke dalam sel menjadi lebih bersifat hidrofilik (mudah larut dalam air) daripada bahan asalnya.b. Reaksi fase II (Reaksi Konjugasi), terdiri dari reaksi sintesis dan konjugasi. Oleh reaksi konjugasi maka zat yang memiliki gugus polar (-OH, -NH2, -COOH), dikonjugasi dengan pasangan reaksi yang berasal dari tubuh sendiri dan lazimnya diubah menjadi bentuk yang larut dalam air, dan dapat diekskresikan dengan baik oleh ginjal. Reaksi fase II ini merupakan proses biosintesis yang mengubah bahan asing atau metabolit dari fase I membuat ikatan kovalen dengan molekul endogen menjadi konjugat.Reaksi penguraian (fase 1) biasanya disusul oleh reaksi konjugasi (fase 2).

REAKSI PENGURAIANa. Pemutusan hidrolitikBila suatu molekul dihidrolisis akan dipecah menjadi dua molekul karena pengambilan satu molekul air. Contohnya adalah pemutusan ester oleh esterase dengan pembentukan alkohol dan asam. Namun dalam keadaan tertentu stabilitas ester yang toksik dapat merupakan kerugian, misalnya ester ftalat yang digunakan sebagai peliat (plasticizer) pada pembuatan bahan plastik. Ester ini sangat lipofil dan dapat berdifusi keluar dari wadah plastik, misalnya ke dalam bahan makanan yang mengandung lemak yang disimpan didalamnya atau wadah plastik yang digunakan pada transfusi darah. Bila peliat ini stabil terhadap berbagai esterase, maka organisme tidak mampu untuk menguraikannya menjadi alkohol dan asam dan tidak dapat menguraikannya.Senyawa-senyawa demikian yang stabil terhadap hidrolisis enzimatik dan sekaligus peliat yang lipofil, memperlihatkan kecenderungan tertimbun dalam jaringan lemak organisme.Mamalia memperlihatkan kadar esterase yang tinggi di dalam plasma dan di hati. Jadi kapasitas hidrolisis esternya tinggi tetapi sebaliknya pada serangga. Keadaan ini telah dimanfaatkan pada pengembangan jenis insektisida organofosfat yang bekerja selektif. Zat ini mengandung suatu gugus ester tambahan dalam molekul fosfat organik yang dihidrolisis oleh esterase menjadi asam karboksilat dan alkohol. Mamalia mampu untuk mendetoksifikasi dengan cepat zat tersebut dengan hidrolisis. Karena serangga lebih sedikit esterasenya, maka mereka tidak mampu untuk mendetoksifikasi senyawa ini. Tetapi ada pula usaha untuk pengembangan senyawa fosfat organik dengan toksisitas yang lebih tinggi pada manusia, seperti pengembangan senyawa fosfat organik sebagai gas saraf.Kecuali ester, amida juga dapat dihidrolisis oleh pengaruh katalisis amidase dengan pembentukan asam dan amina. Dalam hal ini stabilisasi mungkin dilakukan dengan memasukkan gugus amino dari substituen alkil yang bertetangga. Pada umumnya amida asam lebih stabil daripada ester karenanya juga lebih lambat dihidrolisis. Selain itu plasma mengandung relatif lebih sedikit amidase dibandingkan dengan esterase.b. OksidasiEnzim yang berperanan pada oksidasi zat asing berada di dalam sel, terutama di dalam retikulum endoplasma sel hati. Penyelidikan di bidang ini sering dilakukan dengan mikrosoma, yang diperoleh dari retikulum endoplasma setelah homogenisasi sel hati. Substrat yang paling cocok untuk reaksi oksidasi ini adalah senyawa alkohol, aldehida, asam karboksilat, senyawa dengan rantai samping alifatik yang tidak bercabang dan amina alifatik.Senyawa asam fenilalkil karboksilat, fenilalkilamina dan sebagainya dengan rantai samping yang panjang tidak bercabang, dioksidasi menjadi asam benzoat, bila rantai sampingnya mengandung atom karbon berjumlah ganjil dan menjadi asam fenilasetat, bila rantai sampingnya mengandung atom karbon berjumlah genap. Proses demikian merupakan mekanisme detoksifikasi yang penting.Proses penguraian secara oksidasi yang serupa berperanan pada