pengaruh gel aloe vera terhadap jumlah cd4+ dan cd8+ pada

89
PENGARUH GEL ALOE VERA TERHADAP JUMLAH CD4+ DAN CD8+ PADA JARINGAN PERIODONTAL GIGI TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus) PASCA REPLANTASI SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Gigi Oleh: Andiani Budi Lestari NIM: 135070400111034 PROGRAM STUDI SARJANA KEDOKTERAN GIGI FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS BRAWIJAYA 2018

Transcript of pengaruh gel aloe vera terhadap jumlah cd4+ dan cd8+ pada

PENGARUH GEL ALOE VERA TERHADAP JUMLAH CD4+ DAN CD8+ PADA

JARINGAN PERIODONTAL GIGI TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus) PASCA

REPLANTASI

SKRIPSI

Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh

Gelar Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh:

Andiani Budi Lestari

NIM: 135070400111034

PROGRAM STUDI SARJANA KEDOKTERAN GIGI

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

2018

vii

DAFTAR ISI

Judul ............................................................................................................... i

Halaman Persetujuan ..................................................................................... ii

Kata Pengantar ............................................................................................... iii

Abstrak ........................................................................................................... v

Daftar Isi ......................................................................................................... vii

Daftar Gambar ................................................................................................ xi

Daftar Tabel .................................................................................................... xii

Daftar Lampiran .............................................................................................. xiii

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang .................................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah .............................................................................. 4

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum ..................................................................................... 4

1.3.2 Tujuan Khusus .................................................................................... 4

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Akademis .............................................................................. 5

1.4.2 Manfaat Praktis ................................................................................... 5

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Avulsi

2.1.1 Definisi ............................................................................................... 6

2.1.2 Etiologi ............................................................................................... 6

2.1.3 Pertolongan Pertama Gigi Avulsi ........................................................ 7

2.2 Replantasi

2.2.1 Definisi……………………………………………………………………….. 7

2.2.2 Tujuan Penelitian ................................................................................ 8

2.2.3 Replantasi Segera .............................................................................. 8

2.2.4 Replantasi dalam Waktu Satu Jam Setelah Avusi .............................. 9

viii

2.2.5 Replantasi Lebih dari Satu Jam Setelah Avulsi ................................... 10

2.2.6 Prognosis ........................................................................................... 11

2.3 Ligamen Periodontal ........................................................................... 12

2.4 Penyembuhan Luka ............................................................................ 12

2.4.1 Fase Penyembuhan Luka ................................................................... 13

2.4.2 Faktor yang Mempengaruhi Penyembuhan Luka ................................ 16

2.4 Sel T CD4+ dan T CD8+ ..................................................................... 17

2.5 Inflamasi ............................................................................................. 21

2.6 Aloe Vera

2.6.1 Definisi ................................................................................................ 21

2.6.2 Jenis dan Taksonomi Aloe vera .......................................................... 22

2.6.3 Morfologi Aloe vera ............................................................................. 23

2.6.4 Kandungan Aloe vera.......................................................................... 25

2.6.4.1 Acemannan ......................................................................................... 31

2.6.5 Aloe vera sebagai Immunomodulator .................................................. 31

2.6.6 Peran Aloe vera dalam Penyembuhan Luka ....................................... 31

2.7 Anatomi Gigi Tikus .............................................................................. 34

BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep ............................................................................... 35

3.2 Hipotesis Penelitian ............................................................................ 37

BAB 4 METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penilitian .......................................................................... 38

4.2 Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................. 38

4.3 Sampel Penelitian

4.3.1 Kriteria Sampel ................................................................................... 39

4.3.2 Jumlah Sampel ................................................................................... 40

4.4 Variabel dan Definisi Operasional

4.4.1 Variabel Penelitian

4.4.1.1 Variabel Bebas/Independen................................................................ 41

ix

4.4.1.2 Variabel Tergantung/Dependen .......................................................... 41

4.4.1.3 Variabel Terkendali ............................................................................. 41

4.4.2 Definisi Operasional ........................................................................... 42

4.5 Alat dan Bahan Penelitian

4.5.1 Alat dan Bahan untuk pemeliharaan dan perlakuan hewan coba ........ 43

4.5.2 Alat dan Bahan untuk pembiusan hewan coba ................................... 43

4.5.3 Alat dan Bahan untuk pencabutan gigi hewan coba ............................ 43

4.5.4 Alat dan Bahan untuk perlakuan hewan coba ..................................... 43

4.5.5 Alat dan Bahan untuk pembuatan Aloe vera……………………..….... 44

4.5.6 Alat dan Bahan Pengambilan Jaringan dan Pembuatan Preparat ....... 44

4.5.7 Alat dan Bahan untuk Immunohistokimia ............................................ 45

4.6 Cara Kerja

4.6.1 Ethical Clearance ................................................................................ 45

4.6.2 Persiapan Hewan Coba ...................................................................... 45

4.6.3 Pembuatan Aloe vera …………………………………………………… 46

4.6.4 Anastesi pada Rattus norvegicus ........................................................ 47

4.6.5 Pencabutan Gigi pada Tikus ............................................................... 47

4.6.6 Prosedur Perlakuan ............................................................................ 48

4.6.7 Perawatan Tikus Pasca Pencabutan................................................... 48

4.6.8 Sacrifies pada Tikus ............................................................................ 48

4.6.9 Prosedur Pembuatan sediaan parafin blok ......................................... 49

4.6.10 Proses Deparafinisasi ......................................................................... 50

4.6.11 Immunohistokimia (IHK) ..................................................................... 50

4.7 Analisa Statistik .................................................................................. 51

4.8 Alur Penelitian ..................................................................................... 54

BAB 5 PENDAHULUAN

5.1 Hasil Penelitian ................................................................................... 55

5.2 Analisis Data ....................................................................................... 61

5.2.1 Uji Normalitas Data ............................................................................. 61

5.2.2 Uji Homogenitas Ragam ..................................................................... 62

x

5.2.3 Uji One Way Anova (Analysis of Variance) ......................................... 62

5.2.4 Uji Post-Hoc Tukey ............................................................................. 63

5.2.5 Uji Korelasi Pearson ........................................................................... 65

BAB 6 PEMBAHASAN

6 Pembahasan ....................................................................................... 68

6.1 Perbandingan Jumlah CD4+ dan CD8+ pada Gigi Tikus (Rattus norvegicus) Pasca Replantasi Tanpa Pemberian Aloe vera ................ 71

6.2 Perbandingan Jumlah CD4+ dan CD8+ pada Gigi Tikus (Rattus norvegicus) Pasca Replantasi Tanpa Pemberian Aloe vera ................ 72

6.3 Perbandingan Jumlah CD4+ dan CD8+ Antara Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan ........................................................................... 73

BAB 7 PENUTUP

7.1 Kesimpulan ......................................................................................... 76

7.2 Saran .................................................................................................. 76

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 77

LAMPIRAN ..................................................................................................... 84

v

ABSTRAK

Lestari, Andiani Budi. 2017. Pengaruh Gel Aloe vera Terhadap Jumlah CD4+ dan CD8+ pada Jaringan Periodontal Gigi Tikus Putih (Rattus norvegicus) Pasca Replantasi. Skripsi, Program Studi Sarjana Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Brawijaya. Pembimbing: (1) drg. Delvi Fitriani, M. Kes (2) drg. Yuliana R. Kumala, Sp.KG

Pada gigi avulsi terlepas dari soketnya menyebabkan terjadinya

kerusakan ligamen periodontal dan menimbulkan respon inflamasi di daerah jaringan periodontal. Perawatan yang ideal adalah replantasi. Pasca replantasi pada jaringan periodontal akan meninggalkan luka. Penggunaan gel Aloe vera dapat menjadi salah satu alternatif untuk penyembuhan luka karena kandungan antrakuinon seperti aloe emodin yang berperan sebagai antiinflamasi dengan menurunkan jumlah sel CD4+ dan CD8+. CD4+ dan CD8+ merupakan subset limfosit T yang berperan dalam proses penyembuhan luka. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dan menganalisis pengaruh gel Aloe vera terhadap jumlah CD4+ dan CD8+ pada jaringan periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi. Penelitian ini merupakan true experimental laboratory post test with control group design dengan pengamatan sebanyak 3 time series yaitu hari pertama, hari ketiga, dan hari ketujuh. Sampel dipilih dengan teknik Simple Random Sampling kemudian dibagi menjadi kelompok perlakuan yang diberi gel Aloe vera sebelum replantasi dan kelompok kontrol yang tidak diberikan gel Aloe vera sebelum replantasi. Terdapat 24 sampel dibagi kedalam 6 kelompok. Variabel yang diteliti adalah jumlah sel CD4+ dan CD8+ pada jaringan periodontal gigi tikus yang diukur dengan sediaan HPA. Berdasarkan hasil uji statistik One Way ANOVA diperoleh nilai signifikansi p=0,00 (p<0,05). Uji korelasi menunjukan adanya korelasi yang kuat dengan arah korelasi negatif, sehingga semakin bertambahnya hari, maka jumlah CD4+ dan CD8+ pada gigi tikus pasca replantasi akan semakin menurun secara signifikan. Kesimpulan pada penelitian ini adalah Gel Aloe vera berpengaruh terhadap jumlah sel CD4+ dan CD8+ pada jaringan periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi.

Kata Kunci : Gel Aloe vera, CD4+, CD8+, avulsi, replantasi

vi

ABSTRACT

Lestari, Andiani Budi. 2017. Effect of Aloe vera Gel on CD4+ and CD8+ Count

on Periodontal Tissue of White Mice (Rattus norvegicus) Post Replantation. Thesis, Undergraduate Program Faculty of Dentistry Brawijaya University. Supervisor: (1) drg. Delvi Fitriani, M. Kes (2) drg. Yuliana R. Kumala, Sp.KG

When dental avulsion occurs the tooth detaches from its socket causes periodontal ligament damage and will causes an inflammatory response on the periodontal tissue. The ideal treatment is replantation. Post replantation procedure will leave some wound on the periodontal tissue. The use of Aloe vera gel can be an alternative in wound healing process because it contains anthraquinones like aloe emodin that will act as anti-inflammatory and can decrease the CD4+ and CD8+ count. This study aims to analyze the effect of Aloe vera gel on CD4+ and CD8+ count on periodontal tissues of white mice (Rattus norvegicus) post replantation. This research is true experimental laboratory post test with control group design with observation of 3 time series that is the first day, third day, and seventh day. There are 24 samples divided into 6 groups. The samples were selected by Simple Random Sampling technique and then divided into the treatment group which was given Aloe vera gel into socket before replantation, and the control group which was not given Aloe vera gel before replantation. The variables studied were the number of CD4+ and CD8+ cell count in the periodontal tissue of the mice which measured by the HPA preparats. Based on the results of One Way Anova statistical tests showed significant values p=0.00 (p <0.05). Correlation test shows there are strong bond in negative direction which shows that as the day is increasing, the CD4+ and CD8+ count in periodontal tissue of white mice post replantation will decreases significantly. The conclusions of this study were Aloe vera gel affect CD4 + and CD8+ counts in periodontal tissues of white mice (Rattus norvegicus) post replantation.

Keywords: Aloe vera gel, CD4 +, CD8 +, avulsion, replantation

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Cedera traumatik gigi didefinisikan sebagai kerusakan yang disebabkan

oleh trauma secara fisik maupun mekanik yang mengenai jaringan keras,

jaringan periodontal ataupun keduanya. Kejadian ini umum terjadi dan

perawatannya dikategorikan sebagai tindakan darurat dalam praktik dokter gigi

(Newland et al., 2007). Cedera traumatik gigi meliputi patahnya enamel gigi dan

dentin tanpa melibatkan pulpa, fraktur mahkota, fraktur akar, perubahan letak gigi

dan avulsi (Carranza, 2002). Avulsi gigi didefinisikan sebagai keluarnya seluruh

gigi dari soket akibat trauma. Gigi yang keluar dari soketnya akibat trauma

menyebabkan ligamen periodontal terputus dan suplai darah ke jaringan pulpa

terputus, sehingga pulpa gigi mengalami nekrosis dan ligamen periodontal rusak

parah (Ram & Cohenca, 2004).

Menurut Gomes (2009), perawatan yang paling ideal untuk avulsi gigi

adalah replantasi. Replantasi adalah menempatkan kembali gigi pada soketnya,

dengan tujuan mencapai pengikatan kembali bila gigi telah terlepas sama sekali

dari soketnya karena kecelakaan (McDonald et al., 2010).

Ketika gigi terlepas dari soketnya, seringkali disebabkan oleh robeknya

ligamen periodontal. Biasanya sebagian besar sel-sel ligamen periodontal akan

tertinggal di akar. Namun, karena gigi menggores soket, kerusakan kecil dan

lokal pada sementum juga terjadi. Jika ligamen periodontal yang tertinggal

menempel pada akar, permukaan tidak mengering dan akibat yang disebabkan

avulsi biasanya menjadi minimal (Trope, 2011).

2

Sel ligamen periodontal yang terhidrasi dengan baik akan

mempertahankan kelangsungan hidup mereka dan memungkinkan

penyembuhan dengan regenerasi sel ligamen periodontal saat direplantasi tanpa

menimbulkan banyak kerusakan ataupun peradangan. Selain itu, karena cidera

yang terjadi di area lokal, radang yang dirangsang oleh jaringan yang rusak akan

menjadi terbatas, artinya penyembuhan dengan penggantian sementum yang

baru kemungkinan terjadi setelah peradangan awal telah mereda. Namun,

apabila gigi avulsi tidak terhidrasi yang baik sebelum replantasi, sel ligamen

periodontal yang rusak akan menimbulkan respon inflamasi di daerah permukaan

akar yang diffuse. Berbeda dengan situasi yang dijelaskan di atas, dimana

daerah yang akan diperbaiki setelah peradangan awal responnya kecil, disini

permukaan akar yang lebih besar akan rusak sehingga harus diperbaiki oleh

jaringan baru (Trope, 2011).

Penyembuhan luka merupakan proses yang kompleks dengan melibatkan

banyak sel untuk penggantian dan perbaikan fungsi jaringan yang rusak. Proses

ini terdiri dari fase inflamasi, proliferasi, dan fase maturasi. Fase inflamasi dimulai

setelah beberapa menit dan berlangsung selama sekitar 3 hari setelah cedera.

Dalam proses inflamasi terjadi perusakan, pelarutan, dan penghancuran sel atau

agen penyebab kerusakan sel (Potter & Perry, 2010). Limfosit bermigrasi

kedaerah peradangan dan mencapai jumlah yang bermakna pada hari ketiga

(Jesse, 2005). Limfosit T menghasilkan limfokin interferon-γ (IFN- γ), yang

mengaktivasi makrofag untuk mengeluarkan sitokin seperti Transforming Growth

Factor (TGF-α) yang berperan terhadap proses reepitelisasi. Makrofag

mensekresikan Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), TNF- α dan IL-1 dan juga

bertanggung jawab atas fagositosis mikroorganisme, serta debridemen sisa

3

jaringan. Subpopulasi limfosit menunjukkan perubahan selama penyembuhan

luka: rasio limfosit T CD4+ dan CD8+ yang tinggi mencirikan stadium awal dan

saat penyembuhan berlangsung rasionya menurun. (Huttunen, 2003). Epitelial

Growth Factor (EGF), dan Insulin – like Growth Factor (IGF) bertanggung jawab

terhadap reepitelisasi dan proses proliferasi fibroblast. Platelet-Derived Growth

Factor (PDG-F), Transforming Growth Factor (TGF- ), dan Fibroblast Growth

Factor (FGF) bertanggung jawab terhadap proses proliferasi fibroblast,

angiogenesis dan reepitelisasi. Vaskular Endhotelial Growth Factor (VEGF) yang

menginduksi terjadinya angiogenesis. Peningkatan proliferasi fibroblast,

reepitelisasi dan angiogenesis akan mempercepat penyembuhan luka (Price dan

Wilson, 2006).

Aloe vera merupakan salah satu tanaman yang mempunyai daya

adaptasi tinggi. Aloe vera telah lama dijuluki sebagai tanaman obat, bahkan

master healing plant (tanaman penyembuh utama). Aloe vera memiliki manfaat

sebagai antiinflamasi, antibakteri, antijamur, peningkat aliran darah ke daerah

yang terluka dan menstimulasi fibroblas yang bertanggung jawab untuk

penyembuhan luka (Rieuwpassa, 2011). Gel Aloe vera mengandung zat fenolik

seperti antrakuinon. Kandungan aloe emodin dalam daun Aloe vera dapat

berfungsi sebagai anti inflamasi dengan menekan limfosit T sitolisis CD8+

dengan bantuan sel T supressor CD8+. Antrakuinon juga dapat menurunkan

produksi sitokin IL-2 dan TNF-α pada sel limfosit T yang teraktivasi (Rainsford et

al., 2015). Zat aktif polisakarida seperti acemannan dapat meningkatkan aktivitas

makrofag (Wiedosari, 2007).

4

Berdasarkan uraian diatas, penulis tertarik untuk melakukan penelitian

tentang pengaruh gel Aloe vera terhadap jumlah sel CD4+ dan CD8+ pada

jaringan periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi.

1.2 Rumusan Masalah

Apakah ada pengaruh gel Aloe vera terhadap jumlah CD4+ dan CD8+

pada jaringan peridontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Mengetahui pengaruh gel Aloe vera terhadap jumlah CD4+ dan CD8+

pada jaringan periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi.

1.3.2 Tujuan Khusus

a. Untuk mengetahui jumlah CD4+ dan CD8+ jaringan periodontal gigi tikus

putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi yang tidak diberi gel Aloe vera

pada hari ke 1, 3 dan 7.

b. Untuk mengetahui jumlah CD4+ dan CD8+ pada jaringan periodontal gigi

tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi yang sudah diberi gel

Aloe vera pada hari ke 1, 3 dan 7.

c. Untuk menganalisa perbandingan jumlah CD4+ dan CD8+ pada jaringan

periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi yang

tidak diberi gel Aloe vera pada hari ke 1, 3 dan 7.

d. Untuk menganalisa perbandingan jumlah CD4+ dan CD8+ pada jaringan

periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi yang

sudah diberi gel Aloe vera pada hari ke 1, 3 dan 7.

5

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Akademis

Hasil penelitian ini diharapkan dapat dijadikan data mengenai pengaruh

gel Aloe vera terhadap jumlah CD4+ dan CD8+ pada jaringan periodontal gigi

tikus putih (Rattus norvegicus) pasca replantasi dan dapat dikembangkan oleh

peneliti selanjutnya dalam penelitian kedokteran gigi dalam lingkup yang sama.

1.4.2 Manfaat Praktis

a. Hasil penelitian ini untuk kedepannya dapat dijadikan informasi dalam

penanganan gigi pasca replantasi.

b. Hasil penelitian ini dapat dijadikan informasi mengenai pengaruh gel Aloe

vera terhadap reaksi inflamasi pasca replantasi gigi.

