7/24/2019 BAB 4 n

1/8

BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Desain Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratoris dengan

rancangan true experimental-post test only control group designyang bertujuan

untuk mengetahui efek dari fitoestrogen yang terdapat pada susu kedelai yang

diberikan sejak umur satu bulan terhadap fungsi dari sistem reproduksi tikus

jantan (Rattus nevergicus strain Wistar) yang dilihat dari histopatologi vesika

seminalis.

4.2 Populasi dan Sampel Penelitian

4.2.1 Populasi

Populasi penelitian ini adalah tikus Rattus norvegicusstrain Wistar yang

memenuhi kriteria sehat, jantan dengan umur yang sama satu bulan dan berat

sekitar 100 gram, setiap tikus diberi tempat yang cukup untuk menghindari

kematian maupun sakit.

4.2.2 Sampel

ikus strain Wistar dibagi menjadi empat grup. !engan satu sebagai

kontrol negatif dan ketiga lainnya diberi susu kedelai dengan dosis yang berbeda

4.2.3 Periraan Ban!a Sampel

otal banyak sampel yang dipakai dihitung dengan rumus"

(t#1) (n#1) $ 1%

dimana, t & banyaknya intervensi, dan n & banyaknya sampel yang

dipakai. 'ksperimen ini memiliki empat grup, jadi sampel yang diperlukan

berjumlah dua puluh empat. erarti setiap grupnya memerlukan sedikitnya enam

tikus.

24

7/24/2019 BAB 4 n

2/8

25

4.2.4 "arateristi Sampel

arakteristik sampel berupa tikus (wistar rats), kelamin jantan, berumur

satu bulan, berat tubuh 100 gram, sehat dengan indikasi bergerak aktif, bulu

bersih dan mata jernih, belum mendapatkan obat#obatan.

4.2.# "riteria Eslusi$

ikus yang tidak makan dan minum ketika eksperimen, tikus yang

kondisinya memburuk, sakit pada *aktu eksperimen dan mati.

4.3 Identi$iasi %aria&el

4.3.1 %aria&el Ter'antun'

+ariabel tergantung pada studi ini adalah histopatologi vesika seminalis

tikus Wistar yang diberi diet susu kedelai.

4.3.2 %aria&el Be&as

+ariabel bebas pada peneltian ini adalah susu kedelai dengan berbagai

konsentrasi.

4.4 Loasi Dan (atu Penelitian

4.4.1 Loasi

Penelitian ini dikerjakan di laboratorium armakologi akultas

edokteran -niversitas ra*ijaya.

4.4.2 (atu

Penelitian ini dilakukan mulai bulan ktober /01 sampai anuari /012.

4.# Instrumen Penelitian

4.#.1 Susu "edelai

3lat yang dibutuhkan membuat susu kedelai yaitu alat timbangan,

tabung erlenmeyer, corong, dan batang pengaduk. !an bahan yang dibutuhkan

7/24/2019 BAB 4 n

3/8

26

yaitu bubuk susu kedelai, dan air a4uades. Pemberian susu kedelai

menggunakan alat sonde.

4.#.2 Diet Normal

3lat yang dibutuhkan yaitu alat timbangan, analytic weights

measurement device, *adah5tempat makanan. ahan yang dibutuhkan yaitu

tepung terigu, dedak jagung, dan air secukupnya.

4.#.3 Pem&eda)an dan Persiapan Slide *istopatolo'is

3lat yang dibutuhkan yaitu *adah plastik dengan penutupnya, pisau

operasi, kapas, gunting, pinset, mikroskop, mikrotom, dan kamera. !an bahan

yang diperlukan yaitu kloroform, balok parafin, formalin 106.

4.#.4 Pemeli)araan Tius

3lat pengukur berat 7artorius, kandang tikus, penutup kandang,

sekam5serbuk kayu, botol minuman.

4.+ De$inisi Operational

1. itoestrogen merupakan substansi dari tumbuhan yang memiliki sifat

mimikri estrogen.

/. 7usu kedelai yang digunakan pada pada penelitian ini adalah susu

kedelai bubuk 8unisoy9.

