Post on 25-Dec-2019
GAMBARAN POLIMORFISME GEN LEPTIN RECEPTOR
(LEPR) RS 1137101 PADA ANAK DENGAN RIWAYAT
ORANGTUA DIABETES MELITUS TIPE 2
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
gelar SARJANA KEDOKTERAN
OLEH :
RISFY GUSTI PAMUNGKAS
11151030000015
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1440 H / 2018 M
iv
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Warrahmatullahi Wabaralatuh,
Alhamdulillah puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan
rahmat dan ridho-Nya sehingga saya sebagai penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan laporan penelitian dengan judul GAMBARAN
POLIMORFISME GEN LEPTIN RECEPTOR (LEPR) PADA ANAK
DENGAN RIWAYAT ORANGTUA DIABETES MELITUS TIPE 2.
Penulis juga berterimakasih atas doa dan bantuan dari berbagai pihak
sehingga penelitian ini dapat terselesaikan dengan baik. Oleh karena itu, penulis
ingin mengucapkan terima kasih kepada yang terhormat :
1. Orang tua saya yang telah membesarkan, memberi doa, mencurahkan hati
dan raga nya untuk anak-anaknya, memberikan yang terbaik untuk anak-
anaknya sehingga memberikan saya semangat untuk menyelesaikan
penelitian ini.
2. Dr. Hari Hendarto, Sp.PD, K.EMD selaku Dekan Fakultas Kedokteran
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Dr. Achmad Zaki, M.Epid, Sp.OT selaku Kepala Program Studi
Pendidikan dokter Fakultas Kedokteran UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
4. Chris Adhiyanto, S.Si, M.Biomed, PhD dan DR. Zeti Harriyati,
M.Biomed. Selaku pembimbing yang telah membimbing, mengarahkan,
mengajarkan, memfasilitasi dan membantu penelitian ini.
5. Laboran laboratorium biokimia dan biologi, Mbak Ayi dan Mba Suryani
yang telah membantu berjalannya penelitian ini.
6. Intan Aziz sebagai teman kelompok penelitian yang telah saling
membantu dan menyemangati menyelesaikan penelitian ini.
7. Teman-teman dan adik kelas angkatan 2015, 2016 dan 2017 yang telah
rela membantu menjadi responden penelitian.
8. Pasien klinik dan peserta prolanis beserta keluarganya yang rela
membantu menjadi responden penelitian.
9. Pegawai klinik Salsabilla Medical Centre yang telah membantu
mencarikan responden penelitian.
v
10. Teman-teman amigdala 2015 yang selalu memberi semangat.
11. Iang Fatma Putri yang selalu memberikan doa, menyemangati, dan
memberikan dukungan.
Penulis menyadari dalam penulisan laporan penelitian ini masih banyak
terdapat kekurangan. Kritik dan saran yang membangun dari semua pihak akan
diterima dan sangat dihargai oleh penulis demi laporan yang lebih baik. Penulis
berharap penelitian ini dapat bermanfaat untuk masyarakat dan berharap
penelitian ini dapat dikembangkan lagi. Demikian, semoga Allah SWT selalu
memberikan rahmat dan ridho-Nya kepada seluruh pihak yang membantu dalam
penelitian ini. Aamiin ya Allah ya Rabbal’alamin
Wassalamualaikum Warrahmatullahi Wabarakatuh
Ciputat, 28 November 2018
Penulis
vi
ABSTRAK
Risfy Gusti Pamungkas, Program Studi Kedokteran, Gambaran
Polimorfisme Gen Leptin Receptor (LEPR) Rs 1137101 pada Anak dengan
Riwayat Orangtua Diabetes Melitus Tipe 2
Leptin Receptor (LEPR) merupakan reseptor hormon yang di ekspresikan di
hipotalamus dan berfungsi dengan berinteraksi dengan Hormon Leptin yang
berfungsi untuk meregulasi asupan makanan, suhu tubuh dan homeostasis energi.
Polimorfisme gen LEPR diketahui berkaitan dengan peningkatan indeks massa
tubuh (IBM), peningkatan berat badan, peningkatan nafsu makan, hiperleptinemia
dan faktor predisposisi resistensi leptin. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui gambaran polimorfisme genetik LEPR pada anak dengan riwayat
orangtua menderita Diabetes Melitus tipe 2 (N = 100). Metode yang digunakan
adalah Reverse Transcription – Polymerase Chain Reaction (RT-PCT). Hasil
penelitian ini menunjukan bahwa genotip GG memiliki proporsi terbanyak (N =
83).
Kata Kunci : LEPR, DM tipe 2, RT-PCR
vii
ABSTRACT
Risfy Gusti Pamungkas, Medicine Study Program, Representation of Leptin
Receptor (LEPR) Gene Polymorphism Rs 1137101 on Child of Parents with
Type 2 Diabetes Mellitus.
Leptin Receptor (LEPR) is a hormone receptor that expressed in the
hypothalamus and its main function is to interact with Leptin Hormone to regulate
food intake, body temperature and energy homeostasis. LEPR gene polymorphism
known to related with increased Body Mass Index (BMI), weigh gain, increase of
apetite, hyperleptinemia and predisposition to leptin resistance. The purpose of
this research is to know the representation of LEPR gene polymorphism on child
of parents with type 2 Diabetes Mellitus( N = 100 ). The method used on this
research are Reverse Transcription – Polymerase Chain Reaction (RT-PCT). The
result of this research show that GG genotype has higher frequencies (N = 83).
viii
DAFTAR ISI
LEMBAR PERNYATAAN ................................................................................... i
LEMBAR PERSETUJUAN ................................................................................. ii
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................. iii
KATA PENGANTAR .......................................................................................... iv
ABSTRAK ............................................................................................................ vi
ABSTRACT ......................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ....................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. x
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xi
DAFTAR SINGKATAN ..................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiii
BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 4
1.3 Hipotesis ........................................................................................................ 4
1.4 Tujuan Penelitian ........................................................................................... 4
1.4.1 Tujuan Umum ..................................................................................... 4
1.4.2 Tujuan Khusus .................................................................................... 4
1.5 Manfaat Penelitian ......................................................................................... 5
1.5.1 Bagi Peneliti ........................................................................................ 5
1.5.2 Bagi perguruan tinggi ......................................................................... 5
1.5.3 Bagi Masyarakat ................................................................................. 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Landasan Teori .............................................................................................. 6
2.1.1 Insulin ................................................................................................. 6
2.1.2 Diabetes Melitus ................................................................................. 8
2.1.3 Materi Herediter ................................................................................ 13
2.1.4 Single Nucleotide Polimorphism (SNP) ........................................... 17
2.1.5 Hormon Leptin dan Polimorfisme Gen Leptin Receptor .................. 18
2.2 Kerangka Teori ............................................................................................ 22
2.3 Kerangka Konsep ........................................................................................ 23
2.4 Definisi Operasional .................................................................................... 23
BAB III METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Desain Penelitian ......................................................................................... 24
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ..................................................................... 24
3.3 Sampel Penelitian ........................................................................................ 24
3.4 Besar Sampel ............................................................................................... 24
3.5 Teknik Pengambilan Sampel ....................................................................... 25
3.6 Kriteria Pemilihan Sampel .......................................................................... 25
3.6.1 Kriteria Inklusi .................................................................................. 25
3.6.2 Kriteria Eksklusi ............................................................................... 26
ix
3.7 Alur Penelitian ............................................................................................. 26
3.8 Prosedur Penelitian ...................................................................................... 27
3.9 Cara Kerja Penelitian ................................................................................... 28
3.9.1 Pengumpulan Data ............................................................................. 28
3.9.2 Isolasi DNA ....................................................................................... 28
3.9.3 Amplifikasi Genom dengan RT-PCR ................................................ 35
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Data Karakteristik Responden ..................................................................... 39
4.2 Isolasi Genom .............................................................................................. 39
4.3 Identifikasi Genetik LEPR Menggunakan RT-PCR.................................... 40
4.4 Frekuensi Alel Gen LEPR ........................................................................... 42
4.5 Analisis Hubungan Gen LEPR Anak dengan Orangtua DM tipe 2 ............ 43
4.6 Analisis Hubungan Gen LEPR dengan DM tipe 2 ...................................... 43
4.7 Keterbatasan Peneliti ................................................................................... 44
BAB V SIMPULAN DAN SARAN 5.1 Simpulan ...................................................................................................... 45
5.2 Saran ............................................................................................................ 45
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 46
LAMPIRAN ......................................................................................................... 50
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Ekskresi Insulin dari Sel Beta Pankreas .............................................. 7
Gambar 2.2 Cara Kerja Insulin pada Sel ................................................................. 8
Gambar 2.3 Omnious Octet ................................................................................... 10
Gambar 2.4 Faktor Resiko DM tipe 2 ................................................................... 12
Gambar 2.5 DNA .................................................................................................. 14
Gambar 2.6 Gen .................................................................................................... 15
Gambar 2.7 Kromosom ......................................................................................... 16
Gambar 2.8 Lokasi Mutasi Gen FTO, LEPR, PPARg dan TCF7L2 ................... 21
Gambar 3.1 Skema Kerja Isolasi DNA dari Darah ............................................... 31
Gambar 3.2 Skema Kerja Isolasi DNA dari Air Liur ............................................ 34
Gambar 3.3 Prinsip Kerja Probe pada Endpoint Genotyping ............................... 37
Gambar 3.4 Hasil dari Endpoint Genotyping ........................................................ 38
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Klasifikasi Etiologis Diabetes Melitus .................................................... 9
Tabel 2.2 Definisi Operasional ............................................................................. 23
Tabel 3.1 Alat dan Bahan ...................................................................................... 27
Tabel 4.1 Karakteristik Jenis Kelamin Responden Penelitian .............................. 39
Tabel 4.2 Data Kemurnian DNA Genom Responden ........................................... 40
Tabel 4.3 Data Distribusi Genotip Responden ...................................................... 41
Tabel 4.4 Distribusi Data Genotip Berdasarkan Pasangan Orang Tua Dengan DM
Tipe 2 dan Anak .................................................................................................... 41
Tabel 4.5 Hasil Kalkulasi MedCalc ...................................................................... 43
xii
DAFTAR SINGKATAN
LEPR Leptin Receptor
DM Diabetes Melitus
WHO World Health Organization
IDF International Diabetes Federation
SNP Single Nucleotide Polymorphism
GLUT-4 Glucose Transporter-2
PGE 2 Prostaglandine E 2
ATP Adenosine Triphosphate
ADP Adenosine Diphosphate
HGP Hepatic Glucose Production
GLP-1 Glucagon-like Polypeptide 1
GIP Glucose-dependent Insulinotrophic Polypeptide
IGT Impaired Glucose Tolerance
DNA Deoxyribonuclei Acid
CFTR Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator
NPY Neuropeptida Y
RT-PCR Reverse Transcription Polmerase Chain Reaction
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Susunan Asam Basa Gen LEPR ........................................................ 50
Lampiran 2 Karakteristik Sampel Kontrol ............................................................ 51
Lampiran 3 Karakteristik sampel Penderita DM tipe 2 ........................................ 53
Lampiran 4 Karakteristik Sampel Anak Penderita DM tipe 2 .............................. 55
Lampiran 5 Alat dan Bahan .................................................................................. 57
Lampiran 6 Analisis Data...................................................................................... 59
Lampiran 7 Surat Persetujuan Responden ............................................................ 62
Lampiran 8 Curricullum Vitae Peneliti ................................................................. 64
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Diabetes melitus adalah penyakit metabolik kronis yang berlangsung
seumur hidup dan ditandai dengan tingginya kadar gula pada darah.
Meningkatnya kadar gula darah diakibatkan oleh rusaknya sel beta pankreas
atau resistensi insulin yang diakibatkan oleh kelainan genetik, efek dari
inflamasi, autoimun atau insufisiensi pankreas dalam memebentuk insulin.
