artikel isolasi kj-05-06
Transcript of artikel isolasi kj-05-06
PURIFIKASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ANTIOKSIDAN
DARI SPONS Aaptos sp.
Muhammad Nursid*), Hedi Indra Januar*) dan Ekowati Chasanah*)
ABSTRAK
Penelitian untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa antioksidan dari spons Aaptos sp. telah dilakukan. Uji antioksidan dilakukan dengan metode 2,2 difenil pikril hidrazil (DPPH). Fraksinasi dan isolasi senyawa aktif dilakukan dengan menggunakan kromatografi kolom C18, silika gel dan kromatografi lapis tipis preparatif. Identifikasi senyawa yang diperoleh dilakukan berdasarkan atas data spektra massa menggunakan LC-PDA-MS dan dibandingkan dengan pustaka digital MarinLit 2007. Hasil uji antioksidan menunjukkan bahwa sub fraksi 1 memiliki aktivitas antioksidan yang cukup baik dengan IC50 24,6 µg/ml. Sub fraksi 2 tidak menunjukkan aktivitas antioksidan dengan IC50 > 1000 µg/ml. Identifikasi lebih lanjut terhadap sub fraksi 1 menunjukkan bahwa senyawa kimia yang terdapat di dalamnya adalah aaptamin atau isoaaptamin, sedangkan senyawa kimia yang terdapat pada sub fraksi 2 adalah 4-metilaaptamin dan dimetiloksiaaptamin.
ABSTRACT : Purification and identification of antioxidant compound of Aaptos sp. sponge. By : Muhamammd Nursid, Hedi Indra Januar and Ekowati Chasanah
Research to isolate and identify antioxidant compounds in Aaptos sp. sponge has been carried out. Antioxidant test was performed using 2,2 diphenyl picrylhydrazyl (DPPH). Fractionation and isolation of bioactive compound was carried out using C18 column chromatography, silica gel column chromatography and preparative thin layer chromatography. Compounds identification was performed using LC-PDA-MS and was compared to 2007 MarinLit digital library. Result of the study showed that sub fraction 1 had strong antioxidant activity with IC50 value of 24.6 µg/ml. Sub fraction 2 did not show antioxidant activity with IC50
value of >1000 µg/ml. Further identification revealed that the chemical compound of sub fraction 1 was aaptamine or isoaaptamine while the chemical compounds of sub fraction 2 were 4-methyl aaptamine and dimethyloxiaaptamine.KEYWORDS : Purification, identification, antioxidant compound, Aaptos sp.
PENDAHULUAN
Sejak tahun 1969 sampai 1999 lebih kurang 300 paten telah dihasilkan dalam bidang
marine natural products. Setiap tahun sekitar 100 senyawa yang berhasil diinvestigasi. Sebagian
besar senyawa aktif dari lingkungan laut diteliti khasiatnya sebagai bahan antikanker (Proksch et
al., 2002).
*Peneliti pada Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan
Spons dikenal sebagai organisme yang kaya dengan kandungan senyawa bioaktif.
Menurut Munro et al. (1999), spons merupakan biota laut yang paling banyak diteliti kandungan
senyawa bioaktifnya. Senyawa bioaktif dari spons sangat beragam dan secara kimia memiliki
struktur yang unik dan menarik untuk dijadikan sebagai senyawa pemandu (lead compound)
dalam sintesis obat-obat baru.
Aaptos merupakan salah satu genera spons yang banyak diteliti kandungan dan aktivitas
senyawa bioaktifnya. Spons ini banyak mengandung senyawa alkaloid yang memiliki aktivitas
antitumor, antimikrobial, antivirus dan lain-lain. Menurut Souza et al (2007), senyawa 4-
metilaaptamin yang diisolasi dari spons Aaptos aaptos dapat menghambat infeksi Herpes
Simplex Virus-1 (HSV-1). Nakamura et al. (1987) menemukan 2 senyawa baru golongan alkaloid
dari spons Aaptos aaptos yang berasal dari perairan Okinawa yaitu dimetilaaptamin dan
dimetil(oksi)aaptamin yang memiliki aktivitas sitotoksik dan antimikrobial. Laporan lain
menyebutkan bahwa isoaaptamin dari Aaptos memiliki aktivitas untuk mencegah infeksi
Staphylococcus aureus dengan menghambat enzim sortase A (SrtA) (Jang et al., 2007). Namun
demikian, laporan bahwa senyawa-senyawa aktif dari spons Aaptos juga memiliki bioaktivitas
untuk meredam radikal bebas 2,2 difenil pikril hidrazil (DPPH) masih jarang terpublikasi.