6

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Avulsi

2.1.1 Definisi

Avulsi didefinisikan sebagai keluarnya seluruh gigi dari soket akibat

trauma. Secara klinik dan foto ronsen, gigi tidak ada di dalam soket (Dalimunte,

2003). Tulang alveolar, sementum, ligament periodontal, gingiva, dan pulpa akan

mengalami kerusakan pada saat gigi secara total keluar dari soketnya

(Jacobsen, 2003).

Tercabutnya gigi dari soketnya akibat trauma menyebabkan terputusnya

ligamen-ligamen periodontal dan suplai darah ke jaringan pulpa. Sebagai

akibatnya pulpa gigi mengalami nekrosis dan periodonsium rusak parah (Ram,

2004).

Gambar 2.1 Gigi anterior atas dan bawah yang mengalami avulsi (Ercan and Dalli, 2007)

2.1.2 Etiologi

Avulsi gigi akibat trauma relatif jarang terjadi dengan persentase kejadian

mulai dari 0,5% hingga 16% dari seluruh kasus trauma (Shashikiran et al., 2006).

7

Etiologi terjadinya trauma avulsi pada umumnya disebabkan oleh

kecelakaan lalu lintas, perkelahian, terjatuh, kecelakaan olahraga, kekerasan

pada anak. Avulsi yang terjadi pada usia anak sekolah seringkali terjadi pada gigi

yang masih belum mengalami maturasi secara sempurna, sehingga kerusakan

struktur gigi yang terjadi dapat menimbulkan gangguan pada pertumbuhan gigi

selanjutnya. Berdasarkan data penelitian yang dilakukan oleh Quaranta et al.,

insidensi terjadinya avulsi 62% disebabkan oleh kecelakaan yang terjadi di

rumah, 17% terjadi pada saat berolahraga, dan 14% terjadi di tempat lain

(Zakirulla et al., 2011).

2.1.3 Pertolongan Pertama Gigi Avulsi

Pada gigi yang avulsi prognosis terbaik didapat jika gigi segera ditanam

kembali. Jika gigi tidak dapat ditanam kembali dalam waktu 5 menit, sebaiknya

disimpan. Dalam media yang akan membantu menjaga vitalitas serat ligamen

periodontal. Tahapan yang perlu dilakukan pada saat pertolongan pertama pada

gigi avulsi adalah sebagai berikut (Walton dan Torabinejad, 2008) :

a. Bilas gigi dengan air kran mengalir yang dingin selama 10 detik

b. Jangan mengelap gigi

c. Letakkan kembali gigi dalam soketnya dengan tekanan jari yang ringan

d. Pertahankan gigi pada posisinya, bisa juga dilakukan oleh pasien sendiri

e. Cari pertolongan dokter gigi segera

2.2 Replantasi

2.2.1 Definisi

Istilah replantasi ini diartikan sebagai menempatkan kembali gigi pada

soketnya dengan tujuan mencapai pengikatan kembali bila gigi telah terlepas

sama sekali dari soketnya karena kecelakaan (Grossman, 1995).

8

2.2.2 Tujuan Perawatan

Pada gigi sulung perawatan dilakukan untuk mencegah perkembangan

cedera yang lebih lanjut pada penggantinya. Gigi sulung yang teravulsi

sebaiknya tidak ditanam kembali sebab berpotensi merusak benih gigi permanen

(Flores et al., 2007).

Sedangkan pada gigi permanen perawatan bertujuan untuk menanam

gigi sesegera mungkin dan menstabilkan gigi yang sudah di replantasi pada

lokasi anatomis yang benar untuk mengoptimalkan penyembuhan dari ligamen

periodontal dan suplai neurovaskular sambil mempertahankan integritas estetika

dan fungsional, kecuali ketika replantasi terdapat kondisi yang merupakan kontra

indikasi dari replantasi, yaitu (Flores et al., 2007) :

a. Tahap perkembangan gigi anak (risiko ankilosis dimana pertumbuhan

alveolar cukup tinggi)

b. Mengompromikan kondisi medis

c. Mengompromikan integritas gigi yang teravulsi atau jaringan pendukung.

Fleksibel splinting selama 2 minggu diindikasikan. Profilaksis tetanus dan

cakupan antibiotik harus dipertimbangkan (Flores et al., 2007). Strategi

perawatan diarahkan untuk menghindari peradangan yang mungkin terjadi

sebagai akibat kerusakan gigi dan infeksi pulpa (McIntyre et al., 2009).

2.2.3 Replantasi Segera

Jika dilakukan replantasi segera setelah avulsi, maka prognosisnya

semakin baik. Ketika pasien avulsi datang ke praktik dokter gigi dengan kondisi

giginya sudah dimasukkan kembali di tempat cedera, hendaknya dokter gigi

memeriksa baik secara klinik maupun radiologik untuk memeriksa hasil

replantasi yang dilakukannya. Selain itu, periksa juga cedera lain yang mungkin

9

terjadi pada gigi tetangga atau antagonisnya dan stabilitas serta letak gigi yang

direplantasikan tersebut (Walton dan Torabinejad, 2008).

2.2.4 Replantasi dalam Waktu Satu Jam Setelah Avulsi

Jika replantasi segera tidak bisa dilakukan, maka pasien dapat dibawa ke

klinik. Media transport terbaik yang dapat digunakan adalah salin fisiologis. Jika

salin fisiologis tidak tersedia, maka pasien dapat menggunakan susu sebagai

alternatif yang sangat baik. Selain itu, pasien juga dapat menggunakan saliva

sebagai media transportasi sementara air tidak bisa digunakan karena air tidak

bisa mempertahankan kevitalan sel permukaan akar (Walton dan Torabinejad,

2008).

Tahapan yang dilakukan ketika pasien tiba di klinik (Walton dan

Torabinejad, 2008) :

a. Gigi diletakkan pada cawan yang berisi salin fisiologis.

b. Segera lakukan rontgen pada daerah yang terkena cedera untuk melihat

apakah ada fraktur alveolus atau tidak.

c. Lokasi avulsi diperiksa dengan saksama untuk mengetahui ada-tidaknya

serpihan tulang yang harus dibuang. Jika alveolusnya telah runtuh maka

soket dikuakkan dengan instrumen.

d. Soket diirigasi dengan menggunakan salin untuk membuang koagulum

yang terkontaminasi. Lakukan dengan hati-hati.

e. Pada cawan salin, mahkota gigi diangkat dengan menggunakan tang

ekstraksi agar akarnya tidak terkena.

f. Periksa gigi apakah masih mengandung debris, jika masih ada bersihkan

dengan menggunakan kasa yang dibasahi salin.

10

g. Masukkan kembali gigi ke dalam soketnya. Setelah sebagian sudah masuk,

teruskan dengan menekannya perlahan-lahan dengan jari atau pasien

disuruh menggigit kasa sampai giginya kembali ke posisi semula.

h. Ketepatan letak gigi dalam lengkung diperiksa dan koreksi jika ada yang

mengganjal. Luka-luka di jaringan lunak dijahit, terutama di bagian servikal.

i. Gigi distabilkan selama 1 sampai 2 minggu dengan splin.

j. Dianjurkan untuk memberikan antibiotik kepada pasien dengan dosis yang

sama seperti untuk infeksi mulut yang ringan sampai moderat. Injeksi

tetanus penguatan juga dianjurkan jika pemberian tetanus terakhir

dilakukan lebih dari 5 tahun yang lalu.

k. Pasien diberikan perawatan penunjang. Diet lunak dan analgesik diberikan

sesuai dengan keperluan.

2.2.5 Replantasi Lebih dari Satu Jam Setelah Avulsi

Jika gigi telah berada di luar soket lebih dari satu jam dan tidak terjaga

kebasahannya dalam medium yang sesuai, maka sel dan serabut ligamen

periodontium tidak akan bertahan hidup. Oleh karena itu, dapat dilakukan

perawatan sebelum replantasi meliputi pemberian fluor pada permukaan akar

untuk mengurangi (melambatkan) proses resorpsinya (Walton dan Torabinejad,

2008).

Tahapan yang perlu dilakukan ketika pasien tiba di klinik (Walton dan

Torabinejad, 2008) :

a. Periksalah daerah avulsi dan periksa juga gambaran radiografinya untuk

melihat ada-tidaknya fraktur alveolus.

b. Bersihkan debris yang melekat pada permukaan gigi.

11

c. Celupkan gigi ke dalam larutan NaF 2,4% (diasamkan sampai pH 5,5)

selama 5-20 menit.

d. Ekstirpasi pulpa dan saluran akarnya dibersihkan, dibentuk dan diobturasi

seraya giginya dipegang memakai kasa yang dibasahi fluor.

e. Bersihkan soket alveolus dari bekuan darah dengan menyedotnya secara

hati-hati. Kemudian soketnya diirigasi dengan salin. Mungkin perlu untuk

dianestesi terlebih dahulu.

f. Replantasikan gigi dengan hati-hati ke dalam soketnya, letakkan dengan

tepat di lengkungnya dan kontaknya.

g. Pasang splin pada gigi untuk 3 sampai 6 minggu.

2.2.6 Prognosis

Prognosis pada gigi permanen bergantung pada pembentukan

perkembangan akar dan waktu kering pada ekstraoral (Flores et al., 2007). Gigi

memiliki prognosis terbaik jika segera ditanam kembali (Andreasen and

Andreasen, 2007). Jika gigi tidak dapat ditanam kembali dalam waktu 5 menit,

sebaiknya disimpan dalam media yang akan membantu menjaga vitalitas serat

ligamen periodontal (Sigalas et al., 2004). Media penyimpanan terbaik adalah

cairan fisiologis untuk gigi avulsi meliputi Viaspan™, Hank’s Balanced Salt

Solution (media kultur jaringan) dan susu dingin. Untuk media penyimpanan non-

fisiologis lainnya, seperti air liur (disimpan di vestibulum bukal), garam fisiologis,

atau air (Barrett et al., 2005). Meskipun air dapat memberikan efek yang

merugikan viabilitas sel (osmolalitas rendah) dan untuk penyimpanan jangka

panjang (yaitu lebih dari 20 menit) penyimpanan di air dapat memberikan efek

buruk pada penyembuhan ligamen periodontal. Namun hal ini tetap merupakan

pilihan yang lebih baik daripada penyimpanan kering. Risiko ankylosis meningkat

12

secara signifikan dengan waktu kering pada ekstraoral selama 20 menit

(Donaldson and Kinirons, 2005). Waktu kering ekstraoral 60 menit dianggap

sebagai titik di mana kelangsungan hidup sel periodontal akar tidak mungkin

terjadi (Trope, 2002). Pada gigi permanen yang teravulsi, terdapat resiko yang

cukup besar untuk terjadinya nekrosis pulpa, resorpsi akar, dan ankilosis (Barrett

et al., 2005).

2.3 Ligamen Periodontal

Serat periodontal atau ligamen periodontal, biasa disingkat PDL adalah

sekelompok serat jaringan ikat khusus yang pada dasarnya melekatkan gigi ke

tulang alveolar. Serat ini membantu gigi mengatasi gaya tekan alami substansial

yang terjadi selama mengunyah dan tetap tertanam dalam tulang. Fungsi dari

PDL antara lain pendukung jaringan, sensori, suplai nutrisi, homeostatis dan

erupsi (Wolf and Rateitschak, 2005).

Struktur dari PDL terdiri dari sel, dan fiber ekstraseluler. Sel nya meliputi

fibroblas, epitel, undiffrentitated mesenchymal cells, sel tulang dan sementum.

Kompartemen ekstraseluler terdiri dari serat bundel kolagen. Substansi PDL

telah diperkirakan menjadi 70% air dan diperkirakan memiliki efek yang signifikan

pada kemampuan gigi untuk menahan tekanan. PDL adalah bagian dari

periodonsium yang menyediakan lekatan dari gigi ke tulang alveolar sekitarnya.

Tampilan PDL ialah ruang periodontal 0,4-1,5 mm pada radiografi, area

radiolusen antara radiopak lamina dura dari tulang alveolar dan radiopak

sementum (Wolf and Rateitschak, 2005).

2.4 Penyembuhan Luka

Penyembuhan luka adalah respon tubuh terhadap berbagai cedera

dengan proses pemulihan yang kompleks dan dinamis yang menghasilkan

13

pemulihan anatomi dan fungsi secara terus menerus (Joyce M. Black,

2006).

2.4.1 Fase Penyembuhan Luka

Penyembuhan luka melibatkan integrasi proses fisiologis. Sifat

penyembuhan pada semua luka sama, dengan variasinya bergantung

pada lokasi, keparahan dan luasnya cedera. Kemampuan sel dan jaringan

melakukan regenerasi atau kembali struktur normal melalui pertumbuhan

sel juga mempengaruhi penyembuhan luka.

Penyembuhan terjadi dalam beberapa tahap yang terdiri dari:

a. Fase inflamasi

Fase inflamasi merupakan awal dari respon perlindungan tubuh terhadap

adanya luka. Inflamasi membatasi area luka dan menjadi barrier imun yang

melindungi tubuh dari kemungkinan infeksi yang muncul selanjutnya dan

menghalau zat asing berbahaya yang dapat masuk ke dalam tubuh dengan

adanya fagosit dari leukosit. Ketika luka muncul tubuh merespon dengan

mensekresikan histamin yang bertujuan untuk vasodilatasi pembuluh darah dan

peningkatan permeabilitas pembuluh darah di area luka (Sinno, 2013).

Leukosit pertama yang akan muncul adalah Poli morfo nuklear

(PMN) adalah sel pertama yang menuju ke tempat terjadinya luka.

Jumlahnya meningkat cepat dan mencapai puncaknya pada 24 – 48 jam.

Fungsi utamanya adalah memfagositosis bakteri yang masuk. Aktivitas

PMN akan berubah beberapa hari kemudian setelah semua bakteri

penyebab infeksi telah difagositosis. Apoptosis akan terjadi pada PMN

setelah semua bakteri dieliminasi. Elemen imun seluler yang berikutnya

14

adalah makrofag. Sel ini turunan dari monosit yang bersirkulasi, terbentuk

karena proses kemotaksis dan migrasi. Muncul pertama 48 – 96 jam

setelah terjadi luka dan mencapai puncak pada hari ke-3. Makrofag

berumur lebih panjang dibanding dengan sel PMN dan tetap ada di dalam

luka sampai proses penyembuhan berjalan sempurna (Velnar, 2009).

Setelah itu akan muncul limfosit T dengan jumlah bermakna pada hari

ketiga setelah cedera (Jesse, 2005). Limfosit T menghasilkan limfokin

interferon-γ (IFN- γ), yang mengaktivasi makrofag untuk menghasilkan

faktor pertumbuhan seperti Transforming Growth Factor (TGF-ά) yang

berperan terhadap proses reepitelisasi. Epitelial Growth Factor (EGF),

danInsulin – like Growth Factor (IGF) yang bertanggung jawab terhadap

reepitelisasi dan proses mitogen fibroblast. Platelet-Derived Growth Factor

(PDG-F), Transforming Growth Factor (TGF- ), dan Fibroblast Growth

Factor (FGF) yang bertugas terhadap proses mitogen fibroblast,

angiogenesis dan reepitelisasi. Vaskular Endhotelial Growth Factor

(VEGF) yang menginduksi terjadinya angiogenesis. Peningkatan

proliferasi fibroblast, reepitelisasi dan angiogenesis akan mempercepat

penyembuhan luka (Robbins, 2013).

b. Fase Proliferasi (Regenerasi)

Fase proliferasi disebut juga fase fibroplasia, yang berlangsung

sejak akhir fase inflamasi sampai sekitar akhir minggu ketiga. Pada fase

ini, sel fibroblas berproliferasi (memperbanyak diri). Fibroblas

menghasilkan mukopolisakarida, asam amino dan prolin yang merupakan

15

bahan dasar kolagen yang akan mempersatukan tepi luka. Fase ini

dipengaruhi oleh substansi yang disebut growth factor. Pada fase ini

terjadi proses angiogenesis, yaitu proses pembentukan kapiler baru untuk

menghantarkan nutrisi dan oksigen ke daerah luka. Angiogenesis

distimulasi oleh suatu growth factor yaitu TNF-α2 (Tumor Necrosis Factor-

alpha2). Setelah itu terjadi granulasi, yaitu pembentukan jaringan

kemerahan yang mengandung kapiler pada dasar luka dengan

permukaan yang berbenjol halus (jaringan granulasi) lalu terjadi fase

Kontraksi dimana, tepi-tepi luka akan tertarik ke arah tengah luka yang

disebabkan oleh kerja miofibroblas sehingga mengurangi luas luka.

Proses ini kemungkinan dimediasi oleh TGF-β (Transforming Growth

Factor-beta), setelah fase kontraksi terjadi proses re-epitelisasi yang

merupakan proses pembentukan epitel baru pada permukaan luka. Sel-

sel epitel bermigrasi dari tepi luka mengisi permukaan luka. EGF

(Epidermal Growth Factor) berperan utama dalam proses ini (Orsted and

Keast, 2011).

c. Fase Maturasi (Remodelling)

Maturasi, yang merupakan tahap akhir proses penyembuhan luka, fase

ini berlangsung dari hari ke 7 sampai dengan 1 tahun tergantung pada

kedalaman dan keluasan luka. Fase maturasi ditandai dengan adanya

pematangan epitelisasi, pematangan angiogenesis, pembentukan jaringan

granulasi, dan deposisi kolagen. Mekanisme epitelisasi yang terjadi yaitu dengan

proliferasi sel-sel epitel di bawah luka, sel-sel epitel bermigrasi dari bawah luka

ke atas kemudian membentuk epidermis normal kembali. Neovaskularisasi

16

berguna untuk menyalurkan nutrisi dan oksigen ke area luka untuk menjaga

proliferasi jaringan granulasi terjadi dengan semestinya, serta berguna untuk

memfasilitasi makrofag dan fibroblast untuk lebih mudah bergerak ke area luka.

Makrofag berfungsi untuk terus mensekresikan growth factor dan fibroblast

berfungsi untuk mensintesis, mendeposisi, dan remodeling matriks ekstraseluler

(Sinno, 2013).

Fase maturasi yang telah selesai ditandai oleh terbentuknya jaringan

parut bahkan terkadang terbentuk jaringan keloid pada bekas luka yang telah

sembuh .Hal ini terjadi karena penyembuhan luka terjadi secara repair bukan

terjadi secara regenerasi. Fase maturasi terjadi pada 14-20 hari pasca terjadinya

luka (Flanagan, 2005).

2.4.2 Faktor yang Mempengaruhi Penyembuhan Luka

Penyembuhan luka merupakan suatu proses yang kompleks dan

dinamis karena merupakan suatu kegiatan bioseluler dan biokimia yang

terjadi saling berkesinambungan. Proses penyembuhan luka tidak hanya

terbatas pada proses regenerasi yang bersifat lokal saja pada luka,

namun dipengaruhi pula oleh faktor intrinsik dan faktor ekstrinsik

(Indonesia Enterostomal Therapy Nurse Association, 2004), yaitu :

1. Faktor Instrinsik adalah faktor dari penderita yang dapat berpengaruh dalam

proses penyembuhan meliputi: usia, status nutrisi dan hidrasi, oksigenasi

dan perfusi jaringan, status imunologi, dan penyakit penyerta (hipertensi,

DM, dan arthereosclerosis).

