ACARA 1. FIX.docx
Transcript of ACARA 1. FIX.docx
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
1/24
ACARA I
ENZIM
A. Tujuan
Tujuan praktikum acara I Enzim adalah :
1. Untuk mengetahui pengaruh pH terhadap aktivitas enzim diastase
atauamilase.
2. Untuk mengetahui pengaruh suhu terhadap aktivitas enzim diastase atau
amilase.
. Untuk mengetahui aktivitas amilase pada kecam!ah.B. Tinjauan Pustaka
1. Te"ri : #engujian$pengujian
Uji %ehling dan Uji &enedict. '"n"sakarida dan disakarida
(kecuali sukr"sa) !eraksi dengan pereaksi *ehling ataupun pereaksi !enedict
mem!entuk endapan merah !ata +u2,. #ereaksi !enedict dapat digunakan
untuk memeriksa ada tidakn-a gula dalam urine (#utjaatmaka 2//2).
0arutan !enedict merupakan campuran dari +u, natrium sul*at
dan 3a2+,. 4ar!"hidrat -ang mempun-ai si*at pereduksi (misaln-a
gluk"sa) akan mem!erikan endapan merah !ata dengan larutan !enedict. Uji
i"dine digunakan untuk menunjukkan adan-a p"lisakarida. &ila ke dalam
!ahan -ang mengandung p"lisakarida di!eri larutan i"dine mem!erikan
5arna !iru !erarti !ahan terse!ut mengandung amilum (amil"sa).
6mil"pektin akan mem!erikan 5arna merah ungu glik"gen dan dekstrin
akan mem!erikan 5arna merah c"klat (udarm" 2//7).
en-a5a peng"ksidasi -ang selalu direduksi "leh m"n"sakarida
adalah %e(+3)2 H2,2 dan i"n kupri (+u )28. 9ula akan di"ksidasi pada
gugus kar!"niln-a (0ehninger 1;). 'et"de -ang seringdigunakan dalam
analisa kadar gula suatu sampel !iasan-a menggunakan reagen&enedict.
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
2/24
Enzim merupakan unit *ungsi"nal dari meta!"lisme sel. &ekerja
dengan urutan$urutan -ang teratur enzim mengkatalisis ratusan reaksi
!ertahap -ang menguraikan m"lekul nutrien reaksi -ang men-impan dan
mengu!ah energi kinia5i dan -ang mem!uat makr"$m"lekul sel dari
prekurs"r sederhana. =i antara jumlah enzim -ang !erpartisipasi di dalam
meta!"lisme terdapat sekel"mp"k khusus -ang dikenal se!agai enzim
pengatur -ang dapat mengenali !er!agai is-arat meta!"lik dan mengu!ah
kecepatan katalitikn-a sesuai dengan is-arat -ang diterima. 'elalui
aktivitasn-a sistem enzim terk""rdinasi dengan !aik menghasilkan suatu
hu!ungan -ang harm"nis diantara sejumlah aktivitas meta!"lik -ang
!er!eda -ang diperlukan untuk menunjang kehidupan (0ehninger 1>2).
Enzim se!agai pr"tein akan mengalami denaturasi jika suhun-a
dinaikkan aki!atn-a da-a kerja enzim menurun. 'ungkin sampai suhu ?
e*ek pred"minan-a masih memperlihatkan kenaikan aktivitas
se!agaimana dugaan dalam te"ri kinetik. Tetapi le!ih dari ? e*ek
-ang!erla5anan -aitu denaturasi termal le!ih men"nj"l dan menjelang suhu
?? *ungsi katalitik enzim menjadi punah. elain itu pH juga sangat
!erpengaruh terhadap aktivitas enzim karena si*at i"nik gugus kar!"ksil
dan gugus amin" mudah dipengaruhi "leh pH. Hal ini men-e!a!kan daerah
katalitik dan k"n*"rmasi enzim menjadi !eru!ah. elain itu peru!ahan pH
juga akan men-e!a!kan denaturasi enzim dan mengaki!atkan hilangn-a
aktivitas enzim (9irindra 1/).um!er enzim dapat diper"leh dari tanaman he5an dan
mikr""rganisme. alah satu enzim pemecah pati adalah enzim a$amilase
(a$1$glukan$glukan"didr"lase@ E+..2.1.1.) enzim ini sangat !erperan
dalam industri pem!uatan r"ti dan sirup. Enzim A$amilase !an-ak terdapat
padakecam!ah kacang$kacangan. #emilihan kacang hijau se!agai sum!er
enzim a$amilase karena dalam !entuk kecam!ah mengandung t"k"*er"l
(pr" vitamin E) 7 ppm *en"lik 11 ppm. #em!uatan ekstrak
enzim dari kecam!ah kacang hijau : !iji kacang hijau dis"rtasi hingga
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
3/24
diper"leh !iji !ersih dan utuh dicuci direndam dengan aBuades selama
/ menit ditiriskan kemudian diperam dalam 5adah !erp"ri sampai terjadi
perkecam!ahan. Caktu perkecam!ahan (1 2 dan ? hari). 4ecam!ah
di!ersihkan dengan melepas kulit luarn-a se!agian diam!il se!agai sampel
untuk analisis kadar pr"tein dan air. e!agian ditim!ang kemudian
dihancurkan dengan !lender dimana untuk 1 g kecam!ah ditam!ahkan
? mlbuffer asetat /2 ' pH ?. 4ecam!ah -ang sudah hancur disimpan
selama 1/ menit sam!il dik"c"k kemudian dilakukan pen-aringan dengan
kapas. %iltrat -ang dihasilkan disentri*ugasi selama 2/ menit dengan
kecepatan 2///rpm pada suhu ?D+. upernatan (ekstrak enzim) -ang
dihasilkan diukur v"lumen-a dan ditempatkan ke dalam 5adah steril untuk
dianalisis antara lain@ aktivitas enzim A$amilase pH dan pr"tein terlarut.