Jumlah spesies spons di dunia ini diperkirakan mencapai 5000 - 9000 jenis (Colin dan
Arneson, 1995) dan 700 jenis di antaranya terdapat di perairan Indoensia (Tanaka et al., 2002
dalam Dahuri, 2003). Berdasarkan besarnya jumlah jenis spons dari Indonesia maka menjadi hal
yang penting untuk melakukan investigasi kandungan senyawa bioaktif yang terdapat di
dalamnya.
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa antioksidan dari
spons Aaptos sp. yang berasal dari Taman Nasional Laut Karimunjawa, Jawa Tengah. Penelitian
ini diharapkan dapat membantu dalam mengungkap nilai bioprospeksi yang terkandung dalam
spons yang berasal dari perairan Indonesia.
2
METODE PENELITIAN
Preparasi Bahan dan Ekstraksi
Spons KJ-05-06 diambil dari perairan Taman Nasional Laut Karimunjawa. Spesimen
langsung dipreservasi di lapangan dengan etanol teknis. Ekstraksi dilakukan di laboratorium
dengan cara sebagai berikut. Spesimen dipotong-potong kemudian dimaserasi dengan pelarut
etanol. Setelah 12 jam filtrat disaring dengan kertas Whatman no 42. Ekstraksi dilakukan
sebanyak 3 kali. Filtrat kemudian dievaporasi dengan rotavapor vakum pada suhu 4 oC sampai
etanol habis menguap. Sisa air yang terdapat pada ekstrak lalu dikeringkan dengan freeze dryer.
Fraksinasi dan Isolasi
Fraksinasi dan isolasi dilakukan dengan menggunakan kromatografi kolom. Purifikasi
didasarkan atas assay guided isolation. Bioassay yang digunakan sebagai pemandu isolasi adalah
uji antioksidan menggunakan radikal bebas 2,2 difenil pikril hidrazil (DPPH). Fraksinasi
terhadap ekstrak kasar dilakukan dengan kolom kromatografi fase balik C18 menggunakan fase
gerak yang dimulai dari air 100 % kemudian polaritasnya diturunkan secara bertahap sampai
metanol (M) : etil asetat (EA) (5:1). Fraksi yang aktif lalu difraksinasi lebih lanjut menggunakan
kolom kromatografi fase normal silika gel dan dielusi dengan heksan (H) : etil asetat (5:1) dan
secara bertahap polaritasnya dinaikkan hingga metanol 100 %. Fraksi yang memiliki aktivitas
terbaik lalu dipurifikasi dengan menggunakan kromatogafi lapis tipis preparatif pada fase diam
silika gel dan fase gerak diklorometan : metanol (5:1).
Identifikasi senyawa yang diperoleh dilakukan berdasarkan analisis spektra massa
menggunakan LC-PDA-MS. Data ini digabung dengan data jenis spons dan hasilnya
dibandingkan dengan pustaka digital MarinLit 2007 Version # vpc13.5 (Blunt and Blunt, 2007)
3
Uji Antioksidan
Pengujian dilakukan dengan menggunakan mikroplat 96 sumuran (well) menurut Yong Li
et al. (2006). Ekstrak spons dibuat dengan 3 seri konsentrasi 10, 100 dan 1000 µg/ml dalam
larutan metanol p.a. Ekstrak spons pada setiap seri konsentrasi dimasukkan ke dalam sumuran
sebanyak 160 µl. Kemudian ke dalam sumuran yang sudah berisi ekstrak di tambahkan larutan
DPPH masing-masing 40 µl. Larutan DPPH dibuat dengan cara melarutkan 3 mg DPPH dalam
10 ml metanol p.a. Sebagai kontrol ekstrak spons, sebanyak 160 µl ekstrak spons tiap seri
konsentrasi dimasukkan ke dalam sumuran lalu ditambahkan 40 µl metanol p.a. Kontrol negatif
(tanpa pemberian ekstrak spons) dibuat dengan cara menambahkan 160 µl metanol p.a dengan 40
µl DPPH, dan sebagai blanko digunakan 200 µl metanol p.a. Asam askorbat digunakan sebagai
kontrol positif menggunakan seri konsentrasi dan volume yang sama dengan perlakuan contoh.
