aktivitas antibakteri kombinasi

Uji Aktivitas Daya Hambat Sediaan Kombinasi Infus Daun Sirih (Piper betle Linn)

Dan Daun Salam (Shyzigium polyantha Wight) Terhadap Pertumbuhan

Staphylococcus Aureus ATCC 25923 In Vitro

Diajukan olehAdisti Yuliandini

I1A008069UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT

FAKULTAS KEDOKTERANBANJARBARU

April, 2011

Tuberkulosis WHO Global emergency

ASEAN 33%Indonesia Peringkat ketiga

penyebab kematian

Pemanfaatan bahan alam sebagai antituberkulosis

Minyak atsiri: kavikol para allifenol, seskuiterpen, fenol,

dan eugenol

Rimpang jahe (Zingiber officinale Rosc.) dan

Rimpang kunyit (Curcuma domestica)

Latar Belakang

Tujuan umum penelitian

Mengetahui ada tidaknya perbedaan aktivitas sediaan infus tunggal dan kombinasi

Tujuan Penelitian

Tujuan Khusus

• Mengukur zona hambat pertumbuhan S. aureus setelah diberikan infus daun sirih.

• Mengukur zona hambat pertumbuhan S. aureus setelah diberikan infus daun salam.

• Mengukur zona hambat pertumbuhan S. aureus setelah diberikan kombinasi infus daun sirih dan daun salam.

• Menganalisis perbedaan sediaan tunggal dan kombinasi infus daun sirih dan daun salam dalam menghambat pertumbuhan S.aureus

• Wawasan sebagai alternatif pengobatan tradisional untuk penyakit tuberkulosisMasyarakat

• landasan bagi penelitian selanjutnya dalam pengembangan obat fitofarmakaPengembangan Ilmu

Pengetahuan

Manfaat Penelitian

Landasan TeoriDaun Sirih

(Piper betle Linn)

Minyak Atsiri(kavikol),

flavanoid, tanin

Daun Salam(Shyzigium polyantha

Wight)

Kavikol: Gabungan gugus fenol dan terpena.Mekanisme fenol

Mekanisme flavanoid

Kematian bakteriStaphylococcus

aureus

Sinergisme dalam mengganggu

proses fungsional bakteri

Minyak Atsiri(kavikol),

flavanoid, tanin

Kombinasi infus daun sirih dan infus daun salam dapat meningkatkan efek antibakteri (sinergisme) tanaman obat terhadap pertumbuhan S. aureus in vitro

dibandingkan dengan sediaan tunggal.

Hipotesis

Rancangan Penelitian

25 Perlakuan infus kombinasi

2 kontrol (+ dan -)

3xPengulangan

Penelitian Eksperimental

Bahan dan Alat Penelitian

Isolat Staphylococcus aureus ATCC 25923 dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas

Kedokteran Universitas Lambung Mangkurat, daun sirih, daun salam, media Muller Hinton

(MH), media Brain Heart Infusion (BHI), larutan standar Mc.Farland, akuades steril, paper disk

kosong dan paper disk antibiotik.

Bahan

Ose steril, cawan petri, tabung reaksi (Pyrex®), inkubator (Carbolite Shieffield® S 30 2 RR England), labu Erlenmeyer, panci infus,

autoklaf (All America® model No 1925 X), lampu bunsen, mikropipet 1000 μl (W-Germany®), kapas lidi steril, meja kerja

laminary flow (Holten® tipe Maxisafe 1,2), neraca analitik (Ohaus®), skalpel, pinset

steril, pipet steril, kertas saring, aluminium foil, dan penggaris.

Alat

Variabel Penelitian

Variabel

Bebas

Terikat

Pengganggu

konsentrasi infus tunggal dan kombinasi

zona hambat dalam milimeter (mm)

faktor lingkungan: suhu dan kelembaban, kontaminasi bakteri dan

jamur, faktor alat dan bahan penelitian

Definisi Operasional

Obat tradisional.