17

2. Faktor Ekstrinsik adalah faktor yang didapat dari luar penderita yang dapat

berpengaruh dalam proses penyembuhan luka, meliputi: pengobatan,

radiasi, stres psikologis, infeksi, iskemia dan trauma jaringan.

2.4 Sel T CD4+ dan T CD8+

Sistem yang berfungsi melindungi tubuh manusia dari unsur-unsur

patogen disebut sistem imun. Sistem imun terdiri dari komponen genetik,

molekuler dan seluler yang berinteraksi secara luas dalam merespon antigen

endogenus dan eksogenus. Salah satu jenis sel yang berfungsi dalam merespon

antigen adalah limfosit (Baratawidjaja, 2002).

Sel limfosit merupakan sel dengan inti yang besar dan bulat serta

memiliki sedikit plasma. Pada manusia diperkirakan sekitar 3.5×1010 limfosit

setiap hari masuk ke dalam sirkulasi darah. Menurut Guyton (1998), persentase

limfosit di dalam darah putih adalah sekitar 30%. Limfosit mampu bertahan hidup

selama bertahun-tahun. Menurut Alberts B et al. (2002), sel limfosit berperan

dalam sistem perlindungan tubuh dengan mensintesis dan mensekresi antibodi

atau immunoglobulin ke dalam jaringan darah sebagai respon terhadap

keberadaan benda asing. Sel limfosit selain dalam darah, terdapat pula pada

organ limfoid seperti limpa, kelenjar limfe dan timus (Baratawidjaja, 2000).

Sistem imun pada manusia terdapat dalam sel darah putih, tepatnya

pada limfosit. Di dalam limfosit terdapat sel T yang berperan penting terhadap

kekebalan selular. Sel T mampu membedakan jenis sel asing dengan

kemampuan berevolusi sepanjang waktu demi peningkatan kekebalan setiap kali

tubuh terpapar oleh sel asing. Ada beberapa jenis sel T, diantaranya adalah sel T

CD4+ dan sel T CD8+. Sel T CD4+ merupakan jenis sel T helper yang disintesis

di dalam kelenjar timus, sel ini akan terbawa oleh sirkulasi darah hingga masuk

18

ke dalam limpa dan bermigrasi ke dalam jaringan limfatik, kemudian bermigrasi

kembali ke dalam sirkulasi darah, hingga suatu saat terjadi stimulasi oleh antigen

tertentu dengan ikatan pada molekul MHC kelas II. Sedangkan sel T CD8+

merupakan sel T sitotoksik yang dapat menghancurkan sel tumor, dan sel yang

terinfeksi virus serta dapat pula menyerang sel dan jaringan yang

ditransplantasikan. Sel T CD8+ memiliki glikoprotein CD8+ pada permukaan sel

yang mengikat antigen MHC kelas I (Roitt, 2001).

Gambar 2.2 MHC Kelas I dan II yang membatasi sel T-helper dan sel T sitotoksik (Roitt, 2011)

Sel limfosit T atau sel T merupakan 65-80% dari jumlah limfosit yang ada

dalam sirkulasi darah. Dalam perkembangannya di timus, sel T mengekspresikan

berbagai macam antigen permukaan seperti CD4+ dan CD8+. Namun dalam

perkembangan selanjutnya, sebagian antigen itu menghilang dan sebagian lagi

menetap menandai subset sel T (Kresno, 2010).

Sel yang kehilangan antigen CD4+ tetapi tetap menunjukkan antigen

CD8+ akan menjadi sel T suppresor (Ts) dan sel T sitotoksik (Tc). Sedangkan sel

yang kehilangan CD8+ tetapi tetap menunjukkan CD4+ akan menjadi sel T

19

helper (Th). Berdasarkan antigen permukaannya, maka sel Ts dan Tc lebih

dikenal sebagai CD8+, sedangkan sel Th lebih dikenal sebagai CD4+ (Semba,

2008). Semua subset sel T ditandai oleh molekul protein CD3 (Roitt, 2001).

CD8+ merupakan sel Ts (T-suppresor), yaitu sel penekan, yang

mengakhiri tanggapan kekebalan atau proses inflamasi. Sel CD8+ juga

merupakan sel Tc (T sitotoksik), yaitu sel pembunuh, karena sel tersebut

membunuh sel-sel yang telah termutasi (sel kanker) dan sel-sel yang telah

terinfeksi virus (Ajani et al., 1998). Mekanisme pembunuhan sel yang terinfeksi

virus oleh sel Tc dapat dilihat pada Gambar 2.3.

Gambar 2.3 Mekanisme pembunuhan sel yang terinfeksi virus oleh sel T sitotoksik (Roitt, 2011)

Sel CD4+ dapat dibedakan dari sel CD8+ berdasarkan protein tertentu

yang ada di permukaan sel. Sel CD4+ adalah sel-T yang mempunyai protein

CD4+ pada permukaannya (Roittt, 2011). CD4+ yang merupakan penanda

permukaan sel Th adalah rantai protein glikosilat tunggal dengan berat molekul

sekitar 55-62 kDA. Ada 2 jenis sel Th yang dikelompokkan berdasarkan

fungsinya, yaitu sel Th1 yang berfungsi untuk produksi IL-2 dan IFNγ yang

berkaitan dengan fungsi sitotoksisitas (aktivasi makrofag) dan inflamasi lokal.

20

Aktivasi makrofag oleh sel Th dapat dilihat pada Gambar 6. Sel Th yang lainnya

adalah sel Th2 yang berfungsi untuk produksi IL- 4, IL-5, IL-6 dan IL-10 yang

dapat memberikan sinyal positif pada sel B sehingga sel B dapat menghasilkan

antibodi.

Gambar 2.4 Aktivasi sel Th oleh makrofag (Roitt, 2011)

CD4+ merupakan protein penanda sel Th yang dapat meningkatkan

aktivasi dan maturasi sel B dan sel T sitotoksik serta dapat mengatur reaksi

peradangan menahun yang spesifik terhadap antigen melalui stimulasi makrofag.

Molekul CD4+ membentuk ikatan tambahan dengan MHC kelas II pada antigen.

Kadar normal CD4+ dalam darah orang dewasa berkisar 500-1500 sel/mm3

darah atau sekitar 20-40% dari jumlah total limfosit. Ada juga yang menyebutkan

jumlahnya sekitar 31-61% dari jumlah total limfosit. Sedangkan kadar normal

CD8+ dalam darah orang dewasa berkisar 375-1100 sel/mm3 darah atau sekitar

18- 39% dari jumlah total limfosit (WHO, 2008). CD4+ dan CD8+ mempunyai

peran yang saling melengkapi satu sama lain. CD4+ menghasilkan sitokin yang

dapat mengaktifkan makrofag dan meningkatkan IL2 untuk mengaktifkan CD8+,

yang akhirnya dapat menghancurkan sel yang terinfeksi (Roitt, 2001).

21

2.5 Inflamasi

Inflamasi adalah respon fisiologis tubuh terhadap suatu injuri dan

gangguan oleh faktor eksternal Inflamasi terbagi menjadi dua pola dasar.

Inflamasi akut adalah radang yang berlansung relatif singkat, dari beberapa

menit sampai beberapa hari, dan ditandai dengan perubahan vaskular, eksudasi

cairan dan protein plasma serta akumulasi neutrofil yang menonjol. Inflamasi

akut dapat berkembang menjadi suatu inflamasi kronis jika agen penyebab injuri

masih tetap ada. Inflamasi kronis adalah respon proliferatif dimana terjadi

proliferasi fibroblas, endotelium vaskuler, dan infiltrasi sel mononuklear (limfosit,

sel plasma dan makrofag). Respon peradangan meliputi suatu suatu perangkat

kompleks yang mempengaruhi perubahan vaskular dan selular (Sudiono, 2003).

2.6 Aloe vera

2.6.1 Definisi

Aloe vera merupakan salah satu jenis obat-obatan popular asli Afrika,

yang termasuk golongan Liliaceae. Berkembangnya ilmu pengetahuan dan

teknologi sekarang ini, memperluas pemanfaatan khasiat Aloe vera.

Pemanfaatan Aloe vera kini tidak hanya terbatas pada tanaman hias saja tetapi

juga sebagai obat dan bahan baku pada industri kosmetika (Kusmawati, 2009).

Aloe vera adalah tanaman yang semua bagian tumbuhannya bermanfaat,

pelepah Aloe vera dapat dikelompokan menjadi 3 bagian yang dapat digunakan

untuk pengobatan antara lain; daun, keseluruhan daunnya dapat digunakan baik

secara langsung atau dalam bentuk ekstrak, kemudian eksudat, adalah getah

yang keluar dari dalam saat dilakukan pemotongan, eksudat ini berbentuk kental

berwarna kuning dan rasanya pahit. Kemudian gel, adalah bagian yang berlendir

yang diperoleh dengan cara menyayat bagian dalam daun. Di dalam gel Aloe

22

vera ini dipercaya mengandung berbagai zat aktif dan enzim yang sangat

berguna untuk menyembuhkan berbagai penyakit. Karena kandungan zat aktif

dan enzim inilah maka sifat gel ini sangat sensitif terhadap suhu, udara dan

cahaya, serta sangat mudah teroksidasi sehingga mudah berubah warna

menjadi kuning hingga coklat (Furnawanthi, 2004).

Aloe vera telah lama dijuluki sebagai tanaman obat, bahkan master

healing plant, (tanaman penyembuh utama). Gel Aloe vera memiliki aktivitas

sebagai antibakteri, antijamur, peningkat aliran darah ke daerah yang terluka dan

penstimulasi fibroblast yang bertanggung jawab untuk penyembuhan luka.

Publikasi pada American Pediatric Medical Association menunjukan bahwa

pemberian gel Aloe vera pada hewan coba, baik dengan cara diminum ataupun

dioles pada permukaan kulit, dapat mempercepat penyembuhan luka

(Rieuwpassa, 2011).

2.6.2 Jenis dan taksonomi Aloe vera

Terdapat lebih dari 350 jenis Aloe vera yang termasuk dalam suku

liliaceae. Disamping itu tidak sedikit Aloe vera yang merupakan hasil persilangan.

Ada tiga jenis Aloe vera yang dibudidayakan secara komersial di dunia, yakni

Curacao Aloe atau Aloe vera (Aloe Berbadensis Miller), Cape Aloe atau Aloe

Ferox Miller, dan Socotrine Aloe yang salah satunya adalah Aloe Perryi Baker

(Furnawanthi, 2007). Aloe vera yang banyak dimanfaatkan adalah spesies Aloe

Barbadensis Miller yang ditemukan oleh Philip Miller, seorang pakar botani yang

berasal dari Inggris, pada tahun 1768. Aloe berbadensis Miller mempunyai

beberapa keunggulan, diantaranya tahan hama, ukurannya lebih panjang, yakni

dapat mencapai 121 cm, berat perbatangnya dapat mencapai 4 kg, dan

mengandung 75 nutrisi. Disamping itu, Aloe vera ini aman dikonsumsi, karena

23

mengandung zat polisakarida (terutama glukomannan) yang bekerja sama

dengan asam amino esensial dan sekunder serta bagian enzim. Aloe

barbadensis Miller mempunyai nama sinonim yang binomial yakni Aloe vera dan

Aloe vulgaris. Klasifikasi Aloe vera adalah sebagai berikut (Banvard dan Elaine,

2003) :

Kingdom : Plantae

Filum : Anthophyta

Kelas : Monocotyledonae

Sub kelas : Liliidae

Ordo : Liliales

Famil : Aloeaceae

Genus : Aloe

Spesies : Barbadensis

Jenis yang banyak dikembangkan di Asia termasuk Indonesia, adalah

Aloe chinensis Baker, yang berasal dari Cina, tetapi bukan tanaman asli Cina.

Jenis ini di Indonesia sudah ditanam secara komersial di Kalimantan Barat dan

lebih dikenal dengan nama lidah buaya Pontianak, yang dideskripsikan oleh

Baker pada tahun 1877 (Furnawanthi, 2007).

2.6.3 Morfologi Aloe Vera

Gambar 2.5 Aloe vera (Jatnika dan Saptoningsih, 2009)

24

a. Akar

Tanaman Aloe vera berakar serabut pendek dan tumbuh menyebar di

batang bagian bawah tanaman (tumbuh kearah samping). Akibatnya, tanaman

mudah tumbang karena akar tidak cukup kuat menahan beban daun Aloe vera

yang cukup berat. Panjang akarnya mencapai 30-40 cm (Jatnika dan

Saptoningsih, 2009).

b. Batang

Umumnya batang Aloe vera tidak terlalu besar dan relative pendek

(sekitar 10 cm). Penampakan batang tidak terlihat jelas karena tertutup oleh

pelepah daun. Jika pelepah daun Aloe vera telah dipotong (dipanen) beberapa

kali, batang akan tampak dengan jelas (Jatnika dan Saptoningsih, 2009).

c. Daun

Letak daun Aloe vera berhadap-hadapan dan mempunyai bentuk yang

sama, yakni daun tebal dengan ujung yang runcing mengarah ke atas. Daun

memiliki duri yang terletak di tepi daun. Setiap jenis Aloe vera yang satu dan

yang lain memiliki penampakan fisik daun yang berbeda (Jatnika dan

Saptoningsih, 2009).

d. Bunga

Bunga Aloe vera memiliki warna bervariasi, berkelamin dua (bisexual)

dengan ukuran panjang 50-70 mm. Bunga ini berbentuk seperti lonceng, terletak

di ujung atau suatu tangkai yang keluar dari ketiak daun dan bercabang. Panjang

tangkai 50-100 cm dan bertekstur cukup keras serta tidak mudah patah. Bunga

Aloe vera mampu bertahan 1-2 minggu. Setelah itu, bunga akan rontok dan

tangkainya mongering (Jatnika dan Saptoningsih, 2009).

25

e. Biji

Biji dihasilkan dari bunga yang telah mengalami penyerbukan.

Penyerbukan biasanya dilakukan oleh burung atau serangga lainnya. Namun,

jenis Aloe barbadensis dan Aloe chinensis tidak membentuk biji atau tidak

mengalami penyerbukan. Kegagalan ini diduga disebabkan oleh serbuk sari steril

(pollen sterility) dan ketidaksesuaian diri (self incompatibility). Karena itu, kedua

jenis tanaman ini berkembang biak secara vegetative melalui anakan (Jatnika

dan Saptoningsih, 2009).

2.6.4 Kandungan Aloe vera

Tanaman Aloe vera mengandung 99-99,5 % air, dengan pH rata-rata 4,5

yang mengandung Acemannan. Acemannan adalah fraksi karbohidrat terbanyak

di dalam gel, merupakan polimer mannose rantai panjang yang larut dalam air,

berguna untuk mempercepat penyembuhan, memodulasi fungsi imun

(mengaktivasi makrofag dan produksi sitokin), antineoplastik dan antivirus

(Wiedosari, 2007).

Kandungan dan fungsi dari zat aktif yang terdapat pada tanaman Aloe

vera menurut Fumawanthi (2004) antara lain adalah Lignin mempunyai

kemampuan penyerapan yang tinggi sehingga memudahkan peresapan gel ke

dalam kulit atau mukosa; Saponin mampu membersihkan dan bersifat antiseptik,

serta bahan pencuci yang baik; Anthraguinone sebagai bahan laksatif,

penghilang rasa sakit, mengurangi racun, dan sebagai antibiotik; Acemannan

sebagai anti virus, anti bakteri, anti jamur, dan dapat meghancurkan sel tumor,

serta meningkatkan daya tahan tubuh; Enzim Bradykinase dan Karbiksipeptidase

sebagai anti inflamasi, anti alergi, dan dapat mengurangi rasa sakit;

Glukomannan dan Mukopolysakarida memberikan efek imunomodulasi; Tannin

26

dan Aloctin A sebagai anti inflamasi; Salisilat menghilangkan rasa sakit dan anti

inflamasi; Asam Amino sebagai bahan untuk pertumbuhan dan perbaikan, serta

sebagai sumber energy. Aloe vera menyediakan 20 asam amino dari 22 asam

amino yang dibutuhkan oleh tubuh; Mineral yang memberikan ketahanan tubuh

terhadap penyakit; Vitamin A, B1, B2, B6, B12, C, E dan asam folat sebagai

bahan penting untuk menjalankan fungsi tubuh secara normal dan sehat.

Tabel 2.1 Ringkasan komposisi dari Aloe vera

Kelas Komposisi Kegunaan

Antrakuinon /

anthrone

Aloe-emodin, asam-aloetic,

anthranol, barbaloin, isobarbaloin,

emodin, ester dari asam cinnamic.

Aloin dan emodin

berfungsi sebagai

analgesic, antibakteri

dan antivirus.

Karbohidrat Mannan murni, mannan

terasetilasi, glukomanan asetat,

glukan galactomannan, glukan,

galactogalacturan,

arabinogalactan, zat

pecticgalactoglucoarabinomannan,

xylan, selulosa.

Mengandung

glikoprotein dengan

sifat anti alergi, disebut

alprogen dan senyawa

anti-inflamasi.

Chromones 8-C-glusoly-(2’-O-cinnamoly)

-7-O-methylaloediol A,

8-C-glucosyl-(S)-aloesol,

8-C-glucosyl-7-O-methylaloediol A,

8-C-glucosyl-7-0-methylaloediol,

8-C-glucosyl-noreuhenin,

isoaloeresin D, isorabaichromone,

neoalosin A.

Mengandung zat anti-

inflamasi terbaru.

Enzim Alkali fosfatase, amilase,

bradikinase, Carboxypeptidase,

katalase, Siklooksidase,

siklooksigenase, lipase, oksidase,

fosfoenolpiruvat, karboksilase,

Bradikinase membantu

mengurangi inflamasi

berlebihan bila

diaplikasikan pada kulit

secara topical,

27

superoksida dismutase. sementara zat lain

membantu dalam

pemecahan gula dan

lemak.

Komposisi

inorganic

Kalsium, klorin, kromium, tembaga,

besi, magnesium, mangan, kalium,

fosfor, sodium, seng.

Zat tersebut sangat

penting dalam berbagai

sistem enzim pada jalur

metabolism yang

berbeda dan beberapa

antioksidan.

Protein Lektin dan substansi mirip lektin Juga mengandung

asam salisilat yang

memiliki anti-inflamasi

dan sifat antibakteri.

Lignin, sebagai zat

inert, ketika

dimasukkan dalam

persiapan topical,

meningkatkan efek

penetrasi bahan lain

kedalam kulit. Saponin

yang merupakan zat

sabun sekitar 3% dari

gel berfungsi sebagai

pembersih dan

antiseptik.