Umumn-a aktivitas enzim a$amilase terjadi pada suhu /$/ D+ dan
aktivitasn-a akan mengalami penurunan pada kisaran suhu ?$?/ D+
hal ini dise!a!kan karena enzim mengalami denaturasi aki!atn-a
m"lekul$m"lekul enzim rusak sehingga kehilangan spesi*itasn-a. 4"ndisi
pH ekstrak kecam!ah masih diantara pH aktivitas "ptimal -aitu >$?;
(uarni 2//;).
&an-ak *akt"r -ang mempengaruhi laju kerja enzim. =i antaran-a
-ang paling penting adalah k"nsentrasi$k"nsentrasi su!strat dan enzim.
&e!erapa *akt"r utama -ang lain adalah suhu pH kekuatan i"nik dan
adan-a inhi!it"r. 0aju reaksi meningkat dengan kenaikan suhu dan akhirn-a
enzim kehilangan semua aktivitas jika pr"tein menjadi rusak aki!at panas.
&an-ak enzim !er*ungsi "ptimal dala !atasan$!atasan suhu antara 2?
$ ; (#age 1>).
6ktivitas enzim semakin meningkat dengan kenaikan suhu
hingga mencapai "ptimum hal ini terjadi karena meningkatn-a energi
kinetik -ang memper!esar peluang terjadin-a tum!ukan antara enzim
dan su!strat untuk !ereaksi mem!entuk k"mpleks enzim$su!strat sehingga
pr"duk -ang dihasilkan meningkat. 6ktivitas enzim terus meningkat hingga
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
4/24
tercapai pH "ptimum dan menurun setelah pH "ptimum. Enzim al*a
amilase mempun-ai pH "ptimum pada pH $11. 'enurut Cinarn" (2//2)
dekstrin telah ter!entuk dari hidr"lisis pati jika hasil uji i"d !er5arna
merah kec"klatan.
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
5/24
gluk"sa malt"sa dan dekstrin. #r"ses hidr"lisa pati terse!ut dilakukan
melalui tiga tahapan -aitu gelatinisasi likui*ikasi dan sakari*ikasi.
Enzim amilase akan memecah su!strat pati melalui tiga tahapan utama
-aitu gelatinisasi likui*ikasi dan sakari*ikasi. 6milase adalah enzim
-ang mempun-ai kemampuan memecah ikatan gluk"sida pada p"limer
pati. &e!erapa kel"mp"k dari enzim amilase adalah a$amilase G$
amilase dan Familase (3angin 2/1?).
.6ktivitas ter!esar-angdipamerkandaripH? sampaipH; dankerja
maksimumadalah sekitarpH?danpH;. 'enggunakanjumlah -ang samadari
A$amilase dan$amilase dalammencernaterpisah ditemukan !ah5a
tingkataktivitas$amilase melampauidariA$amilase (E-ster 1?).
Enzim adalah katalis pr"tein disintesis "leh sistem kehidupan dan
penting dalam sintetis serta pr"ses degradati*. 6milase adalah enzim -ang
memecah pati atau glik"gen. Hal ini dihasilkan "leh !er!agai "rganisme
hidup mulai dari !akteri jamur untuk tanaman dan manusia
(#ande- et al. 2///). 6lphaamilase (end"$1$=@gluc"se$=
gluc"h-dr"lase.2.1.1) milik keluarga end"amilase -ang acak
mem!elah1$=glik"sida hu!ungan antara unit gluk"sa -ang !erdekatan
dalam rantai pr"duk mempertahankan k"n*igurasi$an"merik dalam pr"duk
(6run asietal #ande-etal. 2//1). ,leh karena itu pentinguntuk
meningkatkan pr"tein meman*aatkan dengan segala cara dan sarana
peningkatan permintaan dunia untuk makanan dan pr"tein akan
men-e!a!kan mencari sum!er pr"tein n"n$k"nvensi"nal untuk sum!er
pr"tein k"nvensi"nal (6runsasi 2/1/).
