BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN

BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN

BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTANJl. Pakuan Ciheuleut, PO Box 105 Bogor, Telp/Fax : 0251-8327768,

E-mail : [email protected]

i

KATA PENGANTAR

Kegiatan pengujian benih merupakan hal yang penting dalam produksi semaidan transaksi bibit komersil. Standarisasi metode pengujian dan mutu benihyang telah dihasilkan oleh Balai Litbang Teknologi Perbenihan hanya memuatuji perkecambahan (langsung). Sehingga untuk penyempurnaannya perludilengkapi dengan teknologi uji cepat viabilitas, agar para pengguna memilikialternatif lain dalam melakukan pengujian benih.

Buku ini merupakan kelanjutan dari buku I yang berisi standar prosedur ujicepat viabilitas benih berdasarkan uji tetrazolium topografis, uji hidrogenperoksida, uji eksisi embrio danuji belahuntuk5 jenis benih tanamanhutan (

, , ,

dan ) serta kunci interpretasi benih hidup danbenih mati berdasarkan uji cepat yang digunakan.

Diharapkan informasi ini dapat membantu dan mempermudah para peneliti,akademisi dan laboran dalam melakukan aktivitas pengujian benih, sertapengguna lainnya dalam rangka memperoleh kepastian informasi kualitas benihdengan cepat.

Ucapan terima kasih disampaikan kepada semua pihak yang telah membantu,baik tenaga maupun pikirannya sehingga buku ini dapat tersusun.

Bogor, Desember 2003

NIP. 080052517

Acacia

crassicarpa Enterolobium cyclocarpum Tectona grandis Dalbergia

latifolia Agathis loranthifolia

Kepala Balai Litbang Teknologi Perbenihan

Ir. Darmawan Budiantho, MP

KATA PENGANTAR CETAKAN KEDUA

Dalam rangka penyebarluasan hasil penelitian dalam bentuk yang lebih praktis,Balai Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan (BPTPTH) telahmenerbitkan buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan yangmemuat informasi tentang standar prosedur uji cepat viabilitas benihberdasarkan Uji Tetrazolium Topografis; Uji Hidrogen Peroksida; Uji EksisiEmbrio dan Uji Belah untuk 5 jenis benih tanaman hutan, serta kunciinterpretasi benih hidup dan benih mati berdasarkan uji cepat yang digunakan.

Teknologi uji cepat viabilitas benih merupakan alternatif lain dalam melakukanpengujian benih. Informasi tersebut dikemas dalam bentuk praktis, lengkap,informatif dan mudah diaplikasikan untuk mengetahui kualitas benih secaracepat.

Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan memperoleh responyang positif dari: instansi pemerintah; swasta; maupun masyarakat umum.Berkaitan dengan hal tersebut mengakibatkan banyaknya permintaanterhadap buku ini. BPTPTH secara bertahap melakukan pencetakan ulang bukuPedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan, yang di dalam bukucetakan ke dua tersebut telah dilakukan penyempurnaan antara lain namaBalai Litbang Teknologi Perbenihan diubah menjadi Balai Penelitian TeknologiPerbenihan Tanaman Hutan; perbaikan redaksional sebagaimana tercantumpada ralat cetakan sebelumnya; serta penyempurnaan lainnya.

Ucapan terimakasih disampaikan kepada semua pihak yang telah berperandalam penyusunan Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutancetakan ke dua ini, sehingga buku ini dapat disusun dan dicetak ulang kembali.

Semoga buku ini bermanfaat.

Bogor, Desember 2014Kepala Balai,

iii

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR

KATA PENGANTAR CETAKAN KE 2

DAFTAR ISI

DAFTAR TABEL

DAFTAR GAMBAR

DAFTAR LAMPIRAN

I. PENDAHULUAN

II METODE UJI CEPAT VIABILITAS

III. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

IV. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

....................................................................... i

............................................... iii

................................................................................... v

.............................................................................. ix

........................................................................ xi

...................................................................... xiii

.................................................................. 1

1.1. Mutu Benih .................................................................. 1

1.2. Viabilitas ...................................................................... 1

1.3. Pengujian Viabilitas ...................................................... 1

1.4. Uji Cepat Viabilitas ....................................................... 2

1.5. Standarisasi Uji Cepat Viabilitas ..................................... 2

....................................... 5

2.1. Uji Tetrazolium Topografis .............................................

2.2. Uji Hidrogen Peroksida .................................................

2.3. Uji Eksisi Embrio ..........................................................

2.4. Uji Belah ......................................................................

........ 9

3.1. Umum ......................................................................... 9

3.2. Uji Tetrazolium Topografis ............................................. 9

3.2.1. Standardisasi prosedur ........................................ 9

3.2.2. Kunci Interpretasi ................................................ 11

3.3. Uji Hidrogen Peroksida ................................................. 12



3.4. Uji Eksisi Embrio .......................................................... 13

3.4.1. Standardisasi Prosedur ........................................ 13


3.5. Uji Belah ...................................................................... 15


3.5.2. Kunci Interpretasi ............................................... 16

19

4.1. Umum ......................................................................... 19

Acacia crassicarpa

Enterolobium cyclocarpum

v

4.2. Uji Tetrazolium Topografis ............................................. 19



4.3. Uji Hidrogen Peroksida ................................................. 23






Uji Belah ...................................................................... 26



............ 29

5.1. Umum ......................................................................... 29




5.3. Uji Belah ...................................................................... 31



......... 35

6.1. Umum ......................................................................... 356.2. Uji Tetrazolium Topografis ............................................. 35

6.2.1. Standardisasi Prosedur ........................................ 356.2.2. Kunci Interpretasi ............................................... 35

6.3. Uji Hidrogen Peroksida .................................................... 396.3.1. Standardisasi Prosedur ........................................ 396.3.2. Kunci Interpretasi ............................................... 40

6.4. Uji Eksisi Embrio .......................................................... 406.4.1. Standardisasi Prosedur ........................................ 406.4.2. Kunci Interpretasi ................................................ 41

6.5. Uji Belah ...................................................................... 416.5.1. Standardisasi Prosedur ........................................ 416.5.2. Kunci Interpretasi ................................................ 42

.. .... 45

7.1. Umum ......................................................................... 457.2. Uji Tetrazolium Topografis ............................................. 45

7.2.1. Standardisasi Prosedur ........................................ 457.2.2. Kunci Interpretasi ............................................... 47

7.3. Uji Hidrogen Peroksida ................................................. 487.3.1. Standardisasi Prosedur ........................................ 48

4.5.

V. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

VI. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

VII. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

Tectona grandis

Dalbergia latifolia

Agathis loranthifolia

vi

7.3.2. Kunci Interpretasi ............................................... 497.4. Uji Eksisi Embrio .......................................................... 49



7.5. Uji Belah ...................................................................... 51



....................................................................... 55

.................................................................................... 56

DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

vii

DAFTAR TABEL

No. Teks Hal.

1. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih ..... 11

2. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih ... 15

3. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih .............. 16

4. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih .. 21

5. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih 25

6. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih 27

7. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih ......... 31

8. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih 32

9. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih ........... 37

10. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih ......... 41

11. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih .................... 42

12. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih .... 47

13. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih .. 50

14. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih ............ 52

A. crassicarpa

E. cyclocarpum

T. grandis

D. latifolia

D. latifolia

D. latifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

A. crassicarpa

A. crassicarpa

E. cyclocarpum.

E. cyclocarpum..........

T. grandis

A. loranthifolia

.................

ix

DAFTAR GAMBAR

No. Teks Hal.

1. Sketsa Struktur Benih .................................... 9

2. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih..................................................................... 11

3. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazoliumuntuk Benih .................................................. 17

4. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksidauntuk Benih .................................................. 17

5. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embriountuk Benih .................................................. 17

6. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untukBenih ............................................................ 17

7. Sketsa Struktur Benih .................................. 19

8. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih................................................................... 22

9. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazoliumuntuk Benih ................................................ 28

10. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksidauntuk Benih ................................................ 28

11. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untukBenih .......................................................... 28

12. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih................................................................... 28

13. Sketsa Struktur Benih ........................................... 29

14. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embriountuk Benih ........................................................ 33

15. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untukBenih .................................................................. 33

A. crassicarpa

A. crassicarpa

A. crassicarpa

A. crassicarpa

A. crassicarpa

A. crassicarpa

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

T. grandis

T. grandis

T. grandis

xi

16. Sketsa Struktur Benih ............................................ 35

17. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih........................................................................... 38

18. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazoliumuntuk Benih ......................................................... 43

19. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksidauntuk Benih ......................................................... 43

20. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untukBenih .................................................................. 43

21. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untukBenih ................................................................... 43

22. Sketsa Struktur Benih ................................... 45

23. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih.................................................................... 48

24. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazoliumuntuk Benih ................................................. 52

25. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksidauntuk Benih ................................................. 52

26. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untukBenih ........................................................... 52

27. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untukBenih ........................................................... 52

D. latifolia

D. latifolia

D. latifolia

D. latifolia

D. latifolia

D. latifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

xii

DAFTAR LAMPIRAN

No. Teks Hal.

