6

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

Pada bab ini dibahas tinjauan tentang nyeri, analgesik, obat

golongan NSAIDs, piroksikam, piridin, reaksi-asilasi, rekristalisasi, uji

kemurnian senyawa hasil sintesis, identifikasi struktur senyawa hasil

sintesis dan pengujian aktivitas analgesik.

2.1. Tinjauan tentang Nyeri

Nyeri merupakan suatu gejala yang terjadi ketika ada gangguan di

jaringan seperti peradangan, infeksi kuman atau kejang otot yang berfungsi

sebagai tanda bahaya. Rasa nyeri juga berfungsi sebagai pertahanan tubuh

(Tan & Raharjda, 2007).

Nyeri timbul jika rangsangan mekanik, termal, kimia dan listrik

melampaui suatu nilai ambang nyeri. Rangsangan-rangsangan inilah yang

mendorong pelepasan mediator-mediator nyeri seperti histamin, serotonin

(5-HT), bradikinin dan prostaglandin serta ion-ion kalium. Mediator ini

kemudian mengaktivasi reseptor nyeri di ujung-ujung saraf bebas dari kulit,

mukosa dan jaringan lain dan selanjutnya disalurkan ke otak melalui sum-

sum tulang belakang dan diteruskan ke pusat nyeri di hipotalamus hingga

dirasakan sebagai nyeri. Kapasitas prostaglandin sebagai mediator adalah

menurunkan nilai ambang polimodal nociceptor pada serat C (Burke, 2006).

Berdasarkan tempat terjadinya, nyeri dibagi menjadi 2 macam

yaitu nyeri somatik dan nyeri viseral. Nyeri somatik terdiri dari nyeri dalam

dan nyeri permukaan. Nyeri dalam dirasakan sebagai tekanan, sukar

dilokalisasikan dan kebanyakan menyebar ke sekitarnya, sebagai contoh

yang paling sering adalah rasa sakit kepala. Nyeri permukaan terjadi apabila

ada rangsangan pada kulit dan dapat dilokalisasi dengan baik, selain itu

7

biasanya nyeri ini diikuti suatu reaksi menghindar secara refleks, seperti

menarik kaki pada saat menginjak duri (Mutschler, 1991).

Nyeri viseral mirip dengan nyeri dalam yaitu sifat tekanan dan

reaksi-reaksi yang menyertainya. Biasanya nyeri otot terjadi pada tegangan

organ perut, kejang otot polos, aliran darah kurang dan penyakit yang

disertai radang (Mutschler, 1991).

Rasa nyeri dapat diklasifikasikan sebagai nyeri akut dan kronik.

Nyeri akut merupakan perasaan tidak nyaman, biasanya disebabkan oleh

penyakit, luka, keracunan kimia, atau stimulasi fisika seperti stimulasi panas

(Gringauz, 1997). Nyeri akut biasanya bertahan hanya selama durasi

kerusakan jaringan, sehingga waktunya pendek. Rasa nyeri kronik

merupakan nyeri yang bertahan untuk periode yang panjang. Contoh

penyakitnya adalah rheumatoid arthritis.

Berdasarkan proses terjadinya, nyeri dapat dilawan dengan

beberapa cara yaitu merintangi pembentukan rangsangan reseptor nyeri

dengan analgetik perifer (analgetik non narkotik), merintangi penyaluran

rangsangan di saraf-saraf sensoris, misalnya dengan anestetik lokal, ataupun

memblok pusat nyeri di SSP dengan analgesik sentral (analgetik narkotik)

atau dengan anestetik umum (Tan & Rahardja, 2007).

2.2. Tinjauan tentang Analgesik

Analgesik atau obat penghalang nyeri adalah senyawa yang dapat

mengurangi atau menghalau rasa nyeri dengan cara menekan fungsi sistem

saraf pusat secara selektif tanpa menghilangkan kesadaran. Berdasarkan

efek farmakologisnya, analgesik dibagi menjadi dua, analgesik narkotik dan

analgesik non-narkotik. Obat-obat analgesik golongan narkotik digunakan

untuk mengurangi rasa sakit dari sedang sampai berat, seperti rasa sakit

yang disebabkan oleh penyakit kanker, atau serangan jantung akut.