Enzim dari sum!er mikr"!a umumn-a memenuhi permintaan
industri dan le!ih sta!il daripada tanaman dan he5an amilase dan
memper"leh murah. Enzim adalah pr"tein mampu memicu pr"ses !i"kimia.
&e!erapa mampu memicu pem!elahan hidr"litik (pencernaan) p"limer
!i"l"gis seperti pr"tein kar!"hidrat dan lemak. Ini dikenal se!agai
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
6/24
hidr"lisis. 6milase adalah nama -ang di!erikan untuk enzim hidr"lase
glik"sida -ang memecah pati menjadi m"lekul gluk"sa. #a-en dan #ers"z
adalah -ang pertama untuk men-adari enzimatik hidr"lisis pati dimana
mereka menemukan !ah5a ekstrak malt dik"nversi pati menjadi gula.Enzim
se!agian !esar pr"tein dengan si*at la!il dan ada aktivitas katalitik -ang
akti* "leh agen tertentu seperti suhu pH !ahan kimia dll -ang mengganggu
k"n*"rmasi asli enzim. #eman*aatan enzim terutama tergantung pada
sta!ilitas "perasi"nal dan pen-impanan. #ati -ang merupakan su!strat
amilase adalah !entuk -ang paling !erlimpah p"lisakarida pen-impanan
-ang signi*ikan -ang !esar di!idang !i"tekn"l"gi di!er!agai industri
peng"lahan pati. =alam !e!erapa tahun terakhir p"tensi menggunakan
mikr""rganisme se!agai sum!er !i"tekn"l"gi enzim industri -ang relevan
telah mem!angkitkan minat dalam ekspl"rasi aktivitas enzimatik
ekstraseluler dalam !e!erapa mikr""rganisme. 6milase memiliki salah satu
-ang paling penting aplikasi industri enzim. Hal ini digunakan dalam
pem!uatan !ir dan *ermentasi industri untuk dalam industri tekstil dalam
industri kertas dan industri makanan ('ahajan 2/11).
6ktivitas diastase (6,6+ 1/ 'et"de /) ditentukan
dengan menggunakans"lusi bufferpati larut dan madu diinku!asi dalam !ak
term"statik di/ "+. etelah itu 1 m0 aliBu"t campuran ini telah dihapus
pada interval ? menitdan pen-erapan sampel diikuti pada 77/ nm dalam
Perkin Elmer LuminescenceSpektrofotometer(3"r5alk U6).3ilai diastase
dihitung dengan menggunakan 5aktu -ang di!utuhkan untuk a!s"r!ansi
untukmencapai /.2? dan hasiln-a din-atakan dalam derajat gothekarenajumlahn-a (m0)dari 1 pati dihidr"lisis "leh enzim dalam 1 g madu dalam
1 jam (9"mes 2/1/).
6ktivitas enzim dipengaruhi "leh pH karena si*at i"nik gugus
kar!"ksil dan gugus amin" mudah dipengaruhi "leh pH. #eru!ahan pH atau
pH -ang tidak sesuai akan men-e!a!kan daerah katalitik dan k"n*"rmasi
enzim !eru!ah. elain itu peru!ahan pH juga men-e!a!kan denaturasi
enzim dan mengaki!atkan hilangn-a aktivitas enzim. Enzim -ang memiliki
aktivitas "ptimum pada suhu ?/J+ sampai dengan >/J+ dise!ut term"zim
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
7/24
dan enzim -ang memiliki aktivitas "ptimum di atas >/J+ dise!ut
hiperterm"zim ('er-andini 2//).
Enzim memiliki kekuatan katalitik !esar dan mempercepat reaksi
dengan mengurangi energi untuk setidakn-a juta kali untuk aktivasi. Enzim
mudah menjadi terdenaturasi dan kehilangan aktivitas katalitik. uhu umum
le!ih tinggi dari /+ dan pH -ang ekstrim harus dihindari setiap saat.
4egiatan hidr"litik dari alpha$amilase dariAspergillus terricoladitemukan
!ervariasi symbioticallydengan r"tasi "ptik tertentu dalam kisaran pHdi
atas.6milase adalah !i"katalis -ang paling penting karena kemampuan
mereka untuk meman*aatkan spektrum -ang luas dari su!strat sta!ilitas
-ang tinggi terhadap suhu ekstrim pH dll. =i antara mikr"!a tanaman dan
he5an enzim amilase mikr"!a memiliki aplikasi !esar dalam !er!agai
!idang. Kumlah amilase dengan pH "ptimum -ang !er!eda dan suhu juga
telah dilap"rkan (6mutha 2/12).
