anfiskimkromatografi
-
Upload
agustian-chuagestu -
Category
Documents
-
view
11 -
download
1
description
Transcript of anfiskimkromatografi
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 1/32
Analisis Fisiko Kimia Analisis Fisiko Kimia
Oleh : Dr. HarmitaOleh : Dr. Harmita
KROMATOGRAFI
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 2/32
DEFINISIDEFINISI
Kromatografi adalah teknik pemisahanKromatografi adalah teknik pemisahancampuran didasarkan atas perbedaancampuran didasarkan atas perbedaandistribusi dari komponen-komponendistribusi dari komponen-komponencampuran tersebut diantara dua fase,campuran tersebut diantara dua fase,
yaitu fase diam (padat atau cair) dan faseyaitu fase diam (padat atau cair) dan fasegerak (cair atau gas).gerak (cair atau gas). ila fase diam berupa !at padat yangila fase diam berupa !at padat yang
aktif, maka dikenal istilah kromatografiaktif, maka dikenal istilah kromatografi
penyerapan (adsorption chromatography).penyerapan (adsorption chromatography).ila fase diam berupa !at cair, makaila fase diam berupa !at cair, makateknik ini disebut kromatografi pembagianteknik ini disebut kromatografi pembagian(partition chromatography).(partition chromatography).
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 3/32
Jenis-jenis kromatografiJenis-jenis kromatografi
erdasarkan fase gerak yangerdasarkan fase gerak yang
digunakan, kromatografi dibedakandigunakan, kromatografi dibedakan
men"adi dua golongan besar yaitumen"adi dua golongan besar yaitu
gas chromatography dan li#uidgas chromatography dan li#uid
chromatography. $asing-masingchromatography. $asing-masing
golongan dapat dibagi lagi sepertigolongan dapat dibagi lagi seperti
yang telah disebutkan pada definisiyang telah disebutkan pada definisidi atas.di atas.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 4/32
Con’dCon’dKromatografi
PADAT GELION EXCHANGE
PLATE KOLOM
GAS CAIR
KATION ANION GPC
GC
EKSKLUSI
HPLC
FASA
GERAK
CAIR
PERTUKARAN ION
CAIR
HPTLC
FASA
DIAM
ADSORBSI
Keterangan%&' %as &i#uid 'hromatography%' %as olid 'hromatography&&' &i#uid &i#uid 'hromatography&' &i#uid olid 'hromatography*' *aper 'hromatography+&' +hin &ayer 'hromatography%* %el *ermeation% %el iltrationH*&' High *erformance &iguid 'hromatography
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 5/32
Liquid Liquid Chromatography (LLC)Liquid Liquid Chromatography (LLC)
&&' adalah kromatografi pembagian&&' adalah kromatografi pembagian
dimana partisi ter"adi antara fase gerakdimana partisi ter"adi antara fase gerak
dan fase diam yang kedua-duanya !atdan fase diam yang kedua-duanya !at
cair.cair. Dalam hal ini fase diam tidak bolehDalam hal ini fase diam tidak bolehlarut dalam fase gerak.larut dalam fase gerak.
mumnya sebagai fase diam digunakanmumnya sebagai fase diam digunakan
air dan sebagai fase gerak adalah pelarutair dan sebagai fase gerak adalah pelarut
organik. $isalnya pada kromatografiorganik. $isalnya pada kromatografikertas, sebagai fase diam adalah air yangkertas, sebagai fase diam adalah air yang
terserap pada serat selulosa dari kertas.terserap pada serat selulosa dari kertas.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 6/32
Liquid Solid Chromatography (LSC)Liquid Solid Chromatography (LSC)
&' adalah kromatografi penyerapan.&' adalah kromatografi penyerapan.
ebagai adsorben digunakan silika gel,ebagai adsorben digunakan silika gel,
alumina, penyaring molekul atau gelasalumina, penyaring molekul atau gelas
berpori dipak dalam sebuah kolom dimanaberpori dipak dalam sebuah kolom dimanakomponen-komponen campurankomponen-komponen campuran
dipisahkan dengan adanya fase gerak.dipisahkan dengan adanya fase gerak.
