7/21/2019 Metode Lowry

http://slidepdf.com/reader/full/metode-lowry-56dad271dd950 1/2

Metode Lowry

Metode Lowry dikembangkan kurang lebih 45 tahun yang lalu. Nama Lowry diambil dari pencetus metode ini yang paling senior. Metode ini merupakan pengembangan dari metode Biuret,dengan penambahan pereaksi asam fosfomolibdat dan asam fosfotungstat. Adanya inti aromatis padaasam amino triptofan, tirosin, dan fenilalanin yang menyusun protein tersebut akan mereduksifosfomolibdat men adi molibdenum yang berwarna biru yang ika digabung dengan warna yangterbentuk dari pereaksi lain yang digunakan pada metode ini maka dapat diukur absorbansinya pada

pan ang gelombang !"" nm. Metode Lowry lebih sensitif dibanding metode biuret.

Prosedur penetapan kadar protein dengan metode Lowry :

#embuatan #ereaksi Lowry A $#ereaksi Lowry A merupakan larutan asam fosfotungstat%asam fosfomolibdat. #ereaksi

ini tersedia di pasaran dan stok yang ada di pasaran tersebut diencerkan terlebih dahulu

sebelum digunakan dengan perbandingan &$&.

#embuatan #ereaksi Lowry B $#ereaksi Lowry B merupakan campuran natrium karbonat '( dalam &"" mL natrium

hidroksida ",& N. #ada larutan ini ditambah & mL tembaga )**+ sulfat &( dan & Ml kaliumnatrium tartrat '(.

#embuatan kur a baku-ibuat larutan bo in serum albumin )B A+ dengan konsentrasi /"" μ g0mL )Li+ lalu

dibuat seri konsentrasi dalam labu takar &" mL, misal dengan komposisi berikut $

No tabung Li ) μ g+& "' &""/ '""4 /""5 4""! 5""1 !""2 1""3 2""

&" &"""

edalam masing%masing labu takar ditambah 2 mL #ereaksi Lowry B dan dibiarkanselama &" menit, kemudian ditambah & mL #ereaksi Lowry A dan ditambah dengan a uadessampai batas olume. Larutan digo og dan dibiarkan selama '" menit. elan utnya absorbansilarutan dibaca pada pan ang gelombang !"" nm terhadap blanko )sebagai blanko adalahtabung reaksi No.& pada tabel diatas+.

#enyiapan sampel-iambil se umlah tertentu sampel protein yang terlarut misal albumin, lalu diendapkan

dahulu dengan penambahan amonium sulfat kristal ) umlahnya tergantung dari enis proteinnya, kalau perlu sampai mendekati ke enuhan amonium sulfat dalam larutan+. #rotein

yang mengendap dipisahkan dalam sentrifuge dengan kecepatan &&.""" rpm selama &" menit,lalu dipisahkan supernatannya. #resipitat yang merupakan proteinnya kemudian dilarukan

7/21/2019 Metode Lowry

http://slidepdf.com/reader/full/metode-lowry-56dad271dd950 2/2

kembali dengan buffer asam asetat p6 5 misal sampai &"," mL. e umlah olume tertentularutan diambil dan dilakukan penetapan kadar sebagaimana pada pembuatan kur a bakumulai dari 7penambahan 2 mL #ereaksi Lowry A sampai seterusnya.

#erlu diperhatikan adanya faktor pengenceran agar absorbansi sampel sedapat mungkinharus masuk dalam kisaran absorbansi kur a baku.