Enzim dapat pula mengalami peru!ahan k"n*"rmasi !ila pH
!ervariasi. 9ugus !ermuatan -ang jauh dari daerah terikatn-a su!strat
mungkin diperlukan untuk mempertahankan strutur tersier atau kuartener
-ang akti*. =engan !eru!ahn-a muatan gugus ini pr"tein dapat ter!uka
menjadi le!ih k"mpak atau !erdis"siasi menjadi pr"t"mer$ semua ini terjadi
dengan aki!at kehilangan aktivitas. &ergantung pada peru!ahan aktivitas
ini aktivitas !isa pulih atau tidak ketika enzim terse!ut dikem!alikan pada
pHn-a -ang "ptimal ('urra- 17).
#ereaksi -ang digunakan untuk menguji p"lisakarida adalah larutan
i"dine. 0arutan id"in akan mem!erikan 5arna !iru jika direaksikan dengan
p"lisakarida. #"lisakarida -ang lain akan mem!erikan 5arna -ang !er!eda
pada uji i"dine ini. 9lik"gen akan mem!erikan 5arna merah c"kelat dan
selul"sa mem!erikan 5arna c"kelat (utresna 2//;).
C. Metodologi
1. 6lat
a. Ta!ung reaksi
!.
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
8/24
e. 9elas pengukur
*. 9elas !eker
g. t"p5atch
h. #ipet tetes
i. #ipet v"lume
j. '"rtar
k. 4ain saring
l. #enjepit
m. Tim!angan
n. Inku!at"r
2. &ahan
a. &iji kacang hijau
!. Tauge
c. &u**er pH 7 >
d. 0arutan i"din //1 3
e. 0arutan diastase
*. 0arutan glik"gen 1
g. 0arutan amilum 1
h. 0arutan dekstrin 1
i. 6Buades
. +ara 4erja (Flowchart)
a.
#erc"!aan I : #engaruh pH Terhadap 6ktivitas Enzim=iastaseL6milase
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
9/24
!. Uji &enedict
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
10/24
c. Uji I"d
d. #engaruh uhu Terhadap 6ktivitas Enzim =iastaseL6milase
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
11/24
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
12/24
e. #engujian 6ktivitas 6milase dari Ekstrak &iji 4acang Hijau dan
Tauge
D. Hasil dan Pembahasan
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
13/24
Tabel ..#engaruh pH Terhadap 6ktivitas Enzim =iataseL 6milase
hi*t 4el u!strat &u**er Carna
/M ?M 1/M 1?M 2/M
1 > 11
ml
amilum
1
pH 4uning 4uning 4uning 4uning 4uning
112
1pH 7 Kingga Kingga Kingga Kingga Kingga
11/1
1?pH >
Ungu
#ekat
Ungu
#ekat
Ungu
#ekat
Ungu
#ekat
Ungu
#ekat
2 1; ml
amilum
1
pH &ening &ening 4uning 4uning 4uning
2 2? pH 7 &ening +"klat +"klat +"klat +"klat
2 7 pH > Ungu Ungu Ungu Ungu Ungu#ekat
um!er : 0ap"ran ementara
6milase adalah enzim -ang mempun-ai kemampuan memecah
ikatan gluk"sida pada p"limer pati. &e!erapa kel"mp"k dari enzim
amilase adalah a$amilase G$amilase dan Familase (3angin 2/1?).
Enzim -ang memiliki aktivitas "ptimum pada suhu ?/J+ sampai dengan >/J+
dise!ut term"zim dan enzim -ang memiliki aktivitas "ptimum di atas >/J+
dise!ut hiperterm"zim ('er-andini 2//).Umumn-a aktivitas enzim a$
amilase terjadi pada suhu /$/ D+ dan mengalami penurunan pada kisaran
suhu ?$?/D+ halini dise!a!kan karena enzim mangalami denaturasi
aki!atn-a m"lekul$m"lekul enzim rusak sehingga kehilangan spesi*itasn-a.
alah satu enzim pemecah pati adalah enzim a$amilase (a$1$glukan$
glukan"didr"lase@ E+..2.1.1.) enzim ini sangat !erperan dalam industri
pem!uatan r"ti dan sirup (uarni 2//;). =alam industri pangan enzim A$
amilase !er*ungsi men-ediakan gula hidr"lisis pati sehingga dapat di
man*aatkan untuk pr"duksi sirup gluk"sa ataupun sirup *rukt"sa -ang
mempun-ai tingkat kemanisan tinggi pem!uatan r"ti dan makanan !a-i
(etiasih 2//7).
Tahap 4arakterisasi Enzim 6milase:
#engaruh pH terhadap 6ktivitas Enzim 6milase
#engaruh 4"nsentrasi u!strat terhadap 6ktivitas Enzim 6milase
#engaruh Temperatur terhadap 6ktivitas Enzim 6milase ('appiratu dan
3urhaeni 2// dalam &ahri 2/12).