Mikroplat kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 30 menit. Setelah 30 menit absorbansi
dari tiap sumuran dibaca dengan dynex microplate reader pada panjang gelombang 510 nm.
Persentase penghambatan radikal bebas ditentukan dengan rumus :
(A – B) – (C – D)% hambatan = x 100 %
(A – B)
Di mana : A = absorbansi kontrol negatif B = absorbansi blanko C = absorbansi ekstrak spons D = absorbansi kontrol ekstrak spons
Data persentase penghambatan digunakan untuk mencari nilai Inhibition Concentration
50 (IC50) dalam µg/ml. Nilai IC50 ditentukan dengan analisis probit menggunakan bantuan
perangkat lunak MINITAB versi 13.0.
4
HASIL DAN BAHASAN
Spons KJ-05-06 diambil dari Taman Nasional Laut Karimunjawa, Jawa Tengah.
Spesimen spons ini sekarang disimpan di laboratorium Bioteknologi Balai Besar Riset
Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan sebagai koleksi. Hasil identifikasi
sepesimen spons KJ-05-06 yang dilakukan di Pusat Penelitian Oseanologi LIPI menunjukkan
bahwa spons ini termasuk dalam jenis Aaptos sp (Gambar 1).
Gambar 1. Spesimen spons Aaptos sp. Figure 1. Specimen of Aaptos sp. sponge
Pengujian aktivitas antioksidan terhadap ekstrak kasar spons Aaptos sp. menghasilkan
nilai IC50 sebesar 30,5 µg/ml. Nilai IC50 sebesar ini menunjukkan bahwa dalam ekstrak kasar
Aaptos sp. terdapat substansi aktif antioksidan yang sangat potensial untuk diteliti lebih lanjut.
Tahap pertama untuk mengetahui senyawa antioksidan dari ekstrak kasar Aaptos sp. adalah
dengan melakukan fraksinasi menggunakan kolom kromatografi dengan fase diam C18 dan dielusi
dengan eluen air 100%, air : metanol (5:1), air : metanol (1:1), air metanol (1:5), metanol 100%
dan metanol : etil asetat (5 : 1). Fraksinasi tahap pertama ini menghasilkan 6 fraksi. Hasil
fraksinasi dan uji antioksidan terhadap setiap fraksi yang dihasilkan disajikan pada Tabel 1.
5
Tabel 1. Hasil fraksinasi KJ-05-06 dan nilai IC50 uji antioksidan
Table 1. Result of KJ-05-06 fractionation and IC50 value of antioxidant test
Keterangan/Remark : W = air/water, M = metanol/methanol, EA = etil asetat/ethyl acetate
Berdasarkan Tabel 1 dapat dilihat bahwa fraksi no. 3 (KJ05F3, cetak tebal) memiliki
aktivitas yang paling kuat dengan IC50 sebesar 10,7 ug/mL. Fraksinasi lebih lanjut fraksi KJ05F3
selanjutnya dilakukan dengan kromatografi kolom silika gel dengan fase gerak heksan : etil
asetat (5:1), etil asetat : metanol (10:1), etil asetat : metanol (1:1), etil asetat : metanol (1:10) dan
metanol 100 %. Hasil fraksinansi KJ05F3 dan nilai IC50 fraksi-fraksi yang dihasilkan disajikan
pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil isolasi KJ05F3 dan IC50 uji antioksidan
Table 2. Result of KJ05F3 isolation and IC50 value of antioxidant test
Keterangan/Remark : H = heksana/hexane, EA = etil asetat/ethyl acetate, M = metanol/methanol
Dari Tabel 2 di atas terlihat bahwa fraksi no. 4 (KJ05F3.4, cetak tebal) memiliki aktivitas
antioksidan yang paling kuat dengan IC50 13,2 ug/mL. Selain itu, rendemen yang dihasilkan dari
fraksi ini juga tinggi (30,1 %). Purifikasi fraksi KJ05F3.4 selanjutnya dilakukan dengan
6
Fase Gerak/ Berat (mg)/ Rendemen (%)/ Eluent Weight (mg) Yields (%)