Kromatografi kolom dan kromatografi lapisKromatografi kolom dan kromatografi lapis
tipis (+&') merupakan teknik pemisahantipis (+&') merupakan teknik pemisahanyang masuk golongan ini.yang masuk golongan ini.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 7/32
Ion-exchange chromatography Ion-exchange chromatography
+eknik ini menggunakan !eolitas, resin+eknik ini menggunakan !eolitas, resin
organik atau anorganik sebagai penukarorganik atau anorganik sebagai penukar
ion. enyaaan yang mempunyai ion-ionion. enyaaan yang mempunyai ion-ion
dengan afinitas yang berbeda terhadapdengan afinitas yang berbeda terhadapresin yang digunakan dapat dipisahkan.resin yang digunakan dapat dipisahkan.
/nalisa asam-asam amino adalah yang/nalisa asam-asam amino adalah yang
umum dilakukan dengan cara ini.umum dilakukan dengan cara ini.
'ontoh lain adalah asam-asam nukleat'ontoh lain adalah asam-asam nukleat
dan analisis garam-garam anorganik.dan analisis garam-garam anorganik.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 8/32
Exclusion chromatography Exclusion chromatography Dalam teknik ini, gel nonionik berpori banyak denganDa am te ni ini, ge nonioni erpori anya engan
ukuran yang sama digunakan untuk memisahkanukuran yang sama digunakan untuk memisahkancampuran berdasarkan perbedaan ukuran molekulnyacampuran berdasarkan perbedaan ukuran molekulnya($). $olekul-molekul yang kecil akan memasuki($). $olekul-molekul yang kecil akan memasukipori-pori dari gel sedangkan molekul besar akanpori-pori dari gel sedangkan molekul besar akanmeleati sela-sela gel lebih cepat bila dibandingkanmeleati sela-sela gel lebih cepat bila dibandingkandengan molekul yang meleati pori-porinya. 0adidengan molekul yang meleati pori-porinya. 0adi
urutan elusi mula-mula adalah molekul yang lebihurutan elusi mula-mula adalah molekul yang lebihbesar, molekul sedang, dan terakhir molekul yangbesar, molekul sedang, dan terakhir molekul yangpaling kecil. ila sebagai penyaring digunakan gelpaling kecil. ila sebagai penyaring digunakan gelyang hidrofil (ephade1) maka teknik ini disebutyang hidrofil (ephade1) maka teknik ini disebut gegelfiltration chromatography filtration chromatography dan bila digunakan gel yangdan bila digunakan gel yanghidrofob (polystyrene-di2inylben!ene) disebuthidrofob (polystyrene-di2inylben!ene) disebut gegel
permeation chromatography. permeation chromatography. +eknik kromatografi yang umum digunakan dibidang+eknik kromatografi yang umum digunakan dibidang
farmasi yaitu kromatografi kolom, kromatografifarmasi yaitu kromatografi kolom, kromatografikertas, kromatografi lapis tipis, kromatografi gas, dankertas, kromatografi lapis tipis, kromatografi gas, danhigh performance li#uid chromatographyhigh performance li#uid chromatographykromato rafi cair kiner a tin i 3 K'K+ .(kromatografi cair kiner"a tinggi 3 K'K+).
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 9/32
TeoriTeori
$artin dan ynge adalah yang pertama$artin dan ynge adalah yang pertama
kali menulis tentang teori li#uid partitionkali menulis tentang teori li#uid partition
chromatography. *rinsip teori yangchromatography. *rinsip teori yang
dikemukakan itu dapat diterapkan untudikemukakan itu dapat diterapkan untuksemua "enis kromatografi.semua "enis kromatografi.