Vitamin Vitamin A, B12, C, E, kolim dan

asam folat

Vitamin A, C, E, berfungsi sebagai anti oksidan yang menangkal radikal bebas

Hormon Auksin dan giberelin Membantu dalam penyembuhan luka dan sebagai anti-inflamasi

(Sumber : Mogaddhasi S, Verma SK, 2011)

28

Aloe vera memiliki cairan bening seperti jeli dan cairan berwarna

kekuningan yang mengandung aloin. Cairan ini berasal dari lateks yang terdapat

di bagian luar kulit Aloe vera. Cairan yang mengandung aloin ini banyak

dimanfaatkan sebagai obat pencahar komersial. Daging Aloe vera mengandung

lebih dari 200 komponen kimia dan nutrisi alami yang secara bersinergi dan

menghasilkan khasiat tertentu. Berikut ini merupakan komponen kimia yang

terkandung dalam Aloe vera.

Tabel 2.2 Komponen kimia Aloe vera berdasarkan manfaatnya

Zat Manfaat

Lignin Memiliki kemampuan penyerapan yang

tinggi yang memudahkan peresapan gel ke

kulit sehingga mampu melindungi kulit dari

dehidrasi dan menjaga kelembapan kulit.

Saponin - Memiliki kemampuan membersihkan

(aspetik)

- Sebagai bahan pencuci yang sangat

baik

Komplek antharaquinon aloin,

barbaloin, iso-barbaloin,

anthranol, aloe emodin,

anthracene, aloetic acid, asam

sinamat, asam krisophanat,

eterat oil, dan resistanol

- Bahan laksatif

- Penghilang rasa sakit

- Mengurangi racun

- Senyawa antibakteri

- Mempunyai kandungan antibiotic

Kalium dan Natrium - Memelihara kekencangan muka dan otot

tubuh

- Regulasi dan metabolism tubuh dan

penting dalam pengaturan impuls saraf

Kalsium Membantu pembentukan dan regenerasi

tulang

Seng (Zn) Bermanfaat bagi kesehatan saluran air

kencing

29

Asam folat Bermanfaat bagi kesehatan kulit dan

rambut

Vitamin A Berfungsi untuk oksigenasi jaringan tubuh,

terutama kulit dan kuku

Vitamin B1, B2, B6, B12, C, E,

Niacinamida, dan Kolin

Berfungsi untuk menjalankan fungsi tubuh

secara normal dan sehat

Enzim oksidase, amylase,

katalase, lipase, dan protease

- Mengatur berbagai proses kimia dalam

tubuh

- Menyembuhkan luka dalam dan luar

Enzim protease bekerja sama

dengan glukomannan

Penghilang rasa nyeri saat luka

Asam krisofan Mendorong penyembuhan kulit yang

mengalami kerusakan

Mono dan polisakarida

(Selulosa, glukosa, mannose,

dan aldopentosa)

- Memenuhi kebutuhan metabolism tubuh

- Berfungsi untuk memproduksi

mukopolisakarida

Salisilat

Mukopolysakarida

- Anti inflamasi dan menghilangkan rasa

sakit

- Memberi efek imonomodulasi

Tennin, Aloctin A Sebagai anti inflamasi

Indometasin Mengurangi edema

Asam Amino Untuk pertumbuhan dan perbaikan serta

sebagai sumber energy. Aloe vera

menyediakan 20 dari 22 asam amino yang

dibutuhkan tubuh

Mineral Memberikan ketahanan tubuh terhadap

penyakit dan berinteraksi dengan vitamin

untuk fungsi tubuh

(Sumber : Jatnika dan Saptoningsih, 2009)

30

Tabel 2.3 Komponen bioaktif yang terkandung pada Aloe vera L.

Komponen Bioaktif Fungsionalitas

Acemannan Anti-inflammatory, wound healing, anti-kanker, anti virus, UV sunburn

Glikoprotein Anti-diabetes, anti-kanker

Aloe emodin Anti-kanker, anti-mikroba

Lectin Anti-inflammatory, wound healing, anti-kanker

Barbaloin dan komponen fenolik (Flavonoid)

Anti-mikroba

Alomicin Anti-kanker

(Sumber : Kismaryanti, 2007) 2.6.4.1 Acemannan

Aloe vera terdiri dari berbagai macam senyawa yang dapat dibagi

menjadi tiga kelompok. Kelompok pertama, gula kompleks

(diantaranya acemannan), berada di dalam gel daun dan memiliki kemampuan

untuk merangsang kekebalan. Kelompok kedua, antrakuinon, yang terkandung di

bagian terluar dari kulit yang dapat berfungsi sebagai pencahar yang kuat

(Bassetti A, 2005).

Aloe vera mengandung acemannan. Acemannan adalah karbohidrat

kompleks yang memiliki rantai sangat panjang. Acemannan yang terkandung

dalam Aloe vera mempunyai aktivitas antiinflamasi imunosupresi serta

antioksidan karena menghambat aktivitas mediator inflamasi yaitu bradykinin

(Yagi A., 2003).

Acemannan (acetylated mannosa) merupakan salah satu komponen

polisakarida yang memiliki aktifitas antimikroba dengan kemampuannya

menstimulasi leukosit fagositik. mampu untuk memulihkan dan meningkatkan

kekebalan tubuh dengan merangsang produksi makrofag dan meningkatkan

aktifitas limfosit T. Acemannan juga menghasilkan agen kekebalan tubuh seperti

31

interferon dan interleukin yang membantu dalam menghancurkan virus, bakteri,

dan sel-sel tumor (Kathuria, 2011).

2.6.5 Aloe vera sebagai Imunomodulator

Dari penelitian diketahui, apabila acemannan diinkubasi bersama

suspense monosit, respon limfosit T akan meningkat terhadap lektin dan akan

meningkatkan sekresi IL-1. Selanjutnya diketahui bahwa, acemannan

merupakan fraksi karbohidrat yang diisolasi dari gel daun Aloe vera dapat

menstimulasi makrofag cell line RAW 264, menyebabkan peningkatan produksi

sitokin IL-6 dan TNF-a, pelepasan nitrit oksida, ekspresi molekul permukaan dan

perubahan morfologi dari sel makrofag (Wiedosari, 2007).

Sebagai imunodulator, Aloe vera dapat meningkatkan aktivitas anti-

kanker pada pengobatan menggunakan melatonin. Acemannan meningkatkan

aktivitas makrofag dari sistem imun sistemik terutama dalam darah dan limpa

serta meningkatkan produksi NO makrofag. Fraksi karbohidrat dari gel Aloe vera

(acemannan) dapat meningkatkan produksi IL-12 dan maturasi dari sel dendritic

sehingga sel dendritic sebagai antigen presenting cell (APC) dapat meningkatkan

ekspresi molekul major histocompability complex (MHC) kelas II, dengan

demikian fungsi limfosit ThCD4++ menjadi optimal (Wiedosari, 2007).

2.6.6 Peran Aloe vera dalam Penyembuhan Luka

Aloe vera memiliki sistem penghambat yang menghalangi rasa sakit dan

peradangan serta sistem stimulasi yang meningkatkan penyembuhan luka.

Pengujian laboratorium independen tentang Aloe vera menunjukkan aktivitas

Aloe vera dalam modulasi antibodi dan kekebalan seluler. Topikal steroid

biasanya digunakan untuk memblokir peradangan akut dan kronis. Mereka

menurunkan edema dengan mengurangi permeabilitas kapiler, vasodilatasi dan

32

menstabilkan membran lisosom. Aloe vera dapat merangsang pertumbuhan

fibroblas untuk meningkatkan penyembuhan luka dan menghalangi penyebaran

infeksi. Penelitian menunjukkan bahwa hanya sekitar 1% dari steroid dapat

menembus stratum korneum kulit, dan 99% terbuang. Data penelitian ini

menunjukkan bahwa Aloe vera dapat bertindak sebagai kendaraan bagi steroid

untuk meningkatkan penyerapan dan bertindak sebagai pembawa yang efisien.

Penggunaan Aloe vera adalah pertimbangan ekonomi yang signifikan.

Kompleksitas komponen Aloe vera, membuat studi penelitian tentang aktifitas

inflamasi dari Aloe vera sebagai sebuah tugas yang sulit (Davis, 2006).

Aloe vera tidak memiliki mekanisme tunggal. Aloe vera mengandung

asam amino seperti phenylalanine dan trytophane yang memiliki aktifitas anti-

inflamasi. Asam salisilat dalam Aloe vera mencegah biosintesis prostaglandin

dari asam arakidonat. Hal ini menjelaskan bagaimana tanaman ini dapat

mengurangi vasodilatasi dan mengurangi efek vaskular dari histamin, seretonin

dan mediator inflamasi lainnya. Prostaglandin memainkan peran integral dalam

mengatur baik peradangan dan reaksi kekebalan tubuh. Aloe vera dapat

mempengaruhi kedua sistem ini dengan memblokir sintesis prostaglandin. Efek

analgesik Aloe vera sinergis dengan aspirin. Aloe vera memiliki komponen

stimulasi dan penghambatan. Aloe vera dapat memodulasi baik reaksi kekebalan

maupun reaksi inflamasi. Aloe vera dapat bertindak sebagai stimulator

penyembuhan luka dan produksi antibodi. Aloe vera dapat memblokir sintesis

prostaglandin dan memodulasi produksi limfosit dan makrofag derivat mediator

(limphokinins) termasuk interleukins dan interferon. Aloe vera disamping memiliki

efek pada reaksi inflamasi dan reaksi kekebalan, juga mengurangi oksigen

radikal bebas yang dihasilkan oleh PMN. Vitamin C dalam Aloe vera

33

menghambat peradangan, mengambil radikal oksigen untuk memblokir proses

inflamasi. Vitamin E, yang dikenal sebagai anti oksidan, juga merupakan

komponen Aloe vera. Efek-efek biologis dari karya orkestra Aloe vera,

bekerjasama dengan konduktor (polisakarida) menghasilkan efek terapi yang

berharga (Davis, 2006).

Komponen yang kurang diserap stratum korneum membutuhkan

kendaraan untuk membantu mereka dalam penetrasi. Penelitian menunjukkan

bahwa Aloe vera membantu dalam penyerapan vitamin C dan menambah

aktivitas biologisnya. Aloe vera dapat melarutkan senyawa larut air serta zat larut

lipid. Selain itu dapat melalui membran sel stratum korneum untuk membantu

berbagai bahan dalam menembus kulit. Aktivitas biologis Aloe vera dapat

bertambah, bahkan bersinergi dengan banyak agen dalam meningkatkan efek

terapi (Davis, 2006).

Penelitian yang dilakukan oleh Meitha Widurini, seorang staf pengajar

Biologi Mulut Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Indonesia, menggunakan

Aloe vera konsentrasi 100% yang diaplikasikan pada radang mukosa mulut

tikus, ternyata dapat menurunkan radang mukosa mulut tikus. Didapatkan hasil

bahwa Aloe vera tidak mempunyai mekanisme tunggal sebagai anti inflamasi.

Tanaman ini mengandung berbagai macam unsur dan zat yang dipercaya dapat

bertindak sebagai agen anti-inflamasi, antara lain asam salisilat vitamin,

polisakarida dan asam lemak. Disamping itu terdapat pula indometasin yang

dapat mengurangi edema, menghambat enzim siklo-oksigenase dan

menghambat motilitas dari dari leukosit poly morpho nuklear (PMN) yang bila

jumlahnya berlebihan dapat merusak jaringan. Dikatakan pula bahwa

sebenarnya daun Aloe vera yang berkhasiat sebagai pengobatan tradisional dan

34

dapat menyembuhkan penyakit atau kelainan pada tubuh adalah hasil dari

interaksi keseluruhan unsur-unsur pokok yang terkandung dalam Aloe vera dan

bila masing-masing unsur tersebut dipisahkan maka khasiat atau manfaatnya

akan berkurang (Widurini, 2003).

2.7 Anatomi Gigi Tikus

Tikus galur Wistar merupakan hewan mamalia yang sering digunakan

dalam percobaan dengan perlakuan secara konvensional. Tikus galur Wistar

dapat digunakan mewakili mamalia termasuk manusia karena mempunyai alat

pencernaan, kebutuhan nutrisi dan homestatis serupa manusia (Smith, 2000).

Tikus putih telah digunakan secara efektif sebagai hewan coba untuk

mempelajari keadaan biologi dan patologi dari jaringan rongga mulut. Spesies ini

telah berguna dalam penelitian dokter gigi untuk menjelaskan informasi biologi

yang berharga untuk membuktikan pengertian dari mekanisme dasar proses

penyakit, untuk eksperimen secara klinik dan epidemiologi yang dimaksud untuk

memberikan informasi yang dapat diaplikasikan secara langsung pada manusia

(Smith, 2007).

Insisivus adalah gigi yang berada paling depan pada mamalia. Pada

tikus, terdapat 4 buah, panjang, tajam, dua rahang atas, dan dua dirahang

bawah. Insisivus tikus memiliki fungsi untuk menggigit. Akarnya terbuka yang

berarti akan terus tumbuh selama tikus masih hidup. molar adalah gigi yang

berada dibelakang pada rongga mulut dan digunakan untuk mengahancurkan

atau menghaluskan makanan untuk ditelan. Tikus memiliki 12 molar, 6 buah

rahang atas dan bawah. Molar tidak pernah dihilangkan. Tikus hanya memiliki

satu fase gigi dalam hidupnya (monophydont) (Sharon, 2005). Tikus memiliki

35

jarak yang lebar antara gigi insisivus dan molar pada rongga mulut yang disebut

dengan diastema dikarenakan tikus tidak memiliki gigi Caninus dan Premolar.

Jumlah gigi yang berbeda pada spesies ini dapat dijelaskan dengan dentl

formula, yang ditulis dengan i n/n C n/n P n/n M n/n, dimana I, C, P, dan M

mempresentasikan gigi Insisivus, Caninus, Premolar, dan Molar serta n/n

mempresentasikan jumlah gigi pada rahang atas dan bawah pada tiap sisi

rahang. Sehingga formula untuk gigi tikus adalah I 1-1, C 0-0, P 0-0, M 3-3. Tikus

memiliki 8 gigi pada rahang atas dan bawah, totalnya 16 gigi (Hirotaka, 2007).

Gambar 2.6 Anatomi Gigi Tikus (Hirotaka, 2007)

35

BAB 3

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep

IL-12

IL-2

Gigi Avulsi

Inflamasi

Replantasi

Luka pasca

replantasi

Aktivasi Limfosit

Th CD4+ ↓

Aktivasi Makrofag ↑ IFN-ɣ

Gel Aloe vera

mengandung

antrakuinon

Proliferasi

fibroblas ↑

Angiogenesis ↑

Penyembuhan luka

pasca replantasi

Keterangan:

= variabel yang

diteliti

= variabel yang

tidak diteliti

= mempengaruhi

= tidak diteliti

↓ = menurun

↑ = meningkat

Gambar 3.1 Bagan Kerangka Konsep

Aktivasi Limfosit

Ts CD8+ ↓

Reepetelisasi ↑

36

Pada kasus avulsi, gigi terlepas dari soketnya dan menyebabkan

kerusakan ligamen periodontal, seringkali disebabkan oleh robeknya ligamen

periodontal dan menimbulkan inflamasi. Perawatan yang paling ideal untuk avulsi

gigi adalah replantasi. Replantasi adalah menempatkan kembali gigi pada

soketnya, dengan tujuan mencapai pengikatan kembali bila gigi telah terlepas

sama sekali dari soketnya karena kecelakaan.

Pasca prosedur replantasi pada jaringan periodontal gigi tikus akan

meninggalkan luka. Terdapat tiga fase karakteristik proses penyembuhan luka

yang berlangsung saling tumpang tindih, yaitu fase inflamasi, fase proliferasi, dan

fase remodelling. Fase inflamasi dimulai setelah beberapa menit dan

berlangsung selama sekitar 3-5 hari setelah cedera. Limfosit bermigrasi

kedaerah peradangan dan mencapai jumlah yang bermakna pada hari ketiga.

Limfosit T menghasilkan limfokin interferon-γ (IFN- γ), yang mengaktivasi

makrofag untuk mengeluarkan sitokin seperti TGF-α yang berperan terhadap

proses reepitelisasi. Makrofag mensekresikan BFGF, TNF- α dan IL-1 dan juga

bertanggung jawab atas fagositosis mikroorganisme, serta debridemen sisa

jaringan. Subpopulasi limfosit menunjukkan perubahan selama penyembuhan

luka, rasio limfosit-T CD4+ atau CD8+ yang tinggi mencirikan stadium awal dan

saat penyembuhan berlangsung, rasionya menurun. CD4+ dan CD8+

mempunyai peran yang saling melengkapi satu sama lain. CD4+ menghasilkan

sitokin yang dapat mengaktifkan makrofag dan meningkatkan IL-2 untuk

mengaktifkan CD8+, yang akhirnya dapat menghancurkan sel yang terinfeksi.

Gel Aloe vera disini berperan sebagai anti inflamasi yang disebabkan oleh

kandungan zat fenolik seperti antrakuinon. Kandungan aloe emodin dalam daun

Aloe vera dapat berfungsi sebagai anti inflamasi dengan menekan limfosit T

37

sitolisis CD8+ dengan bantuan sel T supressor CD8+. Antrakuinon juga dapat

menurunkan produksi sitokin IL-2 pada sel limfosit T yang teraktivasi. Zat aktif

polisakarida seperti acemannan dapat meningkatkan aktivitas makrofag. Gel

Aloe vera juga menstimulasi aktifitas fibroblas dan proliferasi kolagen yang

bertanggung jawab atas proses penyembuhan luka.

3.2 Hipotesis Penelitian

Gel Aloe vera dapat mempengaruhi jumlah CD4+ dan CD8+ pada

jaringan periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar pasca

replantasi.

38

BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian true experimental laboratory post test

with control group design secara in vivo dengan menggunakan hewan coba

Rattus novergicus dibagi kedalam 6 kelompok.

Gambar 4.1 Penentuan Sampel

Keterangan : a. Kelompok 1 : Tikus dilakukan ekstraksi gigi Insisif kanan atas dan direplantasi

dalam waktu 60 menit namun tidak mendapatkan perlakuan.

Variabel diamati pada hari 1.

b. Kelompok 2 : Tikus dilakukan ekstraksi gigi Insisif kanan atas dan direplantasi

dalam waktu 60 menit namun tidak mendapatkan perlakuan.

Variabel diamati pada hari 3.

c. Kelompok 3 : Tikus dilakukan ekstraksi gigi Insisif kanan atas dan direplantasi

dalam waktu 60 menit namun tidak mendapatkan perlakuan.

Variabel diamati pada hari 7.

39

d. Kelompok 4 : Tikus dilakukan ekstraksi gigi Insisif kanan atas dan direplantasi

dalam waktu 60 menit dan diberi gel Aloe vera dengan dosis 2

mg/ml. Variabel diamati pada hari 1

e. Kelompok 5 : Tikus dilakukan ekstraksi gigi Insisif kanan atas dan direplantasi

dalam waktu 60 menit dan diberi gel Aloe vera dengan dosis 2

mg/ml. Variabel diamati pada hari 3.

f. Kelompok 6 : Tikus dilakukan ekstraksi gigi Insisif kanan atas dan direplantasi

dalam waktu 60 menit dan diberi gel Aloe vera dengan dosis 2

mg/ml. Variabel diamati pada hari 7.