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
14/24
#ada perc"!aan kali ini dilakukan pengamatan pengaruh pH terhadap
aktivitas enzim amilase. Untuk mengetahui pengaruh n-ata dari pH
diperlukan dua tahap pengujian -akni pengujian i"d dan !enedict.
&erdasarkan hasil perc"!aan pengaruh pH terhadap aktivitas enzim diastase
dan amilase terhadap sampel amilum ml amilum 1 pada pH pada menit
ke / ? 1/ 1? 2/ secara !erturut$turut tidak didapatkan peru!ahan 5arna.
#erc"!aan pada shift 1 tidak sesuai dengan te"ri karena tidak terjadi
peru!ahan 5arna.#ada perc"!aan dengan menggunakan pH 5arna dari
menit ke$/ hingga ke$2/ semuan-a kuning. #ada pH 7 5arna tetap jingga
dan pada perc"!aan dengan pH > 5arnan-a tetap ungu pekat dari menit ke$/
hingga ke$2/.#erc"!aan pada shift2 mendapatkan hasil -akni pada pH
dengan pengamatan pada menit ke / ? 1/ 1? dan 2/ diper"leh 5arna akhir
setelah menit ke$2/ !erturut$turut -akni kuning c"klat dan ungu pekat. #ada
pH didapatkan 5arna !ening pada menit ke$/ dan ke$? sedangkan pada
menit selanjutn-a 5arnan-a menjadi kuning. #ada pH 7 5arna pada menit
ke$/ adalah !ening dan di menit$menit selanjutn-a 5arna menjadi c"klat.
#ada perc"!aan dengan pH > didapatkan hasil -akni ungu ungu ungu ungu
dan ungu pekat. 4erja "ptimum -ang didapat pada pH > sedangkan menurut
(E-ster 1?) pH enzim diastase "ptimum pada kisaran pH 7$;. 6da
kesamaan data pada kedua shift -aitu pada perc"!aan dengan pH > 5arna
-ang dihasilkan adalah ungu pekat.
Tabel ..!Uji &enedict #engaruh pH Terhadap Enzim =iastase
hi*t 4el u!strat &u**er #eru!ahan Carna
1 >111 6milum 1 pH &iru menjadi !iru muda
tidak terdapat endapan
1 12 6milum 1 pH 7 &iru menjadi !iru muda
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
15/24
tidak tedapat endapan
1 1/11? 6milum 1 pH >
&iru menjadi !iru muda
tidak terdepat endapan
2 1; 6milum 1 pH &iru menjadi !iru muda
tidak terdapat endapan
2 2? 6milum 1 pH 7&iru menjadi !iru muda
tidak terdapat endapan
2 7 6milum 1 pH >&iru menjadi !iru muda
tidak terdapat endapan
um!er : 0ap"ran ementara
Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui adan-a gula
pereduksi. &ahan -ang digunakan dalam praktikum amilum 1 -ang
dimasukkan ke dalam ta!ung -ang !er!eda kemudian dipanaskan selama
2/ menit. etelah itu ditam!ahkan 1 tetes sampel dan ditam!ahkan reagen
!enedict. Carna a5aln-a !ening dan !eru!ah menjadi !iru muda.#ada
perc"!aan -ang telah dilakukan pH tidak !erpengaruh pada peru!ahan 5arna
karena per!edaan pH -ang digunakan pH pH 7 dan pH > peru!ahan
5arna -ang terjadi adalah sama.#eru!ahan 5arna -ang terjadi a5aln-a
sampel !e5arna !ening -ang setelah ditetesi larutan !enedict menjadi 5arna!iru dan setelah dipanaskan!eru!ah menjadi !iru muda.
6ktivitas enzim dipengaruhi "leh pH karena si*at i"nik gugus
kar!"ksil dan gugus amin" mudah dipengaruhi "leh pH ('er-andini
2//).Uji &enedict !ertujuan untuk mengetahui adan-a gula pereduksi
4ar!"hidrat -ang mempun-ai si*at pereduksi (misaln-a gluk"sa) akan
mem!erikan endapan merah !ata dengan larutan !enedict (udarm" 2//7).
Kadi dapat disimpulkan !ah5a perc"!aan ini tidak sesuai dengan te"ri karena
tidak ada per!edaan peru!ahan 5arna meskipun dilakukan perlakuan
pem!erian buffer pH -ang !er!eda selain itu pada hasil 5arna akhir tidak
terdapat endapan merah !ata.