8

Pemberian obat golongan ini secara terus-menerus dapat menimbulkan

kertergantungan fisik dan mental atau yang disebut dengan kecanduan,

selain itu dapat terjadi depresi napas, mual, dan muntah (Purwanto &

Susilowati, 2000 ; Way et al., 2002). Efek analgesik dari obat golongan ini

dihasilkan oleh karena pengikatan obat pada sisi reseptor khas pada sel

dalam otak dan sumsum tulang, rangsangan reseptor tersebut menimbulkan

efek rasa nyaman dan rasa mengantuk (Purwanto & Susilowati, 2000).

Contoh obat-obat yang termasuk golongan ini adalah turunan morfin,

turunan dihidromorfin, petidin dan metadon (Mutschler, 1991).

Obat golongan analgesik non-narkotik (perifer) adalah obat-obat

yang mampu meringankan atau menghilangkan rasa nyeri tanpa

mempengaruhi sistem saraf pusat (SSP), sehingga tidak menurunkan

kesadaran dan tidak menimbulkan ketagihan. Obat-obat golongan ini biasa

digunakan untuk mengurangi rasa sakit dari yang ringan sampai sedang,

seperti nyeri kepala, gigi, otot, persendian, (rematik, encok), ataupun perut.

Efek analgesik yang ditimbulkan oleh obat golongan non-narkotik

ini, dihasilkan dengan cara menghambat secara langsung dan selektif

enzim-enzim pada sistem saraf pusat yang mengkatalis biosintesis

prostaglandin dengan menghambat siklooksigenase, sehingga mencegah

sensitisasi reseptor rasa sakit oleh mediator-mediator nyeri yang dapat

dirangsang secara mekanis atau kimiawi (Purwanto & Susilowati,2000).

Efek samping yang sering terjadi pada penggunaan obat golongan ini adalah

gangguan lambung-usus, kerusakan hati, ginjal, dan reaksi alergi pada kulit.

Contoh obat-obat yang termasuk golongan analgesik perifer adalah

parasetamol, turunan salisilat, golongan penghambat prostaglandin,

ibuprofen, turunan antranilat (mefenamat), dan turunan pirasolon

(aminofenazon, metamizol) (Tan & Rahardja, 2007).

9

2.3. Tinjauan tentang Obat Golongan NSAIDs

Obat-obat golongan antiinflamasi atau yang sering disebut dengan

analgetik non steroidal antiinflamatory drugs (NSAIDs) adalah golongan

obat analgesik non narkotik yang terutama bekerja secara perifer dengan

aktivitas menghambat biosintesis prostaglandin melalui penghambatan

aktivitas enzim siklooksigenase (COX). Enzim tersebut terdiri dari 2

bagian, yaitu COX-1 dan COX-2. Prostaglandin adalah mediator inflamasi

yang dilepaskan ketika sel mengalami kerusakan. Prostaglandin tersebut

berperan penting terhadap timbulnya nyeri, demam, dan reaksi peradangan.

Obat golongan NSAIDs berkhasiat sebagai analgesik, antipiretik

dan antiradang serta digunakan untuk menghalau gejala penyakit rematik,

seperti arthosis (Tan & Rahardja, 2007).

NSAIDs yang ideal seharusnya bekerja selektif terhadap COX-2

yang dapat menghambat inflamasi dan tidak menghambat COX-1 agar tetap

dapat melindungi mukosa lambung (Tan & Rahardja, 2007). Contoh-contoh

obat yang termasuk dalam golongan NSAIDs yaitu: turunan asam salisilat

(aspirin, salsalat), turunan asam propionat (fenbufen, ibuprofen), turunan

asam fenamat (asam mefenamat, meklofenamat), turunan pirazolon

(fenilbutazon), turunan asam fenilasetat (diklofenak), turunan asam asetat

inden/indol (indometasin), turunan oksikam (tenoksikam, piroksikam).