1. Bahan dan Alat yang Digunakan untuk Uji Cepat Viabilitas Benih(a). Uji Tetrazolium,(b). Uji Hidrogen Peroksida (c). Uji Eksisi Embrio dan(d). Uji Belah ......................................................................... 57

2. Prosedur Pengambilan Contoh Benih untukPengujian (BTP, 2000) ............................................................. 58

3. Cara Pembuatan Larutan Tetrazolium ....................................... 59

4. Cara Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida ............................ 60

5. Glosari .................................................................................. 61

xiii

1

I. PENDAHULUAN

1.1. Mutu Benih

1.2. Viabilitas

1.3. Pengujian Viabilitas

Keberhasilan penanaman terutama dalam skala yang besar sangat dipengaruhioleh interaksi antara faktor-faktor biotik, klimatik, edafik, teknik maupunmanajemen. Secara tidak langsung faktor teknik seringkali dinyatakan sebagaipenyebab utama kegagalan, misalnya karena rendahnya mutu benih. Untukmembedakan suatu benih bermutu atau tidak, secara visual sangat sukar.Apabila benih ditanam tanpa melalui proses pengujian mutu, maka perbedaanbaru akan terlihat setelah benih tumbuh di lapangan atau setelah tanamanberproduksi, sehingga konsumen benih akan dirugikan karena kehilangan waktu,biaya dan kemungkinan harus melakukan penanaman ulang (Sadjad, 1980).Informasi yang diperoleh dari pengujian benih akan bermanfaat bagi produsen,penjual maupun konsumen benih, karena mendapat keterangan yang dapatdipercaya tentang mutu atau kualitas dari suatu benih. Pengujian benih adalahpenilaian secara objektif tentang mutu benih yang diproduksi atau diedarkan.

Pengujian benih terdiri dari: Pengujian karakteristik fisik benih dan pengujiankarakteristik biologis benih. Pengujian karakteristik benih meliputi: Kemurnianbenih, kadar air benih dan berat 1000 butir. Sedangkan karakteristik biologisbenih meliputi: Pendugaan viabilitas dan vigor benih. Secara Garis besarpengujian kualitas suatu kelompok benih dapat dilakukan berdasarkan metodeindikasi viabilitas benih.

Viabilitas benih merupakan refleksi dari mutu benih, yang dapat didefinisikansebagai daya hidup benih yang ditunjukkan oleh fenomena pertumbuhan benihatau gejala metabolismenya dan dapat pula ditunjukkan oleh keadaan organelsitoplasma atau kromosom. Sementara Gordon (1992), menyatakan bahwaviabilitas adalah kemampuan yang dimiliki oleh benih untuk berkecambah,sedangkan perkecambahan adalah keberhasilan proses di dalam benih untukmenghasilkan semai yang baik di persemaian.

Viabilitas benih dapat dideteksi melalui beberapa pendekatan, pendekatan yangpaling lazim dilakukan adalam melalui pendekatan fisiologis. Metode pendekatanfisiologis ini dibagi menjadi metode langsung dan tidak langsung. Metodelangsung yaitu apabila pengamatan dilakukan pada setiap individu, sedangkanmetode tidak langsung jika deteksi viabilitas tersebut dilakukan terhadapsejumlah benih sekaligus. Deteksi viabilitas benih dari gejala pertumbuhannyadisebut penilaian dengan indikasi langsung, sedangkan penilaian viabilitas benihdari gejala metabolisme, bentuk fisik yang kesemuanya tanpa memperlihatkangejala pertumbuhan disebut pendekatan dengan indikasi tidak langsung.

Pada pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator pertumbuhankecambahnya langsung sering disebut dengan indikasi langsung, di manayang dinilai adalah kenormalan pertumbuhan kecambah dan dilakukan dalam

2

jangka waktu tertentu. Sedangkan metode pengujian yang didasarkan padaproses metabolisme benih yang merupakan indikasi tak langsung atau seringdisebut juga dengan uji cepat.

Pendugaan potensial perkecambahan dari suatu kelompok benih denganmengecambahkannya langsung merupakan suatu metode yang hampir relevandalam praktek bidang kehutanan. Tetapi pengujian tersebut akan membutuhkanwaktu yang lama, seperti yang diungkapkan oleh Zanzibar (1996), bahwapelaksanaan pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator gejalapertumbuhan kecambah biasanya memerlukan waktu yang relatif lama. Untukjenis pohon hutan, waktu yang diperlukan berkisar antara 7-30 hari tergantungpada jenis benihnya. Dalam beberapa keadaan, jenis-jenis tertentu secaranormal akan berkecambah secara lambat atau menunjukan gejala dormansisehingga informasi mengenai viabilitas benih tidak dapat segera diperoleh.Keadaan ini akan berpengaruh terhadap benih yang diuji dan keputusan tentangpengadaan benih untuk keperluan yang bersangkutan misalnya untukpenanaman. Sehingga diperlukan metode pengujian viabilitas benih yang dapatmenduga secara akurat namun lebih cepat dari pada pengujian perkecambahansecara langsung. Dalam hal ini maka dikembangkan uji cepat viabilitas benih.

Tujuan dari uji cepat viabilitas benih menurut Manan (1976) dan Willan (1985),adalah:

(a). Untuk menentukan secara cepat viabilitas benih suatu spesies yangberkecambah normal secara lambat atau menunjukkan dormansi dibawah perkecambahan normal.

(B). Untuk menentukan viabilitas dari suatu sampel yang pada akhir ujiperkecambahan menyatakan suatu persentase yang tinggi dari yangtidak berkecambah ( ).

Beberapa metode uji cepat yang dapat digunakan dalam menduga viabilitasbenih, antara lain: uji belah ( ), uji tetrazolium, uji hidrogenperoksida, metode radiografi, uji eksisi embrio, uji daya hantar listrik dan ujiindigo carmine.

Penilaian secara objektif dapat dilaksanakan dengan baik dalam melakukanuji cepat viabilitas bila ditetapkan adanya pembakuan dalam segala segi, mulaidari benih yang diuji, metode pengujian, alat pengujian, skill atau keahliantenaga penguji sampai dengan parameter yang digunakan untuk menilai hasilpengujian tersebut.

Standardisasi uji cepat viabilitas benih tanaman hutan mencakup standarprosedur pengujuan dan kunci interpretasi. Pedoman standardisasi uji cepatviabilitas ini diharapkan dapat membantu mempermudah aktivitas berbagaipihak yang berkepentingan dalam pengujian benih. Dengan adanya pedomanstandar ini maka hasil pengujian lot benih akan seragam jika dikerjakan olehpihak lain, informasi data hasil pengujian diharapkan mempunyai keakuratan

1.4. Uji Cepat Viabilitas

1.5. Standardisasi Uji Cepat Viabilitas

hard seed

cutting test

yang cukup baik dan dapat digunakan sebagai acuan dalam rangka penerapanaspek legalitas perbenihan.

Metode uji cepat viabilitas benih tanaman hutan yang terdapat dalam pedomanini meliputi : (1). Uji Tetrazolium Topografis ( Test),

(2). Uji Hidrogen Peroksida ( Test), (3). Uji Eksisi Embrio

( Test) dan (4). Uji Belah ( ). Sedangkan jenis

benih tanaman hutan yang diuji meliputi :(1). Krasikarpa ( ),

(2). Sengon Buto ( ), (3). Jati ( ),

(4). Sonobrit ( ) dan (5). Damar ( ).