Tabel ."Uji &enedict 0arutan 9luk"sa
hi*t 4el u!strat #eru!ahan CarnaCarna
Endapan
1 > 12 9luk"sa //1 ' &iru menjadi c"klat
kemerahan
'erah !ata
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
16/24
1 1 9luk"sa //2 ' &iru menjadi hijau t"sca
pekat
'erah !ata
1 1/ 1 9luk"sa // ' &iru menjadi merah
kec"klatan
'erah !ata
1 11 1? 9luk"sa // ' &iru menjadi
merahpekat
'erah !ata
2 1 ? 9luk"sa //1 ' &iru kemerahan menjadi
!iru kemerahan
'erah !ata
2 2 7 9luk"sa //2 ' &iru kemerahan menjadi
merah kec"klatan
'erah !ata
2 ; 9luk"sa // ' &iru kemerahan menjadi
merah kec"klatan pekat
'erah !ata
2 9luk"sa // ' &iru kemerahan menjadi
merah !ata
'erah !ata
um!er : 0ap"ran ementara
#erc"!aan uji !enedict larutan gluk"sa ini !ertujuan untuk mengetahui
adan-a kandungan gula pereduksi. =alam !idang pangan uji !enedict !isa
digunakan untuk pem!uatan nata de coco(Indarti 2/11). #ada perc"!aan uji
!enedict ini gluk"sa -ang memiliki k"nsentrasi //1 '@ //2 '@ // '@ dan
// ' dimasukkan ke dalam masing$masing ta!ung reaksi. 4emudian tiap
ta!ung reaksi -ang telah dimasukkan larutan gluk"sa -ang k"nsentrasin-a
!er!eda ditam!ahkan ml reagen !enedict. etelah itu setiap ta!ung reaksi
ditutup dengan menggunakan alumunium foil dan dimasukkan kedalam
penangas air lalu tunggu sampai terjadi peru!ahan 5arna dan ter!entuk
endapan.
0arutan gluk"sa //1 ' -ang telah ditam!ahkan reagen !enedict dan
telah dipanaskan 5arnan-a !eru!ah menjadi c"klat kemerahan dan
mem!entuk endapan merah !ata. &egitu pula dengan larutan gluk"sa -ang
lainn-a larutan gluk"sa //2 ' ditam!ahkan dengan reagen !enedict
5arnan-a !eru!ah menjadi hijau t"sca pekat dan mem!entuk endapan merah
!ata. 0arutan gluk"sa // ' 5arnan-a !eru!ah menjadi merah kec"klatan
dan larutan gluk"sa // ' 5arnan-a !eru!ah menjadi merah pekat kedua
larutan ini juga mem!entuk endapan merah !ata. #ada larutan gluk"sa dengan
k"nsentrasi //2 ' menghasilkan 5arna -ang !er!eda dengan 5arna larutan
gluk"sa dengan k"nsentrasi //1 '@ // '@ dan // '. aat melakukan
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
17/24
perc"!aan pada larutan gluk"sa //1 '@ // '@dan // ' reagen !enedict
-ang ditam!ahkan ml sedangkan pada larutan gluk"sa dengan k"nsentrasi
//2 ' reagen !enedict -ang ditam!ahkan le!ih !an-ak -akni
ml.#er!edaan pem!erian reagen !enedict terse!ut terjadi karena kesalahan
dalam melalukan praktikum.
'"n"sakarida dan disakarida (kecuali sukr"sa) !eraksi dengan
pereaksi *ehling ataupun pereaksi !enedict mem!entuk endapan merah !ata
+u2,. #ereaksi !enedict dapat digunakan untuk memeriksa ada tidakn-a gula
dalam urine (#utjaatmaka 2//2).
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
18/24
'enurut utresna (2//;) pereaksi -ang digunakan untuk menguji
p"lisakarida adalah larutan i"din. 0arutan i"din akan mem!erikan 5arna !iru
jika direaksikan dengan p"lisakarida. Hal ini dapat diuji dengan
menggunakan amilum. +aran-a se!agai !erikut: mula$mula amilum
dilarutkan dalam air sampai ter!entuk suspensi. 4emudian suspensi ini
dipanaskan hingga mem!entuk k"l"id. Kika larutan k"l"id ini ditetesi larutan
i"din akan ter!entuk 5arna !iru. Carna !iru !erasal dari sen-a5a k"mpleks
-ang ter!entuk dari amil"sa (-ang terlarut dalam air) dengan larutan i"din.
#"lisakarida -ang lain akan mem!erikkan 5arna -ang !er!eda pada uji i"din
ini. =ekstrin mem!erikan 5arna merah anggur glik"gen mem!erikan 5arna
merah c"kelat dan selul"sa mem!erikan 5arna c"kelat.
&erdasarkan te"ri -ang di!erikan "leh utresna (2//;) hasil
perc"!aan -ang ditelah dilakukan tern-ata tidak sesuai dengan te"ri. 'enurut
te"ri glik"gen jika ditam!ahkan dengan larutan i"d akan !eru!ah menjadi
merah c"klat dan selul"sa jika ditam!ahkan dengan larutan i"d akan !eru!ah
menjadi 5arna c"kelat. Tetapi hasil perc"!aan menghasilkan 5arna -ang
!er!eda. 0arutan glik"gen !eru!ah menjadi 5arna "range sedangkan larutan
selul"sa !eru!ah menjadi 5arna kuning. Hal terse!ut dapat terjadi karena
kurang sempurnan-a reaksi antara larutan dengan i"dn-a pada saat dilakukan
perc"!aan.