Diabetes melitus termasuk dalam salah satu dari empat (4) prioritas
penyakit tidak menular selain dari penyakit kardiovaskular, kanker dan
penyakit paru kronis. Diabetes biasanya terjadi pada dewasa akhir, namun
sekarang ini diabetes mulai banyak terjadi pada anak-anak, remaja dan dewasa
muda, hal tersebut dikarenakan terjadinya peningkatan angka obesitas,
inaktifitas dan diet yang buruk.34
International Diabetes Federation (IDF)
menyatakan bahwa pada populasi usia 20-79 tahun terdapat 425 juta penduduk
dunia yang menyandang diabetes tahun 2017 dan diprediksi padatahun 2045
akan meningkat menjadi 629 juta penduduk dunia. Indonesia juga merupakan
negara yang termasuk dalam 10 negara dengan angka diabetes tertinggi
sedunia, yaitu peringkat 6 setelah China, India, Amerika, Brazil dan Meksiko
dengan penderita pada usia >20 tahun sebanyak 10 juta penduduk di
Indonesia.34
Ada tiga jenis diabetes utama yaitu diabetes tipe 1, diabetes tipe 2, dan
diabetes gestasional. Semua jenis DM memiliki kesamaan yaitu terjadinya
kerusakan atau ketidak mampuan tubuh untuk memetabolisme gula dengan
baik. Normalnya, tubuh akan memetabolisme gula dan karbohidrat yang
masuk kedalam tubuh dan diserap dalam bentuk glukosa. Glukosa akan di
metabolisme dalam sel untuk membentuk energi, namun untuk memasukan
glukosa kedalam sel memerlukan insulin sebagai mediator untuk
2
mengaktifkan reseptor glukosa GLUT-4. Pada penyakit DM, jumlah insulin
dalam tubuh sedikit atau tidak ada sama sekali sehingga glukosa tidak dapat
masuk ke dalam sel. Karena sel-sel tidak mendapat asupan glukosa, glukosa
akan menumpuk didalam darah. Kadar glukosa yang tinggi dapat merusak
fisiologi sistem organ di pembuluh darah, ginjal, jantung, mata, atau sistem
saraf. Sehingga jika tidak diobati dapat mengakibatkan komplikasi pada
sistem organ seperti stroke, glaukoma, neuropati diabetik, penyakit jantung,
hipertensi, retinopati diabetik, nefropati diabetik, dan komplikasi di sistem
organ lainnya.24
Diabetes melitus tipe 2 merupakan penyakit dengan penyebab yang
multifaktorial, dari akibat faktor lingkungan berupa gaya hidup, kebiasaan
makan, olahraga, pekerjaan dan lain-lain. Faktor lainnya ada juga faktor risiko
genetik dimana riwayat keluarga menjadi faktor penting terjadinya diabetes
melitus tipe 2. Hal ini dibuktikan dan dilaporkan pada beberapa penelitian
bahwa terdapat peningkatan risiko yang cukup signifikan jika salah satu
keluarga yang mengalami diabetes melitus maka keturunannya akan
mengalami resiko diabetes melitus yang lebih tinggi dari orang tanpa riwayat
keluarga dengan diabetes melitus tipe 2. Selain dari faktor risiko riwayat
keluarga, ada faktor yang tidak dapat diubah seperti usia dan ras. Selain itu
masih ada faktor resiko lainnya yang masih dapat dimodifikasi seperti
obesitas, inaktifitas, konsumsi alkohol, stress, dislipidemia dan asupan
makanan. Dengan mengetahui terlebih dahulu apa saja faktor-faktor risiko
yang kita miliki maka kita dapat menghindari dan juga mengurangi
kemungkinan berkembangnya diabetes melitus. Oleh karena itu ada kebutuhan
untuk melakukan intervensi lebih awal pada penyakit ini bertujuan untuk
meningkatkan kemungkinan terkontrolnya diabetes, mempertahankan kualitas
hidup pasien, memperlambat onset penyakit dan juga memperkecil
kemungkinan terjadinya komplikasi dari diabetes melitus.35
Penelitian yang dilakukan baru-baru ini menemukan adanya varian gen
yang bertanggungjawab dalam peningkatan risiko kejadian diabetes melitus.
3
Hasil dari penemuan ini diharapkan akan memberikan pemahaman lebih
dalam mengenai mekanisme terjadinya penyakit DM. Gen ini yang
bertanggung jawab dalam beberapa tahapan yang memungkinkan terjadinya
diabetes seperti mengganggu sekresi insulin oleh sel beta pankreas,
mengganggu ekspresi protein pembentukan reseptor leptin, abnormalitas gen
mitokondria, insensitifitas leptin dan insensitifitas insulin.5,7
Salah satu dari mutasi gen yang berpengaruh dalam kejadian penyakit
diabetes adalah mutasi gen Leptin Receptor (LEPR). Single Nucleotide
Polymorphism (SNP) yang umum terjadi seperti Lys109Arg (rs1137100),
Gln223Arg (rs1137101), dan Lys656Asn (rs8179183) sudah terbukti terkait
dengan peningkatan indeks massa tubuh, peningkatan berat badan,
penumpukan adiposit, hiperleptinemia, dan predisposisi dari resistensi leptin
yang cenderung mengarah ke diabetes tipe 2. Dengan adanya mutasi ini dapat
menyebabkan terjadinya perubahan dalam regulasi asupan makanan dengan
terjadinya peningkatan nafsu makan, sehingga tubuh akan mengirimkan rasa
lapar dan akan terjadi terus menerus sehingga asupan glukosa, lemak dan
protein meningkat. Dengan adanya peningkatan asupan glukosa maka akan
memicu terjadinya peningkatan glukosa darah, yang berujung dengan
terjadinyai defek pada utilisasi glukosa dan juga terjadi insensitifitas insulin.
Sehingga dapat menjadi salah satu fakto penyebab DM tipe 2. Dengan
peningkatan jumlah lemak dalam jaringan adiposa, maka akan terjadi
pelepasan hormon leptin kedalam darah. Peningkatan hormon tersebut dapat
mengganggu regulasi pengeluaran insulin, yang juga bisa memicu
insensitifitas insulin. Sehingga siklus ini pada akhirnya akan terus berulang,
dan menyebabkan obesitas dan DM tipe 2. Hiperleptinemia dapat dicegah
dengan cara menurunkan jumlah lemak dalam jaringan adiposa dalam tubuh.5
4
1.2 Rumusan Masalah
a. Apakah ada polimorfisme gen LEPR pada populasi orang dengan
riwayat diabetes melitus tipe 2 pada pelayanan kesehatan keluarga
tingkat pertama di Ciputat dan Cibinong ?
b. Apakah terdapat hubungan terjadinya polimorfisme gen LEPR dengan
risiko terjadinya diabetes pada populasi orang dengan riwayat diabetes
melitus tipe 2 pada pelayanan kesehatan keluarga tingkat pertama di
Ciputat dan Cibinong ?
1.3 Hipotesis
a. Terdapat polimorfisme gen LEPR pada populasi orang dengan riwayat
diabetes melitus tipe 2 pada pelayanan kesehatan keluarga tingkat
pertama di Ciputat dan Cibinong.
b. Terdapat hubungan antara polimorfisme gen LEPR dengan risiko
terjadinya diabetes pada populasi orang dengan riwayat diabetes
melitus tipe 2 pada pelayanan kesehatan keluarga tingkat pertama di
Ciputat dan Cibinong
1.4 Tujuan Penelitian
1.4.1 Tujuan Umum
Tujuan umum dari penelitian ini adalah mengetahui polimorfisme
genetik LEPR pada orang dengan riwayat diabetes melitus tipe 2 pada
keluarga pelayanan kesehatan tingkat pertama.
1.4.2 Tujuan Khusus
Tujuan khusus dari penelitian ini adalah :
1. Mengetahui polimorfisme genetik LEPR pada responden dari
Ciputat dan Cibinong.
5
2. Mengetahui hubungan polimorfisme gen LEPR dengan risiko
yang ada pada orang dengan riwayat diabetes melitus tipe 2
pada keluarga tingkat pertama.
3. Mendapat gambaran varian genetik LEPR di Indonesia
1.5 Manfaat Penelitian
1.5.1 Bagi Peneliti
Manfaat bagi peneliti adalah menambah ilmu pengetahuan
mengenai gen LEPR dan risiko yang ditimbulkan dengan adanya
polimorfisme gen LEPR.
1.5.2 Bagi perguruan tinggi
Penelitian ini dapat digunakan sebagai bahan acuan untuk
penelitian-penelitian selanjutnya di FK dan FIKES UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta
1.5.3 Bagi Masyarakat
Penelitian ini dapat memberikan pengetahuan mengenai risiko
yang di dapat dari keluarga dengan diabetes melitus.
6
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan Teori
2.1.1 Insulin
Insulin merupakan hormon dengan protein yang tersusun dari 2
rantai polipeptida, dengan rantai peptida A sebanyak 21 residu asam
amino dan rantai peptida B sebanyak 30 residu asam amino yang
terhubung dengan rantai peptida C dan gugus disulfida. Insulin disintesis
di sel beta pankreas dalam bentuk preproinsulin yang merupakan
prekursor utama dari insulin. Dalam beberapa menit setelah disintesis,
akan di masukan ke dalam ruang sisternal pada retikulum endoplasma
kasar dimana akan di pecah menjadi proinsulin oleh enzim proteolitik.
Proinsulin yang memiliki rantai C yang masih terhubung dengan rantai A
dan rantai B akan di transpor dalam mikrovesikel ke kompleks golgi.
Proinsulin ini akan meninggalkan kompleks golgi di vesikel, dimana
protease akan memutus rantai C yang tidak aktif dan akan melepaskan
rantai A dan rantai B sebagai insulin aktif ke dalam darah. Rantai peptida
C dapat di ukur dalam darah sebagai salah satu indikator tak langsung
dari jumlah sintesis insulin dalam darah. Pada studi terbaru dikatakan
bahwa rantai peptida C ini memiliki fungsi biologis dan akan berikatan
dengan sel melalui reseptor protein G, ikatan ini akan menghasilkan
peningkatan kadar kalsium intraseluler. Peran reaksi ini dalam
komplikasi diabetes masih sedang diteliti.3, 24
Sekresi dari insulin diregulasi oleh bahan-bahan kimia, hormonal
dan kontrol neural. Sekresi insulin akan dipicu oleh peningkatan kadar
glukosa, asam amino (arginin dan lisin) dan hormon gastrointestinal
(glukagon, gastrin, kolesitokinin dan sekretin) dan pada saat sel beta
pankreas distimulasi secara parasimpatis. Sekresi insulin akan diturunkan
sebagai respon dari penurunan kadar glukosa dalam darah
7
(hipoglikemia), tingginya kadar insulin (melalui respon negative
feedback ke sel beta) dan stimulasi simpatik ke sel alfa pankreas.
Prostaglandin (PGE2) juga diketahui menginhibisi sekresi insulin.24
Ketika terjadi peningkatan kadar glukosa dalam darah, glukosa
akan masuk ke sel beta pankreas melalui transporter spesifik yang
disebut Glucose Transporter-2 (GLUT-2). Lalu glukosa akan di
fosforilasi oleh glukokinasi menjadi glukosa 6-fosfat yang dimetabolisme
melalui glikolisis, siklus asam sitrat dan fosforilasi oksidatif. Reaksi-
reaksi tersebut akan menghasilkan produk adenosine triphosphate (ATP)
dalam sel beta. Ketika rasio antara ATP/ADP dalam sel beta meningkat,
maka aktifitas kanal ion K+
ATP dihambat/ditutup. Penutupan kanal ini
akan memicu depolarisasi membran yang mengaktifkan kanal voltage-
gated Ca2+
sehingga akan terjadi peningkatan Ca2+
intraseluler yang
signifikan. Peningkatan dari kadar Ca2+
intraseluler ini akan merangsang
terjadinya eksositosis vesikel-vesikel yang membawa insulin, lalu akan
terjadi sekresi insulin.3
Gambar 2.1 Ekskresi Insulin dari Sel Beta Pankreas
Sumber : Guyton, 2006
Insulin merupakan hormon anabolik yang bukan hanya memicu
asupan insulin tapi juga sintesis protein, karbohidrat, lipid dan asam
8
nukleat. Insulin utamanya bekerja di hepar, otot, dan jaringan adiposa.
Efek umum yang terjadi pada jaringan tersebut adalah untuk
menstimulasi sintesis protein dan lemak dan menurunkan kadar insulin
dalam darah. Pada otak, sel darah merah, ginjal dan lensa mata tidak
memperlukan insulin untuk melakukan transpor glukosa. Insulin juga
membantu dalam traspor kalium, fosfat dan magnesium intraseluler.