4.2 Tempat dan waktu penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakologi, Laboratorium

Biokimia dan Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya,

di Malang. Penelitian dijadwalkan pada bulan Agustus - November 2017.

4.3 Sampel penelitian

4.3.1 Kriteria Sampel

Hewan coba dalam penelitian ini adalah tikus jenis Rattus norvegicus

galur wistar yang dipelihara di Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran

Universitas Brawijaya Malang. Pemeliharaan dilakukan dalam kandang yang

bersih. Sampel penelitian dipilih berdasarkan ketentuan:

Kriteria Inklusi :

a. Jenis kelamin jantan (untuk menghindari efek hormonal yang lebih dominan

pada tikus betina)

b. Usia 2,5 – 3 bulan

c. Berat badan 175 – 250 gram

40

d. Sehat, ditandai dengan gerakannya yang aktif, mata jernih, dan bulu yang

tebal dan berwarna putih mengkilap

Kriteria Eksklusi :

a. Tikus yang selama penelitian tidak mau makan

b. Tikus yang pernah digunakan dalam penelitian sebelumnya

c. Tikus mengalami keradangan gusi

d. Tikus dengan pertumbuhan gigi abnormal

e. Tikus yang kondisinya menurun atau mati selama penelitian berlangsung

Tikus galur Wistar dipilih sebagai sampel karena tikus merupakan hewan

coba yang tergolong jinak, mudah perawatannya dan fungsi metabolismenya

mirip dengan manusia. Lalu sampel di bagi kedalam enam kelompok dengan

teknik simple random sampling.

Gambar 4.2 Tikus jantan Rattus norvegicus galur Wistar (Estina, 2010)

4.3.2 Jumlah Sampel

Jumlah sampel yang diperlukan untuk masing-masing kelompok

perlakuan dihitung berdasarkan rumus Federer (Purawisastra, 2001), yaitu :

(n – 1) (p – 1) 15

Keterangan: n = replikasi sampel

p = banyaknya perlakuan

41

Dalam penelitian ini ada 6 jenis perlakuan sehingga berdasarkan rumus tersebut

jumlah sampel tiap kelompok adalah sebagai berikut:

(n – 1) (p – 1) 15

(n – 1) (6 – 1) 15

(n – 1) 5 15

5n – 5 15

n 4

Dari rumus tersebut diperoleh replikasi sampel sebanyak 4 ekor tikus untuk

masing-masing kelompok. Jadi penelitian ini memerlukan tikus sebanyak 24

ekor.

4.4 Variabel dan Definisi Operasional

4.4.1 Variabel Penelitian

4.4.1.1 Variabel bebas/Independen

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah gel Aloe vera dengan dosis 2

mg/ml.

4.4.1.2 Variabel tergantung/Dependen

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah jumlah CD4+ dan CD8+ pada

jaringan periodontal gigi tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar pasca avulsi

pada hari ke 1, 3, dan 7.

4.4.1.3 Variabel terkendali

Variabel terkendali adalah umur, jenis kelamin dan berat badan tikus,

makanan dan minuman tikus, perawatan dan sanitasi kandang, jenis anastesi,

jumlah anastesi, waktu pemberian anastesi, lama pencabutan, alat untuk

42

mencabut, soket bekas pencabutan, dosis gel Aloe vera dan cara pemberian gel

Aloe vera.

4.4.1.4 Definisi Operasional

a. Replantasi

Pada gigi insisif rahang atas kanan tikus dilakukan dengan menggunakan

klem yang dimodifikasi khusus untuk pencabutan gigi tikus dengan cara

menggoyang gigi tersebut memakai lecron yang dimodifikasi sebagai bein.

Setelah gigi terlepas dari soketnya lalu difiksasi dengan wire dengan diameter

0,4 mm.

b. Gel Aloe vera

Merupakan cairan kental tidak berwarna yang terdapat di dalam daun

Aloe vera. Gel Aloe vera diperoleh dengan cara proses maserasi menggunakan

pelarut etanol 96% dengan asumsi konsentrasi awal adalah 100%. Ekstrak yang

telah dibuat kemudian dibuat menjadi gel menggunakan propilen glikol,

trietanolamin, dan natrium benzoat sebagai basis gel hingga terbentuk gel Aloe

vera dengan konsentrasi 20%. Sediaan daun Aloe vera diperoleh dan

diidentifikasi dari Balai Penelitian Materia Medika Batu, Jawa Timur. Diberikan

pada gigi tikus dalam dosis 2mg/ml.

b. Sel CD4+

Merupakan glikoprotein transmembran berantai tunggal yang ditemukan

pada subset sel T (helper atau inducer) yang mewakili 45% limfosit darah perifer.

Jumlah sel T CD4+ dinilai dengan skor histologi dengan pemeriksaan

imunohistokimia menggunakan monoklonal antibodi sel T CD4+ dengan

pewarnaan metode streptavidin-biotin pada preparat eksisi biopsi jaringan.

Penghitungan sel limfosit yang tampak ekspresi sel berbentuk bulat atau oval

43

berwarna coklat dengan inti biru dan sitoplasma coklat untuk memperoleh

ekspresi sel T CD4+.

Gambar 4.3 Sel T CD4+ pada pewarnaan Immunohistokimia dengan perbesaran 400x (Romani et al., 2017).

c. Sel CD8+

Jumlah sel T CD8+ dinilai dengan skor histologi dengan pemeriksaan

imunohistokimia menggunakan monoklonal antibodi sel T CD8+ dengan

pewarnaan metode streptavidin-biotin pada preparat eksisi biopsi jaringan.

Penghitungan sel limfosit yang tampak ekspresi sel berbentuk bulat atau oval

berwarna coklat dengan inti biru dan sitoplasma coklat sebagai nilai untuk

memperoleh ekspresi sel T CD8+.

Gambar 4.4 Sel T CD8+ pada pewarnaan Immunohistokimia dengan perbesaran 400x (Zhu et al., 2017).

44

4.5 Alat dan Bahan Penelitian

4.5.1 Alat dan Bahan untuk pemeliharaan dan perlakuan hewan coba

a. Kandang plastik ukuran 50 cm x 40 cm x 15 cm yang ditutup dengan kawat

kassa dan dialasi sekam.

b. Botol minum.

c. Timbangan untuk menimbang berat badan tikus.

4.5.2 Alat dan Bahan untuk pembiusan hewan coba

a. Dysposible syringe ukuran 1 ml sebanyak 1 buah untuk Ketalar tiap tikus

b. Ketalar dengan dosis 60 mg/kg BB

c. Diazepam dengan dosis 10 mg/kg BB

4.6.3 Alat dan Bahan untuk pencabutan gigi hewan coba

a. Klem yang telah dimodifikasi khusus untuk pencabutan gigi insisive tikus

b. Pinset kecil dengan ujung bengkok

c. Lecron yang dimodifikasi sebagai bein

d. Needle holder untuk penjahitan soket

e. Gunting.

f. Kapas dan kassa

4.5.4 Alat dan Bahan untuk perlakuan hewan coba

a. Syringe ukuran 3 ml dengan ujung jarum (ukuran 5) tumpul untuk

mengaplikasikan gel Aloe vera.

b. Syringe ukuran 1 ml tanpa jarum untuk mengambil darah tikus.

c. Cawan mortar untuk tempat mencampur gel dan darah tikus.

d. Gel Aloe vera dengan dosis 2 mg/ml

e. Wire dengan diameter 0,4 mm

4.5.5 Alat dan Bahan untuk pembuatan Gel Aloe vera

45

a. Aloe vera (Aloe barbadensis Miller)

b. Alkohol 96%

c. Kalsium hipoklorit

d. Juicer

e. Pisau

f. Kertas saring

g. Vacuum dryer

h. Tabung steril

4.5.6 Alat dan Bahan Pengambilan Jaringan dan Pembuatan Preparat

a. Scalpel no.11

b. Pinset

c. Tabung fiksasi berlabel

d. Gelas ukur

e. Object glass dan deck glass

f. Alkohol 30%, 50%, 70%, 80%, 95%, 96%, 100%

g. Formalin 10%

h. Kapas yang diberi eter 10%

i. Xylol

j. Paraffin

k. Alat cetak paraffin

l. Dissposable syringe (1ml)

m. Rotari mikrotom

4.5.7 Alat dan Bahan untuk Immunohistokimia

a. PBS pH 7,4

b. Blocking endogenous peroksida (H2O2 3%)

c. Blocking unspesifik protein (FBS 5%)

46

d. anti TNF-

e. antibodi sekunder biotin conjugated

f. SA-HRP (Strep-Avidin Horseradis Peroxide)

g. Betazoid DAB chromogen solution (Biocare)

h. Hematoxylin

i. Mikroskop Nikon eclipse E100

4.6 Cara Kerja

4.6.1 Ethical Clearance

Penelitian ini diawali dengan pengurusan ethical clearance di Komisi Etik

Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya.

4.6.2 Persiapan Hewan Coba

a. Tikus diadaptasikan dalam kandang kurang lebih selama 1 minggu pada

temperatur konstan (20-25 ºC). Tikus dipelihara dalam kandang plastik

ukuran 50 cm x 40 cm x 15 cm yang ditutup dengan kawat kassa dan dialasi

sekam yang diganti tiap minggu. Selama proses tersebut, dijaga agar

kebutuhan makan dan air minum tetap terpenuhi. Tikus diberi makan berupa

pellet dan minum ad libitum. Makanan diberikan 2 kali sehari saat pagi dan

sore hari.

b. Tikus dipuasakan selama (12-18) jam sebelum perlakuan, namun air minum

tetap diberikan (ad libitum) (Parveen et al., 2007; Rajavel et al., 2007).

c. Berat badan tiap tikus ditimbang dan dikelompokkan menjadi 6 kelompok

secara acak dengan jumlah masing-masing kelompok adalah 4 ekor.

47

4.6.3 Pembuatan Gel Aloe vera

Sebelumnya telah dilakukan penelitian pendahuluan tentang cara

pembuatan Aloe vera. Dengan demikian metode pembuatan gel Aloe vera

adalah sebagai berikut gel Aloe vera diperoleh dengan cara proses ekstraksi-

pengendapan yang merupakan cara untuk mengambil zat aktif (Acemannan)

yang terdapat dalam Aloe vera. Bahan baku yang digunakan adalah lendir Aloe

vera yang diperoleh dari tanaman Aloe vera. Selain itu ada beberapa bahan lain

yang digunakan yaitu alkohol 96% sebagai pengendap polisakarida dan kalsium

hipoklorit untuk membuat larutan pencuci Aloe vera.

Setelah Aloe vera dipotong dari tanamannya segera dicuci dengan

menggunakan larutan kalsium hipoklorit, dikupas dan dipotong kecil untuk

dimasukkan dalam juicer. Proses pencucian ini dilakukan dengan tujuan untuk

menghilangkan kotoran dan bakteri yang terdapat pada permukaan Aloe vera.

Jus Aloe vera yang diperoleh diambil untuk kemudian ditambahkan dengan

alkohol 96%, dalam hal ini 50 cc jus Aloe vera ditambahkan dengan 200 cc

alkohol 96%.

Campuran jus Aloe vera dan alkohol tersebut diaduk selama 10 menit

pada suhu 30oC, kemudian didiamkan untuk proses pengendapan selama 10 jam

pada suhu 10oC. Endapan yang terbentuk dipisahkan dari larutannya dengan

menggunakan kertas saring untuk selanjutnya endapan tersebut dioven pada

vaccum (vacuum dryer) dengan suhu 50oC. Metil-paraben 0,2 gram dilarutkan

kedalam propilen-glikol 16,7 gram kemudian carbomer sebanyak 3 gram

ditambahkan pada campuran sambil terus diaduk dengan cepat hingga terbentuk

sediaan gel, lalu disimpan pada temperatur kamar selama 24 jam (Dewi, 2012).

48

4.6.4 Anestesi Pada Rattus norvegicus

Sebelum dilakukan pembiusan, tikus ditimbang terlebih untuk

menyesuaikan dosis anestesi. Malam sebelumnya tikus tidak diberi makan dan

minum. Tikus dianestesi dengan Ketalar dengan dosis 60 mg/kg BB dicampur

dengan Diazepam 10 mg/kgBB menggunakan syringe berukuran 1 ml secara

intraperitoneal. Setelah dilakukan anestesi, tikus akan menunjukkan gejala tidak

sadarkan diri yang ditandai dengan reflek kumis dan bulu mata yang menghilang

dan dilakukan asepsis pada daerah pencabutan.

4.6.5 Pencabutan Gigi pada Tikus

Anatomi gigi beberapa hewan coba berbeda, maka cara pencabutan gigi

juga memiliki tingkat kesulitan yang berbeda. Teknik pencabutan gigi pada tikus

memakai modifikasi tang dan elevator. Pada prinsipnya adalah memasukkan

modifikasi tang dan elevator di antara tulang dan gigi, berikan tekanan pada tang

serta gunakan suatu gerakan pergelangan memutar yang diarahkan menuju

apek akar ke semua sisi dan menarik gigi setelah semua ligamen periodontal

telah terpotong (Kusumawati, 2004).

Pencabutan gigi insisive rahang atas kanan tikus dilakukan dengan

menggunakan klem yang dimodifikasi khusus untuk pencabutan gigi tikus

dengan cara menggoyang gigi tersebut memakai lecron yang dimodifikasi

sebagai bein. Setelah goyang gigi dijepit dengan klem dan diekstraksi. Gigi yang

dikeluarkan harus utuh.

4.6.6 Prosedur Perlakuan

Pada kelompok perlakuan, masing-masing sampel, sebelum gigi

direplantasi, soket diberi gel Aloe vera dengan konsentrasi 2 mg/ml pada

masing-masing kelompok dengan memakai pipet khusus ke dalam soket yang

49

telah dibersihkan dengan kassa. Kemudian gigi direplantasikan dan difiksasi

dengan wire dengan diameter 0,4 mm. Pada kelompok kontrol (K) sebanyak 4

sampel, setelah pencabutan langsung dilakukan replantasi tanpa diaplikasikan

gel Aloe vera. Kemudian pada masing-masing kelompok diamati pada hari ke 1,

3, dan 7.

4.6.7 Perawatan Tikus Pasca Pencabutan

Tikus yang telah dicabut gigi insisive kanan atasnya tidak diberi makan

seperti sebelum pencabutan, akan tetapi pemberian makan dilakukan secara per

oral dengan sonde gastric untuk menghindari terganggunya jaringan

penyembuhan luka pada soket. Bahan makanan yang digunakan adalah bubur

bayi dengan komposisi gizi yang disamakan dengan komposisi gizi makanan

awal.

4.6.8 Sacrifies pada Tikus

Hewan coba dikorbankan hendaknya mengikuti syarat-syarat tertentu

yaitu tidak menimbulkan gejala yang tidak menyenangkan bagi hewan, misalnya

menimbulkan ketakutan sehingga hewan harus meronta-ronta lebih dahulu,

aman untuk peneliti dan pembantu peneliti, mudah dilakukan, sesuai dengan

umur, spesies, kesehatan dan jumlah hewan, tidak menimbulkan polusi,

irreversible, tidak menimbulkan perubahan kimiawi pada jaringan dan tidak

menimbulkan perubahan histopatologi yang akan mempengaruhi hasil penelitian.

Ruangan euthanasia dengan ether, halothane atau methoxyfluarane relative

efektif dan berperikemanusiaan (Kusumawati, 2004).

Tikus dilakukan sacrifice dengan cara dimasukkan kedalam toples yang

berisi kapasyyang mengandung eter 10%, kemudian toples ditutup. Apabila tikus

sudah mati atau tidak lagi bernafas dan bergerak, tikus didekaputasi

50

menggunakan scalpel no.11 dan mengambil rahang atas tikus yang terdapat

jaringan periodontal pada gigi yang telah dilakukan replantasi. Kemudian

direndam dalam tempat yang berisi formalin 10% selama 18-24 jam sebelum

diproses ketahap selanjutnya. Kemudian jaringan yang dibutuhkan dibuat

sediaan di Labolatorium Patologi Anatomi dan Laboratorium Biokimia dengan

menggunakan teknik Immunohistokimia.

Setelah perlakuan, tubuh tikus yang tersisa dibersihkan dan dilakukan

aseptic dengan alkohol 70%. Jasad tikus kemudian dikubur langsung kedalam

tanah dengan membuat lubang sebesar 50cm x 30cm dan kedalaman 40 cm

untuk 24 ekor tikus secara bersamaan tanpa dilapisi plastik untuk mempercepat

penguraian. Areadkerja dibersihkan dengan sabun atau disemprot dengan

alkohol 70% dan alat – alat yang digunakan dicuci dengan sabun, dikeringkan

kemudian disterilkan dengan autoklaf.

4.6.9 Prosedur Pembuatan sediaan parafin blok

Jaringan dicuci dengan PBS 3-5 x untuk membersihkan dari kontaminan.

Kemudian difiksasi pada formalin 10%. Setelah itu dilakukan dehidrasi

menggunakan alkohol bertingkat (30%, 50%, 70%, 80%, 96% dan absolut)

masing-masing 60 menit. Dilakukan Clearing menggunakan xilol 2 kali masing-

masing 60 menit. Kemudian dilakukan infiltrasi dengan parafin lunak selama 60

menit pada suhu 48oC. Kemudian dilakukan block dalam parafin keras pada

cetakan dan didiamkan selama sehari. Keesokan harinya ditempelkan pada

holder dan dilakukan pemotongan setebal 4 um dengan rotary microtome.

Dilakukan mounting pada gelas objek dengan gelatin 5%.

51

4.6.10 Proses Deparafinisasi

Gelas obyek hasil parafin block direndam dalam xilol 2 kali, masing-

masing selama 5 menit. Setelah itu dilakukan rehidrasi menggunakan alkohol

berseri (absolut, 96%, 80%, 70%, 50% dan 30%) masing-masing selama 5

menit. Kemudian dibilas dalam dH2O selama 5 menit.

4.6.11 Immunohistokimia (IHK)

Jaringan periodontal dibuat sediaan parafin blok untuk dibuat slide. Slide

jaringan difiksasi dengan metanol absolut selama 5 menit. Slide dicuci dengan

PBS pH 7,4 satu kali selama 5 menit. Blocking endogenous peroksida

menggunakan H2O2 3% selama 20 menit lalu dicuci dengan PBS pH 7,4 tiga kali,

masing-masing selama 5 menit. Blocking unspesifik protein menggunakan

FBS 5% yang mengandung 0,25% Triton X-100 dicuci menggunakan PBS pH

7,4 tiga kali, masing-masing selama 5 menit. Diinkubasi menggunakan anti TNF-

, semalaman pada suhu 40C. Slide kemudian dicuci dengan PBS, lalu

diinkubasi dengan antibodi sekunder biotin conjugated selama satu jam pada

suhu kamar. Dicuci menggunakan PBS tiga kali, masing-masing selama 5 menit.