Tetrazolium Topography

Hidrogen Peroxida

Exicion Embryo Cutting Test

Acacia crassicarpa

Enterolobium cyclocarpum Tectona grandis

Dalbergia latifolia Agathis lorathifolia

3

5

N N – C H6 5–

C H6 5 C–

N N – C H6 5–

Cl

N = N – C H6 5

N N – C H6 5–

C H – C6 5 H lC+

+ 2H+

II. METODE UJI CEPAT VIABILITAS

2.1. Uji Tetrazolium Topografis

Metode ini merupakan salah satu dari sejumlah metode uji secara biokimiayang telah dikembangkan dan merupakan teknik pengujian yang cukup tepatuntuk menduga viabilitas benih. Dengan mengunakan metode ini, dalam waktukurang lebih 24 jam viabilitas dari suatu kelompok benih telah dapat diduga.Walaupun metode uji tetrazolium telah dinyatakan oleh ISTA sebagai metoderesmi untuk beberapa jenis kayu daun lebar dan konifer pada tahun 1976,tetapi sampai saat ini metode dan standar pengujian dengan cara tetrazoliumuntuk benih tanaman hutan masih sangat sedikit yang telah dibakukan dalamperaturan pengujian internasional/ISTA.

Metode uji tetrazolium menggunakan prinsip bahwa setiap sel hidup akanberwarna merah oleh reduksi dari suatu pewarnaan garam tetrazolium danmembentuk endapan formazan merah sedangkan sel-sel yang mati menunjukanwarna putih. Dengan merendamnya terlebih dahulu selama semalam, kemudiandibelah dan direndam dalam larutan garam selama beberapa jam, telah dapatmenunjukan reaksi yang jelas dan dapat membedakan antara sel yang masihhidup dengan yang sudah mati.

Reaksi tesebut diringkas sebagai berikut:

2, 3, 5 trifenil tetrazolium chlorida 2, 3, 5 triferiil formazan

Enzim yang mendorong terjadinya proses ini adalah dehidrogenase dan kegiatanini berkaitan dengan respirasi. Faktor-faktor yang mempengaruhi reaksi tetra-zolium menurut Byrd (1983) adalah suhu, pH larutan, perlakuan terhadapbenih, konsentrasi larutan dan tekanan udara tempat pengujian dilakukan.

Menurut Sutopo (1998), beberapa kelebihan dan kekurangan uji tetrazoliumantara lain:

(a). Jika diperlukan keterangan segera tentang viabilitas dari suatu kelompokbenih tertentu, maka uji tetrazoiium akan dapat memberikan keteranganlebih cepat dibanding uji perkecambahan secara langsung. Tetapi untukpelaksanaan uji tetrazolium diperlukan waktu yang lebih lama dari padauji perkecambahan secara langsung.

(b). Untuk benih-benih yang sangat dorman atau yang lambat berkecambahlebih menguntungkan bila menggunakan uji tetrazolium.

(c). Kadangkala suatu kelompok benih gagal berkecambah atau mungkinberkecambah lebih lambat dari biasanya disebabkan oleh tipe dormansiafter ripening. Untuk menentukan viabilitas benih tersebut secara cepatmaka dapat digunakan uji tetrazolium.

(d). Efek phytotoxic dari fungisida, insektisida atau fumigasi dengan metylbromide yang telah diperlakukan pada benih tidak dapat diketahuidengan uji tetrazolium.

(e ). Uji tetrazolium tidak selalu dapat memberikan keterangan tentangkerusakan pada benih yang disebabkan oleh proses pengeringan.

(f). Uji tetrazolium memerlukan lebih banyak kecakapan dan keputusan daripada yang biasa diperlukan dalam uji perkecambahan secara langsung.Seringkali diperlukan beberapa kali pembesaran untuk dapat mempelajaridengan seksamapola nodadan lokasi daerahnekrotik yang tidak ternoda.

Hidrogen peroksida (H202) merupakan suatu larutan yang dapat merangsangperkecambahan benih, sehingga dapat digunakan untuk uji perkecambahanterhadap beberapa benih jenis konifer di Amerika Barat (Willan, 1985). MenurutLeadem (1984), metode pengujian benih dengan menggunakan hidrogenperoksida merupakan satu-satunya uji cepat viabilitas benih yang dapatmerangsang perkecambahan benih dan dapat digunakan untuk mempercepatperkecambahan. Namun uji ini memerlukan waktu selama satu minggu penuhdan pengujiannya agak sulit untuk benih-benih yang berukuran kecil.

Keuntungan penggunaan metode hidrogen peroksida sebagai uji cepat viabilitasbenih antara lain: tidak mahal dan alat-alat yang dibutuhkan cukup sederhana,bersifat objektif dan sederhana dalam penyiapannya. Sedangkan kekurangandari metode pengujian ini antara lain: Tidak praktis untuk benih yang berukurankecil, pengujiannya bersifat merusak dan relatif lambat (memerlukan waktu 7 -8 hari sampai memberikan hasil pengujian yang memuaskan).

Merupakan uji viabilitas benih yang mempunyai nilai yang khusus karenadigunakan terutama untuk mendeterminasi viabilitas benih yang bisanyaberkecambah lambat atau memperlihatkan dormansi karena kulit benih dan/atau embrio. Viabilitas benih tersebut dapat dideterminasi secara cepat 5 - 14hari melalui pengamatan terhadap perilaku embrio dalam kondisi jaringan setelahpemotongan dan inkubasi selanjutnya. Embrio yang viabel akan memperlihatkanwarna hijau, tumbuh atau tetap segar sementara embrio yang non viabel akanrusak. Meskipun uji ini bersifat labour intensif dan memerlukan keterampilanserta kesabaran dalam memotong embrio benih secara utuh, tapi merupakanalternatif yang dapat diterima untuk uji viabilitas benih, terutama untuk benih-benih yang memerlukan waktu yang lama jika diuji dengan metode pengujianyang umum, biasanya mencapai 60 hari.

2.2. Uji Hidrogen Peroksida

2.3. Uji Eksisi Embrio

6

Menurut Bonner (1994), keuntungan penggunaan metode eksisi embriosebagai uji cepat viabilitas benih antara lain: peralatan yang dibutuhkan untukpengujian cukup sederhana, yang diuji merupakan kondisi benih sebenarnyadan mudah untuk dievaluasi. Sedangkan kekurangan dari metode ini antaralain: bersifat labour intensive dan memerlukan waktu yang panjang dalammempersiapkan benih sebelum diuji, pengujiannya bersifat merusak dan relatiflambat (memerlukan waktu 10 - 14 hari sampai memberikan hasil pengujianyang memuaskan).

Uji belah ( ) merupakan suatu metode uji cepat yang biasanyadigunakan untuk menguji viabilitas benih dalam jumlah yang banyak. Uji inidapat digunakan di lapangan untuk memperkirakan benih yang telah masakatau kualitas kumpulan benih ( ) dalam kegiatan pengumpulan benih.

Metode ini merupakan salah satu metode pengujian viabilitas benih yang palingsederhana, yang dilakukan dengan cara melihat secara langsung dengan mataterhadap benih yang telah dibelah dengan pisau atau skapel. Jika endospermnyamempunyai warna normal dengan embrio yang baik, maka benih tersebutmempunyai kemungkinan untuk berkecambah, sehingga pengujian ini bersifatsangat subjektif. Dengan hanya melihat penampilannya secara langsung, benihtersebut seperti hidup padahal kalau dikecambahkan mungkin tidak akanberkecambah. Sehingga hasil dari pengujian ini akan memberikan nilaiperkecambahan yang lebih besar dibanding keadaan sebenarnya.

Menurut Boner ( 1994), keuntungan uji cepat viabilitas benih denganmetode belah antara lain: merupakan metode uji viabilitas benih yang cepatdan murah, dapat digunakan di lapangan untuk memeriksa kualitas benih yangdikumpulkan pada saat pemanenan dan hasil pengujian cukup akurat untukbenih-benih yang masih segar. Sedangkan kekurangan dari metode pengujianini antara lain: sulit dilakukan untuk benih-benih yang berukuran kecil,memberikan hasil pengujian yang tidak tepat untuk benih-benih yang telahmengalami penyimpanan dan merupakan uji yang merusak.

et al.

cutting test

seed lot

et al.

2.4. Uji Belah

7

9

III. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

3.1. UMUM

3.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS

3.2.1. Sta

3.2.1.1. Bahan dan Alat

3.2.1.2. Pengambilan Contoh Benih

Acacia crassicarpa

Benih memiliki kulit benih yang keras dan sulit ditembus air.Bila benih tersebut dikecambahkan secara konvensional dengan metode uji diatas kertas (UDK) maupun di rumah kaca diperlukan waktu lebih dari 21 hari.