Insulin dimetabolisme di hepar dan ginjal oleh enzim yang memutuskan
ikatan disulfida. Sejumlah kecil insulin utuh juga diekskresikan melalui
urin.23
Gambar 2.2 Cara Kerja Insulin pada Sel
Sumber : Kathryn, 2014
2.1.2 Diabetes Melitus
Diabetes melitus adalah kumpulan gejala penyakit yang
diakibatkan oleh terjadinya defek pada sekresi insulin atau kerja insulin
yang berakibat peningkatan gula darah (hiperglikemia) menjadi ciri khas
dari gangguan ini.1
9
Berikut tabel klasifikasi diabetes melitus berdasarkan etiologi
Tabel 2.1 Klasifikasi Etiologis Diabetes Melitus
Tipe 1 Destruksi sel beta, biasanya mengarah ke
defisiensi insulin absolut
a). Autoimun
b). Idiopatik
Tipe 2 Bervariasi, mulai dari dominan resistensi
insulin dengan defisiensi insulin relatif
hingga yang dominan defek sekresi insulin
dengan resistensi insulin
Tipe Lain a) Defek genetik dari pembentukan atau
fungsi sel beta
b) Defek genetik dalam kerja insulin
c) Penyakit pada pankreas (Pankreatitis,
neoplasia, dll)
d) Endokrinopati
e) Dipicu oleh obat-obatan dan zat kimia
f) Infeksi
g) Sebab imunologi yang langka (Antibodi
reseptor antiinsulin, dll)
h) Sindrom genetik lainnya yang berkaitan
dengan diabetes (Sindrom Wolfram,
Sindrom Down, dll)
Diabetes Gestasional Diabetes pada kehamilan
Sumber : PERKENI, 2015
2.1.2.1 Diabetes melitus tipe 2
Diabetes Melitus tipe 2 merupakan penyakit metabolik dengan
karakteristik hiperglikemia kronis , dimana 90% individu pengidap DM
10
tipe 2 di dunia disebabkan oleh resistensi insulin dan keadaan kurangnya
produksi insulin. Dari penelitian yang telah diadakan sebelumnya
menunjukan terjadinya peningkatan jumlah penyandang DM tipe 2
secara pesat di seluruh dunia. Secara global, jumlah pengidap penyakit
DM tipe 2 pada tahun 2010 sejumlah 285 juta individu diprediksi akan
meningkat menjadi 438 juta pada tahun 2030.36
Dan IDF memprediksi
adanya kenaikan jumlah penyandang DM di Indonesia dari 9,1 juta pada
tahun 2014 menjadi 14,1 juta pada tahun 2035. 1
Jenis kelamin, usia dan latar etnik merupakan faktor penting
dalam menentukan resiko terjadinya DM tipe 2. Penyakit ini lebih umum
terjadi pada wanita, dan peningkatan prevalensi pada ras dan kelompok
etnis tertentu sudah termasuk dalam faktor risiko penting dalam
berkembangnya penyakit ini. Usia merupakan faktor penting,
sebelumnya DM tipe 2 ini dilihat sebagai penyakit usia tua, dan itu
terbukti hingga hari ini. Namun akhir-akhir ini telah muncul tren baru
dimana terjadi peningkatan prevalensi obesitas dan DM tipe 2 pada usia
anak. Dahulu kasus diabetes pada anak dipercaya sebagai kasus DM tipe
1, dan hanya sekitar 1-2% saja yang termasuk dalam DM tipe 2 atau
bentuk langka lainnya dari diabetes. Pada laporan terbaru, sekitar 8-45%
Gambar 2.3 Omnious Octet Sumber : PERKENI, 2015
11
anak telah didiagnosis diabetes yang tidak dimediasi oleh imun. Pada
penelitian di Amerika, pada anak yang diabetes di rentang usia 10-19
tahun terdapat 15% anak didiagnosis DM tipe 2.36
Secara garis besar, terdapat 8 penyebab utama DM tipe-2 atau
disebut omnious octet 1
, yaitu :
1. Kegagalan sel β-pankreas dalam memproduksi insulin.
2. Peningkatan pembentukan glukosa melalui proses
glukoneogenesis pada keadaan basal oleh liver atau disebut
peningkatan hepatic glucose production (HGP).
3. Gangguan kinerja insulin multipel di sel otot, dimana
terjadinya gangguan transport glukosa kedalam sel otot,
penurunan sintesis glikogen, dan penurunan oksidasi glukosa
akibat adanya gangguan fosforilasi tirosin.
4. Peningkatan asam lemak bebas di darah akibat peningkatan
lipolisis karena adanya sel lemak yang resisten terhadap efek
antilipolisis dari insulin. Peningkatan jumlah asam lemak bebas
akan memicu proses glukoneogenesis dan dapat mencetuskan
resistensi insulin di liver dan otot. Tingginya kadar asam lemak
bebas disebut sebagai lipotoxicity yang bisa mengganggu sekresi
insulin.
5. Terjadi penurunan efek inkretin yang disebabkan oleh
defisiensi Glucagon-like Polypeptide 1 (GLP-1) dan resistensi
Glucose-dependent Insulinotrophic Polypeptide (GIP) di Usus.
Selain itu, inkretin akan segera dipecah oleh enzim DPP-4
sehingga kerja efektif dari inkretin menjadi singkat.
12
6. Terjadi pengingkatan jumlah glukagon dari sel α-pankreas
sebagai kompensasi tubuh karena insufisiensi glukosa
intraseluler akibat dari gagalnya kerja insulin, maka akan terjadi
peningkatan HGP untuk meningkatkan glukosa dalam darah.
7. Peningkatan ekspresi gen Sodium Glucose co-Transporter 2
(SGLT-2) di ginjal sehingga penyerapan kembali glukosa
meningkat.
8. Pada individu obesitas yang DM maupun non-DM akan
terjadi resistensi insulin. Terjadinya resistensi insulin
mengakibatkan hiperinsulinemia sebagai mekanisme
kompensasi dari otak untuk memenuhi kebutuhan glukosa
karena agar otak dapat bekerja dibutuhkan glukosa dengan
jumlah kurang lebih 20% gula darah tubuh untuk melakukan
aktifitas pelepasan sinyal neurotransmitter, pembentukan ATP
dan memproses informasi.
Gambar 2.4 Faktor Resiko DM tipe 2
Sumber : Porth, 2014
13
Pada DM tipe 2 dikarakteristikan dengan adanya kerusakan
dalam proses sekresi insulin, resistensi insulin, produksi glukosa hepatik
berlebih, dan metabolisme lemak yang abnormal. Kejadian obesitas, baik
viseral maupun sentral (dilihat berdasarkan Hip-Waist Ratio) umum
terjadi pada DM tipe 2 (80% kasus adalah diabetes disertai obesitas).
Pada fase awal dari penyakit ini, toleransi glukosa masih dalam batas
normal walaupun terdapat resistensi insulin, karena adanya kompensasi
sel beta pankreas dengan meningkatkan sekresi insulin. Dengan
berjalannya proses resistensi insulin dan kompensasi hiperinsulin oleh
pankreas, pulau kecil pankreatik pada individu tertentu tidak dapat
mempertahankan kondisi hiperinsulinemia. Nantinya akan terjadi IGT
(Impaired Glucose Tolerance) karena rusaknya sel beta pankreas, dengan
ciri terjadinya keadaan hiperglikemia setelah makan. Lalu akan terjadi
penurunan lebih jauh dari sekresi insulin dan peningkatan produksi
glukosa hepatik akan mengakibatkan diabetes yang nyata dengan
hiperglikemia puasa. Puncaknya, akan terjadi kegagalan sel beta
pankreas. Walaupun resistensi insulin dan kegagalan sekresi insulin
merupakan faktor utama yang berkontribusi dalam patogenesis
berkembangnya penyakit DM tipe 2, kontribusi dari kedua faktor ini
relatif berbeda pada tiap individu.37
2.1.3 Materi Herediter
2.1.3.1 DNA
DNA atau deoxyribonuclei acid, adalah materi herediter pada
manusia dan hampi semua organisme. Hampir setiap sel dalam tubuh
manusia memiliki DNA yang sama. Kebanyakan dari DNA pada
eukaryote terdapat di nukleus atau disebut DNA nuklear, tapi sedikit
jumlah dari DNA dapat ditemukan juga di mitokondria atau disebut DNA
mitokondria33
.
14
Informasi yang dimuat dalam DNA adalah dalam bentuk kode
yang tersusun dari 4 basa kimia yaitu adenine (A), guanine (G), cytosine
(C) dan thymine (T). DNA manusia terdisi dari sekitar 3 milyar pasangan
basa, dan >99% dari basa tersebut sama pada seluruh manusia. Urutan
atau sekuens dari basa-basa inilah yang menentukan informasi genetik
yang tersedia untuk membangun dan mempertahankan sebuah
organisme, kode ini mirip dengan huruf alfabet yang jika diurutkan
dalam urutan tertentu akan membentuk kata-kata dan kalimat. Basa kimia
dalam DNA akan saling berpasang-pangsangan membentuk pasangan
basa, yaitu basa A akan berpasangan dengan T, dan G akan berpasangan
dengan C. Setiap pasangan basa akan menempel dengan molekul gula
dan satu molekul fosfat. Dari ke 3 komponen ini (basa, gula dan fosfat)
disebut satu nukleotida. Nukleotida tersusun menjadi 2 rantai panjang
yang membentuk spiral yang disebut double helix. Struktur double helix
ini terlihat seperti tangga dengan pasangan basa membentuk pijakan
tangga dan molekul gula serta molekul fosfat membentuk rangka vertikal
dari tangga. Properti penting dari DNA yaitu dapat bereplikasi atau
membuat salinan dari dirinya sendiri. Tiap rantai DNA dalam double
helix akan berfungsi sebagai pola untuk menduplikasi rangkaian basa.
Hal ini penting saat waktu pembelahan sel karena setiap sel perlu
memiliki salinan DNA yang sama persis dengan DNA yang ada pada sel
sebelumnya. 33
Gambar 2.5 DNA
Sumber : Genetic Home Reference, 2018
15
2.1.3.2 Gen
Gen merupakan unit dasar fisik dan fungsional dari hereditas.
Gen tersusun dari DNA. Beberapa gen berfungsi sebagai instruksi untuk
membuat molekul yang disebut protein. Namun tidak semua gen akan
mengkode protein atau disebut non-coding DNA. Sedangkan genom
adalah suatu kesatuan dari unit fungsional gen yang dikoding dan juga
DNA yang tidak dikoding. Di manusia, gen memiliki variasi ukuran dari
beberapa ratus pasang basa hingga lebih dari 2 juta pasang basa. Pada
Human Genome Project , suatu projek yang bertujuan untuk melakukan
identifikasi sekuens dari genom manusia beserta gen yang terkandung
dalam genome, mengestimasi bahwa jumlah genom manusia sekitar
20.000 hingga 25.000 gen. 33
Gambar 2.6 Gen
Sumber : Genetic Home Reference, 2018
Setiap manusia memiliki 2 salinan dari setiap gen, yang
masing-masingnya didapatkan dari kedua orang tua. Hampir seluruh gen
sama pada setia manusia, namun sejumlah kecil gen (<1% dari total)
akan sedikit berbeda antar manusia. Alel adalah bentuk dari gen yang
sama dengan perbedaan yang sedikit dalam urutan pasangan basa.
Perbedaan yang sedikit inilah yang berkontribusi pada keunikan fisik
yang ada pada setiap manusia. Peneliti akan memberikan nama yang unik
pada setiap gen untuk lebih mudah diingat. Karena gen dapat memiliki
nama yang panjang, maka gen juga akan diberikan simbol., yang
biasanya dalam bentuk kombinasi pendek dari huruf yang
16
merepresentasikan nama dari gen tersebut. Seperti misalnya gen pada
kromosom 7, yang berkaitan dengan cystic fibrosis itu disebut cystic
fibrosis transmembrane conductance regulator dan memiliki simbol
CFTR.33
2.1.3.3 Kromosom
Di dalam nukleus setiap sel, molekul DNA akan di bentuk
menjadi struktur seperti benang yang disebut kromosom. Tiap-tiap
kromosom ini terbentuk dari DNA yang di buat menjadi kumpara yang
padat dengan melilitkannya berkali-kali disekitar protein yang disebut
histon yang mempertahankan strukturnya. Kromosom tidaklah terlihat
dalam nukleus sel, bahkan dibawah mikroskop sekalipun, pada saat sel
tidak sedang melakukan pembelahan. Namun, DNA akan dipadatkan dan
menjadi kromosom pada saat pembelahan sel terjadi dan akan terlihat
dibawah mikroskop. Setiap kromosom memiliki bagian yang terdapat
konstriksi yang disebut sentromer, yang membagi kromosom menjadi 2
bagian atau biasa disebut lengan kromosom. Lengan pendek dari
kromosom disebut lengan P, sedangkan lengan yang panjang disebut
lengan Q. Lokasi dari sentromer dari tiap kromosom akan memberkan
bentuk karakteristik yang berbeda dari kromosom yang lainnya dan dapat
dapat digunakan untuk membantu mendeskripsi lokasi gen yang spesifik.