Diinkubasi menggunakan SA-HRP (Strep-Avidin Horseradis Peroxidase) selama

40 menit. Slide dicuci lalu diinkubasi dengan Betazoid DAB chromogen solution

(Biocare) selama 3-5 menit hingga menunjukkan warna coklat yang berarti

positif. Slide kemudian dicelupkan dalam hematoxylin sebagai counterstaining,

kemudian dilakukan proses dehidrasi, clearing, dan mounting. Hasil pewarnaan

kemudian diamati di mikroskop dan dilihat ada tidaknya reaksi positif. Slide

kemudian diambil foto sebanyak 5 bidang pandang dengan perbesaran 400x

(Penkowa, et al., 2003).

52

4.7 Analisa statistik

Hasil pengukuran jumlah CD4+ dan CD8+ yang positif pada tikus kontrol

dan perlakuan dianalisa secara statistik dengan menggunakan program

komputer dengan tingkat signifikansi 0,05 (p = 0,05) dan taraf kepercayaan 95%

(α = 0,05). Langkah-langkah uji hipotesis komparatif dan korelatif adalah sebagai

berikut :

a. Uji Normalitas : bertujuan untuk menginterpretasikan apakah suatu data

memiliki sebaran atau distribusi normal atau tidak. Karena pemilihan

penyajian data dan uji hipotesis bergantung dari normal tidaknya distribusi

data. Untuk penyajian data yang berdistribusi normal digunakan mean dan

standar deviasi sebagai pasangan ukuran pemusatan dan penyebaran.

Sedangkan untuk penyajian data yang tidak terdistribusi normal

menggunakan median dan minmum-maksimum sebagai pasangan ukuran

pemusatan dan penyebaran. Untuk uji hipotesis, jika sebaran data normal,

maka digunakan uji parametrik. Sedangkan, jika sebaran data tidak normal

digunakan uji non-parametrik.

b. Uji homogenitas : bertujuan untuk menguji berlaku atau tidaknya asumsi

ANOVA, yaitu apakah data yang diperoleh dari setiap perlakuan memiliki

varian yang homogen. Uji menggunakan Levene, jika didapatkan varian

yang homogen, maka analisa selanjutnya dapat menggunakan uji ANOVA.

Uji One-way ANOVA bertujuan untuk menguji berlaku untuk

membandingkan nilai dari rata-rata dari masing-masing kelompok perlakuan

dan mengetahui bahwa minimal ada dua kelompok yang berbeda signifikan.

c. Data penelitian yang terdistribusi normal (p > 0,05), dilanjutkan dengan uji

parametrik menggunakan Oneway Anova dengan tingkat kepercayaan

53

95%(α=0,05) dan bila ada perbedaan dilanjutkan dengan uji LSD (Least

Significance Difference) dengan tingkat kepercayaan 95% (α=0,05). Bila

data penelitian tidak terdistribusi normal dan homogen, dilakukan uji

nonparametrik dengan Kruskal-Wallis dengan tingkat kepercayaan 95%

(α=0,05) dan bila ada perbedaan nyata antara kelompok sampel, dilanjutkan

dengan uji statistik Mann-Whitney dengan derajat kemaknaan 95% dengan

nilai α=0,05 (Notoatmojo, 2002).

d. Post-Hoc Test (Uji Least Significant Difference) : bertujuan untuk mengetahui

kelompok mana yang bereda secara signifikan dari hasil tes ANOVA. Uji

POST-Hoc yang digunakan adalah uji LSD dengan tingkt signifikansi 95% (p

< 0,05).

e. Uji korelasi Pearson : untuk mengetahui besarnya perbedaan secara kualitatif

kelompok yang berbeda secara signifikan, yang telah ditentukan

sebelumnya dari hasil uji Post Hoc (LSD).

54

4.8 Alur Penelitian

Rattus novergicus

Penyesuaian 7 hari

Kelompok Kontrol K1, K2, K3

Kelompok Perlakuan P1, P2, P3

Tidak diberikan gel Aloe vera

Diberi gel Aloe vera 2 mg/ml pada soket

Hari ke-1

Hari ke-3

Hari ke-7

Hari ke-1

Hari ke-3

Hari ke-7

Pengambilan sampel jaringan

Dekalsifikasi dengan EDTA

Fiksasi, Dehidrasi, dan Clearing

Embedding dan Penyayatan Jaringan

Immunohistokimia

Pencabutan insisive kanan rahang atas

Replantasi

Penghitungan Jumlah CD4+ dan CD8+

Analisa Data

Gambar 4.5 Bagan Alur Penelitian

55

BAB 5

HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA

5.1 Hasil Penelitian

Pada penelitian ini menggunakan hewan coba berupa tikus putih (Rattus

norvegicus) galur wistar yang dibagi menjadi 6 kelompok, yaitu kelompok kontrol

hari ke-1 (K1), kelompok kontrol hari ke-3 (K2), kelompok kontrol hari ke-7 (K3),

kelompok perlakuan hari ke-1 (P1), kelompok perlakuan hari ke-3 (P2), kelompok

perlakuan hari ke-7 (P3). Kelompok kontrol (K) merupakan kelompok tikus yang

dilakukan pencabutan gigi dan dimasukkan kembali kedalam soketnya

(replantasi) tanpa diberikan perlakuan. Kelompok perlakuan (P) merupakan

kelompok tikus yang dilakukan pencabutan gigi kemudian diberikan gel Aloe vera

ke dalam soketnya dan gigi dimasukkan kembali kedalam soketnya (replantasi).

Tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar mula-mula dilakukan

pencabutan gigi insisive kanan rahang atas, kemudian diberikan gel Aloe vera ke

dalam soketnya, gigi dimasukkan kembali ke dalam soketnya dan difiksasi

dengan menggunakan wire. Setelah itu semua tikus dikorbankan serta diambil

sampel jaringan periodontal gigi insisive rahang atas tikus putih (Rattus

norvegicus) galur wistar yang didekaputasi pada hari ke-1, ke-3 dan ke-7 setelah

gigi dimasukkan kembali ke dalam soketnya (replantasi), kemudian dilakukan

pembuatan preparat dengan teknik Immunohistokimia, lalu dilakukan

pemeriksaan di bawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 400 kali pada lima

lapang pandang. Didapatkan gambaran CD4+ dan CD8+ berupa sel berbentuk

bulat atau oval dengan inti biru dan sitoplasma coklat. Hasil perhitungan jumlah

56

CD4+ dan CD8+ kelompok kontrol dan perlakuan dapat dilihat dalam tabel 5.1

dan tabel 5.2, serta gambar 5.4 dan gambar 5.5.

(a) (b)

(c) (d)

Gambar 5.1 Perbandingan Gambaran Histologi Sel CD4+ dan CD8+ pada Jaringan Periodontal Gigi Tikus Putih (Rattus norvegicus) Kedua Kelompok pada Hari ke-1 dengan teknik Immunohistokimia dan pewarnaan Betazoid DAB chromogen solution menggunakan mikroskop Nikon eclipse E100 dengan perbesaran 400x (a) kelompok kontrol CD4+, (b) kelompok perlakuan CD4+, (c) kelompok kontrol CD8+, (d) kelompok perlakuan CD8+. Tanda = CD4+/CD8+.

Berdasarkan gambar 5.1 diatas didapatkan bahwa jaringan periodontal

gigi insisif rahang atas tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar pada kelompok

kontrol pada hari ke-1 tampak gambaran sel CD4+ memiliki jumlah yang lebih

banyak daripada kelompok perlakuan. Pada kelompok perlakuan hari ke-1

tampak gambaran sel CD4+ memiliki jumlah yang lebih sedikit.

Berdasarkan gambar 5.1 diatas didapatkan bahwa jaringan periodontal

gigi insisive rahang atas tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar pada

kelompok kontrol pada hari ke-1 tampak gambaran sel CD8+ memiliki jumlah

yang lebih banyak dan kelompok perlakuan pada hari ke-1 tampak gambaran sel

CD8+ memiliki jumlah yang lebih sedikit.

57

(a) (b)

(c) (d)

Gambar 5.2 Perbandingan Gambaran Histologi CD4+ dan CD8+ pada Jaringan Periodontal Gigi Tikus Putih (Rattus norvegicus) Kedua Kelompok pada Hari ke-3 dengan teknik Immunohistokimia dan pewarnaan Betazoid DAB chromogen solution menggunakan mikroskop Nikon eclipse E100 dengan perbesaran 400x (a) kelompok kontrol CD4+, (b) kelompok perlakuan CD4+, (c) kelompok kontrol CD8+, (d) kelompok perlakuan CD8+. Tanda = CD4+/CD8+.

Berdasarkan gambar 5.2 diatas didapatkan bahwa jaringan periodontal

gigi insisive rahang atas tikus (Rattus norvegicus) galur wistar pada kelompok

kontrol pada hari ke-3 tampak gambaran sel CD4+ memiliki jumlah yang lebih

banyak dan kelompok pada perlakuan pada hari ke-3 tampak gambaran sel

CD4+ memiliki jumlah yang lebih sedikit.

Berdasarkan gambar 5.2 diatas didapatkan bahwa jaringan periodontal

gigi insisive rahang atas tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar pada

kelompok kontrol pada hari ke-3 tampak gambaran sel CD8+ memiliki jumlah

yang lebih banyak dan kelompok perlakuan pada hari ke-3 tampak gambaran sel

CD8+ memiliki jumlah yang lebih sedikit.

58

(a) (b)

(c) (d)

Gambar 5.3 Perbandingan Gambaran Histologi CD4+ dan CD8+ pada Jaringan Periodontal Gigi Tikus Putih (Rattus norvegicus) Kedua Kelompok pada Hari ke-7 dengan teknik Immunohistokimia dan pewarnaan Betazoid DAB chromogen solution menggunakan mikroskop Nikon eclipse E100 dengan perbesaran 400x ((a) kelompok kontrol CD4+, (b) kelompok perlakuan CD4+, (c) kelompok kontrol CD8+, (d) kelompok perlakuan CD8+. Tanda = CD4+/CD8+.

Berdasarkan gambar 5.3 diatas didapatkan bahwa jaringan periodontal

gigi insisive rahang atas tikus (Rattus norvegicus) galur wistar pada kelompok

kontrol pada hari ke-7 tampak gambaran sel CD4+ memiliki jumlah yang lebih

banyak dan kelompok pada perlakuan pada hari ke-7 tampak gambaran sel

CD4+ memiliki jumlah yang lebih sedikit.

Berdasarkan gambar 5.3 diatas didapatkan bahwa jaringan periodontal

gigi insisive rahang atas tikus putih (Rattus norvegicus) strain wistar pada

kelompok kontrol pada hari ke-7 tampak gambaran sel CD8+ memiliki jumlah

yang lebih banyak dan kelompok perlakuan pada hari ke-7 tampak gambaran sel

CD8+ memiliki jumlah yang lebih sedikit.

Untuk analisa data hasil penghitungan CD4+ dan CD8+ ditulis dengan

format mean ± standar deviasi.

59

Tabel 5.1 Rata-rata Jumlah Sel CD4+ pada Jaringan Periodontal Gigi Tikus (Rattus norvegicus) dengan teknik Immunohistokimia dan perbesaran mikroskop 400x sebanyak lima lapang pandang

Kelompok Hari Mean ± SD

Kontrol 1 1 13,67 ± 1,528

Kontrol 2 3 12,67 ± 2,517

Kontrol 3 7 8,67 ± 1,528

Perlakuan 1 1 3,00 ± 1,000

Perlakuan 2 3 4,33 ± 1,528

Perlakuan 3 7 3,67 ± 4,640

Gambar 5.4 Diagram Rata-rata Jumlah Sel CD4+

Gambar 5.4 menunjukkan bahwa pada hari ke-1, kelompok kontrol

memiliki rata-rata jumlah CD4+ tertinggi sebesar 13,67 ± 1,528 dan kelompok

perlakuan memiliki rata-rata jumlah CD4+ sebesar 3,00 ± 1,000. Pada hari ke-3,

kelompok kontrol memiliki rata-rata jumlah CD4+ yaitu 12,67 ± 2,517 dan

kelompok perlakuan memiliki rata-rata CD4+ tertinggi yaitu 4,33 ± 1,528. Pada

hari ke-7, kelompok kontrol memilik rata-rata CD4+ sebesar 8,67 ± 1,528 dan

kelompok perlakuan memiliki rata-rata jumlah CD4+ sebesar 3,67 ± 1,528. Selain

itu, dari diagram diatas didapatkan bahwa pada kelompok kontrol mengalami

penurunan jumlah sel CD4+ dari hari ke-1 sampai hari ke-7, sedangkan pada

13.67 12.67

8.67

3 4.33

3.67

0

2

4

6

8

10

12

14

16

Hari ke-1 Hari ke-3 Hari ke-7

Kontrol

Perlakuan

60

kelompok perlakuan mengalami penaikan jumlah sel CD4+ pada hari ke-1

sampai hari ke-3 lalu menurun pada hari ke-7.

Tabel 5.2 Rata-rata Jumlah Sel CD8+ pada Jaringan Periodontal Gigi Tikus (Rattus norvegicus) dengan teknik Immunohistokimia dan perbesaran mikroskop 400x sebanyak lima lapang pandang

Kelompok Hari Mean ± SD

Kontrol 1 1 6,00 ± 1,000

Kontrol 2 3 17,00 ± 1,000

Kontrol 3 7 12,00 ± 2,000

Perlakuan 1 1 4,00 ± 1,000

Perlakuan 2 3 9,33 ± 1,528

Perlakuan 3 7 3,67 ± 1,528

Gambar 5.5 Diagram Rata-rata Jumlah Sel CD8+

Gambar 5.5 menunjukkan bahwa pada hari ke-1, kelompok kontrol

memiliki rata-rata jumlah CD8+ sebesar 6,00 ± 1,000 dan kelompok perlakuan

memiliki rata-rata jumlah CD8+ sebesar 4,00 ± 1,000. Pada hari ke-3, kelompok

kontrol memiliki rata-rata jumlah CD8+ tertinggi yaitu 17,07 ± 1,000 dan begitu

juga pada kelompok perlakuan memiliki rata-rata CD8+ tertinggi yaitu 9,33 ±

1,528. Pada hari ke-7, kelompok kontrol memilik rata-rata CD8+ sebesar 12,00 ±

6

17

12

4

9.33

3.67

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

Hari ke-1 Hari ke-3 Hari ke-7

Kontrol

Perlakuan

61

2,000 dan kelompok perlakuan memiliki rata-rata jumlah CD8+ sebesar 3,67 ±

1,528. Selain itu, dari diagram diatas didapatkan bahwa pada kelompok kontrol

dan perlakuan mengalami penaikan jumlah sel CD8+ dari hari ke-1 sampai hari

ke-3 lalu mengalami penurunan pada hari ke-7.

5.2 Analisis Data

Data hasil penelitian berupa jumlah CD4+ dan CD8+ yang dianalisis

menggunakan metode One Way Anova. Sebelum dilakukan pengujian dengan

One Way Anova, dilakukan uji normalitas dan uji homogenitas ragam. Uji

normalitas menggunakan uji Shapiro-Wilk karena jumlah data kurang dari 50,

sedangkan uji homogenitas menggunakan Levene’s Test, keduanya

menggunakan tingkat kesalahan (α) 0,05.

Pada uji One Way Anova, hipotesis ditentukan melalui suatu rumusan

yaitu Ho diterima bila nilai signifikansi diperoleh p > 0,05, sedangkan Ho ditolak

bila nilai signifikansi p < 0,05. Ho dari penelitian ini adalah gel Aloe vera tidak

berpengaruh terhadap perubahan jumlah CD4+ dan CD8+ pada gigi tikus (Rattus

norvegicus) galur wistar pasca replantasi, sedangkan H1 dari penelitian ini adalah

gel Aloe vera berpengaruh terhadap perubahan jumlah CD4+ dan CD8+ pada

gigi tikus (Rattus norvegicus) galur wistar pasca replantasi.

5.2.1 Uji Normalitas Data

Pengujian normalitas dilakukan dengan menggunakan uji one sample

Shapiro-Wilk karena jumlah data 24, sedangkan data yang jumlahnya lebih dari

50 menggunakan uji Kolmogorov-smirnov (lihat lampiran 3). Uji ini bertujuan

menguji apakah sebaran data yang ada dalam distribusi normal atau tidak.

62

Keluaran hasil uji adalah dengan melihat besarnya nilai signifikansi. Jika nilai

signifikansi >0,05 (α=5%), maka data dalam distribusi normal.

Hasil uji normalitas data dengan menggunakan uji Shapiro-wilk

menunjukkan bahwa nilai signifikansi rata-rata jumlah sel CD4+ pada semua

kelompok baik kelompok kontrol maupun kelompok perlakuan adalah 0,51 lebih

besar dari 0,05 (p>0,05), ini berarti data penelitian yang diperoleh berdistribusi

normal. Sedangkan nilai signifikansi rata-rata jumlah sel CD8+ pada semua

kelompok baik kelompok kontrol maupun kelompok perlakuan adalah 0,145 lebih

besar dari 0,05 (p>0,05), ini berarti data penelitian yang diperoleh berdistribusi

normal.

5.2.2 Uji Homogenitas Ragam

Setelah mengetahui bahwa data berdistribusi normal selanjutnya

dilakukan pengujian homogenitas ragam dengan menggunakan Levene’s Test

(lihat lampiran 3). Uji homogenitas ragam dikatakan terpenuhi jika nilai

signifikansi hasil perhitungan lebih besar dari 0,05 (p>0,05).

Hasil uji homogenitas menunjukkan bahwa nilai probabilitas pada

perhitungan rata-rata jumlah CD4+ adalah 0,707 (p>0,05) sedangkan

perhitungan rata-rata jumlah CD8+ adalah 0,787 (p>0,05) maka dapat

disimpulkan bahwa kedua data penelitian tersebut bersifat homogen.

5.2.3 Uji One Way Anova (Analysis of Variance)

Uji One Way Anova (F) bertujuan untuk mengevaluasi perbedaan nilai

jumlah CD4+ dan CD8+ pada masing-masing kelompok. Uji ini harus

berdistribusi normal, variasi homogen dan diambil dari sampel yang acak.

Berdasarkan uji statistik ini dapat diketahui apakah terdapat perbedaan jumlah

63

CD4+ dan CD8+ yang signifikan antar kelompok. Perbedaan rata-rata sel CD4+

dan CD8+ dianggap bermakna jika nilai p<0,05 atau dengan kata lain Ho ditolak.

Pada Uji One Way Anova ini Ho yang diajukan adalah gel Aloe vera tidak

berpengaruh terhadap perubahan jumlah CD4+ dan CD8+ pada gigi tikus (Rattus

norvegicus) galur wistar pasca replantasi. Dari hasil pengujian didapatkan bahwa

nilai p=0,000 (lihat lampiran 3) dan berdasarkan hasil tersebut maka disimpulkan

Ho ditolak sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat pengaruh yang signifikan

dari pengaplikasian gel Aloe vera terhadap perubahan jumlah CD4+ dan CD8+

pada gigi tikus (Rattus norvegicus) galur wistar pasca replantasi.