2.4. Tinjauan tentang Piroksikam

N NH

O

N

SH3C

OO

OH

Gambar 2.1. Struktur molekul piroksikam

10

Rumus molekul : C15H13N3O4

BM : 331.35

Piroksikam memiliki sifat fisika kimia berupa serbuk putih, hampir

putih atau coklat terang atau kuning, tidak berbau. Bentuk piroksikam

memiliki karakteristik monohidrat berwarna kuning, yang sangat sukar

larut dalam air, asam-asam encer dan sebagian besar pelarut organik, sukar

larut dalam etanol dan dalam larutan alkali mengandung air (Depkes RI,

1995).

Piroksikam merupakan suatu turunan oksikam yang juga adalah

penghambat COX nonselektif tetapi pada konsentrasi tinggi juga dapat

menghambat migrasi leukosit polimorfonuklear, mengurangi produksi

radikal oksigen dan menghambat fungsi limfosit. Piroksikam memiliki

waktu paruh rata-rata 50-60 jam. Waktu paruh yang panjang tersebut

memungkinkan dosis satu kali sehari. Piroksikam cepat diserap oleh

lambung dan usus halus bagian atas dan mencapai 80% dari konsentrasi

puncak plasmanya dalam 1 jam. Piroksikam dimetabolisme secara ekstensif

menjadi metabolit yang tidak aktif dan mempunyai sirkulasi enterohepatis,

kemudian juga penggunaannya pada kerusakan ginjal. Piroksikam

diekskresi sebagai konjugat glukuronid dan sebagian kecil sebagai obat

yang tidak berubah. Toksisitas meliputi gejala-gejala gastrointestinal (20%

dari pasien), pusing, tinitus, sakit kepala dan ruam kulit. Bila piroksikam

diberikan dengan dosis yang lebih tinggi dari 20 mg/hari maka ditemukan

peningkatan insiden ulkus peptikum dan pendarahan (Katzung, 2002).

11

2.5. Tinjauan tentang Piridin

Gambar 2.2. struktur piridin

(Fessenden & Fessenden, 1997).

Rumus molekul : C5H5N

BM : 79,10

Piridin merupakan cairan jernih, tidak berwarna, memiliki bau

tidak enak dan higroskopik. Dapat bercampur dengan air, etanol 95 %, dan

dengan kloroform (FI III, 1979).

2.6. Tinjauan tentang Reaksi Asilasi

Asilasi adalah suatu reaksi yang memindahkan gugus asil dari satu

molekul ke molekul yang lain. Gugus penerima biasanya alkohol

(membentuk ester) atau amina (membentuk amida). Gugus karbonil punya

dua fungsi yaitu menyediakan tempat untuk penyerangan oleh nukleofilik

dan meningkatkan keasaman dari hidrogen pada karbon alfa (Fessenden &

Fessenden, 1986).

Gamb

ar 2.3. Mekanisme reaksi asilasi (Morrison & Boyd, 1987)

Keterangan :

Y : Gugus pergi

Z : Nukleofil

N

CR

O

Y

::

+ z : CR

O

Z

Y

: :. . -

C R O

Z

+ Y-

12

Ada tiga macam reaksi asilasi yaitu reaksi asilasi O, N dan C.

Asilasi O merupakan reaksi substitusi pada gugus karbonil dengan senyawa

yang punya atom O pada gugus X, gugus asil tersebut berikatan langsung

dengan atom O menggantikan gugus H pada gugus OH. Asilasi N

merupakan reaksi substitusi pada karbonil dari gugus asil dengan senyawa

yang punya atom N, gugus asil tersebut berikatan langsung dengan atom N

menggantikan atom H pada NH2 sedangkan asilasi C merupakan reaksi

substitusi pada gugus karbonil dari gugus asil dengan senyawa yang punya

atom C. Gugus asil tersebut berikatan langsung dengan atom C (Pine et al,

1988). Reaksi antara piroksikam dengan suatu asil klorida (3,4-

diklorobenzoil klorida) adalah reaksi asilasi O.