33
Gambar 2.7 Kromosom
Sumber : Genetic Home Reference, 2018
17
2.1.4 Single Nucleotide Polimorphism (SNP)
Mutasi genetik dapat terjadi dalam beberapa bentuk, salah satunya
adalah Polimorfisme Tunggal Nukleotida / Single Nucleotide
Polymorphism (SNP) atau dapat dibaca “snip”, yang merupakan variasi
genetik yang paling umum pada manusia. Tiap dari SNP
merepresentasikan perbedaan dalam nukleotida. SNP dapat terjadi secara
normal timbul di DNA manusia dan muncul rata – rata 1 kali setiap 300
nukleotida, yang berarti diperkirakan ada 10 juta SNP dalam genom
manusia.33
Jika terjadi SNP dalam sebuah gen atau dalam sebuah regio yang
meregulasikan fungsi khusus dekat sebuah gen, maka SNP ini dapat
memiliki peranan khusus dalam penyakit dengan mengganggu fungsi
normal gen. Namun di antara 10 juta SNP yang ada pada manusia, tidak
seluruhnya berpengaruh langsung terhadap kesehatan tubuh, bahkan
beberapa dari perubahan genetik ini berperan penting dalam
pembelajaran mengenai kesehatan tubuh manusia. SNP juga dapat
berguna sebagai tanda seseorang dapat dipengaruhi terhadap suatu obat,
faktor – faktor lingkungan seperti toksin, berkembangnya suatu penyakit,
selain itu SNP dapat digunakan untuk menelusuri penyakit genetik dari
keluarga. Polimorfisme yang terjadi pada SNP juga beragam dan sedang
diteliti kaitannya dengan penyakit kompleks seperti penyakit jantung,
diabetes dan kanker.33
18
2.1.5 Hormon Leptin dan Polimorfisme Gen Leptin Receptor
2.1.5.1 Leptin
Leptin merupakan suatu protein yang tersusun dari 167 asam
amino yang bekerja sebagai hormon yang disekresi oleh jaringan adiposit
dan mengatur asupan makanan. Leptin membatu meregulasi kebiasaan
makan melalui mekanisme neuroendokrin sentral dengan cara
memberikan sinyal kenyang dengan berikatan dengan reseptor neural di
hipotalamus sehingga menurunkan nafsu makan dengan cara melakukan
downregulating pada peptida oreksigenik ( Neuropeptida Y, agouti-
related peptide, Melanin-concentrating hormone, dan oreksin) yang
fungsinya menstimulasi nafsu makan dan dengan melakukan
upregulating peptida anoreksigenik ( alpha-melanocyte stimulating
hormone, kokain dan amphetamine-regulated transcripts, dan
corticotropin-releasing hormone) yang dapat menginhibisi nafsu makan.
Leptin diproduksi oleh jaringan lemak putih dan dilepaskan sebagai
protein 16 kDa.9 Leptin akan melakukan efek kerja fisiologisnya dengan
berikatan dengan reseptor leptin, yang berupa sebuah protein
transmembran yang termasuk ke dalam famili reseptor sitokin kelas 1.
Leptin membantu meregulasi metabolisme energi , suhu tubuh, dan
homeostasis lipid tubuh.7,8
Hormon leptin berfungsi untuk meregulasi sekresi insulin
dengan 2 mekanisme, dengan cara menginhibisi sistem saraf parasimpatis
dan mengeksitasi saraf simpatis dengan menginhibisi produk gen NPY
yang akhirnya menurunkan sekresi insulin. Leptin juga berikatan ke
LEPR di sel beta pankreas dan membantu meregulasi sekresi insulin.16,17
Kerja hormon leptin berlawanan dengan hormon ghrelin yang
disekresikan oleh lambung dengan fungsi utamanya untuk menstimulasi
nafsu makan.10
Peningkatan rasa lapar merupakan efek langsung dari
19
peningkatan rasio ghrelin dengan leptin. Studi klinis menunjukan bahwa
terjadi peningkatan tingkat leptin pada saat tidur. Riset sebelumnya juga
menemukan bahwa tingkat ghrelin berkebalikan dengan durasi waktu
tidur.10,11
Pada orang dengan obesitas, terjadi peningkatan jumlah leptin
dalam darah akibat dari peningkatannya simpanan lemak dalam jaringan
adiposa. Peningkatan jumlah leptin dalam kasus obesitas dapat dikatakan
sebagai resistensi leptin, yaitu suatu keadaan dimana leptin tidak bisa
berfungsi secara normal dalam mengurangi asupan makanan. Sehingga
orang dengan obesitas akan merasakan kenyang lebih cepat dan lapar
lebih lama. Resistensi leptin yang diakibatkan oleh asupan lemak
berlebih akan berefek terjadinya kerusakan pada situs aksi leptin di
hipotalamus, yang akan menurunkan kemampuan leptin perifer untuk
mengaktifkan rangkaian sinyal neurohormonal hipotalamik secara
signifikan. Pada kasus resistensi leptin ini masih dapat kembali lagi ke
fungsi normalnya jika jumlah simpanan lemak dikurangi agar sensitivitas
leptin kembali normal. Resistensi leptin ini dapat mengakibatkan diabetes
melitus tipe 2 karena efek leptin yang berlebih ini bisa mengakibatkan
resistensi dari insulin.13,14,15
Belum banyak studi yang mempelajari hubungan pasti antara
hormon leptin dengan penyakit diabetes melitus. Dan pada beberapa
penelitian dijelaskan bahwa terjadi peningkatan nilai leptin umumnya
tinggi pada orang dengan diabetes melitus tipe 2.18
Leptin memiliki
kemampuan untuk meningkatkan atau bahkan mengakibatkan resistensi
insulin. Hormon ini juga diketahui memiliki fungsi untuk memediasi
pelepasan insulin dari sel β pankreas. Sehingga pada beberapa penelitian
dijelaskan bahwa dengan adanya obesitas memiliki hubungan langsung
dengan terjadinya resistensi insulin dan berkembangnya penyakit
diabetes melitus tipe 2 di manusia. Hal tersebut dikarenakan oleh dengan
adanya obesitas, maka akan sangat memungkinkan terjadinya resistensi
20
leptin dan resistensi leptin ini sangat mungkin terkait dengan
berkembangnya penyakit ini.19
Seperti halnya resistensi leptin, defisiensi
dari leptin juga memiliki patogenesis yang signifikan dalam terjadinya
resistensi insulin dalam diabetes melitus dengan defisiensi insulin yang
tidak terkontrol. 21
Namun persinyalan leptin yang rusak pada sistem saraf dapat
dikembalikan dengan overexpression dari peptida anoreksigenik dan atau
dengan repression peptida oreksigenik. Komponen makanan seperti
teasaponin, reservatol, kafein, taurin, dan selastrol dapat mengembalikan
persinyalan leptin di sistem saraf menggunakan ekspresi atau represi
peptida-peptida tersebut. Dikatakan juga bahwa vitamin A dan vitamin D
dapat membantu transpor leptin melewati sawar darah otak. 22
Peneliti
menemukan perlakuan pemberian leptin dapat memperbaiki diabetes
pada tikus lipoatrofi. 23
2.1.5.2 Polimorfisme Gen Leptin Receptor
Polimorfisme adalah sebuah variasi sekuens/urutan DNA yang
dapat terjadi pada sebuah populasi dengan frekuensi sebanyak 1% atau
lebih. Tingginya kejadian polimorfisme menandakan bahwa
polimorfisme terjadi secara alami. Terjadinya polimorfisme bisa bersifat
netral atau tidak berarti dan juga bisa bermakna jika terjadi perubahan
pada gen terebut. 26
Gen LEPR terletak di kromosom 1p31, dengan panjang 70 kb,
dan memiliki 20 ekson dan 19 intron dan mengkode 1165 asam amino.
Walaupun banyak mutasi dan polimorfisme di gen LEPR manusia, letak
polimorfisme khususnya terjadi di 20 ekson dari gen LEPR. Spesifiknya
polimorfisme gen Gln223Arg, atau disebut juga sebagai Rs 1137101,
disebabkan oleh subtitusi adenin (A) pada posisi basa ke 668 oleh guanin
(G), dan akan memutasi asam amino ke 223, yaitu protein arginin dan
digantikan dengan glutamin. Mutasi ini terletak di ekson ke 6 dari
21
sekuens gen LEPR dan akan pada mutasi ini dapat merusak transduksi
sinyal yang bisa meningkatkan resiko penyakit DM tipe 2.25
Gambar 2.8 Lokasi Mutasi Gen FTO, LEPR, PPARg dan TCF7L2
Sumber : Anghebem, 2017
Dengan adanya polimorfisme gen LEPR Gln223Arg, dapat
terjadi peningkatan kemungkinan terjadinya peningkatan indeks massa
tubuh, terjadinya keadaan leptinemia, dan insulinemia. 29
Selain itu, pada
varian Gln223Arg dan Lys109Arg terlihat adanya peningkatan pada
profil lipid aterogenik. Sehingga bukan hanya varian ini dapat
menyebabkan penyakit metabolik, tapi juga dapat meningkatkan
kemungkinan munculnya aterosklerosis.29
Dikatakan juga pa sebuah
meta-analisis dari 11 studi dengan kurang lebih 5000 total kasus
menyimpulkan bahwa alel Rs 1137101 / Gln223Arg (G) memiliki
hubungan yang signifikan dengan DM tipe 2 dengan odds ratio 1,2 – 1,8.
27,28 Sehingga dapat dikatakan LEPR Gln223Arg memiliki potensi
sebagai salah satu penyebab terjadinya resistensi leptin dan juga
resistensi insulin pada beberapa populasi di Brazil, Malaysia, Cina dan
beberapa etnis lain di negara lainnya. 30,31,32
22
2.2 Kerangka Teori
Obesitas Diet tidak terkontrol
Peningkatan
profil lipid
Mutasi gen LEPR
Gln223Arg
Perubahan ekspresi protein
pembentuk reseptor leptin
Insensitifitas
hormon leptin
Peningkatan produksi
leptin (leptinemia)
Insensitifitas
hormon insulin
Kompensasi pankreas untuk
mensekresi insulin lebih
Diabetes
Tipe 2
Varian mutasi
menurun ke anak
Resiko obesitas dan Diabetes
meningkat pada anak
23
2.3 Kerangka Konsep
2.4 Definisi Operasional
Tabel 2.2 Definisi Operasional
No Variabel Definisi Alat ukur Skala Skor
1 Gen LEPR
Rs 1137101
(GG, AG, AA)
Variasi
urutan DNA
pada gen
LEPR
Gln223Arg
RT-PCR Nominal 1. Homozigot
mutan
2. Heterozigot
mutan
3. Homozigot
murni
Orangtua dengan DM
Terdapat varian
gen Gln223Arg
Varian menurun
ke anak
Identifikasi Polimorfisme
Genetik LEPR (AA , AG , GG)
Peningkatan Resiko
mengalami obesitas dan
DM tipe 2 pada anak
24
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian observasional analitik dengan
desain cross sectional.
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Desember 2017 hingga
Agustus 2018. Penelitian dilaksakan di Laboratorium Kultur Sel,
Biokimia, dan Biologi Fakultas Kedokteran Universitas Islam Negri
(UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.3 Sampel Penelitian
Sampel penelitian ini adalah responden laki-laki dan perempuan di
Fakultas Kedokteran dan Fakultas Ilmu kesehatan Universitas Islam
Negri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta dan di klinik Salsabila Medical
Centre Cibinong.