5.2.4 Uji Post-Hoc Tukey

Uji ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan rata-rata jumlah CD4+ dan

CD8+ dari ketiga kelompok perlakuan. Metode Post-Hoc yang digunakan adalah

Uji HSD (lihat lampiran 3). Pada uji ini, suatu data dikatakan berbeda secara

bermakna apabila nilai signifikansi p<0,05 serta pada interval kepercayaan 95%.

Hasil perhitungan Post-Hoc Tukey adalah sebagai berikut :

Tabel 5.3 Uji Post-Hoc Tukey CD4+

K1 K2 K3 P1 P2 P3

K1 - .973 .029* .000* .000* .000*

K2 .973 - .100 .000* .001* .000*

K3 .029* .100 - .013* .067 .029*

P1 .000* .000* .013* - .916 .996

P2 .000* .001* .067 .916 - .996

P3 .000* .000* .029* .996 .996 -

64

Hasil uji Tukey HSD menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang

signifikan antara kelompok K1 dengan P1, K1 dengan P2, K1 dengan P3, K2

dengan P1, K2 dengan P3, K3 dengan K1, K3 dengan P1, K3 dengan P3, P1

dengan K1, P1 dengan K2, P1 dengan K3, P2 dengan K1, P2 dengan K2, P3

dengan K1, P3 dengan K2, P3 dengan K3. Perbedaan yang signifikan

disebabkan karena nilai p<0,05.

Perbedaan yang tidak signifikan ditunjukkan oleh kelompok K1 dengan

K2, K2 dengan K1, K2 dengan K3, K3 dengan K2, K3 dengan P2, P1 dengan P2,

P1 dengan P3, P2 dengan K3, P2 dengan P1, P2 dengan P3, P3 dengan P1,

dan P3 dengan P2. Perbedaan yang tidak signifikan disebabkan karena nilai

p>0,05.

Tabel 5.4 Uji Post-Hoc Tukey CD8+

K1 K2 K3 P1 P2 P3

K1 - .000* .002* .524 .102 .372

K2 .000* - .009* .000* .000* .000*

K3 .002* .009* - .000* .250 .000*

P1 .524 .000* .000* - .005* 1.000

P2 .102 .000* .250 .005* - .003*

P3 .372 .000* .000* 1.000 .003* -

Hasil uji Tukey HSD menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang

signifikan antara kelompok K1 dengan K2, K1 dengan K3, K2 dengan K2, K2

dengan K3, K2 dengan P1, K2 dengan P2, K2 dengan P3, K3 dengan K1, K3

dengan K2, K3 dengan P1, K3 dengan P3, P1 dengan K2, P1 dengan K3, P1

dengan P2, P2 dengan K2, P2 dengan P1, P2 dengan P3, P3 dengan K2, P3

65

dengan K3, P3 dengan P2. Perbedaan yang signifikan disebabkan karena nilai

p<0,05.

Perbedaan yang tidak signifikan ditunjukkan oleh kelompok K1 dengan

P1, K1 dengan P2, K1 dengan P3, K3 dengan P2, P1 dengan K1, P1 dengan P3,

P2 dengan K1, P2 dengan K3, P3 dengan P1, dan P3 dengan P1. Perbedaan

yang tidak signifikan disebabkan karena nilai p>0,05.

Berdasarkan hasil uji Post Hoc Tukey dapat dijelaskan bahwa terdapat

perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.

Sehingga dari pengujian ini dapat disimpulkan bahwa pemberian gel Aloe vera

dapat menurunkan jumlah CD4+ dan CD8+ pada gigi tikus putih (Rattus

norvegicus) galur wistar pasca replantasi.

5.2.5 Uji Korelasi Pearson

Uji Korelasi Pearson digunakan untuk mengukur kekuatan hubungan dua

variabel atau lebih yang berskala interval (parametrik). Dalam hal ini, uji korelasi

pearson digunakan untuk membuktikan korelasi antara penambahan gel Aloe

vera terhadap jumlah CD4+ dan CD8+. Agar penafsiran dilakukan sesuai dengan

ketentuan, kita perlu mempunyai kriteria yang menunjukkan kuat atau lemahnya

korelasi. Korelasi dapat bersifat positif atau negatif. Korelasi positif menunjukkan

arah yang sama hubungan antar variabel. Artinya jika variabel 1 besar maka

variabel 2 semakin besar pula. Sebaliknya korelasi negatif menunjukkan arah

yang belawanan, artinya jika variabel 1 besar maka variabel 2 menjadi kecil

(Sarwono, 2006).

Siginifikansi hubungan dua variabel dapat dianalisis dengan ketentuan,

jika probabilitas atau signifikansi p < 0.05, hubungan kedua variabel signifikan.

66

Jika probalilitas atau signifansi p > 0.05, hubungan kedua variabel tidak

signifikan. Jika output angka korelasi diberi tanda 2 bintang (**), maka signifikansi

menjadi 0,01 (Sarwono, 2006). Hasil dari perhitungan korelasi pearson terhadap

data penelitian (lihat lampiran 3) adalah sebagai berikut :

1. Kekuatan korelasi ( r ) = 0.766**, dengan demikian terdapat korelasi yang

kuat antara gel Aloe vera dengan jumlah CD4+ pada gigi tikus (Rattus

norvegicus) galur wistar pasca replantasi.

2. Arah korelasi adalah negatif, sehingga semakin bertambahnya hari, maka

jumlah CD4+ pada gigi tikus (Rattus norvegicus) galur wistar pasca replantsi

akan semakin menurun secara signifikan.

3. Kekuatan korelasi ( r ) = 0.804**, dengan demikian terdapat korelasi yang

kuat antara gel Aloe vera dengan jumlah CD8+ pada gigi tikus (Rattus

norvegicus) galur wistar pasca replantasi.

4. Arah korelasi adalah negatif, sehingga semakin bertambahnya hari, maka

jumlah CD8+ pada gigi tikus (Rattus norvegicus) galur wistar pasca

replantasi akan semakin menurun secara signifikan.

68

BAB 6

PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk menganalisa pengaruh gel Aloe vera

terhadap jumlah CD4+ dan CD8+ pada jaringan periodontal gigi tikus putih

(Rattus norvegicus) pasca replantasi. Pengamatan pada penelitian ini dibagi

menjadi 3 time series, yaitu dilakukan pada hari ke-1 (K1, P1), hari ke-3 (K2, P2),

dan hari ke-7 (K3, P3) pada tiap kelompok karena limfosit muncul pada hari

ketiga lalu mencapai puncak pada hari kelima setelah itu limfosit akan mengalami

penurunan. Pengamatan dilakukan setelah semua hewan coba dilakukan

pencabutan gigi insisivus kanan maksila tikus putih (Rattus norvegicus) galur

wistar kemudian langsung dilakukan replantasi pada gigi tersebut.

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental murni pada hewan

coba tikus putih (Rattus norvegicus) yang dilakukan prosedur pencabutan gigi

insisif kanan atas pada tikus memakai modifikasi tang dan elevator. Pada

kelompok perlakuan, masing-masing sampel, sebelum gigi direplantasi, soket

diberi gel Aloe vera dengan konsentrasi 2 mg/ml pada masing-masing sampel

dengan memakai pipet khusus ke dalam soket yang telah dibersihkan dengan

kassa. Kemudian gigi direplantasikan dan difiksasi dengan wire dengan diameter

0,4 mm. Pada kelompok kontrol (K) sebanyak 4 sampel, setelah pencabutan

langsung dilakukan replantasi tanpa diaplikasikan gel Aloe vera. Kemudian pada

masing-masing kelompok diamati pada hari ke-1, hari ke-3, dan hari ke-7. Pada

penelitian ini, kelompok perlakuan (P1, P2, P3) diberi perlakuan berupa

pemberian gel Aloe vera dengan dosis tunggal berdasar pada penelitian

sebelumnya yang telah dilakukan oleh Sulistiawati (2011), menunjukkan bahwa

69

perbandingan dosis Aloe vera tidak mempunyai perbedaan yang signifikan.

Selain itu, Aloe vera bisa menjadi salah satu obat alternatif dalam penyembuhan

luka karena mudah dalam penggunaan, memiliki efek antiinflamasi, menstimulasi

kekebalan tubuh dan membantu proses regenerasi sel (Jatnika dan

Saptoningsih, 2009).

Aloe vera memiliki manfaat sebagai antiinflamasi, antibakteri, antijamur,

peningkat aliran darah ke daerah yang terluka dan menstimulasi fibroblas yang

bertanggung jawab untuk penyembuhan luka (Rieuwpassa, 2011). Gel Aloe vera

mengandung zat fenolik seperti antrakuinon. Kandungan aloe emodin dalam

daun Aloe vera dapat berfungsi sebagai antiinflamasi dengan menekan limfosit T.

Antrakuinon juga dapat menurunkan produksi sitokin IL-2 dan TNF-α pada sel

limfosit T yang teraktivasi (Rainsford et al., 2015). Zat aktif polisakarida seperti

acemannan dapat meningkatkan aktivitas makrofag (Wiedosari, 2007).

Subpopulasi limfosit yang menunjukkan perubahan selama penyembuhan luka:

rasio limfosit T CD4+ dan CD8+ tinggi mencirikan stadium awal dan saat

penyembuhan berlangsung rasionya menurun. (Huttunen, 2003).

Sediaan gel digunakan karena memiliki beberapa keuntungan yaitu,

mudah merata jika dioleskan pada kulit tanpa penekanan, memberi sensasi

dingin, tidak membekas di kulit, dan sangat mudah digunakan (Astuti, 2012).

Basis gel yang digunakan adalah carbomer. Carbomer mampu menjadi basis gel

tanpa mempengaruhi sifat kimia acemannan, serta tidak mempengaruhi respon

jaringan, sehingga tidak mempengaruhi efektivitas gel Aloe vera (Anggraeni et

al., 2012).

Hasil analisis data dari penelitian ini berdasarkan uji One Way Anova

yang telah dilakukan, menunjukkan rata-rata jumlah CD4+ dan CD8+ pada

70

kelompok kontrol dan kelompok perlakuan memiliki perbedaan. Pada kelompok

perlakuan, rata-rata jumlah CD4+ dan CD8+ lebih rendah dibandingkan rata-rata

jumlah CD4+ dan CD8+ pada kelompok kontrol. Hal tersebut dikarenakan pada

kelompok kontrol pasca pencabutan tidak diberi suatu bahan tertentu seperti

pada kelompok perlakuan diberi gel Aloe vera yang mengandung zat fenolik

seperti antrakuinon (Rainsford et al., 2015)

Berdasarkan uji Post Hoc yang telah dilakukan untuk mengetahui

kelompok yang berbeda secara signifikan sebagai lanjutan uji One Way Anova,

didapatkan rata-rata jumlah CD4+ dan CD8+ kelompok kontrol dan kelompok

perlakuan berbeda secara signifikan. Pada hari ke-1 mulai terlihat perbedaan

yang signifikan jumlah CD4+ dan CD8+ pada kedua kelompok tersebut dan

kelompok perlakuan memiliki jumlah CD4+ dan CD8+ yang lebih rendah, hal ini

dikarenakan pemberian gel Aloe vera pada kelompok perlakuan berperan

sebagai antiinflamasi (Wiedosari, 2007). Pada hari ke-3 terdapat peningkatan

jumlah CD4+ dan CD8+ dari hari sebelumnya pada kelompok kontrol dan

kelompok perlakuan, menandakan bahwa pada tikus (Rattus norvegicus) galur

wistar yang dilakukan pencabutan gigi kemudian dilakukan replantasi akan

mengalami proses inflamasi yang mengakibatkan terjadinya peningkatan CD4+

dan CD8+ yang lebih tinggi pada daerah yang terinflamasi. Pada hari ke-7 terjadi

penurunan jumlah CD4+ dan CD8+ pada kelompok kontrol dan kelompok

perlakuan, pada kelompok perlakuan jumlah CD4+ dan CD8+ lebih sedikit

dibanding pada kelompok kontrol. Hal tersebut sesuai dengan penelitian yang

telah dilakukan sebelumnya (Yu et al., 2009) bahwa jumlah rata-rata CD4+ dan

CD8+ pada kelompok yang diberi bahan yang mengandung Aloe vera

menunjukan hasil yang signifikansi lebih rendah daripada kelompok kontrol.

71

Jumlah rata-rata CD4+ dan CD8+ kelompok perlakuan (P) yang lebih

rendah dibanding kelompok kontrol (K) disebabkan karena pengaruh zat-zat

fenolik yang terkandung dalam Aloe vera, salah satunya adalah antrakuinon.

Kandungan aloe emodin dalam daun Aloe vera dapat berfungsi sebagai

antiinflamasi dengan menekan T sitolisis CD8+ dengan bantuan sel T supressor

CD8+ (Rainsford et al., 2015). Sedangkan acemannan meningkatkan aktivitas

makrofag dilakukan melalui reseptor manosa yang terdapat dipermukaan selnya,

sedangkan terhadap sel dendritik melalui peningkatan ekspresi molekul MHC

kelas II (Wiedosari, 2007). Limfosit mulai terbentuk pada hari ketiga dan

mencapai puncak pada hari kelima lalu mulai mengalami penurunan karena

keberadaan limfosit telah digantikan oleh adanya fibroblas yang membentuk

jaringan baru (Pratiwi, 2011). Selanjutnya diketahui bahwa menurut penelitian

yang dilakukan oleh Yagi (2003), gel Aloe vera juga menstimulasi aktifitas

fibroblas dan proliferasi kolagen yang bertanggung jawab atas proses

penyembuhan luka hal ini yang menyebabkan jumlah CD4+ dan CD8+ terjadi

penurunan pada hari ke-7.

6.1 Perbandingan Jumlah CD4+ dan CD8+ pada Gigi Tikus Putih (Rattus

norvegicus) Pasca Replantasi Tanpa Pemberian Gel Aloe vera

Menurut hasil penelitian dari perlakuan hari pertama, ketiga, dan ketujuh

didapatkan data bahwa rata – rata jumlah CD4+ pada kelompok K1 paling tinggi

dibandingkan kelompok K2 dan K3, sedangkan pada CD8+ kelompok K1 lebih

rendah dibandingkan kelompok K2 dan K3. Jumlah limfosit paling tinggi terdapat

pada kelompok K2 pada CD8+. Hal ini disebabkan karena pada hari pertama

72

limfosit belum terlalu berperan pada proses penyembuhan luka sehingga jumlah

CD4+ dan CD8+ yang muncul tidak terlalu besar. Yang berperan pada hari

pertama adalah sel PMN maka pada hari pertama jumlah CD4+ dan CD8+ masih

tidak terlalu banyak. Limfosit mulai terbentuk pada hari ketiga dan mencapai

puncak pada hari kelima lalu mulai mengalami penurunan karena keberadaan

limfosit telah digantikan oleh adanya fibroblas yang membentuk jaringan baru

(Pratiwi, 2011).

6.2 Perbandingan Jumlah CD4+ dan CD8+ pada Tikus Putih (Rattus

norvegicus) Pasca Replantasi dengan Pemberian Gel Aloe vera

Menurut hasil penelitian dari perlakuan hari pertama, ketiga, dan ketujuh

didapatkan data bahwa rata – rata jumlah CD4+ dan CD8+ pada kelompok P1

paling rendah dibandingkan kelompok P2 dan P3. Jumlah CD4+ dan CD8+

paling tinggi terdapat pada kelompok P2. Kelompok P1 pada CD8+ signifikan

terhadap kelompok P2. Penurunan jumlah CD4+ dan CD8+ pada kelompok

perlakuan dihari ketujuh, disebabkan jumlah limfosit telah mencapai angka

puncak pada hari kelima, sehingga pada hari ketujuh jumlah limfosit terus

mengalami penurunan karena keberadaan limfosit telah digantikan oleh adanya

fibroblas yang membentuk jaringan baru. Proses penyembuhan telah masuk

pada tahap proliferasi ditandai dengan adanya penurunan jumlah sel radang

termasuk limfosit dan makrofag serta terbentuknya jaringan granulasi yaitu

fibroblas dan angiogenesis. Sehingga fase inflamasi dan proses penyembuhan

luka menjadi lebih singkat (Pratiwi, 2011). Namun hal ini juga disebabkan

perlakuan yang diberikan pada kelompok perlakuan mengandung senyawa

fenolik seperti antrakuinon yang lebih spesifiknya aloe emodin yang memiliki

73

fungsi antiinflamasi dan peningkatan aliran darah ke daerah yang terluka dan

menstimulasi fibroblas yang bertanggung jawab untuk penyembuhan luka

(Rieuwpassa, 2011). Antrakuinon mampu menekan T sitolisis CD8+ dengan

bantuan sel T supressor CD8+ dan juga dapat menurunkan produksi sitokin IL-2

pada sel limfosit T yang teraktivasi. (Rainsford et al., 2015).

6.3 Perbandingan Jumlah CD4+ dan CD8+ Antara Kelompok Kontrol

dengan Kelompok Perlakuan

Kelompok hari pertama, yaitu antara kelompok K1 dan P1 menunjukkan

perbedaan jumlah CD4+ dan CD8+ yang bermakna. Jumlah rata – rata limfosit

kelompok K1 lebih tinggi dibandingkan kelompok P1 pada CD4+ dan signifikan.

Pada CD8+ rata – rata limfosit kelompok K1 lebih tinggi dibandingkan kelompok

P1 namun nilainya tidak signifikan. Hal ini terjadi karena pada pada hari pertama

terjadi fase inflamasi yaitu tahap radang akut yang dominasi leukosit PMN dan

makrofag ke area luka untuk fagositosis, sementara limfosit sendiri baru akan

muncul di area luka pada saat keradangan berubah menjadi kronis yaitu pada

hari ke- 3 (Pratiwi, 2011).

Kelompok hari ketiga, yaitu antara kelompok K2 dan P2 menunjukkan

perbedaan jumlah CD4+ dan CD8+ yang bermakna. Jumlah rata – rata CD4+

dan CD8+ K2 lebih tinggi daripada P2 dan signifikan, hal ini menunjukkan bahwa

aplikasi gel Aloe vera berpengaruh terhadap penurunan jumlah CD4+ dan CD8+

yang terbentuk yaitu paling sedikit pada kelompok perlakuan dibanding kelompok

kontrol. Berdasarkan teori, pada hari ketiga terjadi fase proliferasi dan

keradangan berubah menjadi kronis yaitu terjadi angiogenesis, proliferasi

fibroblas, penurunan PMN serta peningkatan limfosit dan makrofag (telah

74

terbentuk jaringan granulasi) (Sinno, 2013). Zat fenolik pada gel Aloe vera seperti

antrakuinon memiliki fungsi antiinflamasi dan peningkatan aliran darah ke daerah

yang terluka dan menstimulasi fibroblas yang bertanggung jawab untuk

penyembuhan luka (Rieuwpassa, 2011). Antrakuinon mampu menekan T sitolisis

CD8+ dengan bantuan sel T supressor CD8+ dan juga dapat menurunkan

produksi sitokin IL-2 pada sel limfosit T yang teraktivasi. (Rainsford et al., 2015).