proses self-purification sungai dan kanal. Sabun yang klasik, yaitu garam natrium dan kalium dari asam-asam lemak yang panjang, tidak bercabang, merupakan substrat yang baik untuk banyak mikroorganisme yang terdapat di dalam air. Mula-mula deterjen sintetik dibuat dari parafin (hidrokarbon) yang bercabang banyak yang dihasilkan sebagai produk samping pada pengilangan minyak bumi karena tidak cocok untuk dipakai sebagai bahan bakar. Zat hidrokarbon yang bercabang ini tahan terhadap proses oksidasi yang berperanan dalam self-purification air, sehingga merupakan deterjen kuat yaitu deterjen yang tidak dapat diuraikan. Mereka menyebabkan pencemaran air yang berat dan terus menerus yang nampak dari pembentukan busa dalam sungai dan kanal. Salah satu tanda pertama dari pencemaran air oleh deterjen adalah menghilangnya serangga yang bergerak di atas air. Deterjen menurunkan tegangan permukaan, sehingga serangga tenggelam ke dalam air dan mati terbenam. Solusinya adalah dengan menggunakan deterjen dengan rantai samping yang tidak bercabang, jadi zat yang dapat diuraikan secara biologi. Deterjen lunak yaitu deterjen yang dapat diuraikan sudah banyak digunakan sekarang.Oksidasi xenobiotika selanjutnya dapat menghasilkan pembentukan peroksida tokson atau pembentukan H2O2. Peroksida ini kemudian menyerang substrat biologi dan dengan cara ini menimbulkan lesi kimia, misalnya methemoglobinemia.c. ReduksiSebagai reaksi biotransformasi, reaksi reduksi relatif jarang terjadi. Senyawa nitro dapat direduksi menjadi amina dan senyawa azo diuraikan melalui reduksi menjadi amina yang sesuai. Senyawa keton dan aldehida yang tahan oksidasi mungkin terjadi reduksi menjadi senyawa alkohol yang sesuai.

REAKSI KONJUGASIReaksi konjugasi yang penting adalah konjugasi dengan asam glukuronat, asam amino (terutama glisina), asam sulfat, dan asam asetat. Kecuali pada konjugasi dengan asam asetat atau reaksi metilasi, pada konjugasi selalu dimasukkan gugus asam ke dalam molekul yang meningkatkan sifat hidrofil secara nyata. Konjugat asam ini cepat diekskresikan oleh ginjal melalui proses aktif. Reaksi konjugasi bersifat sebagai reaksi detoksifikasi, karena produk konjugasi hampir selalu tidak aktif secara biologi. Namun dalam beberapa kasus konjugat dapat dihidrolisis kembali menjadi senyawa asalnya. Hal ini sering terjadi bila konjugat bersama empedu, mencapai usus.a. Konjugasi dengan asam glukuronatSenyawa alkohol sekunder dan tersier yang dapat cepat dioksidasi dikonjugasi dengan asam glukuronat. Gugus OH-fenolik, gugus karboksil dan gugus NH2 juga dapat dikonjugasi dengan asam glukuronat. Asam glukuronat adalah suatu asam yang relatif kuat, yang mengandung gugus OH-alkohol tambahan dan karena itu sangat hidrofil. Pada pembentukan glukuronida sifat ini dipindahkan ke metabolit.b. Konjugasi dengan glisinaAsam karboksilat, khususnya asam karboksilat yang tidak dapat diuraikan lanjut secara oksidasi, dapat membentuk konjugat dengan glisina. Contohnya adalah asam hipurat yang dibentuk dari asam benzoat dan asam salisilurat yang terjadi dari asam salisilat.c. Konjugasi dengan asam sulfatSenyawa fenol terutama membentuk konjugat dengan asam sulfat sehingga terbentuk ester parsial dari asam sulfat. Residu asam sulfat adalah asam kuat sehingga konjugat sangat hidrofil dan dapat diekskresikan dengan mudah. Karena itu senyawa fenol sering diekskresikan ke dalam urin sebagai ester asam sulfat. Perbandingan antara sulfat organik dan sulfat anorganik meningkat kuat dalam urin setelah penggunaan senyawa fenol atau zat yang diuraikan menjadi senyawa fenol.d. Pembentukan turunan asam merkapturatPada reaksi biotransformasi ini terlibat reaksi