Post on 26-Jun-2015
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
1. Tujuan
Praktikum ini bertujuan meningkatkan keterampilan
praktikan dalam menginokulasi mikroba.
2. Landasan Teori
Salah satu tahapan identifikasi mikroba adalah
inokulasi mikroba. Inokulasi dimaksudkan untuk
menumbuhkan, meremajakan mikroba dan mendapatkan
populasi mikroba yang murni. Inokulasi dapat dilakukan
pada media cair (broth) atau padat (solid). Inokulasi
mikroba pada media cair dapat dilakukan menggunakan
media kaldu yang disimpan dalam labu Erlenmeyer.
Inokulasi mikroba pada media padat dapat dilakukan pada
agar lempeng, miring dan tegak. Inokulasi mikroba pada
agar lempeng, yaitu menginokulasi mikroba ke agar
lempeng untuk memurnikan mikroba.
Inokulasi mikroba pada agar lempeng dapat
dilakukan dengan tiga cara, yaitu lempeng gores (streak
plate), lempeng tuang (pour plate), dan lempeng sebar
(spread plate). Inokulasi mikroba dengan cara lempeng
gores dimaksudkan untuk menumbuhkan mikroba pada
agar lempeng dengan cara menggores (streaking)
permukaan agar menggunakan jarum ose yang mengandung
mikroba inokulan. Dengan teknik ini mikroba yang
tumbuh akan tampak dalam bentuk goresan. Ada beberapa
Mikrobiologi Perikanan 1
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
teknik menggores yang biasa digunakan (Gambar 1).
Gambar 1. Pola goresan pada media agar
Sumber : http://www.studentsguide.in/microbiology/microbiology-tools-techniques/images/various-methods-of-streaking.jpg&imgrefurl
Inokulasi mikroba dengan cara lempeng tuang
dimaksudkan untuk menumbuhkan mikroba di media agar
dengan cara mencampurkan kultur mikroba ke media agar
hangat yang masih cair. Teknik ini bertujuan agar mikroba
tumbuh tersebar merata di seluruh media agar. Inokulasi
mikroba dengan cara lempeng sebar dimaksudkan untuk
menumbuhkan mikroba di bagian permukaan media agar.
Cara inokulasi ini dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu
dengan pemipetan (pipetting) dan penghapusan (swabbing).
Mikrobiologi Perikanan 2
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
(a) (b)
Gambar 2. Inokulasi mikroba dengan metode tuang (a) dan pipet (b)Sumber :
http://biology.clc.uc.edu/fankhauser/Labs/Microbiology/Bacterial_Inhibition/Pour_seeded_agar_P7231208md.jpg&imgrefurl
Agar miring (slant), yaitu menginokulasi mikroba
ke agar miring di dalam tabung reaksi untuk melihat
karakteristik koloni mikroba yang tumbuh. Setiap bakteri
memiliki karakteristik koloni yang khas. Agar tegak
(deep), yaitu menginokulasi mikroba ke agar tegak dalam
tabung reaksi untuk melihat karakteristik koloni mikroba
yang tumbuh.
(a) (b)
Gambar 3. Inokulasi mikroba pada agar miring (a) dan agar tegak (b)Sumber : http://a-s.clayton.edu/furlong/BIOL2250LAB/Reviews/pictures/tsi.jpg
Mikrobiologi Perikanan 3
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
3. Alat dan Bahan
3.1. Alat
a. Ose
b. Lampu Bunsen
c. Tabung reaksi
d. Inkubator
e. Tisu
3.2. Bahan
a. Agar tegak dan agar miring
b. Biakan fermentasi kubis
4. Prosedur Kerja
Untuk menginokulasi mikroba, semua peralatan dan lingkungan
harus steril sehingga dapat dicegah kemungkinan terjadinya
kontaminasi. Adapun tahapan inokulasi mikroba adalah :
1. Sterilisasi ruang, peralatan, pakaian dan praktikan sehingga dapat
meminimalkan terjadinya kontaminasi . Sterilisasi dapat dilakukan
secara kering atau basah.