1 KJ05F1 W (100 %) 672.9 26.9 1272.62 KJ05F2 W:M (5:1) 818.7 32.7 263.83 KJ05F3 W:M (1:1) 224.9 8.9 10.74 KJ05F4 W:M (1:5) 120.1 4.8 46.85 KJ05F5 M (100%) 36.6 1.4 71.66 KJ05F6 M:EA (5 : 1) 6.3 0.3 24.3
IC50 (ug/mL)Fraksi/FractionsNo/No
Fase Gerak/ Berat (mg)/ Rendemen (%)/ Eluent Weight (mg) Yields (%)
1 KJ05F3.1 H:EA (5:1) - EA:M (10:1) 2 0.9 6619.62 KJ05F3.2 EA:M (10:1) - EA:M (1:1) 0.6 0.2 39759.33 KJ05F3.3 EA:M (1:1) 5.9 2.6 166.14 KJ05F3.4 EA:M (1:1) 67.5 30.1 13.25 KJ05F3.5 EA:M (1:1) - EA:M (1:10) 32.1 14.3 37.66 KJ05F3.6 M (100%) 11.6 5.1 183.6
IC50 (ug/mL)Fraksi/FractionsNo/No
menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) preparatif dengan fase diam silika gel dan dielusi
dengan fase gerak diklorometan : metanol = 5 : 1. Hasil KLT menunjukkan terdapat 2 buah sub
fraksi yang memisah dengan baik. Sub fraksi pertama (kode fraksi : KJ05F3.4.1) memiliki rf =
0,63 dan sub fraksi kedua (kode fraksi : KJ05F3.4.2) memiliki rf = 0,86 (Gambar 2).
Gambar 2. Hasil KLT preparatif fraksi KJ05F3.4 yang dideteksi pada sinar UV 366 nmFigure 2. Result of preparative TLC of KJ05F3.4 fraction detected by 366 nm UV light
Kedua senyawa ini selanjutnya dianalisis menggunakan LCMS untuk melihat kemurnian
dan spektra massanya. Eluen yang digunakan dalam analisis LCMS adalah asetonotril 10 %
dalam air kemudian secara gradien menuju 100 % asetonitril. Kromatogram, spektra massa dan
serapan UV sub fraksi 1 disajikan pada Gambar 3.
7
Sub Fraksi 2 (KJ05F3.4.2) Rf = 0,86
Sub Fraksi 1 (KJ05F3.4.1) Rf = 0,63
Sub Fraksi 2 (KJ05F3.4.2) Rf = 0,86
Sub Fraksi 1 (KJ05F3.4.1) Rf = 0,63
5 10 15 20 25 30 35 min
25.0e6
50.0e6
75.0e6
100e6
125e6
150e6
Int . TIC(1.00)
A 1
Gambar 3. Kromatogram LCMS (A), spektra massa (B), dan serapan UV (C) dari sub fraksi 1
Figure 3. LCMS Chromatogram (A), Mass spectra (B) and UV absorbance (C) of sub fraction 1
Kromatogram dari sub fraksi 1 (Gambar 3 A) terdiri dari dua puncak, puncak pertama
(puncak tajam) merupakan puncak absorbansi eluen dan puncak kedua yang terlihat lebih datar
8
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 m/z 0e3 2500e3 5000e3 7500e3 10.0e6 12.5e6
Int. 229
291 472 122 212 258 337 163 196 311 447 143 520 373 409 489 563 652 392 712 792 581 762
200 300 400 500 600 700 nm 0
10 20 30 40 50 60
mAbs 13.87 /1.00
246.47 221.67
374.26 378.04 398.24
236.54 252.69
373.00 375.52 379.30
B
C
2
dan memanjang merupakan absorbansi dari sub fraksi 1. Bentuk puncak sub fraksi 1 sesuai
dengan bentuk spot pada KLT yaitu memanjang dan berekor seperti yang terlihat pada Gambar
2. Dari data spektra massa pada Gambar 3 B, terdapat ion massa pada m/z 229 dan m/z 291.
Selisih dari kedua nilai ini sama dengan 62, adalah karakteristik untuk penambahan adduct ion
(AcN+Na)+. Oleh karena itulah pola massa untuk senyawa pada kromatogram di atas adalah
(M+H)+ yaitu pada m/z 229 dan (M+AcN+Na)+ pada m/z 291. Berdasarkan database MarinLit
(Blunt and Blunt, 2007), senyawa yang memiliki massa 229 (m+), serapan UV pada 235 dan 375
nm (Gambar 3 C) adalah aaptamin dan isoaaptamin. Kedua senyawa ini merupakan dua isomer
gugus fungsional. Perkiraan ini diperkuat secara taksonomis bahwa spons KJ-05-06 termasuk
dalam jenis Aaptos sp. yang dikenal sebagai spons penghasil senyawa aaptamin.