Tabel .##engaruh uhu Terhadap 6ktivitas Enzim =iataseL 6milase
hi*t 4el uhuCaktu
inku!asi#eru!ahan Carna
1 >111 / /&ening menjadi ungu
kec"klatan
1 12 1// 1/ &ening menjadi ungu
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
19/24
kehitaman
1 1/11? uhu kamar /
&ening menjadi ungu
kec"klatan (le!ih terang)
2 1; / /&ening menjadi ungu
kec"klatan (le!ih terang)
2 2? 1// 1/&ening menjadi ungu
kehitaman
2 7 uhu kamar /&ening menjadi ungu
kec"klatan
um!er : 0ap"ran ementara
Tujuandari praktikum ini adalah untuk mengetahui pengaruh suhu
terhadap kerja enzim. 'asing$masing ta!ung diisi 2 ml enzim amilase dan 2
ml enzim diastase. =imana terdapat perlakuan ta!ung ke$1 diinku!asi
/menit pada /+ ta!ung ke$2 diinku!asi selama 1/menit dengan suhu
1//+ dan ta!ung -ang ke$ diinku!asi selama /menit dengan suhu kamar.
etelah diinku!asi dengan suhu -ang !er!eda$!eda masing$masing ta!ung
ditam!ahkan larutan i"d 1 ml.
&erdasarkan perc"!aan -ang dilakukan pada shift1 ta!ung pertama
5arnan-a !eru!ah dari !ening menjadi ungu kec"klatan. Ta!ung kedua
mengalami peru!ahan 5arna dari !ening menjadi ungu kehitaman.
edangkan pada ta!ung ketiga mengalami peru!ahan 5arna dari !ening
menjadi ungu kec"klatan (le!ih terang). Hasil perc"!aan pada shift2 pada
ta!ung pertama 5arna !eru!ah dari !ening menjadi ungukec"klatan (le!ih
terang) ta!ung kedua !eru!ah dari !ening menjadi ungu kehitaman dan pada
ta!ung -ang ketiga peru!ahan 5arna terjadi dari !ening menjadi ungu
kec"klatan. #er!edaan 5arna -ang terjadi pada suhu dan 5aktu inku!asi -ang
sama dapat dise!a!kan per!edaan keakti*an enzim.
Umumn-a aktivitas enzim a$amilase terjadi pada suhu /$/ D+
dan aktivitasn-a akan mengalami penurunan pada kisaran suhu ?$?/
D+ hal ini dise!a!kan karena enzim mengalami denaturasi aki!atn-a
m"lekul enzim rusak sehingga kehilangan spesi*itasn-a(uarni 2//;).
&erdasar data -ang diper"leh padashift1 kerja "ptimum enzim saat suhun-a
di suhu kamar. edangkan data padashift2 menunjukkan !ah5a kerja enzim
paling "ptimum saat suhu /+. Hal ini menunjukkan !ah5a sesuai dengan
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
20/24
te"ri hasil -ang diper"leh dari perc"!aan keja enzim menjadi "ptimum pada
kisaran suhu kamar dan /+.
Tabel .$ 6ktivitas Enzim 6milase dari Ekstrak 4acang Hijau dan Tauge
hi*t 4el &ahan#eru!ahan 5arna
/M 2/M
1 >
1/ 11
ml amilum 8 1 ml
ekstrak kacang hijau
4rem kehijauan
menjadi ungu
kehitaman
4rem kehijauan
menjadi ungu
kehitaman
1 12 1
1 1?
ml amilum 8 1 ml
ekstrak tauge
#utih susu
menjadi ungu
kehitaman
#utih susu
menjadi ungu
kehitaman
2 1 2 ml amilum 8 1 ml
ekstrak kacang hijau
8 buffer
&ening menjadi
hitam
kekuningan
&ening menjadi
kuning pekat
ml amilum 8 1 ml
ekstrak tauge 8
buffer
&ening menjadi
ungu pekat
&ening menjadi
kuning !ening
um!er: 0ap"ran ementara
um!er enzim dapat diper"leh dari tanaman he5an dan
mikr""rganisme. Enzim A$amilase !an-ak terdapat pada kecam!ah kacang$
kacangan. #emilihan kacang hijau se!agai sum!er enzim a$amilase karena
dalam !entuk kecam!ah mengandung t"k"*er"l (pr" vitamin E) 7 ppm
*en"lik 11 ppm. #em!uatan ekstrak enzim dari kecam!ah kacang
hijau : &iji kacang hijau dis"rtasi hingga diper"leh !iji !ersih dan utuh
dicuci direndam dengan aBuades selama / menit ditiriskan kemudian
diperam dalam 5adah !erp"ri sampai terjadiperkecam!ahan.Caktu
perkecam!ahan (1 2 dan ? hari). 4ecam!ah di!ersihkan dengan
melepas kulit luarn-a se!agian diam!il se!agai sampel untuk analisis kadar
pr"tein dan air. e!agian ditim!ang kemudian dihancurkan dengan !lender
dimana untuk 1g kecam!ah ditam!ahkan ? m0 !u**er asetat /2 ' pH ?.