2. Lakukan pengambilan mikroba dari cairan fermentasi kubis dan
inokulasikan ke media agar miring dan agar tegak. Pengambilan
mikroba dilakukan dengan menggunakan ose sebagai berikut :
Mikrobiologi Perikanan 4
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
Panaskan ujung ose hingga berpijar. Bagian api berwarna biru paling panas sehingga bias memanaskan ose lebih cepat. Panaskan pula kawat baja hingga ke pangkal pegangan. Dinginkan ose selama 10-20 detik. Ose jangan diletakkan di atas meja untuk mencegah kontaminasi.
Pegang tabung reaksi berisi mikroba dan tabung reaksi yang akan diinokulasi pada satu tangan, sementara tangan lainnya tetap memegang ose. Buka kedua tutup tabung reaksi menggunakan tangan yang memegang ose
Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api
Ambil sample mikroba dari tabung reaksi menggunakan ose, baik ose berbentuk lingkaran atau jarum
Mikrobiologi Perikanan 5
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
Panaskan kembali mulut tabung reaksi sebelum ditutup
Sentuhkan koloni mikroba pada ujung ose ke media tanpa merusak permukaan agar.
Saat menginokulasi ke media agar tegak dan miring, goreskan ose lingkaran ke permukaan media agar dengan pola lurus atau zigzag secara hati-hati tanpa ditekan sehingga tidak merusak permukaan agar. Inokulasi pada agar tegak dilakukan dengan menusukkan ose jarum ke dalam media agar hingga mencapai dasar tabung reaksi dan kemudian dicabut kembali.
Sumber : faculty.clintoncc.suny.edu/.../Procaryotes.htm
3. Mikroba yang telah diinokulasi selanjutnya diinkubasi selama 2 x 24
jam di dalam incubator.
4. Amati karakteristik koloni mikroba yang tumbuh.
5. Hasil Pengamatan
Mikrobiologi Perikanan 6
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
Berdasarkan prosedur kerja yang dilaksanakan,
maka lakukan pengamatan terhadap hasil inokulasi. Buat
gambar pertumbuhan mikroba dari masing-masing teknik
inokulasi.
Gambar Deskripsi
Agar miring
Agar tegak
6. Pembahasan
Buat pembahasan mengenai kegiatan praktikum
inokulasi mikroba yang saudara kerjakan. Kesimpulan apa
yang Saudara dapatkan?
Mikrobiologi Perikanan 7
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
................................................................................................
7. Pendalaman
Mikrobiologi Perikanan 8
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
Untuk meningkatkan pemahaman mengenai proses
inokulasi mikroba, maka praktikan diwajibkan menjawab
pertanyaan berikut ini :
1. Apa tujuan utama inokulasi mikroba pada media
lempeng agar?
…………………………………………………………
…………………………………………………………
…………………………………………………………
…………………………………………………………
…………………………………………………………
2. Berdasarkan hasil yang diperoleh, jelaskan oleh
Saudara apa perbedaan tujuan inokulasi mikroba pada
media agar miring dan agar tegak?
…………………………………………………………
…………………………………………………………
…………………………………………………………
…………………………………………………………
…………………………………………………………
8. Pustaka
Apriyantono, A., D. Fardiaz, N.L. Puspitasari, Sedarnawati dan S. Budiyanto. 1989. Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, Direktorat Jenderal Pendidikan
Mikrobiologi Perikanan 9
LaboratoriumTeknologi Industri Hasil Perikanan
Inokulasi Mikroba FPIK-Unpad
Tinggi. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi. Institut Pertanian Bogor.
Cappuccino J.G. and N. Sherman. 1987. Microbiology : A Laboratory Manual. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. Menlo Park, California.
Furlong. 2008. Media Study Guide. http://a-s.clayton.edu/furlong/BIOL2250LAB/Reviews/pictures/tsi.jpg&imgrefurl
Post, F.J. 1988. A Laboratory Manual for Food Microbiology and Biotechnology. Star Publishing Company, United State of America.
Prokaryotes. http ://faculty.clintoncc.suny.edu/.../ Procaryotes.htm
Streaking Agar Plates. 2008. http://www.madsci.org/~lynn/ micro/techniques/streaking/secondary.
Seeley, H.W., P.J. Vandemark dan J.J. Lee. Microbe in Action. A Laboratory Manual of Microbiology. W.H. Freeman and Company, New York.
Mikrobiologi Perikanan 10