1. TEKNIK PEMBUATAN APUSAN BAKTERI

Alat : Jarum Ose Gelas

Object Bunsen

Bahan : Biakan (Agar Culture/ Broth

Culture) NaCl Fisiologis Spiritus

Prosedur : Sumber dari biakan Padat (Agar Culture)

1. Dengan menggunakan Jarum Ose, ambil 2 loop NaCl Fisiologis, tempatkan di atas Object Glass;

2. Dengan menggunakan Jarum Ose (ujung runcing), ambil 1 koloni bakteri dari biakan Padat, tempatkan di atas suspensi NaCl Fisiologis yang sudah ada di atas Object Glass,

3. Ratakan suspensi dengan membentuk area apusan; 4. Keringkan suspensi pada suhu ruang untuk beberapa menit; 5. Lewatkan suspensi di atas api bunsen untuk fiksasi apusan.

Sumber dari biakan Cair (Broth Culture) 1. Dengan menggunakan Jarum Ose, ambil 2 loop Biakan Cair (Broth

Culture), tempatkan di atas Object Glass; 2. Ratakan suspensi dengan membentuk area apusan; 3. Keringkan suspensi pada suhu ruang untuk beberapa menit; 4. Lewatkan suspensi di atas api bunsen untuk fiksasi apusan.

TEKNIK PEWARNAAN GRAM

Alat : Object Glass Cover Glass Pipet Tetes Botol

Semprot Bunsen

Bahan : Apusan Bakteri Zat Warna Gentian Violet Iodine Alcohol Zat Warna Safranin/ Air

Fuchsin Aquades Spiritus

Prosedur : 1. Persiapkan Apusan bakteri yang telah dibuat pada tahap

sebelumnya; 2. Teteskan 1 tetes Zat Warna I (Gentian Violet) ke atas area

apusan, biarkan selama 20 detik; 3. Cuci perlahan dengan menggunakan air aquades, biarkan 2 detik; 4. Teteskan 1 tetes Larutan Iodine ke atas apusan, biarkan 30 detik

s.d. 1 menit;

5. Cuci dengan Alcohol, hingga larutan yang mengalir sudah tidak berwarna (sekitar 10 – 20 detik);

6. Cuci perlahan dengan menggunakan air aquades, biarkan selama 2 detik;

7. Teteskan 1 tetes Zat Warna II (Safranin/ Air Fuchsin), biarkan selama 20 detik; 8. Cuci perlahan dengan menggunakan air aquades, biarkan selama 2 detik; 9. Keringkan di suhu ruang; 10. Amati di atas mikroskop dengan perbesar 100 x Objektif, dengan bantuan minyak

imersi;

ALAT DAN BAHAN ALATAdapun alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah :1. Tabung reaksi2. Ose3. Pipet4. Botol semprot 5. Baskom 6. Korek Api7. Pensil glass8. Rak tabung reaksi9. Mikroskop10. Penyaring bakteri11. Gelas objek 12. Spirtus  

BAHANBahan-bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah :  Biakan Bakteri: Escherichia coliZat warna : Karbol Kristal ungu 5-10% Cairan Lugol Alkohol 96% Air Fukhsin 0,5% Minyak ImmersiV. CARA KERJA1. Membuat Preparata. Gelas objek dibersihkan dahulu dengan kain yang bersih, kemudiandilewatkan di atas api untuk menghilangkan lemak dan biarkan dinginsebelum dipakai.b. Buat batas bulatan dengan pensil gelas.c. Ambil bakteri sebanyak satu ose, taruh di atas gelas objek, sebarkanseluas 1-2 cm2.d. Biarkan mengering di udara atau dipercepat dengan melewatkan di atasapi (difiksasi).2. Pewarnaan Grama. Tuangkan larutan karbol kristal ungu pada sediaan dan biarkan selama5 menit.b. Cuci dengan air.c. Tuangkan cairan Lugol selama 45-60 detik, kemudian cuci dengan air.d. Cuci dengan alkohol dengan cara mencelupkan ke dalam bejana yangberisis alkohol 96% dan goyang-goyangkan selama 30 detik, atausampai zat warna tidak mengalir lagi.e.

 Cuci dengan air.f. Tuangkan air Fukhsin, biarkan selama 1-2 menit, cuci dengan air dankeringkan.g. Tetesi minyak immersi di atas sediaan, periksa dengan mikroskop.3. Pengamatan a. Bakteri gram positif berwarna ungu birub. Bakteri gram negatif berwarna ungu merahLAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGIPEWARNAAN BAKTERI GRAM

CAROLINA ASTARI (1106067192)THERESA (1106067160)FITRI ARUM SARI (1106067204)FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS INDONESIA2012