*emisahan ter"adi karena molekul sampel*emisahan ter"adi karena molekul sampel
tertahan oleh fase diam atau dibaa olehtertahan oleh fase diam atau dibaa oleh
fase gerak, tergantung dari afinitasfase gerak, tergantung dari afinitassenyaa tersebut terhadap kedua fase ini.senyaa tersebut terhadap kedua fase ini.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 10/32
Koefisien distribusiKoefisien distribusi
Distribusi dari molekul-molekul sampelDistribusi dari molekul-molekul sampeldiantara dua fase ditentukan oleh tetapandiantara dua fase ditentukan oleh tetapankesetimbangan yang dikenal dengankesetimbangan yang dikenal dengankoefisien distribusi, K (koefisien partisi).koefisien distribusi, K (koefisien partisi).
K K
K koefisien partisiK koefisien partisi
's's konsentrasi sampel dalam fase diamkonsentrasi sampel dalam fase diam
(stationary phase)(stationary phase)'m konsentrasi sampel dalam fase'm konsentrasi sampel dalam fase
gerak (mobile phase)gerak (mobile phase)
Cm
Cs
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 11/32
Faktor kapasitas ( Retention / K’)Faktor kapasitas ( Retention / K’)
K’= KVs/Vm = capacity factor =K’= KVs/Vm = capacity factor =
CsCv / CmVm = perbaninganCsCv / CmVm = perbaningan
mo!e"#! sampe! a!am fase iammo!e"#! sampe! a!am fase iam
engan fase gera"$engan fase gera"$ K’ aa!a% ni!ai yang men#n&#""anK’ aa!a% ni!ai yang men#n&#""an
seberapa "#at "omponen'"omponenseberapa "#at "omponen'"omponen
a!am samp!e yang iba(a o!e% fasaa!am samp!e yang iba(a o!e% fasa
gera" berintera"si engan "o!omgera" berintera"si engan "o!om)fasa iam*$)fasa iam*$
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 12/32
Con’dCon’d
aktor kapasitas (k4) didefinisikan sebagai aktu tambahanaktor kapasitas (k4) didefinisikan sebagai aktu tambahan
yang diperlukan !at terlarut untuk terelusi, dibandingkanyang diperlukan !at terlarut untuk terelusi, dibandingkan
dengan !at yang tidak tertahan (k4 5), dibagi dengandengan !at yang tidak tertahan (k4 5), dibagi dengan
aktu elusi dari !at yang tidak tertahan. aktor kapasitasaktu elusi dari !at yang tidak tertahan. aktor kapasitas
dinyatakan berdasarkan persamaan :dinyatakan berdasarkan persamaan :
k4 k4 M
M R
t
t t −
M
R
t
t
'
'
Keterangan : k4 faktor kapasitas
tR
R
= waktu retensi zat
tM
M
= waktu retensi zat inert (conto ! "elarut#
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 13/32
Con’dCon’d
Kromatogram sampe! engan tiga "omponen
t$t67
t68
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 14/32
Laju pemisahanLaju pemisahan
/pabila bagian aktu yang dibutuhkan oleh molekul/pa i a agian a tu yang i utu an o e mo e usampelsampel pada fase gerak dikalikan dengan kecepatan linierpada fase gerak dikalikan dengan kecepatan linier(u) dari fase gerak maka diperoleh la"u pemisahan (rate of(u) dari fase gerak maka diperoleh la"u pemisahan (rate oftra2el) dari molekul rata-rata.tra2el) dari molekul rata-rata.
6ate u6ate u
0adi, la"u pemisahan ditentukan oleh :0adi, la"u pemisahan ditentukan oleh :
7. Kecepatan fase gerak (sama untuk tiap komponen7. Kecepatan fase gerak (sama untuk tiap komponencampuran).campuran).
8. *erbandingan dari 2olume fase diam dengan fase gerak8. *erbandingan dari 2olume fase diam dengan fase gerak(sama untuk tiap komponen campuran)(sama untuk tiap komponen campuran)
9. Koefisien distribusi (spesifik untuk tiap komponen9. Koefisien distribusi (spesifik untuk tiap komponencampuran).campuran).