, termasuk ke dalam famili Leguminosae, umumnya memiliki 3bagian dasar benih yaitu embrio, jaringan penyimpan cadangan makanan danpelindung biji. Jaringan penyimpan cadangan makanan berupa kotiledon,sedangkan embrio terdiri dari radikel dan plumula. Pengamatan terhadapbenih yang akan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitasdifokuskan pada struktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula dan kotiledon(Gambar 1).

Gambar 1. Sketsa Struktur Benih

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5-triphenil tetrazolium klorida), Na HP .2H , KH PO , etanol 70%, kertasmerang dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alatpembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazoliumdapat dilihat pada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( ) yang hendak diuji. Prosedur

A. crassicarpa

A. crassicarpa

A. crassicarpa

seed lot

ndardisasi Prosedur

2 O O4 2 2 4

pengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat padaPedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan(BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yangdiperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih.

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan,kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.

Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3

Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukandengan cara sebagai berikut :

(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku. Pada saat melubangi kulit, jangan sampai terkenakotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam di dalam gelaspiala.

(3) Kupas kulit dan belah benih menjadi keping benih dengan silet.Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hati-hati,jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi radikel,plumula, dan kotiledon harus terbagi dua.

(4) Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5 % yangditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnyadengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam oven dengan suhu 40 °C selama4 jam.

(6) Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquadesselama 30 - 60 detik.

(7) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikel,plumula dan kotiledon.

(8) Amati intensitas dan luas pewarnaan yang terbentuk. Intensitaspewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) danputih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan denganmembandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luaskeseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaanyang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi.

3.2.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat

3.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazolium

3.2.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian

10

3.2.2. Kunci Interpretasi

Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihatpersentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengankunci interpretasi pada Tabel 1 dan Gambar 2, sedangkan contoh benih viabeldan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 3.

Tabel 1. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih

Gambar 2. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih

A. crassicarpa

A. crassicarpa

A. crassicarpa

11

Benih Viabel

1 2 3 4 5 6 7

Benih Non Viabel

1 2 3 4 5 6 7

Berdasarkan Tabel 1 dan Gambar 2, secara umum kunci interpretasi uji tetra-zolium untuk benih adalah sebagai berikut:

(1). Benih viabel :

a. Radikel 100 % merah sampai 100 % merah muda tanpa bercak pundan plumula berwarna merah maupun merah muda tanpa putih.

b. Kotiledon minimal 50 % merah atau merah muda.

(2). Benih non viabel :

a. Adanyabagian radikel danplumula yangberwarnaputih/bercakputih.

b. Radikel berwarna merah muda lebih dari 50 %.

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida,benomil, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambarbahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihatpada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat padaPedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan(BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benihyang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih.

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merangdan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° C selama 24 jam.Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secaramerata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotantangan.

l

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomilselama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji.

Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4.

A. crassicarpa

3.3. UJI HIDROGEN PEROKSIDA

3.3.1. Standardisasi prosedur




3.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol

3.3.1.3.2. Sterilisasi dengan Benomi

3.3.1.4. Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida

12

13



3.4. UJI EKSISI EMBRIO

3.4.1. Standardisasi Prosedur


3.4.1.2. Pengambilan Cantoh Benih

Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujiandilakukan dengan cara sebagai berikut :

(1) Sterilkan benih dengan benomil (lihat 3.3.1.3.2.).

(2) Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan guntingkuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam larutan H2O2 1 % (volume larutan H O =3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.

(4) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelappada suhu 20 - 30 °C. Pengujian dilakukan selama 4 hari.

(5) Ganti larutan H2O2 dengan larutan H2O2 yang baru pada hari ke-1 danke-3.

(6) Bilas benih dengan aquades, kemudian tempatkan benih tersebut dalamcawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab.

(7) Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasilpengukuran tersebut dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksidadidasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan.Benih viabel memiliki panjang radikel > 0,2 mm, sedangkan benih non viabelmemiliki panjang radikel < 0,2 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contohbenih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat padaGambar 4.

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, benomil, etanol 70% dan kertassaring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, guntingkuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow danalat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisiembrio dapat dilihat pada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( ) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat padaPedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan(BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benihyang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih.

A. crassicarpa

seed lot

2 2

14



3.4.1.3.2. Sterilisasi dengan Benomil

3.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian


Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskandalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukandengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alattersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomilselama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji

Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan carasebagai berikut :

(1) Sterilkan benih dengan benomil (lihat 3.4.1.3.2.).

(2) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dengan suhuperendaman 25 °C.

(4) Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudatyang dikeluarkan oleh benih.

(5) Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketikamembelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikutterbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatanpemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempatyang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembarkertas saring lembab.

(7) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamarpada suhu konstan (20-25 °C) selama 5 hari dengan periodepencahayaan minimal 8 jam per hari.

(8) Amati setiap hari kondisi embrio dan buang embrio yang busuk danberjamur. Apabila media mulai kering, semprotkan aquades secukupnya.

(9) Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatandicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benihdapat dilihat pada Tabel 2, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabelhasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 5

A. crassicarpa

A. crassicarpa

Tabel 2. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang.Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, semprotan tangan, lup, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahandan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( ) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat padaPedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan(BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benihyang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih.

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruhbagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagaiberikut :

(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengangunting kuku.

(2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dalam gelas piala.

(3) Kupas kulit dan belah benih searah keping (memanjang) denganmenggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(4) Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon denganmata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunciinterpretasi.

A. crassicarpa

seed lot

3.5. UJI BELAH





3.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih

15


Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih dapat dilihat padaTabel 3, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapatdilihat pada Gambar 6.

Tabel 3. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih

A. crassicarpa

A. crassicarpa

16

17

Gam

bar

3.

Benih

Via

bel (

a)dan

Non

Via

bel (

b)

Hasi

lU

jiTe

trazo

lium

untu

kBenih

A.Cra

ssic

arp

a

Gam

bar

4.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asi

lU

jiH

idro

gen

Pero

ksi

da

untu

kBenih

A.Cra

ssic

arp

a

Gam

bar

5.

Benih

Via

bel (

a)dan

Non

Via

bel (

b)

Hasi

lU

jiEksi

siEm

brio

untu

kBenih

A.Cra

ssic

arp

a

Gam

bar

6.

Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bel(b

)H

asil

Uji

Bela

huntu

kB

enih

A.Cra

ssic

arp

a

19

IV. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS

4.1. UMUM





Enterolobium cyclocarpum

E. cyclocarpum

seed lot

yang dikenal dengan nama sengon buto, termasuk ke dalam

famili Leguminosae. Uji viabilitas benih secara konvensionalyang dilakukan dengan perkecambahan langsung menggunkan media pasirtanah di ruma kaca memerlukan waktu lebih dari 20 hari.

Seperti benih-benih yang tergolong ke dalam famili Leguminosae lainnya, benihjuga memiliki 3 bagian dasar benih yaitu embrio, jaringan

penyimpan cadangan makanan an pelindung biji. Pengamatan terhadap benihyang akan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitas difokuskanpada struktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula dan kotiledon (Gambar7).


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5-triphenil tetrazolium klorida), Na HPO .2H O, KH PO , etanol 70 %, kertasmerang, lembaran plastik an aluminium foil.


Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( ) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

h

d

d2 4 2 2 4

20

disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 50 butir benih.

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringankertas merang dan alumunium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga diiakukan dengan menyemprotkan etanol70, % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.

Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3.


(1). Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku. Pada saat melubangi kulit, jangan sampai terkena kotiledon,karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2). Rendam benih dalam air dingin selama 48 jam.

(3). Kupas kulit dan belah benih menjadi keping benih dengan menggunakansilet. Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi radikel,plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(4). Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5 % yangditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnyadengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5). Masukkan gelas piala tersebut ke dalam oven dengan suhu 40 ° C selama4 jam.

(6). Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquades selama30 - 60 detik.

(7). Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikelplumula dan kotiledon.

(8). Amati intensitas dan luas pewarnaan yang terbentuk. Intensitaspewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) danputih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan denganmembandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luaskeseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaanyang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi.


4.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazoiium



Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihatpersentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunciinterpretasi pada Tabel 4 dan Gambar 8, sedangkan contoh benih viabel dannon viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 9.