Sinergistik

Infus

Daya hambat

Zona hambat

Prosedur penelitian

Determinasi Tanaman

Pembuatan ekstrak etanol rimpang jahe dan rimpang kunyit

Pembuatan media Lowenstein Jensen

Pembiakan dan standarisasi M. tuberculosis untuk inokulasi

Pengenceran dan pembuatan sediaan kombinasi

Uji pertumbuhan M. tuberculosis

Teknik Pengumpulan Data

Zona hambat masing–masing kultur bakteri

ditabulasikan berdasarkan konsentrasi infus daun sirih dan daun salam

nilai reratanya

• Uji normalitas Kolmogorov-Smirnov• Uji homogenitas Levene

Distribusi tidak normal & homogen

Transformasi Data

Distribusi tidak normal & homogen

- Kruskal-Wallis- Mann-Whitney

Cara Analisis Data

Zona Hamba

t Staphylococcus aureus

Uji Kruskal-Wallis

Uji Mann

Whitney

• TempatLaboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran UNLAM

• Waktu November 2010-Agustus 2011

Tempat dan Waktu Penelitian

HASIL PENELITIAN

Hasil Penelitian

Rerata Zona Hambat (mm) untuk Sediaan Tunggal dan Kombinasi Infus Daun Sirih dan kombinasinya terhadap S.

aureus ATCC 25923 in vitro

Sediaan Infus

0 5 10 15 20 25

Si10 8.67Si15 8.65

Si20 9.56Si25 9.47

Si30 8.37Si10Sa30 13.13

Si10Sa40 14.67Si10Sa50 15.3

Si10Sa60 14.76Si10Sa70 12.67

Si15Sa30 15.46Si15Sa40 13.13

Si15Sa50 15.8Si15Sa60 16.76

Si15Sa70 15.67Si20Sa30 15.1

Si20Sa40 12Si20Sa50 16.3

Si20Sa60 15.3Si20Sa70 17.76

Si25Sa30 17.3Si25Sa40 16.67

Si25Sa50 11.9Si25Sa60 16.9

Si25Sa70 13.46Si30Sa30 15.56

Si30Sa40 22.7Si30Sa50 18.1

Si30Sa60 12.9Si30Sa70 18.8

AMPISILIN 21AKUADES 0

Chart Title

Zona Hambat (mm)

Rerata Zona Hambat (mm) untuk Sediaan Tunggal dan Kombinasi Infus Daun Sirih dan kombinasinya terhadap S.

aureus ATCC 25923 in vitro

Rerata Zona Hambat (mm) untuk Sediaan Tunggal dan Kombinasi Infus Daun Salam terhadap S. aureus ATCC

25923 in vitro

Sediaan Infus

0 5 10 15 20 25

Sa30 13.76Sa40 16.56

Sa50 14.53Sa60 15.9

Sa70 20.76Si10Sa30 13.13

Si10Sa40 14.67Si10Sa50 15.3

Si10Sa60 14.76Si10Sa70 12.67

Si15Sa30 15.46Si15Sa40 13.13

Si15Sa50 15.8Si15Sa60 16.76

Si15Sa70 15.67Si20Sa30 15.1

Si20Sa40 12Si20Sa50 16.3

Si20Sa60 15.3Si20Sa70 17.76

Si25Sa30 17.3Si25Sa40 16.67

Si25Sa50 11.9Si25Sa60 16.9

Si25Sa70 13.46Si30Sa30 15.56

Si30Sa40 22.7Si30Sa50 18.1

Si30Sa60 12.9Si30Sa70 18.8

AMPISILIN 21AKUADES 0

Chart Title

Zona Hambat (mm)