K'1
1
+
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 15/32
Retention timeRetention time
aktu yang diperlukan oleh sebuah komponenaktu yang diperlukan oleh sebuah komponensampel untuk melintasi kolom sepan"ang & disebutsampel untuk melintasi kolom sepan"ang & disebut ;retention time4 (t). Dari definisi ini, la"u pemisahan ;retention time4 (t). Dari definisi ini, la"u pemisahandiperoleh:diperoleh:
t ( 7 < K4) tt ( 7 < K4) t$$(7 < K4)(7 < K4)
tt$$ aktu yang diperlukan oleh fase gerak untuk aktu yang diperlukan oleh fase gerak untuk
melintasi kolom sepan"ang &.melintasi kolom sepan"ang &.
*ersamaan ini merupakan persamaan dasar untuk*ersamaan ini merupakan persamaan dasar untuksemua "enis kromatografi. Dalam praktek seringsemua "enis kromatografi. Dalam praktek seringditerapkan pada kromatografi gas dan definisinyaditerapkan pada kromatografi gas dan definisinyadapat diubah men"adidapat diubah men"adi retention timeretention time, yaitu aktu, yaitu aktuyang diperlukan oleh sampel mulai dari saat in"eksiyang diperlukan oleh sampel mulai dari saat in"eksisampai timbulnya peak maksimum.sampai timbulnya peak maksimum.
Rate
Length
u
L
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 16/32
Retention volumeRetention volume
ila kecepatan dari fase gerak konstan, maka 2olume dariila kecepatan dari fase gerak konstan, maka 2olume darifase gerak yang diperlukan untuk memisahkan suatufase gerak yang diperlukan untuk memisahkan suatukomponen campuran dari kolom dapat dihitung dengankomponen campuran dari kolom dapat dihitung denganrumus berikut :rumus berikut :
=olume aktu 1 kecepatan aliran=olume aktu 1 kecepatan aliran
==
66 t t
66
ila persamaan retention time disubstitusikan ke dalamila persamaan retention time disubstitusikan ke dalampersamaan ini maka diperoleh:persamaan ini maka diperoleh:
==66 =m (7 < K4) =m < K=s =m (7 < K4) =m < K=s
=m 2olume dari fase gerak dalam kolom=m 2olume dari fase gerak dalam kolom
=s 2olume dari fase diam=s 2olume dari fase diam
ila fase diam berupa !at padat maka =s dapat dirubahila fase diam berupa !at padat maka =s dapat dirubahmen"adi luas permukaan 3 area (adsorption) ataumen"adi luas permukaan 3 area (adsorption) ataudengan kapasitas penukar ion.dengan kapasitas penukar ion.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 17/32
Relative retention (selektiitas!Relative retention (selektiitas! " " ) )
>> adalah nilai yang menun"ukkan seberapa baikadalah nilai yang menun"ukkan seberapa baiksistem kromatografi dapat memisahkan duasistem kromatografi dapat memisahkan duakomponen.komponen.