Tabel 4. Kunci Interpretasi Hasil Uji TetrazoliumuntukBenih

E. cyclocarpum

E. cyclocarpum

21


Berdasarkan Tabel 4 dan Gambar 8, secara umum kunci interpretasi uji tetra-zolium untuk benih adalah sebagai berikut:

(1) Benih viabel :

a. Radikel dan plumula berwarna merah dan merah muda.

b. Kotiledon minimal mempunyai pola pewarnaan 40 % merah ataumaksimal 15 % tidak berwarna (putih).

(2) Benih non viabel:

a. Benih mempunyai pola pewarnaan merah, merah muda sampaidengan putih

b. Kotiledon maksimal mempunyai pola pewarnaan 40 % merah atauminimal 15 % putih.

E.

cyclocarpum

E. cyclocarpum

22

1 2 3 54 6







4.3.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit



Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida,natrium hipoklorit, etanol 70 %, kertas merang dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambarbahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihatpada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( ) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 50 butir benih.

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merangdan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° C selama 24 jam.Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secaramerata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotantangan.

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutannatrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 15 menit, kemudian dibilasdengan aquades dan benih siap untuk diuji.



(1)

(2)

(3) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 0,5 % (volume larutan H O= 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminiumfoil.

seed lot

Sterilkanbenih dengannatriumhipoklorit (lihat5.3.1.3.2.).

Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan guntingkuku.

(4) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelappada suhu 20 - 30 ° C. Pengujian dilakukan selama 5 hari.

E.cyclocarpum

2 2 22

23

(5) Ganti larutan H O dengan larutan H O yang baru pada hari ke-1 danke-3.


(7) Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasilpengukuran dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksidadidasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan.Benih viabel memiliki panjang radikel 1 mm, sedangkan benih non viabelmemiliki panjang radikel < 1 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contohbenih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat padaGambar 10.

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70 %dan kertas saring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala,gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, lup, semprotan tangan, oven,inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yangdigunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1.


Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskandalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukandengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alattersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutannatrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas denganaquades dan benih siap untuk diuji.

Pengkondisian. pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara

2 2 2 2










>

seed lot

24

sebagai berikut :

(1) Sterilkanbenih dengannatriumhipoklorit (lihat5.4.1.3.2.).

(2) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengangunting kuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 48 jam dengan suhuperendaman 25 ° C.

(4) Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudatyang dikeluarkan oleh benih.

(5) Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketikamembelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikutterbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatanpemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempatyang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembarkertas saring lembab.

(7) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamarpada suhu konstan (20 - 25 ° C) selama 5 hari dengan periodepencahayaan minimal 8 jam per hari.


(9) Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatan,dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benihdapat dilihat pada Tabel 5, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabelhasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 11.

E.cyclacarpum

E. cyclocarpum


Tabel 5. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih E. cyclocarpum

25

4.5. UJI BELAH







Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70 % dan kertas merangAlat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,silet, lup, semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahandan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.


Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70 % secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.


(1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengangunting kuku.

(2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 48 jam dalam gelas piala,

(3) Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) denganmenggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(4) Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon denganmata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunciinterpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih dapat dilihatpada Tabel 6, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belahdapat dilihat pada Gambar 12.

seed lot

E. cyclocarpum

26

27

Tabel 6. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih E. cyclocarpum

28

Gam

bar

.Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bel

(b)

Hasi

lU

jiTe

trazo

lium

untu

kBenih

9

E.cyclo

carp

un

Gam

bar

10.

Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bl

(b)

Hasi

lU

jiH

idro

gen

Pero

ksid

au

ntu

kB

en

ihe

E.

cyclo

carp

un

Gam

bar

11.

Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bl

(b)

Hasi

lU

jiE

ks

is

iE

mb

rio

un

tu

kB

en

ih

e

E.cyclo

carp

un

Gam

bar

12.

Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bl

(b)

Hasi

lU

jiBela

huntu

kBenih

eE.cyclo

carp

un

29

V. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Teotona grandis

5.1. UMUM





T. grandis

T. grandis

T. grandis

seed lot

yang lebih dikenal dengan nama jati, termasuk ke dalam familiVerbenaceae. Jenis ini merupakan salah satu jenis komersil yang banyak ditanamdan telah dikembangkan sejak lama terutama di pulau jawa (perhutani). Untukmengetahui viabilitas benih secara konvensional denganmengecambahkannya di persemaian pada media campuran tanah dan pasir(1 : 1) memerlukan waktu lebih kurang 90 hari.

Buah memiliki kulit luar yang lunak, di dalamnya terdapat kulitbuah yang keras berwarna hitam, sekitar 3 - 4 butir benih berada di dalambuah ini. Benih memiliki struktur tumbuh yang terdiri dari embrio,jaringan penyimpan cadangan makanan an pelindung. Embrio terdiri darikotiledon an radikel (calon akar). Struktur tumbuh benih dapatdilihat pada Gambar 13.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70 %,kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakanadalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, lup, semprotantangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahandan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1.


T. grandis

T. grandis

T. grandisd

d

30






Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, kertas saring dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruhbagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Benih-benih yang akan diuji dan telah dikeluarkan dari endocarp-nya, disterilkandengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untukdiuji.

Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan carasebagai berikut:

(1) Keluarkan benih dari endocarpnya dengan menggunakanragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak,cacat atau rusak, karena benih akan mudah terkontaminasi oleh jamur.

(2) Ambil salah satu benih dalam satu endocarp untuk mewakili satu biji.

(3) Kupas kulit benih dan potong bagian kotiledon yang berada di sekitarembrio dengan menggunakan silet membentuk potongan segitiga,Pengupasan kulit benih dan pemotongan embrio harus dilakukan secarahati-hati, kondisi embrio harus utuh (tidak boleh terpotong atau cacat).Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukankegiatan di dalam laminar flow di tempat yang steril. Peralatan yangdigunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(4) Letakkan embrio yang telah dipisahkan tersebut pada cawan petri yangberisi media berupa 2 lembar kertas saring lembab.

(5) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamarpada suhu konstan (20 - 25 °C) selama 8 - 9 hari dengan periodepencahayaan minimal 8 jam per hari.

(6) Amati setiap hari kondisi embrio dan buang bila busuk dan berjamur.Apabila media mulai kering, semprotkan aquades secukupnya.

(7) Kondisi embrio yang diperoleh pada akhir pengamatan, dicocokkan dengankunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih dapatdilihat pada Tabel 7, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil ujieksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 14.

T. grandis

T. grandis

T. grandis


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70 %, natrium hipoklorit,kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawanpetri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven danalat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belahdapat dilihat pada Lampiran 1.


Cawan petri, gelas piala, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalamoven pada suhu 105 ° C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan denganmenyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebutdengan menggunakan semprotan tangan.


(1) Keluarkan benih dari endocarp-nya dengan menggunakanragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak,cacat atau rusak, karena akan mempengaruhi hasil evaluasi pengujian.

(2) Ambil salah satu benih dalam satu endocarp untuk mewakili satu biji.

(3) Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) denganmenggunakan silet. Embrio (hipokotil dan radikel) serta kotiledon harusterbagi dua.

(4) Amati warna dan penampakan embrio (hipokotil dan radikel) sertakotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup),sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuaidengan kunci interpretasi.

T. grandis

seed lot

T. grandis

5.3. UJI BELAH






T. grandis

31




T. grandis

T. grandis

32

33

Gambar 1 . Benih Viabel (a) dan Non Viab l (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untukBenih

4 eT. Grandis

Gambar 1 . Benih Viabel (a) dan Non Viab l (b) Hasil Uji untuk Benih5 e BelahT. Grandis

VI. UJI CEPAT VIABILITAS JENlS Dalbergia latifolia

6.1. UMUM





D. latifolia

(testa

(seed lot)

yang dikenal dengan nama sonobritz, termasuk ke dalam famili

Leguminosae. Uji viabilitas benih secara konvensional yang dilakukandi persemaian pada media pasir tanah (1 : 1) memerlukan waktu lebih kurang20 hari.

Struktur tumbuh benih seperti halnya benih ieguminosae terdiri

atas kulit benih ), dua keping kotiledon serta poros embrio. Poros embrioterdiri dari dua bagian utama, yaitu radikel dan plumula. Radikel terletakdi bagian luar kotiledon. Karena ukuran plumula benih ini yang sangat kecil(tidak jelas) maka fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas benihdilakukan terhadap struktur tumbuh radikel dan kotiledon (Gambar 16).