3.4 Besar Sampel
Keterangan:
N = besar sampel
25
Zα = deviasi baku alfa
P = proporsi kategori variable yang diteliti
Q = (1-P)
d = presisi
Pada penelitian ini ditetapkan alfa sebesar 5% sehingga nilai Zα =
1,96, dengan kesalahan prediksi yang masih bisa diterima (presisi)
ditetapkan sebesar 10%. Nilai P ditetapkan oleh peneliti sebesar 50%
karena belum ada nilai dari kepustakaan sebelumnya. Nilai P = 50%
dipilih karena perkalian antara P dan Q akan menunjukkan hasil yang
maksimal apabila nilai P = 50%. Apabila perhitungan peneliti benar,
maka peneliti akan memperoleh prevalensi sebesar 50% ± 10%, yaitu
40% - 60%. Apabila dihitung nilai N x P, akan didapatkan minimal 40%
x 97 = 38,8 dan maksimal 60% x 97 = 58,2. Keduanya > dari 5. Dengan
demikian, besar sampel 97 boleh digunakan karena memenuhi syarat N x
P > 5 dan N x (1 – P) > 5 dalam penelitian deskriptif analitik. 42
3.5 Teknik Pengambilan Sampel
Teknik pengambilan sampel yang digunakan adalah Purposive
Sampling. Dimana sampel diambil berdasarkan kriteria yang sudah
ditentukan di lokasi pengambilan sampel.
3.6 Kriteria Pemilihan Sampel
3.6.1 Kriteria Inklusi
Kriteria yang digunakan untuk penelitian ini adalah penderita DM
tipe 2 yang sudah mengkonsumsi obat antidiabetik oral, anak dari
penderita DM tipe 2 tersebut, dan mahasiswa Fakultas Kedokteran (FK)
dan Fakultas Ilmu Kesehatan (FIKES) Universitas Islam Negri (UIN)
Syarif Hidayatullah Jakarta tahun angkatan 2015-2017 yang tidak
memiliki riwayat DM tipe 2 dikeluarganya.
26
3.6.2 Kriteria Eksklusi
Kriteria eksklusi pada penelitian ini adalah penderita DM tipe 2
dengan komplikasi, dan penderita DM tipe 2 yang tidak mengkonsumsi
obat antidiabetik oral.
3.7 Alur Penelitian
Pasien Diabetes Klinik
Salsabilla Cibinong beserta 1
orang anak pasien
Mahasiswa PSKPD dan Fikes UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta Angkatan
2015 – 2017 beserta orang tua
dengan DM tipe 2
Sampel Darah atau Liur
Isolasi Genom
Mengukur konsentrasi
dan kemurnian DNA
DNA Genom + TaqMan
Mastermix + Probe
DNA
RT - PCR
Interpretasi AA , AG ,
GG
Identifikasi jumlah
kejadian polimorfisme
gen LEPR Gln223Arg
27
3.8 Prosedur Penelitian
Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ini terdapat di
dalam tabel dibawah ini.
Tabel 3.1 Alat dan Bahan
Alat Bahan Keterangan
Pengambilan sampel darah dan liur
Spuit 1 cc
Torniquet
Tabung EDTA
Handscoen
Alchohol swab
Tabung Centrifuge plastik 15 mL
Isolasi genom DNA dari darah dan liur
Microsentrifuge tube 1,5 mL steril Whole Blood 300 µL
Water bath AS ONE TRW-42 TP
60o C
RBC Lysis Buffer 900 µL dan
100 µL
GD Collumn GB Buffer 200 µL
2 mL Collection Tube Ethanol Absolute 200 µL
Eppendorf centrifuge 5417 R W1 buffer 400 µL
Micropipet Nichipet Ex Wash Buffer 600 µL
Nichiryo (2 – 20 µL dan 20 – 200
µL)
Elution Buffer 50 µL
Micropipet BIORAD ukuran 100 –
1000 µL
GST 200 µL
Microtip Biologix ukuran 200 µL
dan 1000 µL
GSB 200 µL
Biomedical Freezer SANYO Proteinase 10 µL
Pengkuran kemurnian dan konsentrasi hasil isolasi DNA
Maestro nano drops Genom DNA 1 µL
Aquadest elution buffer 1 µL
28
Micropipet 0,5 – 2 µL
Microtip Biologix 10 µL
RT PCR
LightCycler 480 Taqman SNP
Assay Mastermix
Genom DNA +
Aquades
2 µL
3.9 Cara Kerja Penelitian
3.9.1 Pengumpulan Data
Penelitian ini menggunakan data primer dari responden yang
sudah mengisi lembar informed consent dan penjelasan mengenai
penelitian dari pengambil data. Data responden diperoleh dengan
pengambilan pungsi vena sebanyak 1 cc darah. Kemudian darah
dimasukan kedalam tabung EDTA, diberi label nama dan tanggal
pengambilan, lalu disimpan dalam Biomedical freezer dengan suhu -20o C.
Untuk pengambilan sampel orang tua yang diluar Jakarta dan Bogor
diambil menggunakan pengumpulan air liur didalam tabung 15 ml pada 1
hari sebelum diserahkan ke peneliti dan di simpan dalam Biomedical
freezer dengan suhu -20o C.
3.9.2 Isolasi DNA
Selanjutnya sampel akan diproses untuk mengisolasi DNA untuk
mendapat genom DNA dari sampel darah dan liur responden. Prinsip dari
perlakuan isolasi DNA adalah mengambil sampel DNA dari sel yang ada
dari sampel, pada sampel darah materi DNA akan di ekstraksi dari sel
darah putih dan pada sampel liur akan diambil dari sel epitel yang ada di
dalam endapan air liur. Langkah yang pertama adalah membuang atau
29
melisiskan sel-sel yang tidak berguna atau berpotensi sebagai kontaminan
menggunakan Red Blood Cell lysis buffer pada darah dan GST pada
sampel liur. Selanjutnya melakukan lisis sel leukosit menggunakan GB
buffer dan lisis sel epitel menggunakan GSB buffer. Langkah berikutnya
adalah melakukan DNA binding menggunakan GS collomn untuk liur dan
GD collomn untuk darah yang berfungsi sebagai saringan DNA dan
membuang cairan sisa ke tabung collection diluarnya. Setelah itu melalui
proses Wash menggunakan W1 buffer dan Wash buffer berurutan untuk
mengeluarkan kotoran atau kontaminan yang menempel pada saringan
filtrasi. Terakhir dengan menggunakan buffer Elution dilakukan proses
DNA Elution untuk melarutkan DNA yang menempel di saringan untuk
turun ke tabung bersama dengan Elution buffer. 41
Langkah pengerjaan isolasi DNA dengan sampel darah / whole
blood. Langkah yang pertama adalah persiapan sampel.
1) Menyiapkan Microsentrifuge tube dan diberi label sesuai dengan
kode sampel.
2) Memasukkan darah sampel sebanyak 300 μl ke dalam
Microsentrifuge tube ukuran 1,5 ml.
3) Menambahkan 900 μl RBC Lysis buffer kemudian dihomogenkan
dengan cara mengkocok kuat Microsentrifuge tube.
4) Menyentrifugasi Microsentrifuge tube selama 5 menit dengan
kecepatan 3000 rpm.
5) Membuang supernatant lalu menambahkan 100 μl RBC Lysis
buffer untuk mensuspensi endapan leukosit kemudian mengocok
Microsentrifuge tube.
Setelah menghancurkan sel darah merah, masuk ke fase Cell Lysis
yang bertujuan untuk mengeluarkan DNA yang ada pada sel dalam darah.
1) Menambahkan 200 μl GB buffer ke dalam Microsentrifuge tube.
30
2) Menginkubasi tabung selama 10 menit pada suhu 60oC untuk
memastikan bahwa sel telah lisis.
3) Menyiapkan tabung berisi Elution buffer sebanyak 50 μl dan
inkubasi pada suhu 60oC, Elution buffer akan digunakan pada
proses selanjutnya.
4) Mendinginkan Micosentrifuge tube sampel pada suhu ruangan.
Setelah dilakukan fase Cell Lysis, prinsipnya adalah mengikat
DNA yang berasal dari dalam sel dengan DNA Binding.
1) Menambahkan 200 μl Ethanol absolute ke dalam Microsentrifuge
tube kemudian dihomogenkan dengan mengocok tabung selama 10
detik.
2) Menyiapkan GD column pada 2 ml Collection tube.
3) Memindahkan campuran dalam Microsentrifuge tube ke dalam GD
column.
4) Menyentrifugasi GD column selama 5 menit pada kecepatan
14.000 – 16.000 rpm.
5) Membuang cairan yang ada pada Collection tube Menempatkan
kembali GD column ke Collection tub.
DNA yang sudah terikat dalam GD Column akan dilanjutkan ke
fase Wash.
1) Menambahkan 400 μl W1 buffer ke dalam GD column kemudian
menyentrifugasi selama 1 menit pada kecepatan 14.000 – 16.000
rpm
2) Membuang cairan yang tidak tersaring pada Collection tube
3) Menempatkan kembali GD column ke Collection tube
4) Menambahkan 600 μl Wash buffer ke dalam GD column
5) Menyentrifugasi GD column selama 1 menit pada kecepatan
14.000 – 16.000 rpm
6) Membuang cairan yang tidak tersaring pada Collection tube
31
7) Menempatkan kembali GD column ke Collection tube
8) Menyentrifugasi GD column selama 1 menit pada kecepatan 3.000
rpm untuk mengeringkan matriks column
DNA yang ada pada GD column selanjutnya akan di larutkan
dengan pelarut pada fase DNA Elution
1) Memindahkan GD column yang sudah kering ke dalam
Microsentrifuge tube yang steril.
2) Menambahkan 50 μl Elution buffer yang telah diinkubasi ke dalam
GD column dan dibiarkan selama 3 menit.
3) Menyentrifugasi Microsentrifuge tube selama 1 menit pada
kecepatan 14.000 – 16.000 rpm untuk mendapatkan hasil isolasi
DNA.
Gambar 3.1 Skema Kerja Isolasi DNA dari Darah
32
Cara lainnya yang dilakukan adalah mengisolasi DNA dari
sampel air liur. Prinsip yang digunakan adalah sama yaitu dengan
mengisolasi DNA yang ada pada sel yang terdapat pada air liur
menggunakan isolasi DNA air liur. 41
Untuk melakukan isolasi DNA dengan air liur langkah pertama
yang dilakukan adalah persiapan sampel.
1) Menyentrifugasi 13-15mL air liur selama 10 menit dengan
kecepatan 3000 rpm
2) Membuang air liur hingga tersisa endapannya
3) Menambahkan reagen GST 200 μl kemudian dihomogenkan
4) Memindahkan endapan air liur dan GST yang sudah dihomogenkan
ke tube 1,5 mL
Setelah sampel disiapkan, akan dilanjutkan ke fase Cell Lysis untuk
mendapatkan DNA dari dalam sel.
1) Menambahkan 10 μl Protease yang digunakan untuk melisis
protein ke dalam tube kemudian mengocoknya kuat-kuat
2) Menginkubasi tabung selama 10 menit pada suhu 60oC kemudian
tunggu hingga suhu tabung turun ke suhu ruang
3) Menambahkan 200 μl GSB buffer ke dalam Microsentrifuge tube
4) Menginkubasi tabung selama 20 menit pada suhu 60oC dan
mengocoknya pelan tiap 10 menit
5) Menyiapkan tabung berisi Elution buffer sebanyak 50 μl dan
inkubasi pada suhu 600C, Elution buffer akan digunakan pada
proses selanjutnya.
6) Mendinginkan Micosentrifuge tube sampel pada suhu ruangan.
33
Setelah DNA dikeluarkan dari sel, maka DNA tersebut akan
dilakukan pengikatan dengan cara DNA Binding.
1) Menambahkan 200 μl Ethanol absolute ke dalam Microsentrifuge
tube kemudian mengocok tabung selama 10 menit
2) Menyiapkan GS column pada 2 ml Collection tube
3) Memindahkan campuran Microsentrifuge tube ke dalam GS
column
4) Menyentrifugasi GS column selama 1 menit pada kecepatan 14.000
– 16.000 rpm
5) Membuang cairan yang tidak tersaring pada Collection tube
6) Menempatkan kembali GS column ke Collection tub
DNA yang sudah terikan akan di lakukan Wash untuk menyisakan
DNA saja pada GD column
1) Menambahkan 400 μl W1 buffer ke dalam GS column kemudian
menyentrifugasi selama 30 detik pada kecepatan 14.000 – 16.000
rpm
2) Membuang cairan yang terdapat pada Collection tube
3) Menempatkan kembali GS column ke dalam Collection tube
4) Menambahkan 600 μl Wash buffer ke dalam GS column
5) Menyentrifugasi GS column selama 30 detik pada kecepatan
14.000 – 16.000 rpm
6) Membuang cairan yang terdapat pada Collection tube
7) Menempatkan kembali GS column ke dalam Collection tube
8) Menyentrifugasi GS column selama 30 detik pada kecepatan 3.000
rpm untuk mengeringkan matriks column
Setelah DNA yang terdapat di GS column melalui fase Wash maka
dilanjutkan DNA Elution yaitu melarutkan DNA dengan buffer.