Metode yang digunakan untuk melakukan reaksi asilasi adalah

metode Schotten-Baumann. Pada metode ini, nukleofil (alkohol dan amina)

menyerang gugus karbinol elektrofilik dari asil halida. Sintesis ini dilakukan

pada suasana basa dan semua bahan larut dalam pelarut yang digunakan.

Selain ditambah NaOH yang berfungsi untuk menetralkan HCl yang

dibebaskan (membentuk natrium klorida yang larut air) juga ditambahkan

piridin untuk mengubah HCl menjadi agen alkalis yang lebih kuat

(Morisson & Boyel, 1987).

2.7. Tinjauan tentang Pemurnian Senyawa Hasil Sintesis

2.7.1. Tinjauan tentang Rekristalisasi

Rekristalisasi adalah salah satu metode pemurnian hasil sintesis

yaitu zat padat organik yang biasanya terkontaminasi sejumlah kecil

komponen lain. Komponen tersebut terjadi sebagai hasil samping reaksi.

Pemurnian zat hasil sintesis dengan kristalisasi didasarkan pada perbedaan

kelarutannya dalam pelarut yang ditentukan atau campuran pelarut. Pelarut

yang dipilih yaitu zat padat sebagian larut dalam temperatur kamar dan

13

lebih larut dalam temperatur tinggi. Kunci dari prosedur rekristalisasi ini

adalah penggunaan jumlah pelarut sekecil mungkin yang menunjukkan zat

padat larut pada temperatur tinggi (titik didih pelarut), jika zat padat

tersebut stabil pada temperatur kamar, sehingga bahan yang tidak

diinginkan tidak larut dan dapat disaring. Zat padat hasil sintesis akan

mengendap dalam larutan filtrat yang didinginkan pada temperatur kamar

dan kemudian dipisahkan dari supernatannya (Kenkel, 1994; Vogel, 1978).

2.7.2. Tinjauan tentang Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) adalah teknik pemisahan zat

berdasarkan kecepatan migrasi dari masing-masing komponennya pada

fase diam yang berupa sebuah lapisan tipis di bawah pengaruh pelarut yang

bergerak (Stahl, 1985).

Pemisahan terjadi karena ada perbedaan kekuatan ikatan antara

fase pengembang dan fase diam dari senyawa yang dianalisis. Kekuatan

ikatan senyawa terhadap fase diam menentukan lama senyawa tersebut

tertahan dalam fase diam, yang tergantung pada tetapan distribusi dari

masing-masing senyawa. Senyawa yang memiliki kekuatan ikatan yang

rendah terhadap fase diam akan dielusi terlebih dahulu, dan sebaliknya

senyawa dengan kekuatan ikatan yang lebih besar terhadap fase diam

dielusi lebih lambat (Skoog, 1992). Kecepatan migrasi dari tiap komponen

tergantung pada suatu konstanta yang disebut koefisien partisi atau

koefisien distribusi, dengan rumus sebagai berikut:

K = Cs

Cm

Cs adalah konsentrasi solut pada fase diam, Cm adalah konsentrasi solut

pada fase pengembang.

14

Besarnya hambatan yang terjadi pada fase diam dinyatakan dengan

harga Rf (Retardation Factor), yang dapat dihitung dengan rumus sebagai

berikut :

Rf = Jarak yang ditempuh masing-masing substansi

Jarak yang ditempuh larutan fase gerak

Harga Rf merupakan parameter yang menyatakan posisi komponen setelah

proses eluasi. Harga Rf dinyatakan dalam desimal pada rentang 0,20-0,80.

Harga Rf dipengaruhi oleh pelarut, kejenuhan bejana, kelembaban udara,

konsentrasi dan kompetisi larutan yang diperiksa, ketidakhomogenan kertas,

arah serabut kertas, senyawa asing dan pencemaran pelarut (Stahl, 1985;

Skoog, 1992).