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5-triphenil tetrazolium chlorida), Na HPO .2H , KH P , etanol 70 %, kertasmerang, lembaran plastik dan aluminium foil.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, silet ataupisau tajam, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangandan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk ujitetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.

D. latifolia

D. latifolia

D. latifolia

D. latifolia

2 4 2 2 4O O

35





Cawan petri, gelas piala, pinset, silet atau pisau tajam, alat pengaduk, saringan,kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.



(1) Ujung kulit benih yang berlawanan arah dengan radikel dipotong denganmenggunakan gunting kuku.

(2) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama16 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik untuk mencegah penguapan.

(3) Kupas kulit benih secara hati-hati dengan menggunakan silet. Pada saatmengupas kulit benih, silet tidak boleh mengenai benih, karena akanmempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(4) Rendam benih dalam larutan tetrazolium 1 % yang ditempatkan dalamgelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminiunfoil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).


(6) Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquades selama30 - 60 detik.

(7) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab dan benih dibelah memanjang untuk dianalisis pola pewarnaanyang terbentuk pada radikel dan kotiledon.


Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentasepola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasipada Tabel 9 dan Gambar 17, sedangkan contoh benih viabel dan non viabelhasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 18.

O

D. latifolia

36

Tabel 9. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih D. latifolia

Berdasarkan Tabel 9 dan Gambar 17, secara umum kunci interpretasi ujitetrazolium untuk benih adalah sebagai berikut:

(1). Benih viabela. Radikel 100 % merah sampai merah muda atau minimal 60 % merah

atau merah muda.b. kotiledon minimal 40 merah dan maksimal 10 % putih yang terletak

jauh di atas poros embrio.

(2). Benih non viabel :a. Radikel maksimal 60 % putih dan terletak di dekat poros embrio.b. Kotiledon kurang dari 40 % merah dan terdapat P disekitar poros

embrio.

D. latifolia

37

38

Gambar 1 .7 Sketsa Pola PewarnaanHasil uji TetraziliumpadaBenihD. latifolia

1 2 3

4 5 6

39











Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, silet, penggaris,oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan danalat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Lampiran1.


Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, alat pengaduk, kertas merang dan alu-minium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasidapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutanBenomil selama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untukdiuji.


Pengkondisian, perendaman, dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujiandilakukan dengan cara sebagai berikut :

(1) Sterilkan benih tersebut dengan benomil (lihat 7.3.1.3.2.).

(2) Ujung kulit benih yang berlawanan dengan radikel dipotong denganmenggunakan gunting kuku.

(3) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 0,5 % (volume larutan H O= 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminiumfoil.

(4) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelappada suhu 20 - 30 °C. Pengujian dilakukan selama 7 hari.

seed lot

2 2 2 2

(5) Ganti larutan H O dengan larutan H O yang baru pada hari ke-2 dan

ke-5.



Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksidadidasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan.Benih viabel memiliki panjang radikel 3 mm, sedangkan benih non viabelmemiliki panjang radikel < 3 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contohbenih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat padaGambar 19.

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70 %,kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik.

Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, silet, lup,semprotan tangan, oven, inkubator, dan alat pembagi benih.Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihatpada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.

Cawan petri, gelas piala, pinset, siiet, kertas saring dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° C selama 24 jam. Sterilisasi dapat jugadilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruhbagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutanBenomil selama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untukdiuji.

2 2 2 2









>

laminar flow

seed lot)

40



6.5. UJI BELAH



Pegkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagaiberikut :

(1) Sterilkan benih tersebut dengan benomil (lihat 7.3.1.3.2.).



(4) Kupas kulit benih dengan menggunakan silet, kemudian dibelah embrionyadikeluarkan. Pada saat pembelahan radikel harus utuh (tidak boleh ikutterbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatanpemotongan, lakukan kegiatan di dalam atau di tempatyang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(5) Letakkan embrio (titik tumbuh) pada cawan petri yang berisi media 2lembar kertas saring lembab.

(6) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamarpada suhu konstan (20 - 25 °C) selama 5 hari dengan periodepencahayaan minimal 8 jam per hari.


(8) Kondisi embrio (titik tumbuh) yang diperoleh pada akhir pengamatan,dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih dapatdilihat pada Tabel 10, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil ujieksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 20.


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70 % dan kertas merang.Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, silet atau pisau tajam, lup,semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alatyang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.

laminar flow

D. latifolia

D. latifolia

41


6.5.1.3. Sterilisasi Bahan dan Mat



Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( ) yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standardisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.

Cawan petri, pinset, silet atau pisau tajam dan kertas merang dipanaskandalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukandengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alattersebut dengan menggunakan semprotan tangan.




(3) Kupas kulit benih dan dibelah searah keping (memanjang) denganmenggunakan silet radikel dan kotiledon terbagi dua.

(4) Amati warna dan penampakan radikel tumbuh dan kotiledon denganmata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut hidup atau mati, sesuai dengan kunciinterpretasi.



seed lot

D. latifolia

D. latifolia

42

43

Gam

bar

18.Benih

Via

bel(

a)dan

Non

Via

bl (

b)H

asi

lU

jiTe

trazo

lium

untu

kBenih

eD

.la

tifo

lia

Gam

bar

1.

Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bl

(b)

Hasi

lU

jiH

idro

gen

Pero

ksi

da

untu

kBenih

9e

D.la

tifo

lia

Gam

bar

.Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bl

(b)

Hasi

lU

jiEksi

siEm

brio

untu

kBenih

20

e

D.la

tifo

lia

Gam

bar

.Benih

Via

bel

(a)

dan

Non

Via

bl

(b)

Hasi

lUji

Bela

huntu

kBenih

21

eD

.la

tifo

lia

45

VII. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Agathis loranthifolia

7.1. UMUM

A. loranthifolia

seed lot





yang dikenal dengan nama damar, termasuk ke dalam familiPinaceae. Uji viabilitas secara konvensional dengan mengecambahkan benih

melalui metode uji di atas kertas (UDK) memerlukan waktulebih kurang 24 hari. Jenis ini termasuk benih rekalsitran dengan penurunanviabilitas yang sangat tinggi, sehingga untuk mengetahui nilai viabilitasnyaharus diuji secepat mungkin sebelum viabilitas benih semakin turun.

Fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas benih dilakukanterhadap embrio an endosperma (Gambar 22).


Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5-triphenil tetrazolium chlorida), Na HPO .2H , KH PO , etanol 70 %, kertasmerang, lembaran plastik an aluminium foil.



A. loranthifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

d

Od

2 4 2 2 4

7.2.1.3. Steriiisasi Bahan dan Alat



Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan,kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °Cselama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakansemprotan tangan.


Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujiandilakukan dengan cara sebagai berikut :

(1) Kupas kulit benih dengan cara menggunting ujung kulitbenih dengan gunting kuku atau pinset. Pengupasan kulit benih dilakukansecara hati-hati, jangan sampai endosperma cacat atau rusak.

(2) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama24 jam. Tebarkan benih pada kertas merang basah, kemudian kertasdigulung dan dimasukkan ke dalam plastik agar benih tidak kering.

(3) Kupas kulit ari yang melekat pada benih dengan pinset. Selama kegiatanpengupasan kulit ari tersebut, benih harus selalu dalamkeadaan lembab.

(4) Belah sebagian keping benih secara memanjang untuk membantupenyerapan larutan tetrazolium, kemudian rendam benih tersebut dalamlarutan tetrazolium 1% yang ditempatkan dalam gelas piala yang telahditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutantetrazolium = 3 x volume benih).


(6) Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquades selama30 - 60 detik.

(7) Belah benih tersebut dengan menggunakan silet. Pada saat membelah,kondisi embrio (radikel dan kotiledon) dan endosperma harus terbagidua.

(8) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas meranglembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada embrio(radikel dan kotiledon) dan endosperma.


A. loranthifolia

46


Viabilitas benih yang diuji dapat diketahui dengan melihatpersentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunciinterpretasi pada Tabel 12 dan Gambar 23, sedangkan contoh benih viabel dannon viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 24.