1) Memindahkan GS column yang sudah kering ke dalam
Microsentrifuge tube yang steril
34
2) Menambahkan 50 μl Elution buffer yang telah diinkubasi ke dalam
GS column dan dibiarkan selama 5 menit
3) Menyentrifugasi Microsentrifuge tube selama 3 menit pada
kecepatan 14.000 – 16.000 rpm untuk mendapatkan hasil isolasi
Gambar 3.2 Skema Kerja Isolasi DNA dari Air Liur
Hasil isolasi DNA dari darah dan air liur selanjutnya dinilai jumlah
konsentrasi (260/280) dan kejernihan (purity) DNAnya menggunakan alat
Maestro Nano Drops. Sampel genom DNA diambil sebanyak 1 µL, lalu
diteteskan pada lensa nano, lalu ditutup dan dianalisa. Hasil jumlah
konsentrasi dan kejernihan akan ditampilkan pada layar alat, lalu dicatat
hasil analisisnya. Setelah dipastikan bahwa konsentrasi dan kejernihan
DNA-nya sesuai dengan batas minimum, hasil isolasi DNA disimpan
dalam lemari pendingin dengan suhu 4o C hingga akan dilakukan proses
selanjutnya. 41
35
3.9.3 40Amplifikasi Genom dengan RT-PCR
Setelah isolasi DNA dilakukan, langkah selanjutnya adalah
menghomogenkan DNA yang sudah didapatkan dengan campuran Master
Mix, Taqman SNP, dan dH2O dengan perbandingan 2 : 8 jika konsentrasi
dan kemurnian cukup atau dengan perbandingan 4 : 6 jika konsentrasi dan
kemurnian tidak mencukupi. DNA dan campuran diambil menggunakan
micro pippet ke dalam LightCycler® 480 Multiwell Plate 96 white yang
kemudian ditutup dengan LightCycler® 480 Sealing Foil. Setelah itu,
LightCycler® 480 Multiwell Plate 96 white digerak-gerakkan dengan
tangan secara horizontal untuk menghomogenkan campuran lalu
dimasukkan ke dalam The LightCycler® 480 Instrumen yang sudah
dihidupkan. 40
Tabel 3.3 Komponen Campuran SNP untuk DNA Assay
Komponen dan konsentrasi bahan Volume akhir dalam larutan
Master Mix 5 x (n+1) μl
Taqman SNP + dH2O* 0,5 x (n+1) μl
dH2O 2,5 x (n+1) μl
Penelitian ini menggunakan kit Taqman-ThermoFisher dengan
Catalog Number: 4351379, SNP Id: Rs 1137101, dan SNP Type: Exon. 39
The LightCycler® 480 Instrument merupakan suatu rapid thermal
block cycler dengan kemampuan deteksi online real-time terintegrasi.
Pengaturan ini memungkinkan terbentuknya amplifikasi simultan dan
deteksi asam nukleat target atau disebut PCR homogen. Deteksi asam
nukleat target dilakukan dengan cara menambahkan pewarna fluorescent
Double Helix DNA spesifik atau urutan probe oligonukleotida spesifik
yang berlabel dengan fluorophores. Kedua pendekatan ini memungkinkan
pengukuran generasi produk PCR selama amplifikasi, yanga merupakan
prinsip dasar dari PCR kuantitatif (qPCR). 40
36
Sistem The LightCycler® 480 mempunyai dua cara untuk
melakukan analisis SNP, yaitu dengan cara Endpoint Genotyping Analysis
dan Melting Curve Genotyping Analysis. Pada penelitian ini, cara yang
digunakan adalah Endpoint Genotyping Analysis. Analisis kurca
amplifikasi pada cara ini biasanya dilakukan dengan mendeteksi sinyal
fluorescent dengan dua probe hidrolisis dengan label yang berbeda pada
masing-masing alel dalam dua saluran. Endpoint Genotyping Analysis
menyediakan metode yang mudah diakses dan dapat dijalankan
pengaturan eksperimental sederhana untuk menganalisis SNP tunggal pada
regio yang ditandai dengan baik dan tanpa variasi yang tidak dikertahui
yang tidak diinginkan. 40
Endpoint Genotyping Analysis menggunakan dua probe dengan
sequence basa yang spesifik yang dirancang untuk target DNA wildtype
dan mutan dan akan dilabeli dengan pewarna fluorescent yang berbeda.
Program ini bisa menentukan genotip dengan mengukur intensitas
distribusi dari dua zat pewarna setelah PCR dilakukan. Intensitas pewarna
relatif dapat divisualisasikan secara komprehensif pada scatterplot, dan
akan menyederhanakan hasil dengan membedakannya menjadi wildtype,
mutan heterozigot, atau sampel mutan homozigot. 40
37
A: Probe dengan sekuens basa spesifik dan pewarna reporter yang
berbeda
B: Selama fase elongasi, hanya probe yang dengan tepat pada sekuens
basa spesifik yang dibelah, memisahkan pewarna reporter dari pemadam.
C: Pewarna reporter yang dibelah tidak lagi dipadamkan dan
memancarkan sinyal fluoresensi dan akan terdeteksi oleh alat.
D: Scaterplot menampilkan intensitas fluoresensi akhir dari beberapa
sampel yang dapat dibedakan dengan mudah yaitu, Intensitas tinggi dari
Probe alel X ditempatkan ke kanan, intensitas tinggi dari Probe alel Y
ditempatkan ke atas, intensitas tinggi dari kedua Probe ditempatkan di atas
dan kanan ini menandai sampel heterozigot.
Gambar 9 3.3 Prinsip Kerja Probe pada Endpoint Genotyping Sumber : Roche , 2008
38
Dari hasil yang dikeluarkan dari alat, maka akan terlihat pada tabel
hasil dengan kode warna, nama sampel, tingkat intensitasnya, dan hasil
pendaran yang dideteksi yang menentukan apakah termasuk golongan
wildtype, mutan heterozigot, atau sampel mutan homozigot.
Gambar 3.4 Hasil dari Endpoint Genotyping Sumber : Roche, 2008
39
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Data Karakteristik Responden
Responden dalam penelitian ini berjumlah 152 orang yang diambil di
daerah sekitar kampus Fakultas Kedokteran dan Fakultas Ilmu kesehatan
Universitas Islam Negri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta dan di klinik Salsabilla
Medical Centre Cibinong. Responden 51 orang pasien diabetes melitus tipe 2
(terdiri dari 18 laki-laki dan 33 perempuan), dan 51 orang anak dari pasien DM
tipe 2 (terdiri dari 16 laki-laki dan 35 perempuan ). Sementara untuk kontrol 50
orang yang terdiri 10 laki-laki dan 40 perempuan.
Adapun hasil karakteristik sampel dapat ditampilkan dalam bentuk tabel
dibawah ini.
Tabel 4.1 Karakteristik Jenis Kelamin Responden Penelitian
Frekuensi ( % )
Kontrol DM tipe 2 Anak dari pasien DM
tipe 2
Jenis Kelamin Laki-laki 10 (20%) 18 (35,29%) 16 (31,37%)
Perempuan 40 (80%) 33 (64,71%) 35 (68,63%)
Total 50 51 51
4.2 Isolasi Genom
Jumlah sampel yang digunakan pada penelitian ini berdasarkan kriteria
inklusi dan eksklusi berjumlah 152. Sampel yang digunakan adalah sampel darah
dan sampel liur yang dilakukan berdasarkan protokol Genaid GB 300 dan Genaid
GS 300. Hasil dari isolasi DNA genom dilihat secara kuantitatif menggunakan
spektrofotometer DeNovix Nano Drops untuk dilihat kemurnian dan konsentrasi
DNA dalam hasil isolasi menggunakan rasio panjang gelombang A260/280
sebagaimana dapat dilihat di tabel dibawah ini.
40
Tabel 4.2 Data Kemurnian DNA Genom Responden
Kontrol DM tipe 2 Anak DM Tipe 2
Kemurnian
DNA
Genom
A260/280
Frekuensi Persentase
(%) Frekuensi
Persentase
(%) Frekuensi
Persentase
(%)
<1,8 12 24 37 72,55 12 23,53
1,8 - 2,0 36 72 12 23,53 33 64,70
>2,0 2 4 2 3,92 6 11,77
Total 50 100 % 51 100 % 51 100 %
Dari tabel tersebut diketahui dari 50 sampel kontrol, didapatkan 24%
termasuk ke kategori kemurnian DNA kurang dari 1,8 ; 72% orang termasuk ke
kategori kemurnian DNA 1,8 – 2,0 ; dan 4% orang termasuk ke kategori
kemurnian DNA lebih dari 2,0. Dari 51 sampel pasien DM tipe 2, didapatkan
72,55% orang termasuk ke kategori kemurnian DNA kurang dari 1,8 ; 23,53%
orang termasuk ke kategori kemurnian DNA 1,8 – 2,0 ; dan 3,92% orang
termasuk ke kategori kemurnian DNA lebih dari 2,0. Dan dari 51 sampel anak
pasien DM tipe 2, didapatkan 23,53% orang termasuk ke kategori kemurnian
DNA kurang dari 1,8 ; 64,70% orang termasuk ke kategori kemurnian DNA 1,8 –
2,0 ; dan 11,77% orang termasuk ke kategori kemurnian DNA lebih dari 2,0.
4.3 Identifikasi Genetik LEPR Menggunakan RT-PCR
Selanjutnya hasil isolasi DNA diamplifikasi menggunakan RT-PCR untuk
diidentifikasi adanya polimorfisme genetik LEPR spesifiknya pada rs 1137101
atau Gln223Arg. Probe yang digunakan akan menempel pada segmen primer gen
LEPR dan ketika dilakukan PCR maka akan berpendar dikarenakan terdapat
warna fluorescent yang akan dideteksi oleh mesin PCR dan akan dimunculkan
hasil akhirnya pada program Light Cycler. Pada Rs 1137101 terdapat 2 probe
yang akan mendeteksi dan menempel pada sekuens alel yang berbeda, probe
berlabel Vic akan menempel pada sekuens primer dengan alel A dan pada probe
41
berlabel Fam akan menempel pada sekuens primer dengan alel G. Pada sampel
ditemukan hasil seperti yang disajikan dalam tabel dibawah ini.
Tabel 4.3 Data Distribusi Genotip Responden
SNP Alel beresiko Distribusi genotip
Alel Kontrol DM tipe 2
Anak penderita
DM tipe 2
Rs 1137101 G AA 4(8%) 2 (3,92%) 1 (1,96%)
AG 25(50%) 6 (11,77%) 10 (19,61%)
GG 21(42%) 43 (84,31%) 40 (78,43%)
Total 50 51 51
Dari tabel tersebut diketahui pada populasi kontrol terdapat 8 % yang
mempunyai alel AA, 50 % mempunyai alel AG dan 42 % mempunyai alel GG.
Pada populasi pasien DM tipe 2 terdapat 3,92 dengan alel AA; 11,77% dengan
alel AG; dan 84,31 % dengan alel GG. Pada populasi anak dari pasien DM tipe 2
terdapat 1,96 % dengan alel AA; 19,61 % dengan alel AG; dan 78,43 % dengan
alel GG.
Tabel 4.4 Distribusi Data Genotip Berdasarkan Pasangan Orang Tua Dengan DM
Tipe 2 dan Anak
SNP Alel beresiko Distribusi genotip berdasarkan pasangan orang tua dengan
DM tipe 2 dan anak
Orang tua Anak Jumlah Persentase (%)
Rs 1137101 G AA AA 0 0
AA AG 3 5,882
AA GG 0 0
AG AG 2 3,921
AG GG 9 17,647
GG GG 37 72,549
Total 51 100
Dari tabel tersebut diketahui pada pasangan orang tua dengan DM tipe2
dan anaknya, pada pasangan alel AA-AA terdapat 0%, pada pasangan alel AA-
AG terdapat 5,882%, pada pasangan alel AA-GG terdapat 0%, pada pasangan alel
42
AG-AG terdapat 3,921%, pada pasangan alel AG-GG terdapat 17,647%, dan pada
pasangan alel GG-GG terdapat 72,549%.