KLT dapat digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif.

Analisis kualitatif yaitu antara lain identifikasi kemurnian senyawa organik

dan identifikasi campuran suatu zat organik yang dipisahkan. Analisis

kualitatif dilakukan dengan membandingkan antara harga Rf dengan harga

Rf teoritis dari suatu analit dengan pembandingnya. Jika harga Rf senyawa

yang diuji sama dengan harga Rf senyawa pembanding, maka senyawa

yang diuji identik dengan senyawa pembanding. Analisis kuantitatif

diperoleh dengan membandingkan luas area noda analit dengan

standardnya (Skoog, 1992).

2.7.3. Tinjauan tentang Titik Leleh

Titik leleh adalah temperatur saat zat padat kristal berubah menjadi

bentuk cairan pada tekanan 1 atm. Titik leleh ini merupakan salah satu

kriteria untuk identifikasi kemurnian komponen organik.

Senyawa organik murni, pada umumnya memiliki kepastian dan

ketajaman suhu titik leleh yang rentangnya tidak melebihi 0,5oC. Titik leleh

pada senyawa organik dipengaruhi oleh ukuran kristal, jumlah material,

15

kecepatan pemanasan pengotor lain. Pengotor menyebabkan titik leleh turun

dan melebar rentang leburnya (Vogel, 1978)

2.8. Tinjauan tentang Uji Identifikasi Struktur Senyawa Hasil

Sintesis

2.8.1. Tinjauan tentang Spektrofotometri Ultraviolet

Spektrofotometri UV merupakan identifikasi secara kualitatif

dengan melihat intensitas dan panjang gelombang maksimum () dari

spektrum senyawa yang terbentuk. Intensitas dan maksimum tergantung

dari struktur molekul senyawa elektronik dari gugus yang terdapat dari

struktur molekul senyawa. Gugus yang dapat menyebabkan terjadinya

penyerapan cahaya dari daerah ultraviolet dan sinar tampak dari gugus

kromofor, sedangkan gugus yang dapat mengubah intensitas serapan dan

maksimum disebut gugus auksokrom (Mulja & Suharman, 1995). Gugus

kromofor yaitu suatu gugus yang mempunyai ikatan kovalen tidak jenuh

dan mengandung elektronik terkonjugasi, yang bertanggung jawab pada

serapan elektronik. Contoh gugus kromofor yang menyebakan transisi n ke

* adalah C=C, C=O, NO2. Gugus ausokrom adalah gugus jenuh yang

memiliki elektron bebas, jika gugus ini terikat pada gugus kromofor dapat

merubah panjang gelombang dan intensitas serapan. Contoh gugus

ausokrom adalah OH, -NH2 dan Cl atau gugus halogen (Roth & Blaschke,

1994).

Spektrofotometri ultraviolet memberikan informasi mengenai

transisi elektron dalam molekul. Radiasi ultraviolet yang tinggi

menyebabkan elektron berpindah dari tingkat energi yang satu menuju

tingkat energi yang lain yang biasanya mampu memecah ikatan kimia.

Umumnya, spektrofotometri ultraviolet memberi serapan pada daerah 200-

400 nm, serapan di bawah 200 nm dapat terjadi apabila dilakukan dalam

16

vakum atau pada lingkungan beratmosfir nitrogen murni (Silverstein et al.,

1991). Pelarut yang digunakan harus tidak atau hanya sedikit menunjukkan

absorpsi sendiri serta dapat melarutkan dengan mudah senyawa yang

dianalisis. Pelarut terutama yang digunakan adalah air, etanol, metanol,

asetonitril dan heksan (Roth & Blaschke, 1994)

2.8.2. Tinjauan tentang Spektrofotometri Inframerah

Spektrofotometri inframerah adalah salah satu metode instrumen

yang terutama bermanfaat untuk menetapkan jenis ikatan yang ada dalam

molekul (Hart, 2003). Spektroskopi inframerah dapat digunakan untuk

analisis kualitattif dan kuantitatif serta yang terpenting dari spektroskopi

inframerah adalah dapat digunakan untuk mengidentifikasi komponen

organik yang memiliki spektra yang umumnya kompleks (Skoog, 1992).