6etention time dan retention 2olume kurang6etention time dan retention 2olume kurang
tepat "ika dipakai untuk identifikasi dengantepat "ika dipakai untuk identifikasi denganmembandingkan data-data lainnya karena harga-membandingkan data-data lainnya karena harga-harga ini sangat tergantung dari cara pembuatanharga ini sangat tergantung dari cara pembuatankolom dan kondisi percobaan. ntukkolom dan kondisi percobaan. ntuk
menghilangkan efek dari operasional 2ariabel,menghilangkan efek dari operasional 2ariabel,maka lebih baik digunakan hargamaka lebih baik digunakan harga relati2erelati2eretentionretention yaitu perbandingan antara retentionyaitu perbandingan antara retentiontime sampel dengan retention time standar yangtime sampel dengan retention time standar yangdiperoleh dari kolom yang sama dengan kondisidiperoleh dari kolom yang sama dengan kondisi
percobaan yang samapercobaan yang sama
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 18/32
> > > relati2e retention> relati2e retention
tanda asetrik (?) harga untuk standartanda asetrik (?) harga untuk standar
m R
m R
t t
t t
−
−
* * K
K
VmV
VmV
R
R=
+−
−
@n"ek
%ambar : Kromatogram sampel dengan empat komponen
elektifitas, > k48 t68 - t$ k47 t67 - t$
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 19/32
#late theory ($)#late theory ($)
$artin dan ynge melihat adanya$artin dan ynge melihat adanya
persamaan proses yang ter"adi padapersamaan proses yang ter"adi pada
kolom kromatorafi dengan kolomkolom kromatorafi dengan kolom
destilasi bertingkat kemudiandestilasi bertingkat kemudianmenerapkan konsep Atheoreticalmenerapkan konsep Atheoretical
rateB pada pemisahan denganrateB pada pemisahan dengan
destilasi ke dalam kromatografi.destilasi ke dalam kromatografi.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 20/32
Rate theory Rate theory Dalam praktek harga H selalu lebih besar dari hargaDalam praktek harga H selalu lebih besar dari harga
idealnya (nol) yang berarti ter"adi pelebaran peak.idealnya (nol) yang berarti ter"adi pelebaran peak.
*elebaran ini disebabkan oleh 9 faktor yaitu:*elebaran ini disebabkan oleh 9 faktor yaitu:
77.. Cfek perbedaan "arak (eddy diffusion)Cfek perbedaan "arak (eddy diffusion)
*erbedaan "arak yang dilalui oleh molekul yang satu*erbedaan "arak yang dilalui oleh molekul yang satu
dengan yang lain disebabkan perbedaan bentuk,dengan yang lain disebabkan perbedaan bentuk,ukuran partikel-partikel pengisi kolom, cara pengisianukuran partikel-partikel pengisi kolom, cara pengisiankolom, dan diameter dari kolom. *erbedaan inikolom, dan diameter dari kolom. *erbedaan inimengakibatkan perbedaan aktu keluarnya molekul-mengakibatkan perbedaan aktu keluarnya molekul-molekul dari kolom. ntuk memperkecil efek ini,molekul dari kolom. ntuk memperkecil efek ini,digunakan partikel-partikel kecil yang serba samadigunakan partikel-partikel kecil yang serba sama
tetapi tidak menyebabkan penurunan tekanan dalamtetapi tidak menyebabkan penurunan tekanan dalamkolom terlalu tinggi, diameter kolom yang kecil,kolom terlalu tinggi, diameter kolom yang kecil,pengepakan yang mampat dan serba sama tanpapengepakan yang mampat dan serba sama tanpamemecahkan partikel-partikel pengisi kolom tersebut.memecahkan partikel-partikel pengisi kolom tersebut.Cfek ini lebih lan"ut dapat di"elaskan dengan gambaCfek ini lebih lan"ut dapat di"elaskan dengan gambar
berikut :berikut :
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 21/32
Con’dCon’d
8.Difusi molekul sepan"an8.Difusi molekul sepan"ang kolom 'mg kolom 'm
ase Diamase Diam
$olekul-molekul cenderung untu$olekul-molekul cenderung untukberdifusi dari daerah yangberdifusi dari daerah yangkonsentrasinya tinggi ke daerah yangkonsentrasinya tinggi ke daerah yangkonsentrasiya rendah. /kibatnya, aktukonsentrasiya rendah. /kibatnya, aktu
melintasi kolom, molekul-molekul akanmelintasi kolom, molekul-molekul akanmenyebar (berdifusi) ke belakang danmenyebar (berdifusi) ke belakang danke depanke depan
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 22/32
Con’dCon’d
9.9. Cfek ketidaksinambunganCfek ketidaksinambungan
/liran yang terus-menerus dari fase gera/liran yang terus-menerus dari fase gerak
menyebabkan penyimpangan darimenyebabkan penyimpangan dari
keseimbangan dimana 's3'm selalu lebihkeseimbangan dimana 's3'm selalu lebihkecil dari K pada tepi !ona yang didepankecil dari K pada tepi !ona yang didepan
dan selalu lebih besar pada tepi !ona yangdan selalu lebih besar pada tepi !ona yang
dibelakang seperti terlihat pada gambar didibelakang seperti terlihat pada gambar di
atas (c). *ada partition chromatography,atas (c). *ada partition chromatography,efek ini makin nyata bila kekentalan faseefek ini makin nyata bila kekentalan fase
diam makin tinggi.diam makin tinggi.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 23/32
Resolusi (R)Resolusi (R)
Mer#pa"an #"#ran apa"a%Mer#pa"an #"#ran apa"a%
se#at# senya(a terpisa% secarase#at# senya(a terpisa% secara
bai" ata# tia" engan senya(abai" ata# tia" engan senya(a
!ain!ain
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 24/32
Con’dCon’d
*erubahan kecil pada nilai*erubahan kecil pada nilai >> akanakan
menyebabkan nilai resolusi berubahmenyebabkan nilai resolusi berubah
secara segnifikan, hal ini dapatsecara segnifikan, hal ini dapat
dilihat pada contoh dibaah ini.dilihat pada contoh dibaah ini.