4.4 Frekuensi Alel Gen LEPR
Hasil screening yang dilakukan pada mahasiswa Fakultas Kedokteran dan
Fakultas Ilmu kesehatan Universitas Islam Negri (UIN) Syarif Hidayatullah
Jakarta dan di klinik Salsabilla Medical Centre Cibinong didapatkan bahwa dari
152 sampel keseluruhan, memiliki perbedaan pada populasi kontrol dan populasi
orang tua dengan DM tipe 2 beserta anaknya.
Pada populasi kontrol terdapat 50 sampel dengan persentase genotip
homozigot wildtype 8% (4 orang), genotip heterozigot mutan 50% (25 orang),
genotip homozigot mutan 42% (21 orang), sehingga frekuensi genotip heterozigot
mutan merupakan varian paling dominan. Dengan frekuensi alel A 0,33 dan
frekuensi alel G 0,67.
Pada populasi pasien DM tipe 2 terdapat 51 sampel dengan persentase
genotip homozigot wildtype 3,92% (2 orang), genotip heterozigot mutan 11,77%
(6 orang), genotip homozigot mutan 84,31% (43 orang), sehingga frekuensi
genotip heterozigot mutan merupakan varian paling dominan. Dengan frekuensi
alel A 0,098 dan frekuensi alel G 0,902.
Pada populasi pasien DM tipe 2 terdapat 51 sampel dengan persentase
genotip homozigot wildtype 1,96% (1 orang), genotip heterozigot mutan 19,61%
(10 orang), genotip homozigot mutan 78,43% (40 orang), sehingga frekuensi
genotip heterozigot mutan merupakan varian paling dominan. Dengan frekuensi
alel A 0,1176 dan frekuensi alel G 0,8824.
43
4.5 Analisis Hubungan Gen LEPR Anak dengan Orangtua DM tipe 2
Pada tabel 4.4 menggambarkan bahwa pada pasangan orang tua dan anak
yang memiliki genotip GG - GG terdapat 37 orang, AG - GG sebanyak 9 orang,
AG - AG sebanyak 2 orang dan AA - AG sebanyak 3 orang. Sedangkan tidak ada
pasangan orang tua dan anak pada genotip AA – AA dan AA – GG. Dari hasil uji
Chi-Square didapatkan nilai harapan (expected count) <5 adalah 77,8 %, sehingga
nilai signifikansi dari Likelihood Ratio dapat digunakan. Nilai signifikansi yang
didapatkan adalah 0,011 ( p Value <0,05). Sehingga dapat disimpulkan bahwa
terdapat hubungan yang signifikan antara polimorfisme yang terjadi pada anak
dan orang tua dengan DM tipe 2.
Adanya signifikansi hubungan antara polimorfisme yang terjadi pada anak
dan orang tua dengan DM tipe 2 ini dapat mengindikasikan adanya kemungkinan
bahwa dengan adanya polimorfisme gen LEPR ini menjadi salah satu faktor
resiko yang dapat menyebabkan DM tipe 2 dan dapat diturunkan risiko nya dari
orangtua ke anaknya.
4.6 Analisis Hubungan Gen LEPR dengan DM tipe 2
Untuk mencari hubungan antara penderita DM tipe 2 dan dengan
kelompok tanpa DM tipe 2, penelitian ini menggunakan Software medcalc online
dengan aplikasi kalkulator untuk menghitung Odds Ratio dan Allel Frequency
Calculator untuk mencari frekuensi alel merujuk pada penelitian 45
dengan hasil
pada tabel berikut. 43, 44
Tabel 4. 5 Hasil Kalkulasi MedCalc
Alel Frekuensi
Alel Risiko
Odds Ratio
( OR )
Confidence
Interval ( CI )
Significance
Level ( P )
DM Tipe 2 0,902 4.5335 3.5424 – 5.8014 P <0.0001
Kontrol 0,670
44
Berdasarkan tabel diatas didapatkan bahwa pada populasi dengan DM tipe
2 memiliki frekuensi alel berisiko sebanyak 0,902 dan pada populasi Kontrol
didaparkan frekuensi alel berisiko sebanyak 0,670. Dari hasil analisis yang
dianalisis menggunakan aplikasi MedCalc, didapatkan Odds Ratio 4.5335 yang
dapat disimpulkan bahwa pada orang dengan polimorfisme gen LEPR ini
memiliki 4,5 kali risiko lebih tinggi terkena DM tipe 2. Hasil tingkat signifikansi
(Significance Level) yang didapat adalah p < 0,0001 yang menandakan adanya
hubungan gen LEPR ini dengan kejadian DM tipe 2.
4.7 Keterbatasan Peneliti
Penelitian ini memiliki keterbatasan antara lain :
1. Tidak diukur kriteria diagnosis untuk diabetes melitus tipe 2 seperti gula
darah sewaktu dan gula darah puasa pada peserta penelitian.
2. Tidak diketahui apakah anak dari penderita DM juga menderita DM atau
tidak.
3. Pencatatan karakteristik peserta penelitian tidak tertulis dengan lengkap.
45
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
1. Terdapat polimorfisme genetik LEPR rs 1137101 pada populasi
mahasiswa FK dan FIKES UIN Syarif Hidayatullah Jakarta dan pada
populasi pasien DM tipe 2 di klinik Salsabilla Cibinong
2. Genotip LEPR GG memiliki proporsi paling banyak pada populasi
pasien DM tipe 2 dan anaknya, dan mahasiswa FK dan FIKES UIN
Syarif Hidayatullah Jakarta dan pada klinik Salsabilla Cibinong
3. Terdapat hasil yang signifikan dari gambaran genotip yang ada
dengan membandingkan populasi kontrol dan populasi sampel dengan
diabetes melitus tipe2
4. Terdapat hasil yang signifikan yang menggambarkan hubungan gen
LEPR pada anak dan orangtua dengan DM tipe 2
5.2 Saran
1. Diperlukan pemeriksaan lebih lanjut untuk diagnosis DM tipe 2
seperti GDS dan GDP
2. Dapat dilakukan penelitian dengan jumlah sampel lebih besar lagi
3. Dapat dilakukan penelitian dengan sampel yang lebih beragam lagi
agar dapat gambaran lebih luas pada populasi di Indonesia
4. Dilakukan pengambilan darah orangtua atau anak pada populasi
Kontrol (non-DM)
46
DAFTAR PUSTAKA
1. Soelistijo, Soebagijo A, Hermina N, Achmad R, dll. Konsensus :
Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Mellitus Tipe 2 di Indonesia 2015.
PB Perkeni 2015
2. Li YY, Hui W, Xin XY, dll. LEPR gene Gln223Arg polymorphism and type
2 diabetes mellitus: a meta-analysis of 3,367 subjects. Oncotarget. 2017 : 8 :
37.
3. Lieberman, Michael. Marks, Allan D. Marks’ Basic Medical Biochemistry:
A Clinical Approach. 4th ed. 2013.
4. Scott RA, Langenberg C, Shar SJ, dll. The link between Family History and
risk of Type 2 Diabetes is Not Explained by Anthropometric, Lifestyle or
Genetic Risk Factors: the EPIC-InterAct Study. Diabetologia. 2013: 56(1):
60–69.
5. Ramachandrappa S, Farooqi IS. Genetic approaches to understanding
human obesity. J Clin Invest. 2011 : 121:2080-6.
6. Papadakis MA, Stephen JM. Current Medical Diagnosis and Treatment.
New York : McGraww-Hill. 2013
7. Facey A, Lowell D dan Rachel I. A Review of the Leptin Hormone and the
Association with Obesity and Diabetes Mellitus. Journal of Diabetes and
Metabolism. 2017.
8. Minikoshi Y, Kim Y, Peroni OD, et al. Leptin stimulates fatty-acid
oxidation by activating AMP-activated protein kinase. Nature. 2002 : 415:
339-343.
9. Ahima RS, Flier JS. Leptin. Annual Review of Physiology. 2000 : 62 : 413-
437.
10. Spiegel K, Tasali E, Penew P, et al. Brief Communication: Sleep
Curtailment in Healthy Young Men Is Associated with Decreased Leptin
Levels, Elevated Ghrelin Levels, and Increased Hunger and Appetite.
Annals of Internal Medicine. 2004 : 141: 846-850.
11. Taheri S, Lin L, Austin D, et al. Short Sleep Duration Is Associated with
Reduced Leptin, Elevated Ghrelin, and Increased Body Mass Index. PLOS
Medicine. 2004 : 1: e62.
12. El-Haschimi K, Pierroz DD, Hileman SM, et al. Two defects contribute to
hypothalamic leptin resistance in mice with diet-induced obesity. The
47
Journal of Clinical Investigation. 2000 : 105:1827-1832.
13. Ahima RS, Prabakaran D, Mantzoros C, et al. Role of leptin in the
neuroendocrine response to fasting. Nature. 1996 : 382 : 250-252.
14. Myers MG, Leibel RL, Seeley RJ, et al. Obesity and leptin resistance:
distinguishing cause from effect. Trends in Endocrinology and Metabolism.
2010 : 21: 643-651.
15. Enriori PJ, Evans AE, Sinnayah P, et al. Diet-Induced Obesity Causes
Severe but Reversible Leptin Resistance in Arcuate Melanocortin Neurons.
Cell Metabolism. 2007 : 5: 181-194
16. Kieffer TJ, Heller RS, Leech CA, et al. Leptin suppression of insulin
secretion by the activation of ATP-sensitive K+ channels in pancreatic beta-
cells. Diabetes. 1997 : 46:1087-93.
17. Emilsson V, Liu YL, Cawthorne MA, et al. Expression of the functional
leptin receptor mRNA in pancreatic islets and direct inhibitory action of
leptin on insulin secretion. Diabetes. 1997 : 46:313-6.
18. Bandaru P, Shankar A. Association Between Plasma Leptin Levels and
Diabetes Mellitus. Met Syndrome and Related Disorders. 2011. 9: 19-23.
19. Ceddia RB, Koistinen HA, Zierath JR, et al. Analysis of paradoxical
observations on the association between leptin and insulin resistance. Нe
FASEB Journal, 2002 : 16: 1163-1176.
20. Ebihara K, Ogawa Y, Masuzaki H, et al. Transgenic Overexpression of
Leptin Rescues Insulin Resistance and Diabetes in a Mouse Model of
Lipoatrophic Diabetes. Diabetes, 2001 : 50: 1440-1448.
21. German JP, Wisse BE, Нaler JP, et al. Leptin Deficiency Causes Insulin
Resistance Induced by Uncontrolled Diabetes. Diabetes, 2010 : 59: 1626-
634.
22. Aragonès G, Ardid-Ruiz A, Ibars M, Suárez M, Bladé C. Modulation of
leptin resistance by food compounds. Molecular Nutrition & Food Research,
2016 : 60: 1789-1803.
23. Reitman ML, Gavrilova O, Marcus-Samuels B, Leon LR, Vinson C.
Hormones: Leptin and diabetes in lipoatrophic mice. Nature, 2000 : 403:
850-850.
24. McCance , Kathryn L and Sue E Huether.. Patophysiologi : the Biologic
Basis for Disease in Adults and Children, edisi 7. Missouri : Elsevier
Mosby.
48
25. Yiannakouris N, Yannakoulia M, Melistas L, Chan JL, Klimis-Zacas D,
Mantzoros CS. The Q223R polymorphism of the leptin receptor gene is
significantly associated with obesity and predicts a small percentage of
bodyweight and body composition variability. J Clin Endocrinol Metab.
2001 : 86:4434-9.
26. Scripichai O, Fucharoen S. Genetic polymorphisms and implications for
human diseases. J med Assoc Thai, 2007 : 90:394-8
27. Yang MM, Wang J, Fang J, et al. Variations in the Obesity Gene "LEPR"
Contribute to Risk of Type 2 Diabetes Mellitus: Evidence from a Meta-
Analysis. J Diabetes Res. 2016 : 5412084.
28. SNPedia. RS1137101. https://www.snpedia.com/index.php/Rs1137101 .
Diakses pada 25 oktober 2018
29. Gallicchio L, Chang HH, Christo DK, Thuita L, Huang HY, Strickland P, et
al. Single nucleotide polymorphisms in obesity-related genes and all-cause
and cause-specific mortality: a prospective cohort study. BMC Med Genet.
2009 :10:103.
30. Oliveira RD, Cerda A, Genvigir FDV, et al. Leptin receptor gene
polymorphisms are associated with adiposity and metabolic alterations in
Brazilian individuals. Arq Bras Endocrinol Metab. 2013 : 57:9
31. Fan SH dan Say FH. Leptin and leptin receptor gene polymorphisms and
their association with plasma leptin levels and obesity in a multi-ethnic
Malaysian suburban population. Journal of Physiological Anthropology
2014 : 33:15
32. Zhang L, Qing Y, Liang D, et al. Association of polymorphisms in LEPR
with type 2 diabetes and related metabolic traits in a Chinese population. .