. ikus strain *istar yang digunakan pada penelitian ini, disediakan oleh

laboratorium farmakologi akultas edokteran -niversitas ra*ijaya,

2. ikus de*asa adalah tikus yang telah mencapai usia bulan.

4., Prosedur Penelitian

4.,.1 Persiapan Susu "edelai

7/24/2019 BAB 4 n

4/8

27

7usu kedelai dibuat dengan menggunakan mencampur susu kedelai

bubuk dengan air secukupnya. Perbandingan antara susu kedelai dan air yaitu 1

gram berbanding / ml air a4uades.

4.,.2 Persiapan Tius (istar

7elama proses adaptasi, semua kelompok tikus diberi diet normal.

:asing#masing tikus mendapatkan 20 gram dari campuran bahan dedak jagung

dan dan diberikan secara ad libitum. 7emua tikus mendapatkan sinar matahari

yang cukup selama 1/ jam dan berada pada kegelapan selama 1/ jam. :ereka

dipertahankan dalam kondisi ini pada laboratorium selama ; hari sebelum

percobaan dilakukan.

4.,.3 Pem&erian Susu "edelai

Pemberian susu kedelai dilakukan per oral. dosis berbeda diberikan

kepada kelompok tikus. 3*alnya tikus akan diberi diet standar sehingga

beratnya bertambah, selama masa adaptasi yang dilakukan selama satu minggu.

emudian pengambilan sampel akan dilakukan dengan teknik randomisasi,

sehingga setiap tikus akan mempunyai kesempatan yang sama dalam

mendapatkan dosis susu kedelai. 7etelah itu, tikus akan dibagi menjadi 2

kelompok.

elompok 1 < 3kan diberikan diet normal.

elompok / < 3kan diberikan diet normal dan susu bubuk kedelai dengan ;,1

mg5kg.

elompok < 3kan diberikan diet normal dan susu bubuk kedelai dengan 12,/

mg5kg.

elompok 2 < 3kan diberikan diet normal dan susu bubuk kedelai dengan /1,

mg5kg.

7/24/2019 BAB 4 n

5/8

28

4.,.4 Pem&eda)an Tius (istar

Prosedur ini dikerjakan dengan bantuan dari analis lab. armakologi.

ikus yang akan dibedah diberikan anestesi terlebih dahulu dengan

menggunakan eter. Pemberian eter dilakukan secara inhalasi pada tangki

tertutup. ikus yang telah di anastesi kemudian ditempatkan pada meja bedah

dan di fiksasi. 7ebelum pembedahan, dilakukan pemeriksaan bagian luar terlebih

dahulu. Pada pemeriksaan sampel darah tikus, sampel darah diambil dari bilik

jantung dengan menggunakan spuit %cc. Pengambilan sampel darah ini

diperlukan pembedahan pada bagian thora=. ulang rusuk tikus dipotong dari

bagian lateral dengan sedikit mengangkat ke atas dengan gunting bedah supaya

tidak merusak organ internal dari thora=. antung terletak di antara paru#paru

kanan dan kiri. 7ampel darah diambil pada bilik jantung sebanyak %cc dengan

menggunakan spuit. emudian spuit diberi label dan siap untuk dikirim ke

laboratorium. 7etelah itu kita mengidentifikasi bagian vesika seminalis. +esika

seminalis kemudian di insisi secara hati#hati hingga terlihat testis. emudian

bagian vesika seminalis diambil dan dipisahkan dengan prostat dan vas deferen.

7etelah itu berat vesika seminalis dihitung dan disimpan pada tabung yang berisi

formalin 106. +as deferen dipisahkan secara hati#hati dari testis dan prostat

dengan menggunakan pinset dan gunting bedah. 7etelah itu dimasukkan pada

tabung yang berisi formalin 106. Prosedur pembedahan ini memberikan rasa

yang tidak nyaman pada tikus, oleh karena itu prosedur ini dilakukan di ba*ah

pengaruh anestesi.