konjugasi yang berlangsung melalui beberapa tingkat. Hal ini menyangkut terutama senyawa klor dan brom organik yang pada proses ini atom halogen diganti oleh gugus asam merkapturat. Zat aromatik tertentu juga dapat juga dikonjugasi dengan cara ini.Turunan asam merkapturat sangat hidrofil dan dapat diekskresikan dengan mudah. Turunan asam merkapturat adalah substrat yang baik untuk sistem transpor aktif dalam ginjal dan hati.e. MetilasiMetilasi jarang terdapat dalam lingkup reaksi biotransformasi. Contohnya adalah pembentukan N-metilnikotinamida dari nikotinamida. Basa amonium kuaterner yang dibentuk dengan cara ini adalah hidrofil dan dapat diekskresikan secara aktif. Reaksi ini menghasilkan suatu bioinaktivasi dan menjadi suatu detoksikfikasi meskipun produk yang dihasilkan lebih kurang hidrofil dari zat asal.f. AsetilasiXenobiotika dengan gugus amino yang tidak dapat diuraikan secara oksidasi, sering diasetilasi. Contohnya adalah senyawa amina aromatik, yaitu gugus amino langsung terikat pada cincin aromatik dan senyawa alkilamina yang gugus aminonya terdapat pada atom karbon tersier. Asetilasi sulfonamida menghasilkan penurunan kehidrofilan, sehingga menimbulkan komplikasi kristaluria sebagai kerja samping sulfonamida. Asetilasi dapat mengurangi daya kerja, karena gugus amino yang biasanya bermakna untuk aktivitas biologi tertutup karena asetilasi.

FAKTOR YANG MEMPENGARUHI BIOTRANSFORMASIa. Faktor InstrinsikFaktor penting yang mengontrol jalannya reaksi enzimatik dari bahan asing adalah konsentrasinya dalam pusat aktivitas dari enzim. Konsentrasi ini tergantung pada Lipophilicity, Protein binding, Doses, dan Route administration. Lipophilicity penting karena dapat mengatur banyaknya absorbsi dari xenobiotik dari jalan masuknya (kulit, usus, paru). Bahan kimia yang bersifat lipofilik lebih mudah diabsorbsi dalam darah, sedangkan bahan yang larut dalam air kurang cepat diserap.b. Variabel HostBeberapa kondisi fisiologik, farmakologik, dan faktor lingkungan yang mempengaruhi proses biotranformasi xenobiotik, yaitu: spesies, strain, umur, sex, time of day, enzym induksi, enzym penghambat, status gizi, dan status penyakit.Karena itu, biotransformasi adalah suatu proses yang umumnya mengubah senyawa asal menjadi metabolit, kemudian membentuk konyugat. Tetapi, mungkin yang terjadi hanya salah satu reaksi saja. Misalnya, benzene mengalami oksidasi pada reaksi fase I menjadi fenol, kemudian berkonjugasi dengan asam sulfat pada reaksi fase II. Akan tetapi bila zat kimia yang bereaksi adalah fenol, maka hanya terjadi kanyugasi dengan asam sulfat tanpa reaksi fase I.. Metabolit dan konyugasi biasanya lebih larut dalam air dan lebih polar, karenanya lebih mudah diekskresi.Oleh karena itu, biotransformasi dapat dianggap sebagai mekanisme ketoksifikasi organisme pejamu. Tetapi perlu diingat bahwa dalam kasus tertentu metabolit dapat lebih toksik dari pada senyawa asalnya. Reaksi semacam ini dikenal dengan bioaktivasi.Senyawa tertentu yang stabil secara kimia dapat diubah menjadi metabolit reaktif secara kimia. Reaksi ini biasanya diaktalisis oleh system-sistem monooksigenase yang bergantung pada sitokrom P-450, tetapi enzim-enzim lian termasuk enzim dari flora usus, juga berperan dalam kasus tertentu. Metabolit reaktif seperti epoksid dapat terikat secara kovalen pada makromolekul sel dan menyebabkan nekrosis dan atau kanker. Metabolit lain, missal radikal bebas dapat menyebabkan peroksidasi lipid dan mengakibatkan kerusakan jaringan. Misalnya, karbon tetraklorida membentuk radikal triklorometil yang menyebabkan peroksidasi lemak tak jenuh dan terikat secara kovalen pada protein dan lemak tek jenuh.