selekti2itas
+it#ng!a% R &i"a α = ,-, anα = ,-.
e!e"tifitas-
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 25/32
Con’dCon’d
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 26/32
6esolusi atau daya pisah menun"ukkan apakah dua komponen6esolusi atau daya pisah menun"ukkan apakah dua komponen
terpisah baik. 6esolusi didefinisikan sebagai "arak (t) antaraterpisah baik. 6esolusi didefinisikan sebagai "arak (t) antara
dua puncak dibagi rata-rata lebar () dua puncak yangdua puncak dibagi rata-rata lebar () dua puncak yang
diukur pada alas puncak.diukur pada alas puncak.
7 8
∆t6
t67
t68
$enghitung resolusi
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 27/32
Con’dCon’d
'ara menghitung resolusi :'ara menghitung resolusi :
6 6
Keterangan : tKeterangan : t 6767 aktu retensi komponen 7 aktu retensi komponen 7
tt 6868 aktu retensi komponen 8 aktu retensi komponen 8 77 lebar puncak komponen 7 lebar puncak komponen 7
88 lebar puncak komponen 8 lebar puncak komponen 8
ila nilai resolusi lebih besar dari 7,E makaila nilai resolusi lebih besar dari 7,E makapemisahan yang dihasilkan baik atau lebih daripemisahan yang dihasilkan baik atau lebih dariFF,G dan bila nilai resolusi lebih kecil dari 7,FF,G dan bila nilai resolusi lebih kecil dari 7,maka pemisahan yang dihasilkan tidak baik.maka pemisahan yang dihasilkan tidak baik.
21
12 )(2
W W
t t R R
+
−
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 28/32
KR$MA%$&RAFI CAIR KINER'A %IN&&IKR$MA%$&RAFI CAIR KINER'A %IN&&I
H*&' (H*&' (High Performance LiquidHigh Performance Liquid
Chromatography Chromatography ) atau K'K+) atau K'K+
(Kromatografi 'air Kiner"a +inggi)(Kromatografi 'air Kiner"a +inggi)
merupakan teknik analisis yangmerupakan teknik analisis yangpaling cepat berkembang dalampaling cepat berkembang dalam
kimia analitik. *enggunaannya yangkimia analitik. *enggunaannya yang
sangat banyak terdiri atas berbagaisangat banyak terdiri atas berbagaimetode dalam kromatografi cairmetode dalam kromatografi cair
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 29/32
,$,$ Metoe a!am "romatografi cair ibagi atasMetoe a!am "romatografi cair ibagi atas
#a macam#a macam 00
a. Kromatografi 'air 6etensif a. Kromatografi 'air 6etensif
*emisahan dicapai melalui interaksi antara !at*emisahan dicapai melalui interaksi antara !atterlarut dengan fase diam. +ipe ini mencakupterlarut dengan fase diam. +ipe ini mencakupf f ase normal, fase terbalik, dan kromatografi ion.ase normal, fase terbalik, dan kromatografi ion.