Hasil uji antioksidan menunjukkan bahwa sub fraksi 1 memiliki aktivitas antioksidan
yang kuat dengan nilai LC50 sebesar 24,6 µg.ml. Informasi mengenai aktivitas antioksidan dari
aaptamin masih sangat terbatas sehingga hasil penelitian ini memberikan informasi yang baru
tentang bioaktivitas aaptamin terhadap radikal bebas DPPH. Struktur aaptamin dan isoaaptamin
menurut Blunt and Blunt (2007) serta berat molekul (BM) dan serapan optimun UV disajikan
pada Gambar 4.
Gambar 4. Struktur molekul aaptamin dan isoaaptaminFigure 4. Molecular structure of aaptamine and isoaaptamine
Kromatogram dari dari sub fraksi 2 disajikan Gambar 5 A. Dari Gambar 5 A dapat
dilihat bahwa sub fraksi 2 memiliki 3 puncak. Puncak 1 merupakan absorbansi eluen dan puncak
9
AaptaminC13H12N2O2BM: (M): m/z 228
(M+H)+: m/z 229(M+Acn+Na)+: m/z 291
UV: 235 dan 375 nm
N
N
O
HO IsoaaptaminC13H12N2O2
BM: (M): m/z 228(M+H)+: m/z 229(M+Acn+Na)+: m/z 291
UV: 235 dan 375 nm
0523/1
N
NH
OCH3
H3CO AaptaminC13H12N2O2BM: (M): m/z 228
(M+H)+: m/z 229(M+Acn+Na)+: m/z 291
UV: 235 dan 375 nm
N
N
O
HO IsoaaptaminC13H12N2O2
BM: (M): m/z 228(M+H)+: m/z 229(M+Acn+Na)+: m/z 291
UV: 235 dan 375 nm
0523/1
N
NH
OCH3
H3CO
0523/1
N
NH
OCH3
H3CO
2 serta 3 merupakan absorbansi sub fraksi 2. Spektra massa dan serapan UV puncak 2 pada
kromatogram disajikan pada Gambar 5 B dan 5 C.
Gambar 5. Kromatogram (A), spektra massa (B) dan serapan UV (C) dari puncak 1 Figure 5. Chromatogram (A), mass spectra (B) and UV absorbance (C) of peak 1
Spektra massa pada Gambar 5 B memberikan data ion molekul yang kuat berdasarkan
adanya adduct ion pada spektra. Berturut turut puncak (M+H)+ pada m/z 213, (M+Na)+ pada m/z
10
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 m/z 0.0e6 1.0e6 2.0e6 3.0e6 4.0e6 5.0e6
Int. 446
234 213
337 330 483 250 275 506 170 449 294 569 644 369 624 548 681 781 601 751 410 722 208 390 122
200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 nm 20 30 40 50 60 70 80 90
100 110 120 130 140 mAbs 7.70 /1.0 0
219.20
418.46 422.25 307.62 327.69
234.06
374.26 419.72 423.52 432.37
5 10 15 20 25 30 35 min
5.0e6
10.0e6
15.0e6
20.0e6
25.0e6
30.0e6
35.0e6
40.0e6
45.0e6
Int. TIC(1.00)
A
B
C
1
2
3
234, dan ion dimer (M+M+Na)+ pada 446, memberikan data bahwa ion molekul netral dari
senyawa ini adalah pada m/z 212. Spektra massa pada Gambar 5 B memberikan data ion
molekul yang kuat berdasarkan adanya adduct ion pada spektra. Berturut turut puncak (M+H)+
pada m/z 213, (M+Na)+ pada m/z 234, dan ion dimer (M+M+Na)+ pada 446, memberikan data
bahwa ion molekul netral dari senyawa ini adalah pada m/z 212. Bila data ini digabung dengan
data serapan UV pada 235, 269, 272, dan 415 nm serta data nama spesies spons maka
berdasarkan database MarinLit (Blunt and Blunt, 2007), puncak 2 merupakan senyawa alkaloid
yang mirip dengan aaptamin yaitu dimetiloksiaaptamin (Gambar 6).