EFEK TOKSIKAN Penggunaan bahan kimia oleh manusia terutama sebagai bahan baku di dalam industri semakin hari semakin meningkat. Walaupun zat kimia yang sangat toksik sudah dilarang dan dibatasi pemakaiannya, seperti pemakaian tetra-etil timbale (TEL) pada bensin, tetapi pemaparan terhadap zat kimia yang dapat membahayakan tidak dapat dielahkan.Pemaparan bahan-bahan kimia terhadap manusia bias bersifat kronik dan akut. Pemaparan akut biasanya terjadi karena suatu kecelakaan atau disengaja (pada kasus bunuh diri atau dibunuh), dan pemaparan kronik biasanya dialami para pekerja terutama di lingkungan industri- industri kimia.Efek toksik dari bahan-bahan kimia sangat bervariasi dalam sifat, organ sasaran, maupun mekanisme kerjanya. Beberapa bahan kimia dapat menyebabkan cedera pada tempat yang kena bahan tersebut (efek lokal), bias juga efek sistemik setelah bahan kimia diserap dan tersebar ke bagian organ lainnya. Efek toksik ini dapat bersifat reversibel artinya dapat hilang dengan sendirinya atau irreversibel yaitu akan menetap atau bertambah parah setelah pajanan toksikan dihentikan. Efek irreversibel (efek Nirpulih) di antaranya karsinoma, mutasi, kerusakan syaraf, dan sirosis hati. Efek toksikan reversibel (berpulih) bila tubuh terpajan dengan kadar yang rendah atau untuk waktu yang singkat, sedangkan efek nirpulih terjadi bila pajanan dengan kadar yang lebih tinggi dan waktu yang lama.Efek toksik atau toksisitas suatu bahan kimia dapat didefinisikan sebagai potensi bahan kimia untuk meracuni tubuh orang yang terpapar.Potensi bahan kimia untuk dapat menimbulkan efek negatif terhadap kesehatan tergantung terutama pada toksisitas bahan kimia tersebut, dan besarnya paparan. Toksisitas merupakan sifat dari bahan kimia itu sendiri, sedangkan paparan tergantung dari bagaimana bahan itu digunakan, misalnya, apakah bahan dipanaskan, disemprotkan atau dilepaskan ke lingkungan kerja. Tetapi dalam menilai bahaya, perlu diperhitungkan juga kerentanan orang yang terpapar, yang dipengaruhi oleh antara lain jenis kelamin, umur; status gizi. Beberapa konsep telah dikembangkan untuk membantu menggolongkan efek beracun bahan kimia, sebagai berikut:1. Efek akutIstilah efek akut dapat diartikan sebagai paparan singkat dengan efek seketika. Namun pemaparan akut selain dapat menimbulkan efek akut, juga dapat mengakibatkan penyakit kronik, sebagai contoh kerusakan otak yang permanen dapat disebabkan oleh paparan akut senyawa timah putih trialkil atau karena keracunan karbon monoksida berat.2. Efek kronikIstilah kronik dapat diartikan sebagai pemaparan berulang dengan masa tunda yang lama antara paparan pertama hingga timbulnya efek yang merugikan kesehatan.3. Efek akut dan kronikSuatu bahan dapat mempunyai efek akut dan kronik sekaligus. Sebagai contoh pemaparan tunggal karbon disulfida dengan konsentrasi tinggi dapat mengakibatkan hilangnya kesadaran (efek akut), tetapi pemaparan berulang tiap hari selama bertahun-tahun dengan konsentrasi yang jauh lebih rendah yang jika dialami sebagai pemaparan tunggal tidak menimbulkan efek merugikan (efek kronik) dapat mengakibatkan kerusakan pada sistem saraf pusat dan tepi, juga jantung.4. Efek dapat balik (reversible)Efek yang hilang bila pemaparan berhenti/mereda. Sebagai contoh, dermatitis kontak, nyeri kepala dan mual karena terpapar pelarut.5. Efek tidak dapat balik (irreversible)Efek yang tidak akan hilang atau permanen meskipun bahan kimia penyebabnya telah mereda atau hilang. Sebagai contoh, penyakit kanker yang disebabkan oleh pemaparan bahan kimia.6. Efek localEfek berbahaya yang ditimbulkan oleh bahan kimia dibagian permukaan tubuh atau dapat masuk ke dalam tubuh. Sebagai contoh, luka bakar pada kulit7. Efek sistemikEfek suatu bahan kimia pada organ tubuh atau cairan tubuh setelah penyerapan atau penetrasi ke dalam organ atau cairantubuh. Sebagai contoh, masuknya bahan-bahan kimia seperti timbal, benzen, kadmium, raksa dan sebagainya dapat menyebabkan anemia, gangguan saraf, dan sebagainya.8. Efek sinergisEfek gabungan dari lebih dari satu bahan kimia. Efek gabungan ini dapat lebih parah dari efek yang dimiliki oleh masing-masing bahan kimia.Berdasarkan sifat bahayanya, toksisitas dapat digolongkan sebagai berikut:a. Korosif Merusak (membakar) jaringan hidup apabila kontak. Sebagai contoh, larutan asam pekat seperti sulfat atau basa seperti soda api dapat menimbulkan luka bakar.b. Iritan Menimbulkan iritasi setempat atau peradangan pada kulit,hidung, atau jaringan paru.c. SensitizerMenimbulkan reaksi alergi. Seseorang yang peka terhadap bahan kimia akan mengalami reaksi alergi yang berat, sedang bagi individu yang tidak peka, dosis yang sama tidak akan membahayakan. Bagi individu yang peka, setiap pemaparan berikutnya apakah melalui kontak kulit atau inhalasi akan menimbulkan risiko kesehatan.d. AsfiksianMengganggu pengangkutan oksigen ke jaringan tubuh.Sebagai contoh, antara Iain karbon monoksida dan sianida.e. KarsinogenPenyebab kanker.f. MutagenDapat menimbulkan kerusakan DNA sel . DNA adalah molekul pembawa informasi genetik yang mengendalikan pertumbuhan dan fungsi sel. Kerusakan DNA dalam sel telur atau sperma manusia dapat menurunkan kesuburan; aborsi spontan, cacat lahir, dan penyakit keturunan.g. TeratogenSuatu bahan kimia yang apabila berada dalam aliran darah wanita harnil dan menembus plasenta, mempengaruhi perkembangan janin dan menimbulkan kelainan struktur dan fungsional bawaan atau kanker pada anak. Contoh yang telah diketahui secara luas sebagai teratogen adalah talidomid, yang pada tahun 1960an telah banyak menyebabkan kasus fokomelia (pengecilan lengan dan tungkai sedemikian rupa hingga tungkai dan lengan menempel langsung ke tubuh) pada bayi para wanita yang memakan obat tersebut selama tahap awal kehamilannya.h. FetotoksikanSuatu bahan kimia yang berpengaruh buruk terhadap perkembangan janin sehingga bayi lahir dengan bobot yang rendah.Bahan kimia dapat meracuni sel-sel tubuh atau mempengaruhi organ tertentu yang mungkin berkaitan dengan sifat bahan kimia atau berhubungan dengan tempat bahan kimia memasuki tubuh atau disebut juga organ sasaran. Efek racun bahan kimia atas organ-organ tertentu dan sistem tubuh :1. Paru-paru dan sistem pernafasanEfek jangka panjang terutama disebabkan iritasi (menyebabkan bronkhitis atau pneumonitis).Dalam luka bakar, bahan kimia dalam paru-paru yang dapat