Analisis Statistik Uji Kruskall Wallis

P < 0,05

Terdapat Perbedaan yang Bermakna antar Perlakuan

Analistik Statistik Uji Mann WhitneySi10 Si15 Si20 Si25 Si30 positif negatif

Si10Sa30 0.049 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si10Sa40 0.049 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.034)Si10Sa50 0.046 BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.037)Si10Sa60 0.049 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si10Sa70 TB(0.127) TB(0.077) TB(0.275) TB(0.184) TB(0.077) BB(0.049) BB(0.037)Si15Sa30 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si15Sa40 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si15Sa50 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.034)Si15Sa60 BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.037)Si15Sa70 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si20Sa30 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si20Sa40 TB(0.275) TB(0.376) TB(0.376) TB(0.275) TB(0.275) BB(0.049) BB(0.037)Si20Sa50 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.127) BB(0.037)Si20Sa60 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.034)Si20Sa70 BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.037)Si25Sa30 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.127) BB(0.037)Si25Sa40 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.077) BB(0.037)Si25Sa50 TB(0.275) TB(0.275) TB(0.275) TB(0.275) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.037)Si25Sa60 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si25Sa70 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si30Sa30 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.376) BB(0.037)Si30Sa40 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si30Sa50 BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.034)Si30Sa60 BB(0.049) BB(0.049) TB(0.077) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si30Sa70 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.184) BB(0.037)positif BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)negatif BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037)

Sa30 Sa40 Sa50 Sa60 Sa70 positif negatifSi10Sa30 TB(0.513) TB(0.127) TB(0.376) TB(0.184) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si10Sa40 TB(0.513) TB(0.513) TB(0.827) TB(0.376) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.034)Si10Sa50 TB(0.105) TB(0.825) TB(0.507) TB(0.507) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.037)Si10Sa60 TB(0.513) TB(0.513) TB(0.827) TB(0.513) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si10Sa70 TB(0.827) TB(0.275) TB(0.275) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si15Sa30 TB(0.376) TB(0.513) TB(0.513) TB(0.827) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si15Sa40 TB(0.827) TB(0.184) TB(0.275) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si15Sa50 TB(0.376) TB(0.658) TB(0.827) TB(0.827) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.034)Si15Sa60 BB(0.046) TB(0.507) TB(0.072) TB(0.825) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.037)Si15Sa70 TB(0.127) TB(0.827) TB(0.376) TB(0.513) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si20Sa30 TB(0.822) TB(0.275) TB(0.827) TB(0.827) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si20Sa40 TB(0.513) TB(0.275) TB(0.275) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si20Sa50 TB(0.376) TB(0.827) TB(0.827) TB(0.827) TB(0.275) TB(0.127) BB(0.037)Si20Sa60 TB(0.275) TB(0.658) TB(0.513) TB(0.827) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.034)Si20Sa70 BB(0.046) TB(0.507) BB(0.046) TB(0.178) BB(0.046) BB(0.046) BB(0.037)Si25Sa30 TB(0.275) TB(0.827) TB(0.376) TB(0.658) TB(0.275) TB(0.127) BB(0.037)Si25Sa40 TB(0.275) TB(0.827) TB(0.376) TB(0.658) TB(0.127) TB(0.077) BB(0.037)Si25Sa50 TB(0.376) TB(0.077) TB(0.184) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si25Sa60 TB(0.127) TB(0.827) TB(0.127) TB(0.513) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si25Sa70 TB(0.658) BB(0.049) TB(0.275) TB(0.275) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si30Sa30 TB(0.827) TB(0.513) TB(0.658) TB(0.658) TB(0.275) TB(0.376) BB(0.037)Si30Sa40 BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.037)Si30Sa50 BB(0.046) TB(0.369) BB(0.046) TB(0.268) TB(0.121) BB(0.046) BB(0.034)Si30Sa60 TB(0.827) TB(0.127) TB(0.275) TB(0.127) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.037)Si30Sa70 BB(0.049) TB(0.184) TB(0.127) TB(0.275) TB(0.513) TB(0.184) BB(0.037)positif BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) BB(0.049) TB(0.827) BB(0.037)negatif BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037) BB(0.037)

nilai PJika P < 0,05

BB = Berbeda Bermakna

Sediaan kombinasi memiliki daya hambat yang lebih besar atau lebih kecil secara bermakna daripada sediaan tunggal dalam menghambat S.aureus