4ecam!ah -ang sudah hancur disimpan selama 1/ menit sam!il dik"c"k
kemudian dilakukan pen-aringan dengan kapas. %iltrat -ang dihasilkan
disentri*ugasi selama 2/ menit dengan kecepatan 2///rpm pada suhu ?D+.
upernatan(ekstrak enzim) -ang dihasilkandiukur v"lumen-a dan
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
21/24
ditempatkan ke dalam 5adah steril untuk dianalisis antara lain@ aktivitas
enzim A$amilase pH dan pr"tein terlarut (uarni 2//;).
#erc"!aan ini menggunakan !ahan uji ekstrak kacang hijau dan
ekstrak tauge -ang !ertujuan untuk mempermudah !erlangsungn-a reaksi
enzimatik. &erdasarkan hasil analisa dari ekstrak kacang hijau se!elum
dilakukan inku!asi terjadi peru!ahan 5arna dari 5arna krem kehijauan
!eru!ah 5arna menjadi ungu kehitaman. etelah di inku!asi pada suhu /"+
selama 2/ menit terjadi peru!ahan 5arna dari krem kehijauan !eru!ah
menjadi 5arna ungu kehitaman. =engan ekstrak tauge se!elum dilakukan
inku!asi 5arnan-a putih susu setelah ditetesi larutan i"d 5arna !eru!ah
menjadi ungu kehitaman dan setelah diinku!asi dan ditetesi larutan i"d 5arna
dari putih susu menjadi ungu kehitaman. Uji i"din digunakan untuk
menunjukkan adan-a p"lisakarida. &ila ke dalam !ahan -ang mengandung
p"lisakarida di!eri larutan i"dine mem!erikan 5arna !iru !erarti !ahan
terse!ut mengandung amilum (amil"sa). 6mil"pektin akan mem!erikan
5arna merah ungu glik"gen dan dekstrin akan mem!erikan 5arna merah
c"klat (udarm" 2//7). Kadi data -ang diper"leh pada shift1 menunjukkan
!ah5a masih adan-a kandungan amilum padahal sudah dilakukan inku!asi
padahal seharusn-a saat setelah diinku!asi sudah tidak ada kandungan
amilum. #ada shift 2 pada kedua sampel -aitu ekstrak tauge dan ekstrak
kacang hijau setelah diinku!asi dan diteteskan larutan i"d 5arnan-a menjadi
kuning. 6da per!edaan hasil peru!ahan 5arna pada keduashift per!edaan ini
dise!a!kan "leh pem!erian bufferpada shi*t 2 sehingga sesuai dengan te"ri
-aitu menjadi 5arna kuning. Hal ini menunjukkan !ah5a sudah tidak adakandungan amilum. Enzim dipengaruhi "leh *akt"r lingkungann-a seperti
temperatur keasaman (pH) k"nsentrasi su!strat k"nsentrasi enzim dan
aktivat"r (&ahri 2/12).
E. %esim&ulan
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
22/24
=ari praktikum 6cara 1 Enzim dapat diper"leh !e!erapa kesimpulan
se!agai !erikut :
1. 4erja enzim dipengaruhi !e!erapa *akt"r -aitu suhu pH k"nsentrasi
su!strat k"nsentrasi enzim dan ke!eradaan inhi!it"r.
2.
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
23/24
&ahri -ai*ul. '"h. 'irzan. dan '"h. Hasan. 2/12. &arakteristik Enzim
Amilase dari &ecambah %i-i .agung &etan /0ea mays certain L11 Kurnal
3atural cience N"l.1 3".1.
E-ster +l-de. 1?. !he 3ptimum pH for 4iastase of "alt Acti$ity1The ,hi"
K"urnal "* cience N"l. ? 3". ?.
9irindra 6isjah. 1/.%iokimia #. 9ramedia. Kakarta.
9"mes usana. etall. 2/1/.Physicochemical "icrobiological and Antimicrobial
Properties of 'ommercial Honeys from Portugal. +I', F Esc"la uperi"r
6grOria Institut" #"litPcnic" de &raganca 6partad" 11;2.
Indarti =5i. dan 6sna5ati. 2/11. &arakterisasi Film ,ata 4e 'oco5%enedict
Secara Adsorpsi +ntuk Sensor 6lukosa 4alam +rine1Kurnal Ilmu =asar
N"l. 12 3". 2.
0ehninger 6l!ert. 1>21 4asar5dasar %iokimia .ilid 7. Erlangga. Kakarta.
'ahajan
-
7/23/2019 ACARA 1. FIX.docx
24/24