Lipids in Health and Disease 2018 : 17:2
33. US National Library of Medicine. What are single nucleotide
polymorphisms(SNPs).https://ghr.nlm.nih.gov/primer/genomicresearch/snp.
Diakses pada 30 oktober 2018
34. International Diabetes Federation, IDF Diabetes Atlas. 7th Ed. US:
International Diabetes Federation, 2015. hal. 57
35. World Health Organization. Global Report on Diabetes. 2016.
36. Melmed S, Polonsky K.S, Larsen P.R, et al. Williams Textbook of
Endocrinology, 12th edition. 2011. Philadelphia : Elsevier Sanders.
Hal.1371-99
49
37. Kasper D.L, Harrison T.R, Faucy A.S, et al. Harrison's Principles of Internal
Medicine, 19th edition. New York : McGraw-Hill. 2015. hal. 2399-407
38. Anghebem, Oliveira, Mauren I, et al. Type 2 diabetes-associated genetic
variants of FTO, LEPR, PPARg, and TCF7L2 in gestational diabetes in a
Brazilian population. Arch. Endocrinol. Metab. 2017 : 61(3) : 238-48.
39. NCBI. dbSNP Short Genetic Variation.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=1137101.
Diakses pada 1 November 2018
40. Roche Diagnostics GmbH. The LightCycler® 480 Instrument Operator’s
Manual Book Software Version 1.5. Roche Applied Science.2008:90-232.
41. Geneaid. Blood/ cell DNA mini kit (GB100/GB300).
http://www.geneaid.com/products/genomic-dna-purification/dna-extraction-
kit-blood-cultured-cell-miniprep. Diakses 11 November 2018
42. Dahlan MS. Penelitian Deskriptif. In: Besar Sampel dan Cara Pengambilan
Sampel dalam Penelitian Kedokteran dan Kesehatan. Edisi ke-3. Salemba
Medika : 2013:56-60.
43. Free Stastistical Calculator. https://www.medcalc.org/calc/odds_ratio.php.
Diakses 11 November 2018
44. Allele Frequency Calculator. https://www.easycalculation.com/health/allele-
frequency-calculator.php. Diakses 11 November 2018
45. Parshall MB. Unpacking the 2 x 2 Table. Heart Lung. 2013 : 42(3):221-6
50
LAMPIRAN
Lampiran 1 Susunan Asam Basa Gen LEPR
51
Lampiran 2 Karakteristik Sampel Kontrol
No No Sampel Jenis Kelamin Konsentrasi 260/280 Gen LPER
1 3 L 90.856 1,86 AG
2 4 P 82.557 1,86 AG
3 5 L 106.916 1,88 AG
4 6 P 104.116 1,88 AA
5 7 P 97.619 1,78 AG
6 8 P 116.224 1,82 AG
7 9 P 69.672 1,90 AG
8 10 P 81.716 1,88 AG
9 13 P 77.020 1,86 AG
10 15 L 71.092 1,88 AG
11 20 P 106.341 1,90 AG
12 26 P 61.651 1,91 AG
13 27 P 68.537 1,60 AG
14 28 P 98.592 1,89 AG
15 29 P 117.143 2,10 AA
16 30 P 64.294 1,60 AA
17 31 P 66.003 1,03 AG
18 32 P 104.116 1,71 GG
19 38 P 75.023 1,90 AG
20 39 P 97.357 1,84 GG
21 40 P 173.793 1,86 AG
22 41 L 112.477 1,85 AG
23 42 P 92.312 1,85 GG
24 43 P 73.376 1,84 AG
25 44 P 112.619 1,87 GG
26 45 L 132.721 1,68 GG
27 46 L 77.324 1,85 AG
28 47 P 68.594 1,84 AG
29 48 P 57.642 1,75 AG
30 49 P 68.069 1,88 GG
31 51 L 120.113 1,88 GG
32 52 L 15,81 2,02 GG
33 55 P 85.444 1,83 GG
34 56 P 120.942 1,85 AG
35 57 P 164.679 1,86 GG
36 58 P 60.068 1,86 GG
37 59 P 189.987 1,49 AG
38 60 P 143.146 1,86 AG
39 61 P 272.328 1,84 GG
40 62 P 220.708 1,91 GG
41 63 P 219.691 1,86 GG
42 66 L 194.297 1,86 GG
52
43 12 P 37.387 1,32 GG
44 16 P 46.492 1,93 GG
45 17 P 54.434 1,92 GG
46 19 L 39.157 1,51 AA
47 24 P 49.716 1,82 GG
48 25 P 47.239 1,72 AG
49 54 P 81.872 1,79 GG
50 84 P 103.852 1,90 GG
53
Lampiran 3 Karakteristik sampel Penderita DM tipe 2
No No Sampel Jenis Kelamin Konsentrasi 260/280 LPER
1 A L 99.307 1,80 GG
2 B L 85.410 1,16 GG
3 C L 515.397 2,01 GG
4 E L 23.427 2,08 GG
5 G L 139.175 1,12 GG
6 L L 396.132 1,71 GG
7 M P 68.854 1,75 GG
8 N P 109.385 1,71 GG
9 O L 31.038 1,91 GG
10 P P 33.914 1,77 GG
11 Q P 36.609 1,74 GG
12 AB L 32.370 1,64 GG
13 AC P 14.092 1,76 GG
14 AD P 35.178 1,94 GG
15 AE L 65.803 1,79 AG
16 AF P 97.470 1,85 GG
17 AG L 120.822 1,85 GG
18 AH P 22.692 1,82 GG
19 AI P 13.446 1,15 AG
20 AJ P 12.372 2,13 GG
21 AK P 27.571 1,92 GG
22 AL L 14.483 1,78 GG
23 AP L 88.461 1,16 GG
24 AW P 40.580 1,66 GG
25 AX L 7.750 1,21 GG
26 AY L 34.610 1,71 GG
27 AZ P 99.452 1,64 GG
28 BA P 41.535 1,71 GG
29 BB P 86.627 1,88 GG
30 BC P 67.825 1,81 GG
31 BD P 134.457 1,83 GG
32 BF P 106.980 1,76 GG
33 BG P 74.836 1,77 GG
34 BH P 98.176 1,78 AA
35 BI P 41.114 1,73 GG
36 BJ P 21.634 1,62 GG
37 BK L 70.368 1,76 GG
38 BL P 54.397 1,72 GG
39 BM P 73.334 1,76 GG
40 BN L 42.527 1,71 AG
41 BO P 53.760 1,71 GG
42 BP P 46.224 1,70 AG
54
43 105 P 25.461 1,92 GG
44 BR P 23.350 1,62 GG
45 BT P 90.026 1,71 GG
46 BU L 27.805 1,74 AG
47 BV P 45.656 1,75 AA
48 BW P 30.796 1,54 GG
49 BX P 47.302 1,90 AG
50 BY P 45.359 1,79 GG
51 BZ L 35.673 1,55 GG
55
Lampiran 4 Karakteristik Sampel Anak Penderita DM tipe 2
No No Sampel Jenis Kelamin Konsentrasi 260/280 Gen LPER
1 2 L 109.710 1,90 AG
2 14 L 49.152 1,68 GG
3 18 P 49.569 1,27 GG
4 23 P 34.949 1,84 GG
5 36 L 64.590 1,85 GG
6 65 P 135.639 1,82 GG
7 82 P 61.805 1,96 GG
8 67 P 31.404 1,92 GG
9 68 P 90.615 1,83 AG
10 69 P 132.136 1,88 GG
11 70 P 29.276 1,95 GG
12 81 P 88.205 1,76 GG
13 72 P 39.638 1,79 GG
14 73 P 33.174 2,03 GG
15 74 P 24.127 1,51 AA
16 75 L 19.929 2,15 GG
17 76 P 37.549 1,79 GG
18 77 P 17.962 2,13 AG
19 78 P 58.565 1,83 AG
20 79 P 27.129 1,81 GG
21 80 L 11.232 2,57 GG
22 83 P 37.751 1,86 GG
23 85 P 120.140 1,85 AG
24 106 P 26.178 1,94 GG
25 109 L 41.950 1,97 AG
26 111 L 60.491 1,85 GG
27 89 P 39.364 1,72 GG
28 103 P 58.903 1,85 GG
29 93 P 31.804 1,80 GG
30 107 P 35.072 1,94 GG
31 110 P 23.915 2,09 GG
32 113 L 31.894 1,88 AG
33 88 L 82.576 1,80 GG
34 90 L 59.677 1,75 AG
35 96 P 64.046 1,79 GG
36 87 P 53.373 1,75 GG
37 92 P 68.248 1,82 GG
38 114 P 82.681 1,85 GG
39 104 P 41.502 1,99 GG
40 108 L 8.773 2,21 GG
41 112 L 74.180 1,82 GG
42 91 L 55.649 1,81 GG
56
43 BQ L 9,581 1,31 GG
44 95 L 18.561 2,07 GG
45 94 P 104.322 1,86 GG
46 97 P 90.616 1,80 AG
47 102 P 34.461 1,88 AG
48 100 P 27.252 1,96 GG
49 99 L 40.908 1,74 GG
50 101 P 57.141 1,85 GG
51 98 P 26.894 1,88 GG
57
Lampiran 5 Alat dan Bahan
Micropipet
Tabung EDTA
GS Column GB Column
Airtech
Waterbath AS ONE TRW-42 TP
58
Lanjutan
Genomic DNA Mini Kit Geneaid GB
100
GT Buffer, GB Buffer, W1 Buffer
Wash Buffer, RBC Lysis Buffer,
Elution Buffer
Microtip dan Microsentrifuge Tube
Microsentrifuge Eppendorf 5417 R TaqMan Master Mix
59
Lanjutan
LightCycler® 480 Instrument.
Vortex
-4oC Kulkas Penyimpan
-20o C Kulkas Penyiman
Lampiran 6 Analisis Data
60
A. Hasil Analisis Chi-Square
B. Hasil Analisis MedCalc
61
C. Jenis Kelamin
Kontrol DM tipe 2
Anak dari
pasien DM
tipe 2
Total
Laki-laki 10 18 16 44
Perempuan 40 33 35 108
Total 50 51 51 152
D. Distribusi Genetik LEPR
Alel Kontrol DM tipe 2
Anak dari
Pasien DM
tipe 2
Total
AA 4 2 1 7
AG 25 6 10 41
GG 21 43 40 104
Total 50 51 51 152
E. Distribusi Genetik LEPR pada Anak dan Orangtua dengan DM tipe 2
Pasangan Genotip Orangtua - Anak Jumlah
AA – AA 0
AA – AG 3
AA – GG 0
AG – AG 2
AG – GG 9
GG – GG 37
62
Lampiran 7 Surat Persetujuan Responden
63
64
Lampiran 8 Curricullum Vitae Peneliti
CURRICULUM VITAE
A. Identitas Diri
Nama : Risfy Gusti Pamungkas
Jenis Kelamin : Laki-laki
Tempat, Tanggal Lahir : Jakarta, 8 Februari 1999
Glongan Darah : A+
Agama : Islam
E-mail : risfyg@gmail.com
Alamat : Perumahan Bumi Sentosa Blok C6 nomor 20-21,
Kabupaten Cibinong, Kota Bogor, Jawa Barat
B. Pendidikan
Sekolah Dasar : SD Taman Rezeki Cibinong
SD IT Al-Madinah Cibinong
Sekolah Menengah Pertama : SMPN 5 Bogor
Sekolah Menengah Atas : SMAN 6 Bogor
Universitas : UIN Syarif Hidayatullah Jakarta,
Tangerang Selatan
C. Pengalaman Organisasi
1. Ketua Pramuka SMPN 5 Bogor 2012-2013
2. Anggota Peer Councelor for Teenager di SMPN 5 Bogor 2011-2013
3. Anggota Remaja Pecinta Alam SMAN 6 Bogor 2013-2015
4. Ketua SCOPE CIMSA UIN Jakarta 2017-2018
D. Penghargaan
1. Juara 3 Tryout SD Primagama Cibinong
2. Juara 1 Turnamen Taekwondo SD setingkat kecamatan
3. Juara harapan 3 lomba Pramuka di SMKN 1 Bogor