menyebabkan udema pulmoner (paru-paru berisi air), dan dapat berakibat fatal. Sebagian bahan kimia dapat mensensitisasi atau menimbulkan reaksi alergik dalam saluran nafas yang selanjutnya dapat menimbulkan bunyi sewaktu menarik nafas, dan nafas pendek. Kondisi jangka panjang (kronis) akan terjadi penimbunan debu bahan kimia pada jaringan paru-paru sehingga akan terjadi fibrosis atau pneumokoniosis.2. HatiBahan kimia yang dapat mempengaruhi hati disebut hipotoksik. Kebanyakan bahan kimia menggalami metabolisme dalarn hati dan oleh karenanya maka banyak bahan kimia yang berpotensi merusak sel-sel hati. Efek bahan kimia jangka pendek terhadap hati dapat menyebabkan inflamasi sel-sel (hepatitis kimia), nekrosis (kematian sel), dan penyakit kuning. Sedangkan efek jangka panjang berupa sirosis hati dari kanker hati.3. Ginial dan saluran kencingBahan kimia yang dapat merusak ginjal disebut nefrotoksin. Efek bahan kimia terhadap ginjal meliputi gagal ginjal sekonyong-konyong (gagal ginjal akut), gagal ginjal kronik dan kanker ginjal atau kanker kandung kemih.4. Sistem syarafBahan kimia yang dapat menyerang syaraf disebut neurotoksin. Pemaparan terhadap bahan kimia tertentu dapat memperlambat fungsi otak. Gejala-gejala yang diperoleh adalah mengantuk dari hilangnya kewaspadaan yang akhirnya diikuti oleh hilangnya kesadaran karena bahan kimia tersebut menekan sistem syaraf pusat. Bahan kimia yang dapat meracuni sistem enzim yang mennuju ke syaraf adalah pestisida. Akibat dari efek toksik pestisida ini dapat menimbulkan kejang otot dan paralisis (lurnpuh). Di samping itu ada bahan kirnia lain yang dapat secara perlahan meracuni syaraf yang menuju tangan dan kaki serta mengakibatkan mati rasa dan kelelahan.5. Darah dan sumsum tulangSejumlah bahan kimia seperti arsin, benzen dapat rnerusak sel-sel darah merah yang menyebabkan anemia hemolitik. Bahan kimia lain dapat merusak surnsum tulang dan organ lain tempat pembuatan sel-sel darah atau dapat menimbulkan kanker darah.6. Jantung dan pembuluh darah (sistem kardiovaskuler)Sejumlah pelarut seperti trikloroetilena dan gas yang dapat menyebabkan gangguan fatal terhadap ritme jantung. Bahan kimia lain seperti karbon disulfida dapat menyebabkan peningkatan penyakit pembuluh darah yang dapat menimbulkan serangan jantung.7. KulitBanyak bahan kimia bersifat iritan yang dapat menyebabkan dermatitis atau dapat menyebabkan sensitisasi kulit dan alergi.Bahan kimia lain dapat menimbulkan jerawat, hilangnya pigmen (vitiligo), mengakibatkan kepekaan terhadap sinar matahari atau kanker kulit.8. Sistem reproduksiBanyak bahan kimia bersifat teratogenik dan mutagenik terhadap sel kuman dalam percobaan. Disamping itu ada beberapa bahan kimia yang secara langsung dapat mempengaruhi ovarium dan testis yang mengakibatkan gangguan menstruasi dan fungsi seksual.9. Sistem yang lainBahan kimia dapat pula menyerang sistem kekebalan, tulang, otot dan kelenjar tertentu seperti kelenjar tiroid.

Target organ dari zat kimia

DAFTAR PUSTAKA

Wisaksono, Satmoko. 2002, Efek Toksik dan Cara Menentukan ToksisitasBahan Kimia,http://www.kalbe.co.id/files/cdk/files/11_EfekToksik.pdf/11_EfekToksik.pdf,diakses tanggal 16 Februari 2012