Radiasi inframerah yang dipakai untuk analisis instrumen adalah

radiasi inframerah yang rentang bilangan gelombangnya () antara 4000

hingga 650 cm-1

. Radiasi inframerah tersebut terbagi atas dua daerah yaitu;

daerah gugus fungsi pada rentang antara 4000 hingga 1300 cm-1

dan

daerah sidik jari pada rentang antara 1300 hingga 650 cm-1

(Silverstein,

1986).

Daerah gugus fungsi adalah daerah bagian kiri spektrum inframerah

yang khusus berguna dalam identifikasi gugus fungsional. Daerah di kanan

spektrum inframerah pada 1300 cm-1

adalah sidik jari yang sangat rumit

bentuknya karena pita serapan yang ditimbulkan akibat gabungan ikatan

tunggal baik modus tekuk dan ulur yang hampir sama sehingga sulit untuk

ditafsirkan, namun tiap senyawa organik mempunyai serapan yang unik

sehingga menjadi khas untuk senyawa organik (Fessenden, 1997).

17

2.8.3. Tinjauan tentang Spektrometri Nuclear Magnetic Resonance

Spektrometri Nuclear Magnetic Resonance (NMR) dapat

digunakan untuk analisis kualitatif, khususnya dalam penentuan struktur

molekul zat organik. Spektrofotometri dapat memberikan gambaran seperti

jenis gugus, lokasi dan jumlah gugus fungsi, gugus tetangga dan hubungan

gugus tersebut dengan gugus tetangga (Mulja, 1995).

Spektroskopi NMR didasarkan pada penyerapan gelombang radio

oleh inti-inti tertentu dalam molekul organik, apabila molekul ini berada

dalam medan magnet yang kuat (Fessenden, 1997). Inti-inti tertentu

menunjukkan perilaku seolah mereka berputar (spin). Karena inti bermuatan

dan muatan putaran menciptakan medan magnetik, inti yang berputar ini

berperilaku sebagai magnet kecil. Inti yang paling penting untuk penetapan

struktur organik dalam spektrofotometri NMR ialah 1H dan

13C yaitu isotop

nonradioaktif yang stabil dari karbon biasa, namun tidak memiliki spin dan

tidak memberikan spektrum NMR (Hart, 2003).

Bila inti dengan spin diletakkan di antara kutub-kutub magnet yang

sangat kuat, inti akan menjajarkan medan magnetiknya sejajar atau

melawan medan magnetik. Inti yang sejajar dengan arah medan magnetik

(paralel) mempunyai energi yang sedikit lebih rendah dari inti yang

melawan arah medan magnetik (antiparalel). Inti dalam medan magnetik

mengalami resonansi bila inti menyerap energi frekuensi radio spesifik inti

pada keadaan spin berenergi lebih rendah tereksitasi ke keadaan spin

berenergi lebih tinggi (Hart, 2003).

Spektrum NMR berupa grafik dari banyaknya energi yang diserap

(intensitas) terhadap kuat medan magnet. Dalam suatu spektrum NMR,

posisi sebuah serapan oleh sebuah proton bergantung pada kuat medan

magnet lokal yang mengitarinya. Biasanya arah medan magnet yang

terpasang dari kiri ke kanan makin besar, bila proton yang lebih mudah

18

terbalik akan menyerap energi pada medan magnetik luar lebih rendah,

proton ini menimbulkan puncak spektrum bawah medan (lebih ke kiri).

Proton yang sukar membalik menyerap energi pada medan magnetik luar

tinggi dan menimbulkan puncak spektrum atas medan (lebih ke kanan)

(Fessenden, 1997).