Tabel 12. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih

Berdasarkan Tabel 12 dan Gambar 23, secara umum kunci interpretasi ujitetrazolium untuk benih adalah sebagai berikut:

(1). Benih viabel :

a. Radikel dan kotiledon berwarna merah sampai merah muda tanpaputih

b. Endosperm berwarna merah sampai putih ( 20% putih dengan50 merah)

(2). Benih non viabel :

a. Terdapat warna putih pada radikel dan kotiledon atau

b. Pada endosperm terdapat > 20% putih dengan warna merah < 50atau

A. loranthifolia

A. loranthifolia

A. loranthifolia

overstain

< >

overstain

47




Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset,penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambarbahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat padaLampiran 1.




Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merangdan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam.Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secaramerata ke seluruhbagian alat tersebut denganmenggunakan semprotan tangan.

A. loranthifolia

seed lot



48

Benih Viabel

Benih Non Viabel

1 2a 2b 45 63 5

1 2 3 5 64










(1) Kupas kulit benih secara hati-hati jangan sampai menimbulkan lukamekanis.

(2) Rendam benih tersebut dalam larutan H O 0,5 % (volume larutan H= 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminiumfoil.

(3) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelappada suhu 20 - 30 ° C. Pengujian dilakukan selama 9 hari.

(4) Ganti larutan H O dengan larutan H O yang baru pada hari ke-1, ke- 3dan ke-6 (tergantung kekeruhan rendaman).



Kunci interpretasi hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikelyang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjangradikel 2 mm, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 2 mmatau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasiluji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar 25.

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70 %,kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakanadalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, lup,semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih.Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihatpada Lampiran 1.


2 2 2 2

2 2 2 2

O

>

seed lot

49


7.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Penyujian


Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, kertas saring dan kertasmerang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 ° C selama 24 jam. Sterilisasidapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan carasebagai berikut :

(1) Potong ujung benih, kemudian rendam selama 24 jam.

(2) Kupas kulit ari yang melekat pada benih dengan pinset. Selama kegiatanpengupasan kulit ari tersebut, benih harus selalu dalamkeadaan lembab.

(3) Belah sedikit bagian endosperma dengan menggunakan silet dankeluarkan embrionya secara hati-hati. Ketika membelah, kondisi embrioharus utuh (tidak boleh ikut terbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisiaseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminarflow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selaludalam keadaan steril.

(4) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media 3 lembar kertassaring lembab.

(5) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamarpada suhu konstan (20 - 25 ° C) selama 5 hari dengan periodepencahayaan minimal 8 jam per hari.


(7) Kondisi embrio (radikel dan kotiledon) yang diperoleh pada akhirpengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benihdapat dilihat pada Tabel 13, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabelhasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 26.

Tabel 13. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untukBenih

A. loranthifolia

A. loranthifolia

50

7.5. UJI BELAH







Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70 %, natrium hipoklorit,kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawanpetri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven danalat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belahdapat dilihat pada Lampiran 1.

Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benar-benar mewakili kelompok benih ( yang hendak diuji. Prosedurpengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standardisasi PengujianMutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnyadisajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian iniadalah 4 x 100 butir benih.

Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merangdipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapatjuga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70 % secara merata keseluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan carasebagai berikut :

(1) Kupas kulit benih dengan pinset atau gunting kuku.

(2) Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama24 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkanke dalam plastik atau cawan petri agar benih tidak kering/mencegahpenguapan.

(3) Kupas kulit ari benih dengan pinset dan belah benih denganmenggunakan silet. Embrio dan endosperma harus terbagi dua.

(4) Amati warna dan penampakan embrio dan endosperma dengan matatelanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapatditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunciinterpretasi.

Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih dapat dilihatpada Tabel 14, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belahdapat dilihat pada Gambar 27.

seed lot

A. loranthifolia

)

51

Tabel 14. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih A. loranthifolia

52

53

Gam

bar

.Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bl(b

)H

asi

lU

jiTetr

azolium

untu

kB

enih

24

eA

.lo

ranth

ifolia

Gam

bar

.Benih

Via

bel(a

)dan

Non

Via

bl(b

)H

asi

lU

jiH

idro

gen

Pero

ksi

da

untu

kBenih

25

e

A.lo

ranth

ifolia

Gam

bar

.Benih

Via

bel (

a)

dan

Non

Via

bl(b

)H

asi

lU

jiE

ksis

iE

mb

rio

un

tuk

Ben

ih26

e

A.lo

ranth

ifolia

Gam

bar

.Benih

Via

bel (

a)

dan

Non

Via

bl (

b)

Hasi

lU

jiB

ela

huntu

kB

enih

27

e

A.lo

ranth

ifolia

55

DAFTAR PUSTAKA

Bhodthipuks, J., P. Pukkitayacame, B. P. S. Wang, S. Saelim and S. L. Yu. 1994.Rapid Viability Testing of Tropical Tree Seed. Training Course Proceeding No. 4.ASEAN Forest Tree Seed Centre Project. Thailand.

Bonner, F. T, J. A. Vozzo, W. W. Elam and S. B. Land Jr. 1994. Tree Seed TechnologyTraining Course: Instructor's Manual. United State Departemen of Agriculture,Forest Service, Southern Forest Experiment Station. New Orleans.

BTP. 2000. Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih TanamanHutan, Buku I. Publikasi Khusus Vol. 2 No. 4. Balai Teknologi Perbenihan.Bogor.

Byrd, H. W. 1988. Pedoman Teknologi Benih (Terjemahan). State College. Mississipi.

Gordon, A. G. 1992. Seed Testing in Seed Manual for Forest Trees. ForestryCommision. London.

ISTA. 1985. Seed Science and Technology. International Seed Testing Association.Zurich, Switzerland.

_________. 1991. Buku Pegangan Benih Pohon dan Belukar, Terjemahan dari Treeand Shrub Seed Hand Book. Indonesia Forest Seed Project, Directorate ofForest Seed Ministry of Forestry and Estate Crops, Danish InternationalDevelopment Assistance. Indonesia - Denmark.

Laloup, M. 1955. Seed Testing. FAO of United Nation. Rome.

Leadem, C. L. 1984. Quick Test for Tree Seed Viability. Management Report No.18 ISSN. 0702 - 9861. B. C. Ministry Forest Land Research Branch.

Manan, S. 1976. Silvikultur. Proyek Pengembangan Peningkatan Mutu PerguruanTinggi IPB. Bogor.

Mugnisjah, W. Q, dan A. setiawan. 1990. Pengantar Produksi benih. RajawaliPress. Jakarta.

Sadjad, S. 1980. Panduan Pembinaan Mutu Benih Tanaman Hutan. KerjasamaProyek Pusat Perbenihan Kehutanan Direktorat Reboisasi dan RehabilitasiDirektorat Jenderal Kehutanan dengan Lembaga Afiliasi Institut Pertanian Bogor.Bogor.

_______. 1993. Dari Benih Kepada Benih. PT Gramedia Widiasarana Indonesia.Jakarta.

Sutopo, L. 1993. Teknologi Benih. CV Rajawali Pers. Jakarta.

Willan, R. L. 1985. A Guide to Fjrest Seed Handling. DANIDA Forest Seed CentreHunlebaek Denmark - FAO.

Zanzibar, M. 1996. Aplikasi Uji Cepat Viabilitas pada Benih Tanaman Hutan, ProsidingEkpose Program dan Hasil-Hasil Penelitian Perbenihan Kehutanan. BalaiTeknologi Perbenihan, Badan Penelitian dan Pengembangan DepartemenKehutanan. Bogor.