Lebih baik diberikan dalam sediaan kombinasi, jika zona hambat kombinasi lebih besar daripada zona hambat tunggal

nilai P

Jika P > 0,05

TB = Tidak Bermakna

Sediaan kombinasi tidak memiliki daya hambat yang lebih besar atau lebih kecil secara bermakna daripada sediaan tunggal dalam menghambat S.aureus

Lebih baik diberikan dalam sediaan tunggal

Simpulan• Zona hambat hambat infus daun sirih - terkecil pada konsentrasi 30% = 8,36 mm - tertinggi pada konsentrasi 20% = 9,6 mm,

• Zona hambat infus daun salam terkecil pada konsentrasi 30% = 13,76 mm tertinggi pada konsentrasi 70% = 20,76 mm,

• Zona hambat kombinasi terkecil pada konsentrasi daun sirih 25% dan daun

salam 50% =11,9 mm tertinggi pada konsentrasi kombinasi daun sirih 30%

dan daun salam 40% = 22,7 mm,

Simpulan

• terdapat perbedaan yang bermakna antara sediaan tunggal infus daun sirih dan sediaan kombinasi infus daun sirih dengan daun salam (p=0,000) juga terdapat perbedaan yang bermakna antara sediaan tunggal infus daun salam dan sediaan kombinasi infus daun sirih dengan daun salam (p=0,001).

Penutup(Saran)

mengetahui mekanisme dan potensi kombinasi infus daun sirih dan daun salam

antibakteri terhadap S. aureus

Dilakukan penelitian lanjutan menemukan

zat aktif yang diduga memiliki sifat antibakteri

mencegah interaksi zat lain.

Terima Kasih

Prosedur Penelitian

1. Tahap Pembuatan infusa. Infus daun sirih: 30 gram daun

sirihdiirisdimasukkan ke dalam 100ml akuades diperoleh konsentrasi 30% b/v (berat/volume)

b. Infus daun Salam: 70 gram daun Salamdiirisdimasukkan ke dalam 100ml akuades diperoleh konsentrasi 70% b/v (berat/volume)

Prosedur Penelitian

• Bahan tanaman obat dan akuades dimasukkan ke dalam panci infus.

• Dibuat sediaan tunggal infus Daun Sirih dibuat pengenceran 10%,15%, 20%, dan 25%.

• Dibuat sediaan tunggal infus Daun Salam dibuat pengenceran 30%, 40%, 50%, 60%, 70%

c. Infus kombinasi: diambil 1 ml dari masing-masing infus daun sirih dan daun salam campur ke tabung reaksi

Aturan kombinasi :• Infus daun sirih 10% dikombinasikan dengan infus

daun salam (10%-30%, 10%-40%, 10%-50%, 10%-60%, 10%-70%)

• Infus daun sirih 15% dikombinasikan dengan infus daun salam (15%-30%, 15%-40%, 15%-50%, 15%-60%, 15%-70%)


Prosedur Penelitian

2. Uji daya antibakteri metode Kirby Bauer Diambil beberapa koloni bakteri dari pertumbuhan 24 jam

pada agar disuspensikan ke dalam 0,5 ml BHI cair diinkubasikan 5-8 jam pada suhu 370C suspensi tersebut ditambah aquadest steril hingga

kekeruhan tertentu sesuai standar konsentrasi kuman 108 CFU per ml.

kapas lidi steril dicelupkan ke dalam suspensi bakteri lalu ditekan pada dinding tabung hingga kapasnya tidak terlalu basah

kemudian dioleskan pada permukaan media agar hingga rata.

2. Pembuatan Paper diskPaper disk kosong dimasukkan ke dalam konsentrasi infus tunggal dan kombinasi direndam selama 3 jam paper disk diletakkan diatas media agar yang telah ditanam S.aureus

Hasil data

non parametrik parametrik transformasi data

Kruskal-Wallis Uji F- hipotesis komparatif- variabel numerik- tidak berpasangan- > dari 2 kelompok

aktivitas antibakteri kombinasi

Documents

Transcript of aktivitas antibakteri kombinasi