Sehingga didapatkan jumlah sel CD4+ dan CD8+ pada kelompok perlakuan (P)

lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol (K). Hal tersebut sesuai

dengan penelitian (Yu et al., 2009). Subpopulasi limfosit menunjukkan perubahan

selama penyembuhan luka, rasio limfosit T CD4+ dan CD8+ yang tinggi

mencirikan stadium awal dan saat penyembuhan berlangsung, rasionya

menurun. Hal ini menunjukan bahwa limfosit supresor CD8+ memainkan bagian

dalam proses penyembuhan dan peningkatan jumlahnya selama penyembuhan

dapat mengindikasikan kebutuhan lingkungan akan sitokin antiinflamasi saat

respons inflamasi mereda (Huttunen, 2003).

Kelompok hari ketujuh, yakni antara kelompok K3 dan P3 menunjukkan

perbedaan jumlah CD4+ dan CD8+ yang bermakna. Jumlah rata – rata CD4+

dan CD8+ pada K3 lebih tinggi dibandingkan dengan P3 dan nilai yang

didapatkan signifikan, hal ini menunjukkan bahwa aplikasi gel Aloe vera

berpengaruh terhadap jumlah CD4+ dan CD8+ yang terbentuk. Berdasarkan

teori, pada hari ketujuh proses proliferasi telah membentuk epitel gingiva, disertai

peningkatan angiogenesis dan proliferasi fibroblas, serta mulai terjadi fase

maturasi jaringan ditandai dengan luka yang mulai menutup (Robbins, 2010).

Limfosit melepaskan limfokin interferon Ɣ (IFN-Ɣ) yang mengaktivasi

makrofag. Setelah makrofag diaktifkan oleh limfosit akan menghasilkan Nitric

75

Oxide (NO) dan Reactive Oxygen Species (ROS) yang berperan dalam

fagositosis. Makrofag juga melepaskan faktor pertumbuhan yaitu Transforming

Growth Factor (TGF-β) dan Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) yang

mengawali dan mempercepat pembentukan formasi jaringan granulasi berupa

fibroblas dan angiogenesis sehingga terjadi penyembuhan luka (Robbins, 2010)

Aloe vera memiliki manfaat sebagai antiinflamasi dan peningkat aliran

darah ke daerah yang terluka dan menstimulasi fibroblas yang bertanggung

jawab untuk penyembuhan luka (Rieuwpassa, 2011). Penelitian yang dilakukan

oleh Widurini (2003), menggunakan Aloe vera yang diaplikasikan pada radang

mulut tikus, ternyata dapat menurunkan radang mukosa rongga mulut tikus.

Didapatkan hasil ini bahwa Aloe vera tidak mempunyai mekanisme tunggal

sebagai antiinflamasi. Aloe vera mengandung berbagai macam zat yang

dipercaya dapat bertindak sebagai antiinflamasi, antara lain asam salisilat,

vitamin, polisakarida dan asam lemak. Disamping itu terdapat pula indometasin

yang dapat mengurangi edema, menghambat enzim siklooksigease dan

menghambat motilitas dari leukosit poly morphonuclear (PMN) yang bila

jumlahnya berlebihan akan merusak jaringan.

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka dapat dikatakan

bahwa gel Aloe vera berpengaruh menurunkan jumlah CD4+ dan CD8+ serta

membantu proses penyembuhan pada jaringan periodontal gigi tikus putih

(Rattus norvegicus) pasca replantasi. Hal ini menunjukkan bahwa hipotesis

penelitan yang telah disusun dapat diterima.

76

BAB 7

PENUTUP

7.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa, pemberian gel Aloe vera

mempengaruhi jumlah CD4+ dan CD8+ pada jaringan periodontal gigi tikus

(Rattus norvegicus) pasca replantasi.

7.2 Saran

Berdasarkan kekurangan yang ada pada penelitian ini, maka perlu diadakan

penelitian yang lebih lanjut sebagai berikut :

a. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengamati jumlah CD4+ dan

CD8+ pada hari-3 yang mengalami peningkatan dibandingkan hari ke-1

dan ke-7.

b. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang efek samping dan toksisitas

dalam pemberian gel Aloe vera sebagai terapi penyembuhan pasca gigi

yang replantasi.

77

DAFTAR PUSTAKA

Ajani P, Nimmagadda, Burri BJ, Neidlinger T, O’Brien WA, Goetz MB. 1998. Effect of oral β-carotene supplementation on plasma human immunodeficiency virus (HIV) RNA levels and CD4+ cell counts in HIV infected patients. Clinical Infectious Diseases (27).

Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al. 2002. Molecular Biology of the Cell. 4th edition. New York: Garland Science.

Andreasen JO, Bakland L, Andreasen FM. 2006. Traumatic intrusion of permanent teeth. Part 2. A clinical study of the effect of preinjury and injury factors, such as sex, age, stage of root development, tooth location, and extent of injury including number of intruded teeth on 140 intruded permanent teeth. Dental Traumatol.

Anggraeni Y, Esti H, Tuti P. 2012. Karakteristik Sediaan Dan Pelepasan Natrium Diklofenak Dalam Sistem Niosom Dengan Basis Gel Carbomer 940. Surabaya: Fakultas Farmasetika Universitas Airlangga Surabaya

Baggio Gomes. 2009. Study of storage media for avulsed teeth. Brazilian Journal of Dental Traumatology 1(2)

Banvard and Elaine. 2003. Aloe Vera (Aloe Barbadensis). http://www.earlham.edu

Baratawidjaja KG, Rengganis I. 2009. Imunologi dasar Ed ke-8. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.

Baratawidjaja KG. 2000. Imunologi Dasar. Jakarta : Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.

Barrett E, Kenny D, Tenenbaum H, Sigal M, Johnston D. 2005. Replantation of permanent incisors in children using Emdogain®. Dental Traumatol.

Basetti A, Sala S. 2005. The Great Aloe Book. Trento: Zuccari Pty Ltd

Bassetti, A., Stefano, S. 2005. The Great Aloe Book. USA: Zuccari.

Bath-Balogh, M. dan Fehrenbach, M. J., 2006, Dental Embryology, Histology, and Anatomy 2nd edition. St. Louis: Elsevier Inc.

Carranza, F.A. 2002. Clinical Periodontology. 9th Edition. Philadelphia : W.B. Saunders Company.

Cohenca N. 2004. Treatment for avulsed permanent teeth. Therapeutic protocols for avulsed permanent teeth : review and clinical update. Pediatr Dent J.

Dalimunthe, T. 2003. Replantasi gigi depan sulung yang avulsi. Medan: Dentika Dent J.

Davis K, Philpott S, Kumar D, Mendall M. 2006. Randomised double-blind placebo-controlled trial of Aloe vera for irritable bowel syndrome. Int J Clin Pract.

78

Dewi, Galuh. 2012. Formulasi Sediaan Gel Ekstrak Etanol Daun Lidah Buaya (Aloe vera (L.) Webb) dengan Gelling Agent Hydroxyprophyl Methylcellulose (HPMC) 4000 SM dan Aktivitas Antibakterinya terhadap Staphylococcus epidermidis. Surakarta : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.

Donaldson M, Kinirons M. 2005. Factors affecting the time of onset of resorption in avulsed and replanted incisor teeth in children. Dental Traumatol.

Dwi Astuti, Dhani. 2012. Formulasi Sediaan Gel Ekstrak Etanolik Buah Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff.) Boerl.) Dengan Basis HPMC. Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhamadiyah Surakarta

Ercan E, Dalli M. 2007. Replantation of Avulsed Teeth: A Case Report. Turkey: Atatürk Üniv Di Hek Fak Derg.

Flanagan, A.M., Bartlett, W., Skinner, J.A., Gooding. C.R., Carrington, R.W.J., Flanagan, A.M., Briggs, T.W.R., et al. 2010. Autologous chondrocyte implantation versus matrix-induced autologous chondrocyte implantation for osteochondral defects of the knee: a prospective, randomised study. J Bone Joint Surg Br. 87:640-5.

Flores M, Malmgren B, Andersson L, et al. 2007. Guidelines for the management of traumatic dental injuries. III. Primary teeth. Dental Traumatol.

Furnawanthi, I. 2004. Khasiat & Manfaat Lidah Buaya Si Tanaman Ajaib. Agro Media.

Grossman LI, Oliet S, Del Rio CE. 1995. Ilmu Endodontik dalam praktik. Alih Bahasa. Prof. drg. Rafiah Abyono. Jakarta: EGC.

Guyton AC. 1998. Human Physiology and Mechanisms of Disease, 6th ed. Philadelphia: W.B. Saunders Co.

Hirotaka, Sato. 2007. Proliferative Activity, Apoptosis, and Histogenesis. The early stage of rat tooth extraction wound healing. Imunology today: 348-350.

Intan Nurcahaya, Misbah. 2015. Pengaruh Ekstrak Etanol Lidah Buaya (Aloe Vera) Terhadap Peningkatan Jumlah Fibroblas Pada Proses Penyembuhan Luka Mukosa Rongga Mulut Tikus (Rattus Norvegiccus) Strain Wistar. Surakarta: Skripsi thesis, Universitas Muhammadiyah Surakarta.

Jacobsen I, Andreasen JO. 2003. Traumatic Injuries Examination, Diagnosis and Immediate Care. In: Koch G, Poulsen S, ed, Pediatric Dentistry – Clinical Approach. 2nd ed. Copenhagen: Blackwell Munksgaard.

Jatnika A, Saptoningsih, 2009. Meraup laba dari lidah buaya. Jakarta: Agro Media Pustaka.

Jesse A. Taylor. Blueprints Plastic Surgery, Philadelphia, 2005; 18-19.

Joyce M. Black, Jane Hokanson Hawks, 2005. Medical-surgical nursing: clinical management for positive outcomes. Edisi 7 Volume 1. Elsevier Saunders: Universitas Michigan

79

Kathuria N, Gupta N, Manisha, Prasad R, Nikita. 2011. Biologic effects of Aloe vera gel. Internet J Microbiol.

Kismaryanti, Andiny. 2007. Aplikasi Gel Lidah Buaya (Aloe vera L.) sebagai Edible Coating pada Pengawetan Tomat. Bogor: Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.

Kresno SB. 2010. Imunologi: Diagnosis dan Prosedur Laboratorium. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.

Kuntoro. 2010. Hubungan Pemberian Ekstrak Patikan Kebo (Euphorbia hirta L.) terhadap Derajat Inflamasi Bronkus pada Mencit Balb/C Model Asma Alergi. Surakarta : Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret.

Kusmawati A, Pratiwi IB. Pengambilan polisakarida acemannan dari Aloe vera menggunakan etanol sebagai pengendap. [Serial Online] 2009; [Internet] Available from http://eprints.undip.ac.id/1454/1/makalah_aloe_vera.pdf. Acessed November 2016.

Kusumawati, Diah. 2004. Bersahabat dengan Hewan Coba. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press.

Malik Itrat, Zarnigar. 2013. Aloe Vera: A review of its clinical effectiveness. Int Res J Pharm: 4(8).

Maria Huttunen. 2003. Mast Cells in cutaneous wound healing. Finland: Kuopio University Library

Martin Trope. 2011. Avulsion of permanent teeth: theory to practice. Dental Traumatology

McDonald RE, Dean JA, Avery DR. 2010. McDonald and Avery Dentistry for the Child and Adolescent. Elsevier Health Science.

McIntyre J, Lee J, Trope M, Vann WJ. 2009. Permanent tooth replantation following avulsion: Using a decision tree to achieve the best outcome. Pediatr Dent.

Mogaddhasi S, Verma SK. 2011. Aloe vera their chemicals composition and applications: A review. International journal of biological and medical research.

Newland MC, Ellis SJ, Peters KR, Durham TM, Ullrich FA, Tinker JH. 2007. Dental injury associated with anesthesia: a report of 161,687 anesthetics given over 14 years. Journal of Clinical Anasthesia: 19(5)

Notoatmodjo, S. 2002. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta.

Orsted H, Keast D. (2011). Basic principles of wound healing : An understanding of the basic physiology of wound healing provides the clinician with the framework necessary to implement the basic principles of chronic wound care. Journal of Wound Care Canada, Vol : 9, No : 2.

80

Parveen, Deng, Saeed, Dai, Ahamad & Yu. 2007. Antiinflamatory And Analgesic Activities Of Thesium Chinense Turez Extracts And Its Mayor Flavonoids, Kaempferol And Kaempferol 3-O-Glucoside. Yakugaku Zasshi.

Penkowa, M., Keller, C., Keller, P.,Jauffred, S., and Pedersen, B.K. 2003. Immunohistochemical Detection of Interleukin 6 in Human Skeletal Muscle Fibers Following Exercise. Journal Faseb 17.

Pratiwi, M. 2011. Efek Ekstrak Lerak (Sapindus Rarak Dc) 0,01% Terhadap Penurunan Sel-Sel Radang pada Tikus Wistar Jantan (Penelitian In Vivo). Skripsi. Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Sumatera Utara. Medan.

Price AS, Wilson ML. 2006. Patofisiologi Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit. Alih Bahasa: dr. Brahm U. Penerbit. Jakarta: EGC.

Potter PA, Perry AG. Buku Ajar Fundamental Keperawatan : Konsep, Proses, dan Praktik.Edisi 4.Vol 2. Alih Bahasa : Renata Komalasari,dkk. Jakarta: EGC.2010.

Purawisastra S. 2001. Pengaruh isolat galaktomanan kelapa terhadap penurunan kadar kolesterol serum kelinci. Warta litbang kesehatan. Vol.5 (3&4). http://[email protected].

Rajavel, Sivakumar, Jagadeeswaran, dan Malliaga. 2007. Evaluation Of Analgesic And Antiinflammatory Activities Of Oscillatoria Willei In Experimental Animal Models. Journal of medicinal plant research vol 3(7).

Rainsfor KD, Powanda MC, Whitehouse MW. 2015. Novel Natural Products: Therapeutic Effects in Pain, Arthritis and Gastro-intestinal Disease. New York : Springer Basel.

Ram D, Cohenca N. 2004. Therapeutic Protocols for Avulsed Permanent Teeth: Review and Clinical Update. Pediatric Dentistry – 26:3

Rieuwpassa IE, Rahmat, Karlina. 2011. Daya hambat ekstrak Aloe vera terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus (studi in vitro). Dentofasial Jurnal kedokteran gigi 10: 65.

Robin. 2007. Granzyme B Plays a Critical Role in Cytotoxic Lymphocyte-induced Apoptosis. Imunological Review Volume 146. Issue 1.

Roitt I. 2001. Essential Immunology. Oxford: Blackwell Science Limited.

Romani B et al. 2017. Functional conservation and coherence of HIV-1 subtype A Vpu alleles. Sci Rep 7:87.

Samuel CE. 2011. The role of gamma interferon in anti-microbial immunity. Curr. Opin. Microbiol

Semba RD, Bloem MW, et al. 2008. Nutrition and Health in Developing Countries.USA: Humana Press.

Sharon, C. A. 2005. The Journal of Care Management Wound Healing, 65 (40) : 778-784.

81

Shashikiran ND, Reddy VS, Nagaveni NB. 2006. Knowledge and Attitude of 2000 Parents (Urban and Rural - 1000 each) with regards to Avulsed Permanent Incisors and their Emergency Management, in and round Davangere. India: J Indian Soc Pedod Prev Dent.

Sigalas E, Regan J, Kramer P, Witherspoon D, Opperman L. 2004. Survival of human periodontal ligament cells in media proposed for transport of avulsed teeth. Dental Traumatol.

Sinno H dan Satya Prakash. 2013. Complements and the Wound Healing Cascade: An Update Review. Hindawi Journal. Vol. 2013.

Smith JB, Mangkoe Widjoyo. 2007. Pemeliharaan, Pembiakan dan Penggunaan Hewan Percobaan di Daerah Tropis. Universitas Indonesia: Jakarta. Hal 1-18.

Smith, JB. 2000. Pemeliharaan, Pembiakan, dan Penggunaan Hewan Coba di Daerah Tropis. Jakarta : UI Press.

Sudiono, J. Kurniadi, B. Hendrawan, A. Djimantoro,B. 2003. Ilmu Patologi. Editor Janti Sudiono, Lilian Yuwono-Jakarta: EGC. Hal 81-96.

Sulistiawati. 2011. Pemberian Ekstrak Daun Lidah Buaya (Aloe Vera) Konsentrasi 75% Lebih Menurunkan Jumlah Makrofag Daripada Konsentrasi 50% dan 25% Pada Radang Mukosa Mulut Tikus Putih Jantan. Denpasar: Program Studi Ilmu Biomedik Universitas Udayana

Trope M. 2002. Clinical management of the avulsed tooth: Present strategies and future directions. Dental Traumatol.

Velnar, T., T. Bailey, V. Smrkolj. 2009. The Wound Healing Process: an Overview of the Cellular and Molecular Mechanisms. The Journal of International Medical Research.

Walton RE, Torabinejad M. 2008. Prinsip dan praktik ilmu endodonsia. Alih Bahasa. Sumawinata N. Jakarta: EGC: 517-518.

Wheater, Paul R., H. George Burkitt, and Victor G. Daniels. 1979. Functional histology: a text and colour atlas. Edinburgh: Churchill Livingstone.

Widurini, M. 2003. Pengaruh Daun Lidah Buaya Terhadap Peradangan Jaringan Mukosa Rongga Mulut. Jurnal Kedokteran Gigi Universitas Indonesia: edisi 10: 473-477.

Wiedosari, Ening. 2007. Peranan Immunomodulator Alami (Aloe vera) dalam Sistem Imunitas Seluler dan Humoral. Wartazoa Vol. 17 No.4.

Wolf HF, Rateitschak KH, Hassel TM, 2005. Color Atlas of Dental Medicine: Periodontology. New York: Thieme Stutgart.

Yagi, A., Takeo, S. 2003. Anti inflammatory constituents, aloesin, and aloemannan in Aloe species and effects of tanshinon VI in Salvia milticctorrhiza on heart. Yakugazu Zasshi.

82

Yu ZH, Jin M, Xin M, Jianmin H. 2009. Effect of Aloe vera polysaccharides on immunity and antioxidant activities in oral ulcer animal models. Elsevier: Carbohydrate Polimer 75.

Zakirulla M, Togoo RA, Yaseen SM, Sehri DA, Ghamdi AS, Hafed SA et al. 2011. Knowledge and attitude of Saudi Arabian School Teachers with regards to emergency management of dental trauma. IJCDS.

Zhu J et al. 2017. Clinical Significance of Programmed Death Ligand-1 and Intra-Tumoral CD8+ T Lymphocytes in Ovarian Carcinosarcoma. PLoS One 12:e0170879.