Gambar 6. Struktur molekul dimetiloksiaaptamin Figure 6. Molecular structure of dimethyloxyaaptamine
Spektra massa dan serapan UV puncak 3 dari sub fraksi 2 (Gambar 5 A) disajikan pada
Gambar 7.
11
2266/3
N
N
OCH3
O
DimetiloksiaaptaminC12H8N2O2BM: (M): m/z 212
(M+H)+: m/z 213(M+Na)+: m/z 234(M+M+Na)+: m/z 446
UV: 235, 269, 272, dan 415 nm
2266/3
N
N
OCH3
O
DimetiloksiaaptaminC12H8N2O2BM: (M): m/z 212
(M+H)+: m/z 213(M+Na)+: m/z 234(M+M+Na)+: m/z 446
UV: 235, 269, 272, dan 415 nm
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 m/z 0e3
2500e3
5000e3
7500e3
Int. 506
264 243
503 383 212 280 523 305 185 478 582 660 420 630 683 612 764 719 398 782 339 155 114
A
Gambar 7. Spektra massa (A) dan serapan UV (B) puncak 2 Figure 7. Mass spectra (A) and UV absorbance (B) of peak 2
Spektra massa pada Gambar 7 A memberikan data ion molekul yang kuat berdasarkan
dengan adanya adduct ion pada spektra. Berturut turut puncak (M+H)+ pada m/z 243, (M+Na)+
pada m/z 264, dan ion dimer (M+M+Na)+ pada 506, memberikan data bahwa ion molekul netral
dari senyawa ini adalah pada m/z 242. Berdasarkan data spektra massa, serapan UV pada panjang
gelombang 239, 258, 269 dan 416 nm dan database MarinLit menurut Blunt and Blunt (2007)
maka dapat disimpulkan bahwa senyawa dengan karakteristik spektroskopik seperti di atas
adalah senyawa 4-metilaaptamin seperti yang diperlihatkan pada Gambar 8.
12N
N
O
O
14589/2
4-metilaaptamineC14H14N2O2BM: (M) 242
(M+H)+ 243(M+Na)+ 264(M+M+Na)+ 506
UV: 239, 258, 269, 216
200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 nm 25 50 75
100 125 150 175 200 225 mAbs 10.45 /1. 00
217.96
321.41 316.40 318.91 276.36
235.30
374.26
310.13 320.16 317.65
B
Gambar 8. Struktur molekul 4-metilaaptaminFigure 8. Molecular structure of 4-methylaaptamine
Hasil uji antioksidan terhadap sub fraksi 1 dan 2 menunjukkan bahwa sub fraksi 2 yang
terdiri dari 2 senyawa yaitu dimetiloksiaaptamin dan 4-metilaaptamin tidak menunjukkan
aktivitas antioksidan karena IC50 > 1000 µg/ml. Aktivitas antioksidan fraksi KJ05F3.4 (IC50 =
13,2 µg/ml) (Tabel 3) masih lebih rendah dibanding aktivitas antioksidan fraksi asalnya yaitu
KJ05F3 (IC50 = 10,7 µg/ml) (Tabel 2), demikian juga aktivitas antioksidan sub fraksi 1 (IC50 =
24,6 µg/ml) lebih rendah dari fraksi asalnya yaitu fraksi KJ05F3.4 (IC50 = 13,2 µg/ml).
Menurunya aktivitas antioksidan tersebut kemungkinan besar disebabkan oleh dekomposisi
ekstrak selama proses penyimpanan dan pemisahan (fraksinasi). Sebagaimana yang
dikemukakan oleh Rohman (2007), faktor-faktor seperti suhu, kelembaban, radiasi ultraviolet
dan proses oksidasi dapat menyebabkan kerusakan ekstrak atau sampel.
Dalam penelitian ini terungkap bahwa dari tiga senyawa yang diisolasi yaitu aaptamin,
dimetiloksiaaptamin dan 4-metilaaptamin, hanya aaptamin yang memiliki kemampuan meredam
radikal bebas DPPH. Berdasarkan hasil penelitian ini dapat diketahui bahwa aaptamin sebagai
salah satu senyawa alkaloid yang terkandung dalam spons Aaptos sp. memiliki aktivitas
antioksidan. Hal ini menambah informasi tentang bioaktivitas aaptamin yang sudah
dipublikasikan sebelumnya khususnya informasi tentang bioaktivitas spons Aaptos sp. dari
perairan Indonesia.