Analisis dengan NMR dilakukan dengan pengamatan pergeseran

kimia. Pergeseran kimia adalah posisi frekuensi resonansi sebuah proton

tertentu dalam pengaruh medan magnet luar berkekuatan tertentu yang

posisinya berbeda dengan proton standar internal. Sebagai standar internal

digunakan TMS (tetrametilsilana), khususnya ditambahkan pada zat yang

tidak larut dalam air. Alasan pemilihan TMS adalah memberikan spektrun

puncak tunggal yang kuat sebagai titik nol, mudah menguap dan dari segi

kimia bersifat lembam (inert) (Mulja, 1995). Pelarut yang digunakan dalam

spektroskopi NMR tidak boleh mengandung proton dalam struktur

molekulnya, titik didih rendah dan lembam. Contoh pelarut non polar yang

digunakan dalam spektroskopi NMR adalah CCl4 atau pelarut dengan

hidrogen yang digantikan oleh deuterium, seperti CDCl3

(deuteriokloroform) dan CD3COCD3 (heksadeuterioaseton) (Hart, 2003).

Selain pelarut kloroform, pelarut lain yang dapat digunakan adalah DMSO

(dimetil sulfoksida), metanol, aseton dan benzena (Harwood & Moody,

1989).

2.9. Tinjauan tentang Mencit

Kerajaan : Animalia

Filum : Chordata

Anak filum : Vertebrata

Kelas : Mammalia

Bangsa : Rodentia

19

Anak bangsa : Myomorpha

Suku : Muridae

Anak suku : Murinae

Marga : Mus

Jenis : Mus musculus

(Ballenger, 1999)

Hewan coba yang digunakan adalah mencit, karena struktur

anatomi organ dan proses metabolisme pada mencit hampir sama dengan

manusia, di samping itu juga lebih ekonomis, dan lebih mudah

penanganannya (Baker, 1980). Mencit yang digunakan mencit jantan,

berumur 1,5 bulan, sehat, dan memiliki aktivitas normal sebanyak 55

ekor. Berat mencit jantan dewasa adalah 20-40 gram. Sebelum penelitian

dimulai, semua mencit dipelihara dalam kondisi yang sama selama satu

minggu untuk dapat melakukan penyesuaian, lalu ditimbang setiap hari dan

diamati tingkah laku dan kesehatannya. Mencit dinyatakan sehat dan dapat

digunakan dalam percobaan, bila tingkah lakunya tidak menunjukkan

gejala-gejala sakit, dan berat tubuhnya tidak berkurang lebih dari 10% berat

semula. (Smith & Mangkoewidjojo, 1988).

2.10. Tinjauan tentang Metode Pengujian Efek Analgesik

2.10.1. Metode Rangsangan Kimia

Metode ini dapat digunakan untuk mendeteksi analgesik perifer

dan sentral. Metode ini telah digunakan pada banyak penelitian dan

direkomendasikan sebagai metode skrining yang sederhana (Vogel, 2002).

Induksi nyeri dilakukan dengan injeksi iritan secara intraperitoneal

pada mencit. Reaksi hewan coba adalah meregang atau menggeliat (Vogel,

2002). Metode ini sensitif, reprodusibel untuk analgesik ringan (Turner,

1965). Witkien melakukan percobaan writhing test dengan menggunakan

20

tikus jantan. Tikus jantan disuntik secara injeksi intraperitoneal larutan

asam asetat 300 mg/kgBB. Obat yang akan diuji diberikan secara oral lima

belas menit sebelum asam asetat disuntikan kepada tikus. Tiap tikus

kemudian diletakkan pada beker dan setiap geliatan atau regangan pada

tikus tersebut diamati dan dicatat selama dua puluh menit, sedangkan pada

kontrol diberikan salin. Persen proteksi setiap level dosis dikalkulasikan

sebagai berikut (Turner, 1965 ).

% proteksi = 100 (eksperimen X 100)

kontrol

ED50 yaitu dosis efektif yang menghasilkan respons tertentu pada

50% hewan coba dalam kelompok. Dalam hal ini, ED50 adalah dosis efektif

yang dapat mengurangi jumlah geliatan sampai setengah dari hewan

kontrol. Metode ini sensitif dan sederhana untuk analgesik ringan (Turner,

1965).

2.10.2. Metode Rangsangan Mekanik

Metode yang disebut tail-clip (Haffners method) cukup mudah

tetapi hanya bersifat kualitatif karena dengan penjepitan, ekor tikus menjadi

bengkak. Pada metode ini ekor hewan coba (tikus) dijepit dengan alat

penjepit yang dilengkapi dengan pencatat waktu. Alat jepit tersebut

kemudian ditekan dengan sekrup sedikit demi sedikit, sampai timbul rasa

nyeri pada hewan coba. Dengan skala yang tertera pada alat, bandingkan

daya tahan hewan coba terhadap tekanan sebelum dan sesudah pemberian

sediaan uji analgetik (Thompson, 1990).

21

2.10.3. Metode Rangsangan Panas

Metode yang dikenal sebagai metode plat panas telah digunakan

oleh banyak peneliti untuk mendeteksi analgesik sentral tetapi tidak untuk

analgesik perifer. Hewan coba yang digunakan adalah mencit atau tikus.

Metode ini dideskripsikan oleh Woolfe dan Mc Donald (1994), tetapi telah

dimodifikasi oleh banyak peneliti. Satu kelompok terdiri dari 10 mencit

dengan berat 18-22 g digunakan untuk masing-masing dosis. Temperatur

hot plate yang digunakan adalah 55-56C. Hewan coba diletakan di atas hot

plate dan diamati waktu reaksi yang terjadi, reaksi dapat berupa menjilat

kaki atau meloncat (Vogel, 2002). Perpanjangan waktu reaksi menunjukkan

efek analgesik.

Pada metode tail immersion (jentik ekor), hewan coba yang

digunakan adalah tikus putih jantan galur Wistar. Ekor hewan coba

dimasukan ke dalam air panas 50C. Prinsip dari metode ini adalah

membandingkan antara waktu yang diperlukan tikus untuk menjentikkan

ekornya sebelum (respons normal) dan sesudah perlakuan.

Pada metode tail-fick, hewan coba (tikus atau mencit) diletakkan

pada restrainer, kemudian ekor hewan coba yang telah ditandai dengan

spidol 3 cm dari ujung disinari dengan lampu 100 watt melalui suatu lensa

fokus. Waktu reaksi yang diamati yaitu waktu antara pemberian stimulus

nyeri berupa panas hingga terjadinya respon seperti menarik, menggeser

atau menjentikkan ekornya (Thompson, 1990).

2.10.4. Metode Stimulasi Elektrik

Metode ini digunakan sebagai penghasil nyeri baik melalui

jaringan listrik pada lantai chamber (wadah hewan coba), elektroda yang

ditempel pada kulit atau elektroda yang ditanam pada ganglia sensoris atau

pada tempat susunan saraf pusat. Cara ini dilakukan dengan memberikan

22

arus tertentu pada hewan coba dan apabila hewan coba berada pada tingkat

nyeri level tertentu yang tersedia maka arus akan turun. Setelah itu dapat

diukur ambang rasa nyerinya dan setelah perlakuan, dilakukan percobaan

kembali. Apabila ambang rasa nyeri meningkat setelah perlakuan, maka

dapat disimpulkan bahwa obat tersebut memiliki efek analgesik (Domer,

1971). Keuntungan dari metode ini adalah :

1. Arus dapat diatur meski terjadi fluktuasi daya tahan subyek.

2. Dapat dilakukan pada berbagai hewan coba.

3. Mudah diaplikasikan dan diamati.

4. Dapat menghasilkan stimulasi nyeri yang tinggi tanpa kerusakan

jaringan.

5. Dapat diulang pada interval yang pendek

6. Onsetnya cepat