4.,.# Persiapan Slide *istopatolo'i Tius (istar

+esika seminalis diambil melalui pembedahan kemudian difiksasi dengan

merendam jaringan vesika seminalis tikus dalam formalin 106 selama sehari

semalam (/2 jam) kemudian dilanjutkan dengan tahap pencucian menggunakan

air minimal 1,% jam. aringan dimasukkan dalam alkohol ;06 selama 1 jam,

7/24/2019 BAB 4 n

6/8

29

alkohol >06 selama 1 jam, alkohol ?? 6 selama 1 jam dan alkohol absolut

selama /=1 jam lalu dalam campuran =ylol " alkohol absolut & 1"1 selama 0,%

jam, dan =ylol P3 selama /=0 menit. aringan dipotong setipis mungkin dan

dimasukkan ke dalam meltedparaffin " =ylen & 1"1 sekana 1 jam, paraffin (%2#%>)

selama /=1 jam. emudian dipotong dengan ketebalan @Am. Basil pemotongan

diletakkan di gelas objek dilapisi dengan lapisan putih telur " gliserol & 1"1 . Celas

objek diletakkan di atas steamer hangat (agar pita mengembang dan lurus tanpa

lekukan) kemudian dibiarkan kering dan sediaan melekat erat (1 hari). aringan

yang berada di gelas objek dimasukkan ke dalam =ylol selama =% menit. Dalu

dikeringkan. Basil diamati pada mikroskop untuk mengetahui progresivitas

kelainan vesika seminalis.

4.,.+ Penilaian Slide *istopatolo'is Testis

7lide histopatologis diamati menggunakan miksroskop cahaya dengan

pembesaran 200=. setiap slide histopatologis diamati sebanyak 10 lapang

pandang yang kemudian dinilai menggunakan menghitung secara manual sel

nukleus pada epitel yang normal dan sel yang abnormal yang terdapat pada

slide. !an setelah di hitung semua ( 10 lapang pandang per tikus dalam setiap

kandang ) kemudian data di masukan dan di bedakan antara jumlah sel nukleus

yang normal dan sel nukleus yang abnormal. 7etelah itu langsung memulai

perhitungan analisis data.

4.- Alur Penelitian

/2 ikus Wistar

7/24/2019 BAB 4 n

7/8

30

4. Pen'ola)an Dan Analisis Data

7pesimen dibuat dalam bentuk sediaan preparat histo < P3 dari vesica

seminalis, yang dilakukan pengecatan B', dan dilakukan pemeriksaan

abnormalitas kelenjar vesika seminalis, sel Deydig, germ cell dan sperma. !ata

yang didapatkan pada penelitian akan dianalisis dengan berbagai cara. Pertama,

tes homogenitas varian dilakukan untuk mengetahui apakah data ini homogen

atau tidak. edua, untuk mengetahui perbedaan di setiap intervensi, dilakukan

tes one way3E+3 digunakan dengan menggunakan soft*are 7P77 (7tatistical

Fandom 7ampling

elompok

!iet Eormal

G 7usu

edelai 12,/

mg5kg

elompok 1

!iet Eormal

elompok 2

!iet Eormal G

7usu edelai

/1, mg5kg

elompok /

!iet Eormal

G 7usu

edelai ;,1

mg5kg

Observasi setelah 3

!issection +esika

seminalis

HistopatologiVesika Seminalis

nalisis

7/24/2019 BAB 4 n

8/8

3"

Product and 7ervice 7olution). !alam hubungannya dengan 3E+3, post-hoc

analysis(urkeyHs range test) dilakukan untuk melihat perbandingan dari setiap

intervensi. Dangkah ketiga menggunakan uji korelasi untuk mengetahui apakah

ada kekuatan yang signifikan dari hubungan antara peningkatan konsentrasi dari

susu kedelai dengan kondisi abnormalitas histopatologi vesika seminalis dan

sperma pada tikus Wistar. !an yang terakhir simple linear regression dihitung

untuk memprediksi nilai variabel tergantung dari variabel bebas. 7elain itu,

pengujian hipotesis dilakukan dengan cara mencari nilai confidence leveldanp

value.