Contoh publikasi tentang bioaktivitas senyawa golongan aaptamin adalah seperti yang
diungkap oleh Coutinho et al. (2002) yang menyatakan bahwa senyawa 4-metilaaptamin
memiliki aktivitas sebagai anti HSV-1 dan antidetterant. Data dari MarinLit (Blunt and Blunt,
13
2007) juga mengungkapkan bahwa tiga dari empat senyawa golongan aaptamin yang ditemukan
pada Aaptos sp. keseluruhannya merupakan senyawa aktif terutama sebagai antitumor.
KESIMPULAN
Hasil uji antioksidan terhadap sub fraksi 1 menunjukkan bahwa sub fraksi 1 memiliki
aktivitas antioksidan dengan IC50 24,6 µg/ml. Sub fraksi 2 tidak menunjukkan aktivitas
antioksidan karena IC50 > 1000 µg/ml. Hasil purifikasi sub fraksi 1 menunjukkan bahwa senyawa
yang terdapat didalamnya adalah aaptamin atau isoaaptamin, sedangkan senyawa yang terdapat
pada sub fraksi 2 adalah 4-metilaaptamin dan dimetiloksiaaptamin.
DAFTAR PUSTAKA
Cautinho, A.F., Chanas, B., Souza, T.M.L., Frugrulhetti, I.C.P.P., Epifanio, R.A. 2002. Anti HSV-1 alkoloids from a feeding deterrent marine sponge of genus Aaptos. Heterocycles, 57 (7) : 1265 – 1272
Colin, P.L and Arneson, C., 1995. Tropical Pacific Invertebrates. A Field guide to the Marine Invertebrates Occuring on Tropical Pacific Coral Reefs, Seagrass Beds and Mangrove. Coral Reef Press, California.
Dahuri, R., 2003, Keanekaragaman Hayati Laut, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta
Jang, K.H., Chung, S.C., Shin, J., Lee, S.H., Kim, T.I., Lee, H.S., and Oh, K.B. 2007. Aaptamines as sortase A inhibitors from the tropical sponge Aaptos aaptos. Biorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17 (19) : 5366 - 5369
Blunt, J.W. and Blunt, D.A. 2007. MarinLit-Marine Literature Database. 2007. Version # vpc13.5. Revised by Munro, M.H.G. and Blunt, J.W. Maintained at various time by Hickford, S.J.H., Vigneswaran, M., Celestine, Unger, R. E., Hu, S. Marine Chemistry Group, Department of Chemistry-University of Caterbury. Christchurch, New Zealand
Munro, M.H.G., Blunt, J.W., Dumdei, E.J., Hickford, S.J.H., Lill, R.E., Li, S., Battershill, C.N., and Duckworth, A.R. 1999. The discovery and development of marine compound with pharmaceutical potential. Journal of Biotechnology, 70 : 14 -25.
14
Nakamura, H., Kobayashi, J., Ohizumi, Y., and Hirata, Y. 1987. Aaptamines, novel benzo[de][1,6]naphthyridines from the Okinawan marine sponge Aaptos aaptos. J. Chem. Soc., 1 : 173 - 176
Proksch, P., Edrada, R.A., and Ebel R. 2002. Drugs from the sea – current stutus and microbial implications. Appl. Microbiol. Biotechnol, 59 : 125 – 134.
Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar, Yogyakarta. 485 pp.
Souza, T.M., Abrantes, J.L., Epifanio, R.A., Fontes, C.F. and Frugulhetti, I.C. 2007. The alkaloid 4-methylaaptamine isolated from the sponge Aaptos aaptos impairs herpes simplex virus type 1 Penetration and immediate-early protein synthesis. Planta Medica, 3 : 200 – 205
Yong Li, Xifeng Li, U. Lee, J.S. Kang, H. D. Choi and B. W. Son. 2006. A New Radical Scavenging Anthracene Glycoside, Asperflavin Ribofuranoside, and Polyketides from a Marine Isolate of the Fungus Microsporum. Chem. Pharm. Bull. 54(6) : 882—883
15
16