b. Kromatografi 'air Ion-retensif b. Kromatografi 'air Ion-retensif
*emisahan yang dicapai tergantung kepada*emisahan yang dicapai tergantung kepada
perbedaan besar molekul !at terlarut dimanaperbedaan besar molekul !at terlarut dimanater"adi interaksi antara !at terlarut dengan pori-ter"adi interaksi antara !at terlarut dengan pori-pori yang terdapat di permukaan fase diam. +ipepori yang terdapat di permukaan fase diam. +ipeini dikenal sebagai kromatografi ekslusi.ini dikenal sebagai kromatografi ekslusi.
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 30/32
Con’dCon’d
1$ Ke#nt#ngan KCKT antara !ain 01$ Ke#nt#ngan KCKT antara a n 0
a.a. aktu analisis cepataktu analisis cepat
aktu yang diperlukan biasanya kurang dari satu "am, seringkali hanya 7aktu yang diperlukan biasanya kurang dari satu "am, seringkali hanya 7menit hingga 95 menit. ntuk analisis yang mudah aktu yang diperlukanmenit hingga 95 menit. ntuk analisis yang mudah aktu yang diperlukankurang dari menit.kurang dari menit.
b. Daya pisahnya baik.b. Daya pisahnya baik.
c. *ekac. *eka
Kepekaannya sangat tergantung pada "enis detektor dan eluen yangKepekaannya sangat tergantung pada "enis detektor dan eluen yangdigunakan.digunakan.
d. *emilihan kolom dan eluen sangat ber2ariasi.d. *emilihan kolom dan eluen sangat ber2ariasi.
e. Kolom dapat dipakai kembali.e. Kolom dapat dipakai kembali.
f. Dapat digunakan untuk molekul besar dan kecil.f. Dapat digunakan untuk molekul besar dan kecil.
$udah untuk memperoleh kembali cuplikan.$udah untuk memperoleh kembali cuplikan.
+idak seperti kebanyakan detektor dalam kromatografi gas, detektor K'K++idak seperti kebanyakan detektor dalam kromatografi gas, detektor K'K+tidak merusak komponen !at yang dianalisis, sehingga !at yang telahtidak merusak komponen !at yang dianalisis, sehingga !at yang telahdielusi dapat dikumpulkan dengan mudah setelah meleati detektor.dielusi dapat dikumpulkan dengan mudah setelah meleati detektor.
h. Dapat menghitung sampel dengan kadar yang sangat rendah.h. Dapat menghitung sampel dengan kadar yang sangat rendah.
Hal ini sangat bergantung kepada detektor yang digunakan, namunHal ini sangat bergantung kepada detektor yang digunakan, namundetektor K'K+ dapat mendeteksi !at sampai dengan kadar ppt (detektor K'K+ dapat mendeteksi !at sampai dengan kadar ppt ( part pe part pertrilliontrillion).).
7/18/2019 anfiskimkromatografi
http://slidepdf.com/reader/full/anfiskimkromatografi 31/32
nstrumentasinstrumentasi
K'K+ memiliki beberapa komponen yangK'K+ memiliki beberapa komponen yangberbeda. ebagai akibatnya banyakberbeda. ebagai akibatnya banyakinstrumen-instrumen K'K+ yang atauinstrumen-instrumen K'K+ yang atautelah tersedia secara komersial telahtelah tersedia secara komersial telahmenggunakan desain standar. entukmenggunakan desain standar. entukdesain ini sangat menguntungkan karenadesain ini sangat menguntungkan karenainstrumen dapat diperbaharui(mengikutiinstrumen dapat diperbaharui(mengikutiteknologi terkini) hanya denganteknologi terkini) hanya dengan
menambahkan komponen lain ataumenambahkan komponen lain ataudengan mengganti dengan komponen-dengan mengganti dengan komponen-komponen lain yang sesuai.komponen lain yang sesuai.