_______ . 2001. Standar Prosedur dan Kunci Interpretasi Uji Cepat Viabilitas Benih

Tanaman Hutan ( , ,

, , ). Laporan Uji Coba. BalaiTeknologi Perbenihan. Bogor.

et al

Acacia mangium Gmelina arborea Paraserianthes

falcataria Pinus merkusii Swietenia macrophylla

57

Lampiran 1. Bahan dan Alat yang Digunakan untuk Uji Cepat Viabilitas Benih(a). Uji Tetrazolium, (b). Uji Hidrogen Peroksida, (c). Uji EksisiEmbrio dan (d). Uji Belah

(a) (b)

(c) (d)

58

Lampiran 2. Prosedur Pengambiian Contoh Benih Untuk Pengujian(BTP, 2000)

1. Contoh kirim dan komposit dihamparkan, kemudian dibagi menjadi 4bagian, yaitu 1, 2, 3 dan 4.

2. Bagian 1 dan 3 dicampur, kemudian dihamparkan dan selanjutnyadibagi menjadi 4 bagian yaitu 5, 6, 7 dan 8.

3. Langkah 2 selanjutnya hingga diperoleh contoh kerja sesuai denganketentuan

59

Lampiran 3. Cara Pembuatan Larutan Tetrazoiium

Pembuatan larutan tetrazolium dilakukan dengan cara sebagai berikut :

(1) Larutan I : Larutkan 9,078 gram KH PO dalamaquades 1000 ml

(2) Larutan II : Larutkan 11,876 gram Na HPO .2H Odalam aquades 1000 ml

(3) Larutan Penyangga : Campurkan 400 ml Larutan I dengan600 ml Larutan II (2 : 3)

(4) Larutan Tetrazolium 1% : Masukkan 10 gram garam tetrazolium(2,3,5 triphenil tetrazolium chlorida)ke dalam 1000 ml Larutan Penyangga

(5) Larutan Tetrazolium 0,5% : Masukkan 5 gram garam tetrazolium(2,3,5 triphenil tetrazolium chlorida)ke dalam 1000 ml Larutan Penyangga

(6) Larutan Tetrazolium harus dihindarkan dari cahaya langsung, yaitudengan cara menempatkan larutan tersebut ke dalam gelas piala yangtelah dilapisi aluminium foil. Pencampuran benih dengan larutan tersebutdilakukan dalam kamar gelap. Selain itu, apabila tidak digunakan,larutan tersebut disimpan dalam lemari es.

(7) Khusus untuk pengujian benih Agathis loranthifolia, larutan tetrazoliumditambah garam dapur sebanyak garam tetrazolium yang dimasukan,hal ini bertujuan agar pola pewarnaan yang terbentuk lebih baik.

2 4

2 4 2

60

Lampiran 4. Cara Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida

Larutan H O yang dijual di pasaran umumnya memiliki konsentrasi yang masihtinggi, yaitu 35%, sedangkan yang digunakan untuk uji H O ini berkisar antara0,5 - 2 %. Oleh karena itu, larutan H O 35% harus diencerkan terlebihdahulu. Rumus yang digunakan untuk reaksi pengenceran adalah sebagaiberikut :

dimana : C =CV

V

Pembuatan larutan hidrogen peroksida dilakukan dengan cara sebagai berikut:

(1) Larutan H O 0,5% l

(2) Larutan H O 1%

(3) Larutan H O 2% :

2

1

2

2

2 2

2 2

2

1

2 2 2 2

2 2

2 2 2 2

2 2

2 2 2 2

2 2

C1 x V1 = C2 x VZ

Konsentrasi larutan asli= Konsentrasi larutan yang diinginkan= Volume larutan asli yang diperlukan untuk memperoleh

larutan yang diinginkan= Volume larutan yang diinginkan

: Campurkan 14,29 ml arutan H O 35% ke dalam985,71 ml aquades sehingga diperoleh 1000 mllarutan H O 0,5%.

: Campurkan 28,57 ml larutan H O 35% ke dalam971,43 ml aquades sehingga diperoleh 1000 mllarutan H O 1%.

Campurkan 57,14 ml larutan H O 35% ke dalam942,86 ml aquades sehingga diperoleh 1000 mllarutan H O 2%.

Lampiran 5. Glosari

Benih (botanis) : Biji tumbuhan yang digunakan manusia untuk tujuanpertanaman.

Benih : Semua bahan tanaman baik yang dihasilkan secarageneratif maupun vegetatif.

Benih ortodok : Watak/sifat dapat disimpan lama (tidak cepat menurunviabilitasnya) pada kondisi kadar air benih yang rendah(4 - 8 %) dalam penyimpanan.

Benih rekalsitran : Watak/sifat benih benih cepat menurun viabilitasnyadan memerlukan kadar air yang tinggi (20 - 50 %) dalampenyimpanannya yang mendekati atau sama dengankadar air benih segar.

Contoh benih : Sejumlah benih, baik dalam ukuran volume atau beratyang ditarik dari masing-masing lot benih dengan caraacak, untuk kepentingan pengujian benih.

Contoh kerja : Sebagian contoh kiriman yang akan diuji

Contoh kiriman : Sebagian atau seluruh contoh komposit yang dikirimke laboratorium pengujian.

Contoh komposit : Campuran semua contoh primer yang diambil dari lotbenih.

Contoh primer : Sejumlah benih yang diambil dari satu titik di dalam lotbenih.

Dormansi : Proses beristirahatnya suatu tanaman, bagian tanamanatau jaringan yang dalam kondisi petumbuhan yangoptimum tidak menunjukan pertumbuhan sewajarnya.

Embrio : Satu tanaman baru yang terjadi dari bersatunya gametjantan dan gamet betina pada proses pembuahan.

Garam tetrazolium : Merupakan suatu senyawa kimia dengan rumus 2,3,5triphenyl tetrazolium clorida atau bromida yangdigunakan sebagai pewarna untuk menbedakan selhidup dengan sel mati pada uji tetrazolium.

Germinator : Alat pengecambah yang memenuhi syarat optimumdalam faktor tumbuh, yaitu kelembaban udara, suhudan cahaya yang optimum.

Hidrogen : suatu larutan yang tidak stabil dan tidak berwarna,larutan ini dapat larut dalam air dan alkohol sertamudah didekomposisikan dalam air dan oksigen biladisimpan pada suhu yang terlalu tinggi/rendah atau dibawah cahaya langsung.

(perundang-undangan)

peroksida (H O )2 2

61

Kecambah normal : Kecambah benih yang tumbuh normal sesuai ketentuanbaku dalam pengujian viabilitas benih, untuk mensimu-lasikan pertumbuhan normal tanaman di lapangan.

Kotiledon : Bagian dari struktur tumbuh benih yang berfungsisebagai jaringan cadangan makanan.

Lot : Sejumlah benih yang akan diuji mutunya.

Plumula : Bagian dari struktur tumbuh benih yang akan mem-bentuk organ batang.

Radikel : Bagian dari struktur tumbuh benih yang akan mem-bentuk organ akar.

Ragum : Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerjadiletakan di antara substrat kertas yang telah dilembab-kan.

Sterilisasi : Kegiatan pembebasan/pembersihan suatu objek (alat,bahan atau media) dari organisme yang tidak diinginkan,seperti fungi, bakteri, virus atau yang lainnya.

UAK (uji antar : Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerjadiletakan di antara substrat kertas yang telah dilembab-kan.

UDK (uji di atas : Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerjadiletakandi atas substrat kertas yang telahdilembabkan.

Uji belah : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih dengancara melihat langsung penampakan struktur tumbuhnyayang menunjukan kondisi yang baik (hidup).

Uji cepat viabilitas : Metode pengujian viabilitas benih yang didasarkan padaproses metabolisme benih yang merupakan indikasi taklangsung.

Uji eksisi embrio : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih yangdilakukan dengan mengamati perilaku embrio dalamkondisi jaringan setelah pemotongan dan inkubasiselanjutnya, di mana embrio yang viabel akanmemperlihatkan warna hijau, tumbuh atau tetap segarsementara embrio yang non viabel akan rusak.

Uji hidrogen : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih denganmemanfaatkan sifat larutan hidrogen peroksida yangdapat merangsang perkecambahan benih dan dapatdigunakan untuk mempercepat perkecambahan.

Uji tetrazolium : Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih secarabiokimia yang didasarkan kepada pewarnaan yangdihasilkan setiap sel hidup dengan garam tetrazoliumyang membentuk endapan formazan merah sedangkansel-sel yang mati menunjukan warna putih.

kertas)

kertas)

( )cutting test

peroksida

62

Viabel : Hidup

Viabilitas benih : Kemampuan benih untuk hidup, yang ditunjukan olehgejala pertumbuhan atau gejala metabolismenya dandapat pula ditunjukkan oleh keadaan organelsitoplasma atau kromosom.

Viablitas potensiai : Viabilitas benih yang menunjukkan kemampuan benihtumbuh normal dalam kondisi optimim menghasilkantanaman normal yang berproduksi normal.

Viabilitas total : Mencerminkan daya hidup benih yang hanyaditunjukkan oleh sekedar gejala hidup benih melaluimetabolisme benih, misalnya kemampuan benihmengambil oksigen pada saat tertentu.

Vigor benih : Viabilitas benih yang menunjukkan kemampuan benihtumbuh normal dalam kondisi sub optimum,menghasilkan tanaman normal yang berproduksinormal atau berproduksi di atas normal dalam kondisisub optimum.

63

BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN

Documents

Transcript of BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN