Comparing Bacterial Community Composition between Healthy and White Plague-Like Disease States in...

10
Comparing Bacterial Community Composition between Healthy and White Plague-Like Disease States in Orbicella annularis Using PhyloChip TM G3 Microarrays Christina A. Kellogg 1 *, Yvette M. Piceno 2 , Lauren M. Tom 2 , Todd Z. DeSantis 3 , Michael A. Gray 1 , David G. Zawada 1 , Gary L. Andersen 2 1 United States Geological Survey, St. Petersburg Coastal and Marine Science Center, St. Petersburg, Florida, United States of America, 2 Lawrence Berkeley National Laboratory, Berkeley, California, United States of America, 3 Second Genome, Inc., San Bruno, California, United States of America Abstract Coral disease is a global problem. Diseases are typically named or described based on macroscopic changes, but broad signs of coral distress such as tissue loss or discoloration are unlikely to be specific to a particular pathogen. For example, there appear to be multiple diseases that manifest the rapid tissue loss that characterizes `white plague.' PhyloChip TM G3 microarrays were used to compare the bacterial community composition of both healthy and white plague-like diseased corals. Samples of lobed star coral (Orbicella annularis, formerly of the genus Montastraea [1]) were collected from two geographically distinct areas, Dry Tortugas National Park and Virgin Islands National Park, to determine if there were biogeographic differences between the diseases. In fact, all diseased samples clustered together, however there was no consistent link to Aurantimonas coralicida, which has been described as the causative agent of white plague type II. The microarrays revealed a large amount of bacterial heterogeneity within the healthy corals and less diversity in the diseased corals. Gram-positive bacterial groups (Actinobacteria, Firmicutes) comprised a greater proportion of the operational taxonomic units (OTUs) unique to healthy samples. Diseased samples were enriched in OTUs from the families Corynebacteriaceae, Lachnospiraceae, Rhodobacteraceae, and Streptococcaceae. Much previous coral disease work has used clone libraries, which seem to be methodologically biased toward recovery of Gram-negative bacterial sequences and may therefore have missed the importance of Gram-positive groups. The PhyloChip TM data presented here provide a broader characterization of the bacterial community changes that occur within Orbicella annularis during the shift from a healthy to diseased state. Citation: Kellogg CA, Piceno YM, Tom LM, DeSantis TZ, Gray MA, et al. (2013) Comparing Bacterial Community Composition between Healthy and White Plague- Like Disease States in Orbicella annularis Using PhyloChip TM G3 Microarrays. PLoS ONE 8(11): e79801. doi:10.1371/journal.pone.0079801 Editor: MoÈnica Medina, Pennsylvania State University, United States of America Received August 21, 2013; Accepted October 4, 2013; Published November 20, 2013 This is an open-access article, free of all copyright, and may be freely reproduced, distributed, transmitted, modified, built upon, or otherwise used by anyone for any lawful purpose. The work is made available under the Creative Commons CC0 public domain dedication. Funding: This project was supported by the Coral Reef Ecosystems Study (CREST) of the United States Geological Survey's Coastal and Marine Geology Program. A portion of this work was performed under the auspices of the United States Department of Energy under contract DE-AC02-05CH11231 to Lawrence Berkeley National Laboratory. The funders had no role in study design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript. Competing Interests: Co-author Christina Kellogg is a PLOS ONE Editorial Board member, and this does not alter the authors' adherence to all the PLOS ONE policies on sharing data and materials. The authors also agree to declare co-author Todd DeSantis's affiliation with the company Second Genome, Inc. and confirm that this also does not alter their adherence to all the PLOS ONE policies on sharing data and materials. * E-mail: [email protected] Introduction Coral disease is now recognized as one of the major causes of reef degradation and coral mortality. The Caribbean has been particularly hard hit, with disease mortality reducing coral cover by an order of magnitude in some areas [2,3]. A frustrating aspect of trying to manage or prevent disease is that corals have a limited number of ways to visually manifest distress (e.g., discoloration, tissue loss) and as such, the macroscopic signs that `define' a disease actually have minimal diagnostic value. Using tissue loss to characterize a coral disease is on the order of characterizing a human disease solely by the presence of a fever. Being unable to clearly distinguish one disease from another, or link macroscopic signs to specific microbial pathogens, makes it difficult, if not impossible, to develop a plan for containment or prevention. White plague is a perfect example. This disease is visibly `identified' by a sharp boundary between pigmented tissue and bare skeleton that is bright white due to recent tissue loss [4,5]. In the Caribbean, three distinct `types' (WPI, WPII, WPIII) have been described, differentiated only by the progression speed of the lesion [4,6]. One problem is that most microbial studies have collected samples at a single time point without any information about the progression speed. Therefore, each could be describing a different `type,' while combining the microbial results under the single disease name. To further underscore the point that this macroscopic symptom is not diagnostic enough, Red Sea corals that appeared to have white plague were found by microbiology and histology to be suffering from an atypical black band disease [7]. Even when confined to Atlantic corals, there appear to be numerous white plague-like diseases [8±13]. Fortunately, research- ers are beginning to realize the confusion this has created and it is becoming more common to either distinguish a disease as `white plague-like' if no progression data exists, or give each outbreak a more descriptive name (e.g., ``Tortugas multispecies rapid tissue loss disease'' [8]) following the recommendations offered by Work and Aeby [14]. PLOS ONE | www.plosone.org 1 November 2013 | Volume 8 | Issue 11 | e79801

Transcript of Comparing Bacterial Community Composition between Healthy and White Plague-Like Disease States in...

������� ��� ����� ������ � ������� �� �� ������� �� �� ��� � ���������� ������� � � �� ���������� ������� �� ���������!" #$ "������������������ � � �������� �� �� �� ��� ���� ��� � �� ����� ���� �� � ����!� ���� � � "�#��

���� "� �$��� "�# �� �� �� ��

������� ���� �� � ���� ������ �� ���������� � ��� �� ����� ������ ������� �� ����������� �� ���� ������ ���� � ������� � � ����� !��"���� #�� ��

�� �� ��� !��"����� ���� ���� ������ ���� � ������� ! �� �� ��� ��� $���� � !��� � ���� ���� ������ ���� � ������

%�����

� �� ������ �� �� �� %� ����� &������ �� ��%����� ���� � ��������� ���� � ��� �� %�� �'����� ��� �� ������ � � �� �������� ���' � ������ � �� � ���� � ��� � �� ����"��� � �� �%������ � %������� %�' ���� � � �(�%����'��� %%�� � �� �����%�� ������� �'� ������� �'� �%�� ������ � �� �'� �'������)�� * '��� %�����+ �'�� �'�%,� �-���� ���� ��� ���� � � �%�� �'� ������� � ������� � �% ���� � � � �' '���'� �� '��� %����.��"� �������� ���� �%��� � � ��� ��� � �� /�������� ������ � ������ � �'� ����� ������ 0123 ��� � ������� �� � � �� ��%'����� �������� ���� &�� , ����� #�� �� ��" �� 4����� $����� #�� �� ��"� � ��������� �� �'��� ����� �� ��%'�� ����������� ��� ��� �'� �������� $� ���� �� ������� ��%��� ��������� � ���'��� ' ���� �'��� � � � �������� ���" � �������� ��������� '��' '� ���� ��������� � �'� ������� ���� � '��� %���� ��%� $$� ,'����� ���� ������� ���� � ��� � ������� '���� ������� ��'�� �'� '���'� � ��� �� ���� ��������� �� �'� �������� ���� ���.% ������ ������� �� �%� /����� ������� ����������3 � �%����� ������ %� % ��� � � �'� %���� ���( � ��� ����� /5,��3 ���6�� � '���'� ��%���� &������ ��%��� ��� �����'�� �� 5,�� �� � �'� �������� �������������� ��'� �%������ 7' � ��������� �� ���%� � ������ ���' %���� �� � �� ������ �" '����� �� �� ��������� '��' ���� � �� ���' � � ������ ����� � �� ��� ���� � ���.������� ������� ��6������ ���� �'���� �� '�� ������ �'� ��% ����� � ���.% ������ �� �%�� ,'� �'�� �'�%,��� %�������� '��� %� ���� �� ��� �'������)�� � � �'� ������� � ������� �'���� �'� ���� ��'�� �������� ����� ������ �'� �'��� �� � '���'� � ������� �����

�������& 8��� �� ��� ����� 9�� , � ��� &����� ,:� ��� ��� �� �� /;<1-3 � �%���� !������ � ������� � �% ���� � ��� ��� =���'� �� >'��� �����.��"� &����� ���� �� �������� ����� ����� �'�� �'�%,� �- ���� ����� �� 5#? @/113A �BC@<1� � �A1<�1-B1DE �����% ���<<BC@<1

'�����& � F��� ������ ���������� ��� ����������� ������ ���� � ������

( � �� � ������ ;1� ;<1-G �� )� � 5�� ��� H� ;<1-G ��%���� � # ������ ;<� ;<1-

,'�� �� � %��.����� ������� ���� � �� � %����'�� �� �� �� ������ ��%� ������ ������������ ����������� � ������� ����� �% �� � �'�� ��� ���� �� �� �� � ��� � ��� %��% ��� ,'� �" �� ��� ������ ����� �'� ������� � �� �� ��< %����� � ��� ������� ��

*������& ,'�� %� E��� � ��%% ���� �� �'� � �� 7��� ?� ������� ���� /�7?,3 � �'� ������ ���� �� � ���� �����+� � ��� �� ����� �� � �� �� ����� % ��� � � �'�� �" � %��� ���� ����� �'� ��%���� � �'� ������ ���� &�%������ � ?����� ����� � ����� &?.��<;.<I�=11;-1 � � ����� !��"����#�� �� �� �� ��� ,'� ������� '� � � �� �� ����� ������� �� � ������ � �� ������� ������ � � %�����'� � %��%��� � � �'� �������%��

���) ���� +�� � ���& � .��' � �'������ 8��� �� �� ��5 5#? ?��� ��� ! �� ������� �� �'�� � �� � � ���� �'� ��' ��+ �'������ � �� �'� ��5 5#?% ������ � �'���� �� �� �������� ,'� ��' �� �� ���� � ������ � .��' � , �� &�����+� ������� � ��' �'� � �%�� �� �� ��� ��� $��� �� � ������'� �'�� �� � �� � � ���� �'��� �'������ � �� �'� ��5 5#? % ������ � �'���� �� �� ��������

� ?.���A �"��� ��J������ �

+�����������

����� ��� � ��� � ������ � �� �� �� ����� �� ��

�� ���������� ��� ���� ���������� �� �������� �� ��

����� ������ ���� ���� ���� ��� ��������� ��� ��� ���� ���

�� �� ���� �� �������� �� �� ��� ���� � ! ���������� �� �

�� ������ �� ����� �� ����� ��� � ���� ���� ��� � ������

����� �� ��� �� ������� ������ ���� "���� �� ����������

��� ��# ��� � � �� �� �� �� ��� ��� ���� $����% �

��� � ������ ��� ������� �������� ����� &��� ��� �� ��

���� ���� � ���� ��� � �� �� ���� �� ���� ������� �

����� ��� ���� �� �� ��� �� � ���� '��� ����� ��

����� ��������� �� ��� ���� ������� �� ���( �� �� ���

��� �� � ��� �� ������ �������� ��( �� ����� ���� �� ���

�������� �� ����� � ���� ��� ��������� �� ���������

)��� ����� � � ��� � *����� ��� ��� � ������

$��������% �� � ���� �������� ���� ������� ��� ���

��� (���� ���� � ������ ���� �� �� � �� ��� �� �+�, � -�

�� ��������� ��� ����� � $���% ").-� ).--� ).---# ���

�� � ����� ����������� ���� �� �� �������� �� �� ��

���� �+�/ � 0� ������ � ���� ��� �� ������ ���� ���

��� �� ���� �� � ���� ��� ����� ������� ��� �����������

����� �� �������� ��� ������� � � ���� � � ������ �

������� $����% ���� �������� �� �� ������ ���� ���� ��

���� ��� ���� �� ������ ���� �� �� ����� ���� ���

�� �� ��� ������ � ��� �������� ������ 1� 2� ����

���� ������ �� ��� ���� ����� �� ����� �� �� ���������

��� �������� �� � ������� ���� �� ����� �� ��� ( ���� ���

�3 � 4�� ��� ������ �� !������ ����� ��� ����� �� �

������ ���� �����5��( ��� �678� � 9���������� ��� �5

� �� �������� �� ����� �� ������� ��� �� ���� ��� �� �

� ����� ��� ����� �� ���� ��������� � ��� � $����

�����5��(% �� �� �������� ���� *��� �� ��� � � ������( �

��� � ������ ��� "���� $$������� ������ � ����� ���

�� ���%% �6 # ��������� �� � ���������� ����� �� )��(

��� !�� �8+ �

��5 5#? K �%� � ��� �� 1 # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

!������� ������ �� ����� ������� ��� �� �������� ���

��� ���� ����� ��� "���������� ��� ������ ��� ).-- �� ��

�������� �8, ��� ��� ������ ���� ��� ���� �����5��(

��� �� �� 1� 2� �8/ #� �� � �� ������� ����� ���� ����

��� ��� ���� ����������� �� ��������� �����������

������� ����� ���� ���� ������� ������� �83�86 � ���5

���� �� ������ ���� �� � ��� �� ������ ��� ��� �����

� �� ��� � ����� �� ������� �������� ���� :���

������ ���� �� ���� ��� ��� �� �����5���

�8;�8<��;��8 �� ���� �� ��� ������� �� � �� ������

=�� �8���������+ � ���� �� ��� � ��� � ������ ���� ��5

������� �� �� �� ������ �������� �������� )����� �� ��� ���

���� ��� �� �� � ���� ������ � ���=� ���� ������ �

��� �������� ��� �� �� ����5�� ���� �� ������

�������� �� ������ ��� ���� ����� � � � .���������:

>?! �� ������� ��,��/ ��� ����=�� ��� ��37�< � ��

��� ��� �� ��� ���( �� �� � .���������: @� �� ������� ��

*���� ���� �� �� ����5�� ���� �� ����� ��������

���� ������ ������ � ���� ���� "������� �� �� ��� ����������� �8 # ���� ����� ��� ��� ��� �� �� ����5�����5��(

���� �� .���������: @� "�������� �# �� ������� ��;

������ � ����� ��*����� ������ �� �� ������ ���������

��� �� ������� � ������ ���� 8�8 ������� 8/2 �1?! �� ����

�������� ����� /;�;;; ���������� ��*����� ���� "0�&#

���� ��� ����� �� ���� ���� ��*� ���� ������ �� � �� ���

*���� ����� �� (���� �� ����� ��*� ����� �� ���� ��

��� �� ����� �� �� ���� ����������� ��� ������� ������� ��

���� ��� ���������� 0�& �������� ����� ��� ��� ������

���� �� ���5��� ����=�� ��� ������ 2���� ��

������ ���� �� >�� ������� ��� A����� -���� �� ��

����� �� ��� ������ ����� ��� �� �������� ����

�� ���( ��� �������� ��*����� ���� ���� ������ ���

���� ����� ��� �� �� ���� �� �����% ��� ��

�� ���� ���� ���������� ��� ������ �� ������ ���� ��������

��� )��� .���� ��� --�

�� ���� �� � �����

?�'��� ��������� ��� ���� �� ��� ���� ����� A--25�;;652�-5

;;�� "���� A--25;6;��# ��� >1�05�;;<52�-5;;86 "����

>1�05;;;3+#� ������ �� �� ���� ������ �� �� A����� -����

?������� .��( ��� >�� ������� ?������� .��(� �� ������ ?�

��� �� �������� �� �=���� ��� �� *�������� ��� �

� ���� ���

�%�� ���� �� � ������ ��B����� ��� ���� �����5��� �� ������ � ���� ���� "���� ���

����# ���� �� ��� �� �� ��� ?������� .��( ������ ��

���� �� �;;<� 9�� ������ ��� �* ���� ����� ��

����� �� �(��� 1� �� @��� C����� '�� "86�86�+/ ?�

/+�+���� )#� 2�� D���� A����� -���� ?������� .��( "A--2# �� D���

8/783 "���� 8#� 2���� ���� ��� ������ ��� ��� ����

����� �� ��� ��� �� ���� �� $C���� !��� �% ��� � ��

"�+��6�;/ ?� 6��,,�8, )# �� �� >�� ������� ?������� .��(

">1�0# �� !���� , "���� 8#� )��� �������� �� �87�������� � ������� �� �, ��� �� >1�0 ��� �<�� ���� � ������� ��

�+ ��� �� A--2� B����� ���� �� �������� ������� ���� ��

���� �� ��� ��� )��� �����5��� �� ���� *������ �

���� ������ ���� ������ ��� ��� ����� *���

(�����

����� �� ����� ���� � ��� �5������� ���� ��� � ��

�����*������ �5 � ������ �� ��� � ��� ����� �� ��� ����

������� (���� ������� ���� ��� >��� ���� �� �����

�� �� ���� ������ � ����� ��� ���� �� ���������

��� � ���� ���� )����5��( ���� �� ��� � �� ���� ��� �5

��� �� ���� ���� �� ����� ��� ������ �� �� ��� ��

������������� '� ( �� ���� �� ���� ���� �� ������

���� ���� ����5������ ����� �� ���� ����� �� ����

�� ���� ������ �� ���� �������� ����� ��� � ���� � ���

)����5��( ���� ��� ����5����� �� ��=��� �������� 2���� ��

��������� ���� �� ���� �� �� &2@2 2�� .������ 2 ��

���� ��� ��� �������� �� � �6;�� ���� ��� ������

&#� ?(����� �-� �� ����������� � � ���� �� ����� ��� ���� ���� �

���� ���� ����� �� ������ �� ����� ���� � ���� ������

��� ��� �� ��� � ��� ��� ������� �� �� ������

�������� >?! �� *��� �� �� ����� �� ���� � � ������

���� ���� �� :0 '-0 .���.����� >?! -������� E�� ����

�� ������ ����� � �������� � ���� �� 2������� � ���

��8 � !� �� �� �� �� ����� ��� �� ���� �� *��� ���� ��

������� ������� �� � ���� �� ������ >?! *��� ����

�������� � � ���� ����� ������

1L �7#� ���� ��%������� �!������ ����� �� ����� ��� � �������� � ���� ��� �

.���� �������� 8/2 �� ����� �������� 1?! �� �� ��F

�39 ���� �� ������ �� ������ ����� ��� ����� ��

� 69 ",�5!@!@���@!����@@���!@5��# ��� ��� 8+<�1

",�5@@��!����@��!�@!���5��# ��+ � 4���� ���� ��

�, �� ������� ����� �� ������� ��� � � >?! *��� ����

��� � �������� ������� �� +67,6��� !� � � ���������

� �� �� ������ >?! �� ��� 9���� �� �������� ��� � �

�, �� �� ���� ��F 8� 4* ��= '���� ���� � �: :�����

�;; �: � � ����� "�39 ��� 8+<�1#� �;; �: � � �?�.�

�, �� ����� ��� ������� ��� ;�/�, ���� �� 4* ��=

�������� �� �� ���� �� �������� ���� �� ��� �� ���

���� �� ��������� ����� � ���� ��������F <,�� ��� � ��� ���

������� ������������ �; � � �� <,�� ��� �; � +67,6�� ���

�; � ��� 3��� ��� � ���� ��� ��� ����� *����� ��� 8; ��� ��

3���� .�1 ����� � ���� � � �������� �������� ��� �

���� �� ������ ��� �� ������ ���� !�� �� &����5;�,�

&���� �5�; :������ �; (>� ��������� ����� ���� ���

=�������� ���� ����� ����� �� �� .���������:� �� �� �5

����� 8 �� .�1 ����� � �� =�������� �� � �G ����� 45��

���� �� C�� 1��� H���������� >?! C���� � ���� � -�

�� � �� ����� �������� ���� ���� ��� �� ����� >?!

��, � �=������ �� *��� ���� �� �� �� ����� ����� �� ��� ���

���� �� � ������� �� ������ �� �� ���� �� ���

����� � "���� ���� ��� �� ����� ����� ��# �� ������� �;; ��

����� �� ����� ��� �������� �� �� ����� "�� �����# ����� ���

�� �� ��� ��� � ���� � ���� ���� ���� ����� �� * �

�� 8/2 �1?! ����� ���

�'�� �'�%,� �- �������>���� ����� ���� � ����� ���� ������ ���� � =�������

��� ���������� ���� ������ �� � ������ �� B��� � ��� ��; �

9�� � � ����� ,;; �� �� .�1 ����� � �� ������ �� ��

���������� .���������: @� >?! �� �������� ���� �� * �����

�� �� �� ������� "�������� ���� A--2:!B;/#� ��� �

� ��� +,; �� � �� �� � ����� ������� ������ �� ����5

��� �� ��� ���� �� ���� 8/2 �1?! .�1 ����� � ��� �

��*��� �� .�1 ����� � �� (���� �� �������� "����� �� �

$��(5��*%# �� ������� �������� ���� >?!-� ���

������5����� ���� �� � ������ ����� �� ��� !�������*

.��(������ !����� �� ����� ����� � �� ��������� ��

�� .���������: @� �������� �� +6�� ���� �������� �� /; ����

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� ; # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

�� �� ������� �� ����� ������ ��� ���� � ��������

� ���� ��; � '�����F 9���� �� ���� �� ����� ���� ��

@����� 2 ���� �;;; 3@� 4� � �,�� ���� ����� �����

� ���� �����*������ 6�6 ��*� �� �� ���� ���� �� ����� <

��*� �� ���(� �� �������� ��� �� 3,�� �� ���� �� �� �

�� ������ ������� ��� �� ������ !���� ����� �

������� ���� ���� ���� 8 �� /,�,�/� �� ������������� ��

"B��2 ��� ��(���� 0�& �������# ��� �� 0�& �� �� ����� �

�� ��� ������� �� �� ��� ��� ��� ���� ���� * ���� ��

�� ��*���� ��� �������� B��2 �� ���� ������� ���� ��

�4C ��� "����� � ���� @����� :� ������� !����� 2����

����� ,�8# �� ��� �� ����� �� ��(5��* ������ �������

�� 8;�;;; �� ��� � ��� ����� ������ �� �� ������� ��

�������� ���� ������������� ��� �� � � �� �� ��������

&� �������!� ������ ��*����� ��/ �� �� ��� ��� ����� "������

�� ��� #� 2��� 8 �� .���! ������ �� ������� �� ����

0�& ��� ���� �� ��� �� �� ���� ���� ����� ����F

=8I ;�,� =�I ;�<�� =�I ;�<6#� ��� ��� � �� ����� ����� ��

0�& ��� � �� ������ ���� ������� /;�;;; ���� �� 8��++8

"���� �#� �� �� ������� ���� �� �� �� ���� ����� ��

@����� � ��� �� �� ��������� ��� ��� &1CF "����FJJ

�������������J>�������J:� �������K>���J

0��� ���KE�����J#� -������ ���� �� ���� ��������� ����

������������� ���� �� ������ ��������

.1-:41 / ����� /�8�8� ������ ��3 �� �� �� �����

���� ����� ��� ������� �������������� ����� "?:>2#

���� �� *���� ���� �������� "9���� 8#� )�� ���� ������

��� J��� ����� �� ������������� �� ������� ����� ��

�������� �� '��� ����� ���������� 2=���5���� ���������

������� ���� �� �� �� �� ���� �� ���5��� ��� �����

�� ��������� "!?02-:# �� �� ��� ������ ��� ������ �� ��

�� ����� �������� ��������� ���� ������� ���� �

"���� ��� �� ��� ���� �� ����� ��� ����� ���#�

! ���� .41C ���� �� ���� "H���0�&���� 9�� 28# ��

�� �� ���� ��� ���=� 0�&� �� ����� ��� ����� �� �

������� 0�& ���� "9�� 2�# �� ������ ��� J��� ����

���� �� *��� ����� ���� ����� $$0�������%% ��� � ���

��� �� ��� �� ��� 0�& ��� ��� �� ��������� 0�& ������

<<<<<<� 1������ �� .41C ���� �� ��� � ��� ����� �

=�������� ������ ��� �� �� ����� ������� �� � ������

�� ��� �� ���� �� �� ��� �� @���� ! ��� ��� @���� '�

�� ������� ��� ����� �� ��� ������ * ������ ��� 0�&

����� �� ����� �� ������ � ��� �� 0�& ���=� �� � �� ��

������ �� ��� �� ����� ����� �� 0�& �� ������ � ��� �� ��

0�& ������ ��� ��� � ���� ������ �� ����� ������ � �

0�&� �� �������� 0�& ��� ���� �� �� ���� �� �����

����������� �� ����� 0�& �� ������ ��� ���� �� ���� ���

����� 9�� � ��� ������ � ������� �� ��� ��� ������� ��

�� �� ������ �� ���� �� ���� �� ��� 9�� 2��

! H--:45�������� 0�& ���� ��� �� �� ��� J���

���� ��� � ������� ��� �� ���� ��� ��� ������� H--:4

��6 � �� ���� $�������K��*�K�������K�������% �� �� ��

����� ��*� ������ ���� �� 0�& ������� �� �� ������

������� ������ ���� ��� ���� �� ��� �� �� �����

������ ������ ���� ��� ������ ���� ���� ��

����� �� 7 �������

( �����

��� �� � ������ ��� ������ ���� ������ ��� ����

���� "9���� 8!L !?02-: @����� 1I ;��8/� � I ;�;�,# ���

�� @����� 1 ���� ������ �������� ����� � �� ������

�������� �� �� ���� ��� ������ ���� ���� !�������

�� ���� ���� �� ��� ���� �� ���� � �� 8� ���� ��� ��

�%� �� �������� ����� ��%��� � ������� � � ���� ��� �������

�)� +� ������� �� ���� �� � , ��� �� � )�� -�.

4$$���<1 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1L� ;<<C '��� %���� 1;

4$$���<; 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1L� ;<<C '��� %���� 1;

4$$���<- 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1L� ;<<C '��� %���� 1-

4$$���<H 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1B� ;<<C '��� %���� @

4$$���<I 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1B� ;<<C '��� %���� L

4$$��=<L 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1B� ;<<C '���'� C

4$$��=<B 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1B� ;<<C '���'� @

4$$��=<C 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1B� ;<<C '���'� I

4$$��=1< 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1B� ;<<C '���'� L

4$$���11 4����� $����� #�� �� ��" M��� 1B� ;<<C '��� %���� B

&7,5���<1 &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '��� %���� -

&7,5���<; &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '��� %���� ;

&7,5���<- &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '��� %���� ;

&7,5��=<I &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '���'� ;

&7,5��=<L &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '���'� -

&7,5��=<B &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '���'� -

&7,5��=<@ &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '���'� -

&7,5��=<C &�� , ����� #�� �� ��" ��� I� ;<<C '���'� -

� '���'� ��%�� ��������� 4$$��=<@ � � ������� ��� � 1L �7#� ���� ��7 %� ���� � ������� � �� � � � �������� �� �'�� ���� ����� �� � �� � � %%�� ���� �����6���� ��������# �� �'� �� �%��� � �(������� ����'���� �'� �'��� ��%��� � '��� %����.��"� ������ � ������� �� &7,5 ��� �'� ��� ��� ��� ��������� �A1<�1-B1DE �����% ���<<BC@<1��<<1

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� - # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

��� ����� �� � ��� ��� ������ ��� �� ���� "���� 8�

9���� 8#� B����� ���� ���� � ����� ��*����� �������

������ �� ���� ���� "���� �#� 0�� �� �� 3�;<, 0�&

���=� �� ������ ����� 8;/ ";�;8G# �� ���� �� �����

���� ,;G �� �� ������ ���� �� "���� �#� �� �������� "<+J

8;/# ���� �� @���5������ �� ���� ���� �� ����� ! ������ 5

���� ��� 9���� ���

0� �� �� ����� ������ �� �� .���������: @� ��� ��

������ �������� "@�# � �� ���������� �� ���� ����5

�� ���� =�� �� �� ���������� 0�&� ������� (�����

�� � ������� �� ������ ����� �� �� ����� �

������� ���� ��� �� ,+, ����� 0�& �� �� .���������:

@� ���� �� ��� �� ��� �� ����5�� ���� =�� "���� 28#�

�� ���( �� �� ����5�� ���� =�� �� ���� ���

���� �����/��8��<�+; � 0�� ������ � ���� ���� ����� �� ����

�8� �� �� ����5�� ���� 0�&� 0�� �� �� 8�,3� 0�&

���=� �� ���� ���� "���� �#� ���� �6 ";�;�G# �� ����

�� ����� ���� ,;G �� �� ���� �� "���� +#� �� �� �����

���� ���� ���� @���5������ ��� @���5������ �� �����

���� �� ���� ����� ���� 9���� �� ��� .������ �����

4����� �� �� "3J�6# �� ��� 0�& ����� =��

�������� �� ���� ���� ���� "���� 28#�

@��� � � ���� ���������� �� ����5�� ���� =�� ��

�� ��� �� 0�& ���=� �� ���� ����� � ���� ��

?:>2 ���� ���� ���� �� �8� ����5�� ���� 0�& ���� ���

�� �������� ������ �� ����� ����� �� 8��++8 0�&

"9���� 8'#� �� ����� � �� �� ��� ���� �������

������ " ����� 9���� 8 ���� ! ��� '# ���� �� ���� ��

����5�� ���� =�� �� ��������� �� ������������ ��

����� ��� �� �� �����

! ���� ����� �� ��*� �� ���� �� ������ ��� ����

���� �� ��� ��������� ��� "���� �#� ��� �� ������ ��

� � �� �� ������ ��� "9���� �#� )�� ��� ������ ��� �����

���� �� ������ � � ���� �� ��� ����� ������ �� �

������� ��� �� ������ �� ���� ����� "9���� �#� ���

�� ��� A������� � ��� '� ���� � 0�& �� ������ ����

���� ���� ����� ��� � ������ ��� ���� �� ��� �� �

����� �� ������5� ��� 0�& ���� ��� ������ "���� �#�

2��������� �� ������ ������� ���� �� C� ������� ��

1������ ��� �� ��� 2����� � � � �� ���� ������

�� ���� ����� ����� �� ��� �� ���5� ��� 0�&

"���� +#�

)�� �������� ���� �� ����� ��������� �� ����

�����5��( ��� ���� ��� ����� ������ ��� ��� ��

�� ������ ��� ������ ���� �� ��� ������� �� �����

"!?02-: @����� 1I ;�888� � I ;�863L 9���� 8#� ��� �������

���� �� ���� �� ���� ���� ��� ������ �� �����

�������� ������� ������ �� ���������

)��� �� .���������: @� �� �������� �� ��� �� � �

0�& � ������ ��� �� �� ���� �� ������� ����

����� �� �� 0�&� !� 0�& ��� � ���� � ���� ���=�

=�� �� ���� ������ ���� � ���� ������� �� 0�&

���� �� ��� ���������� ��� ����� ).8 "�� ������ ���� ���

).--L �8, # � ��� * ���� �� ���� =�� � ��� � � ������

����� ���� ������� �� ��� �� ��� �� ������ ����

������ ���� �� �� ��� �� ������ ����� �� ������

0��� ��� ���� �� ������ ��� ��� 0�& �� �� ����� ����

��F A--2:!.;+� A--2:!B;/ ��� A--2:!B;3� !�� ���

���� �� ���� �� A����� -����� ���� �� ���� �����

��� ��� ������ ������ ������

�%� �� ?������� � � �( � ��� ��" ������� �������� �� �� ��%����� �'�� �'�%�,� �� � '���'� �� ������� � ����%��� /���� ��� �� �� ;<<C3�

�� /�0�

�1������(�2

, ���#-%��.

��� � �-%��.

� �� ��� �� �

0��3� , ���# -4.

0��3� ��� � � -4.

�� � , ���# 5��� � � -4. ����

5,�� 11�@LC L�-HL HL�I B�<CI /I;�@3 1�IB; /11�B3 H�BBH /-I�I3 1-�HH1

%����� L;B -@@ -@�< -<B /HH�;3 LB /C�L3 -;1 /HL�;3 LCI

����� BBI ILC ;L�L ;HL /-<�;3 H< /H�C3 I;C /LH�C3 @1I

������� --- ;@< 1I�C L1 /1B�C3 @ /;�-3 ;B; /BC�@3 -H1

5����� 1@I 1LI 1<�@ ;I /1-�;3 I /;�L3 1L< /@H�;3 1C<

������ 1;L 1<C 1-�I ;- /1B�H3 L /H�L3 1<- /B@�<3 1-;

�'�� B- L1 1L�H 1; /1L�H3 < /<3 L1 /@-�L3 B-

���� ���� ( ��� �

�1������(�2

, ���#-%��.

��� � �-%��.

� �� ��� �� �

0��3� , ���# -4.

0��3� ��� � � -4.

�� � , ���# 5��� � � -4.

����

5,�� H�ICC -�III ;@�< 1�I1C /;;�L3 H;@ /L�H3 H�BBH /B1�<3 L�B;1

%����� ;@1 ;;C 1@�I LL /1B�<3 ;< /I�13 -<- /BB�C3 -@C

����� HB< H<B 1-�H -- /L�<3 1@ /-�-3 HCB /C<�B3 IH@

������� ;IB ;-< 1<�I 1C /L�B3 ; /<�B3 ;L- /C;�L3 ;@H

5����� 1I; 1H; L�L 11 /L�I3 ; /1�;3 1II /C;�-3 1L@

������ CH CH < ; /1�C3 ; /1�C3 1<1 /CL�;3 1<I

�'�� IC IH @�I I /B�B3 1 /1�I3 IC /C<�@3 LI

, % %��� �������� �� 5,��� ! �� � %��� �(������ ������� �� /������� � 5,�� %������ ��� �� ������ ��%��3�� �A1<�1-B1DE �����% ���<<BC@<1��<<;

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� H # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

����������

&��� ��� J��� �� 0�& �� ��� .���������:�����

� ����� �� ���5���� �������������� ����� ���� ����

���� ����� ������� �� ��� �� ���� �����5��( �����

������ �� ��� ���� �� "9���� 8#� ! .���������: @� ����

���� *����� ��� ���� � � ��� �� �� � ���� �����5��(

��� �� � ���� �� �� �� -���5.� ��� ����� ��������� �� ��

��� �������� ���� ��� �� ��� ��, � �� ������ ��

������ �� ����� �������� �� ���� ���� ��� ��� ����

�� ����� � �� ��� ��, �� �� ����� "��� ����#� ����

���� �� .���������: @� ��� � � ���� ���� �� ���������� ���

��� ( � ��� ���� ���� ��� � �� ������ �� � ���� ����

*����� ������ � ���� ���� ���� �� '����� ���� �����

��������� .�1 "CB5.�1# �� ����� �� 0�& �8; � -�

���� �� ��� ���� ���� ����� ������ ������ �� ���

��� ��� !?02-: ������� �� ������ ��� ������ ����

�� ������ ��� ���� ����� �� ����� �������� �8; � ��

����� ����� �� ������������� 0�& "8��++8# ���� �� .����5

�����: @� ������� �� ��(�� ��������� �� ������� �� �����

���L ������ � ���� �� 9���� 8'� � ��� �� �8� 0�&

��������� ����5�� ���� =�� �� ���� ��� �� ����� �

������ ��� ���

*���� �� 6��7� ���� �������� ������ ������ -6�� . )��� �8 ��)� �� %� � �� 9�#7������ ��������# �8 )� � �� :%� �� /�0��� ���� � �� ���� � � �� 5,�� /1-�HH13� ���� ! �� ���� � �'� ������ � 5,�� �'� ������� � ���� �� � ��.�� ����� ��6����� /-1-3�� �A1<�1-B1DE �����% ���<<BC@<1��<<1

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� I # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

�%� !� 5%���� �� �( � ��� ����� /5,��3 ���6�� � '���'� ��%��� �� %������ �� ������ �'� I<N /���� � � ��3 '���'���%�������

/�0� ��#��� ���� /�� � *���# " ���

1 ����� ������ ����� ������ ����� �������� ���� ��������� ������������

1 ����� ������ ����� ������ ����� �������� ���� � ����� �����������

@ ����� ������ ����� ������ ����� �������� ���� � ����� ����������

1 ����� ������ ����� ������ ����� �������� �� %� ����������� ���������������

1 !���� ������ ��� ������ ��� ��������� ��� ��������� �����������

1 !���� ������ %'��� ������ %'��� ��������� ����� ������� �������� ��������

@1 ���������� !����� !������� !������� �������

1 ���������� �� ������ �� ��������� �� ��������� �����������

1 ���������� �� ������ �� ��������� ��'� �%����� �����������

C �� �� ������ ���%� �� ������ 4���� ���� 4���� ���� ������

1 4����� ���� �� %�� ������ %�� ��������� %�� ��������� ��1@

�;<

� �A1<�1-B1DE �����% ���<<BC@<1��<<-

�%� =� 5%���� �� �( � ��� ����� /5,��3 ���6�� � ������� ��%��� �� %������ �� �I<N /���� � � ��3 ������� ��%�������

/�0� ��#��� ���� /�� � *���# " ���

I ����� ������ ����� ������ ����� �������� � ������������� �������������

1 �'� � ���(� ���� ����� ���� ������� ���� ������ �H�

1 ��� ������ �'� � %��� �'� � %'�� ��� %'���� �����������

1 ��� ������ 5������ �� %'������ �'� � ����� ���� ������� ����������

1 ���������� !����� !������� �%'�� � ����� �������������

1 ���������� !����� ��� �������� ��� ��������� �����������

1 ���������� !����� ��� �������� ��� �������� �����������

- ���������� !����� ��� �������� ���%� � ����� �������������

; ���������� �� ������ �� ��������� �� ��������� �����������

1 ���������� �� ������ �� ��������� $������ ���� �������������

1 ���������� �� ������ �� ��������� ��'� �%����� �����

; ���������� �� ������ �� ��������� ��'� �%����� ��������

; ���������� �� ������ �� ��������� ��'� �%����� �����������

1 ���������� �� ������ �� ��������� 7���� � ����� �������������

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7'�) ����� � '����������� �����������

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7' � �������� 7' � �������� �������

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7' � �������� 7' � �������� ��������

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7' � �������� 7' � �������� ����������

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7' � �������� 7' � �������� �����

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7' � �������� 7' � �������� ���������

- �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7' � �������� 7' � �������� �����������

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ 7' � �%�������� ���� �������� ���

1 �� �� ������ ��%'%� �� ������ %'��� � ����� %'��� � ����� !�������"�����

1 �� �� ������ !��%� �� ������ !��"' �������� �6���������� �#���������

1 �� �� ������ &���%� �� ������ &����� ����� ���� &����� ����� ���� $����%�������

1 �� �� ������ &���%� �� ������ &������� � ����� &������� � ����� $����%������

1 �� �� ������ ���%� �� ������ 5��� �%�������� ����� � ����� ���%4$1@

!>

� �A1<�1-B1DE �����% ���<<BC@<1��<<H

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� L # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

:��� ����� �� ������ �� ��� ����� ���� �� ���� ���

�������� .���������: ��,��/ � ��� ���� �� ��� �������

�� ���� ���� ������ �� ������ �8��+8�+� � -� ��� ���� �

����� �� ������� ���� ����� ����� �� 0�& ���� ����

��� ���=� �� ������ ���� ������ �� ���� "���� �#� !�

���� � ������� ���� �� ������ �� ������� �� �� �� ��

.���������: @� ������ �� �� .���������: @� ����� �

������ �� �� �� ��� �� �� ����5� ��� 0�& �� �� @�

��� "���� 28#� �� ��� ��� ���� ��� �� ������ ��������

������� �� ������ ���� ���� �� ����� �� �� ������ ����

!��� �� �� ���� �� ���� �� �� ��� ������� ����� ����

�� @� ��� ����� ����� � �� �� �� ����� ��*�����

�����F ���� �� @� .��������� 2������� � ��� ��/ �� ��

8�3;� ��� �� � ����� ����� �� 6�3+8 0�& ��� ��� @� ����

��� ���� 8��++8 ��� �� � ����� ,<���� �� ����� 0�&� ��� �

�� ����� �������� �� �� �� 0�& ��� ������ � ���������

������ �� ���������� ������������ B����� ���� ��� �������

���� ��� �������� ���� ��� @� ����� -� ��� �� �� � ��

�� ������� �� ������ ���� �� �� �� ��*� ���� ��

������ �� � ���� 0�& �� �� .���������: @� "����

�� ����� ������� ����� ��� � �#� 9������ �� �� ���

���� 3�;;; 0�& ���=� �� ������ ���� "���� �� ��� ����#�

��� �� ��� ���� �� ��� ���� � �� ���� "���� �����

���� +�;;; 0�& �� ���� ���� ���� �� � ���� ����

����#� �� 1��� � ��� ���� ��, ��� ��� ����� ��� 0�&

���� �� ��� ���� �� ��� ���� �� ���� "�������� ��

������� ������� ���� ����=�� ��� �����#� 9�� �����5

���� ������ � � �� ����� ��� ���(��� ���� ������� ���

������� "���� �� ������ ����#� )��� ����� ���� "/�3�;# �� ���

0�& �� �������� ���� ������ ��� ��� ���� ���

*���� �� ( ���� ��� ����# $����� %�� ��� 8���� � ������ � $��� � ���# �� $��� )��� 7��2 ��� � � ������ ,'� 1; ��������' � ��� �' �� ��%��������� ������ �'� IN � � ���� �� ��%��� ,'� �������� ������� �� � ���������� ��%�������� �� �'� * �'��+ ���� ���,'� ��)� � ��' � � � �� �" /������� � ������� �� �'� "�� ��� 3 ��%������� �'� ������ � 5,�� �������� �� �'� ����� ������� � �'� � �� ������ � 5,�� �������� �� �'� ��%��� $�������� ��%��� �� %�������� � �'� ���� �� ��������� '���'� �� ������� %� ����� � �'� ���'��� �A1<�1-B1DE �����% ���<<BC@<1��<<;

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� B # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

��������� �� ����� ������� �� ������ ���� ������ ��

����� -� ��� �� �� �� ���� �� ���� ��*� �� �� ��

������� ���� "���� �� ������ ����#�

0�� �� �� 8��++8 0�& ���� � �� ��� ����� 8;/ 0�&

�� ���=� �� ������ ���� ��� ���� �� ��� ���� ���� ��

�� ������ ���� �� "���� �#� 0� ��� �� �� ��� ����� ��

������� 0�& ������ �� �� ����F 6 ��� ���������� 68 ���

���� ��� ��� < ��� ������ ��� ��� � ��� ���� 9���� � ���

���� ������ '� ���� � ��� A������� � �� ������ �� �

����� ���������� �� 0�& �� ������ ���� ������ ��

����� ! ����� ������� "��� �� ������ �������# ��

'� ���� � �� ��� ����� �� ������ ���� ������ �� ����

�����5��( ���� ���� �� �� .���������: @� ���� �� ��

-���5.� ��� ��, � -� ��� ����� �� ����� �� ���� �� ��� ��

���� �� ��* �������� ���� ���� ��� ������� �������5��*���

� ������ �� ���� �� ���� �+��++ � ��� ����� � � ��� ������ ���

��� ����5�� ���� ���� �� �� �� ������ ���� ���� � �������

�� �� ��������� �� � ���� ���� 1 �� ���� �� ����

�����5��( ��� �� ���� ���� � � ��� ����� ���� ���� ��

��� �� ������F � ���� ����� �� A�������� =�� �� �

�� ���� ��� ��� ������� ��� ����������� ������� "���� ��������

� �# ��6 � ��� � ����� ������� �� A������� � ��

���� ����� �������� ��� ������ ���� ".� ��� � �# ��, � )���

����� � � ��� �� ����� ��� �� ���� ���� ���

��<�+,�+/ � ��� ��� ��� �� ���� �� � � ������ ���� �� ��

���� �� ������ �+37,; �

��� �� ���� ������ ���� � ���� �� ���� ���� ���

�� ��� ���� �� ��� �� �� ������ ���� "���� �#F '2A�/J

2:8B;�� ��������� �� @��������� �� 1����� ��� ��

2 ������� �� 2������� �� 2�������� �� �������������5

�� &������������ �� ��� ��� �� � "2 ������� �� + 0�&#�

� � ������ � ���� ������ �� � ���� 0�& �� ��

.���������: @�� ��(��� �� ����� ��� �� � �� ������ �� ��

�� ������ ��� �� ���� �6 0�& ���� �� ���=� ��

���� ���� ��� ���� �� ��� ���� ���� �� ����

���� �� "���� +#� -� ���� �� ��� ������ ����� 0�& ���

�� ��� ���� ������� ��������� �� ���� ��� �� $����� ��

��� ( ���� ���% ���� !������� � ��� �3 � ���� � ������

� �� �� ��� ������� �� ���� ������ .���� � ��� �8� ���

��� ���� ��������� �� 8/2 �1?! �� ��� ������� =��

���� ���� ����� ��� ��� ( ���� ����

��� � ��� ���� ��� ���������� �� �� 1������ ��� �

������ "6 0�&L ���� +#L ��� ������ �������� ��� �� �� ��

� ��� �� �� ���� ����� ���� �� ������ � ���� ��� ��

2������� � ��� ��/ ���� �� ����� �������� .���������:

�� ������� ��� ��� �� ���� �����5��( ���� �� -���5.� ���

���� �� .���������: @� ��, � 1������ ��� � 0�& ��

������ �� � ����� ���������� �� 0�& �� ���� ����

������ �� ������ "9���� �#� 2=�� ���� �� ����

1������ ���� �� �������� ��� ������ ����� ��� �� ��

����=�� ��� ����� ���� ���� ����� ���� ��� ��� �������

��� ����������� ������� ������ �� ������ ��6 ��� ��� ��� ��

�� ���� ���� ������ ���� �����5��( ��� �8� � 9������ �

���5������ �� ����5�� ���� =�� �,8 ����� ����������� �� � �� ���� ���� ���� ���� ���� ��� ��� ����

������ ��� � �� ��������� �� ������� �� 2�������

� ��� ��/ ���� 1������ ��� � �� �����������

-� �� � �� .���������: @� �������� �� ������ ���

���� �����5��( ���� -���5.� ��� ����� ���� �� ��

�� ����� ������ ���� ���� ����� ������� �� ���� ����

�� ��������� �� ������� ���� �� C� ������� �� ���

1����� � � � ��, � 2��������� � ����� � ����� ������

������� �� 0�& ���� �� ������ �� ��� ���� ����

"9���� �#� 9����� ���� ���� ������ �� ����� ������

������� �� ��� ���� ���� "9���� �# ��� �� ���

������ �� 0�& ���=� �� ��� ���� "���� +# ��

������� ���� �� C� ������� �� ��� 2����� � � ��

&���( 1������ ��� �� �� ������ �� ��� @���5�������

��� � �� ���( �� ���� ���� ��� �� ���� ��� ���� ��

������ ������� � � @���5������ �� ��� �,� � -� �� ��

������ ��� ���� �� �� � ����� ��� �� ��������� ���� ����

���� ��� ���� ����� �� ������ ��� �������� �� ��

������( �� ���� �����5��( ��� �� ���� ���� � � �8� �

9������ �� �� �� ����� ���� ���� ��� ����� ���� ��

���������� ������� ������ ����� ���� ��� ���� ���

������� �� �� @��� '����� 1� ����� � ��� �����

����� �� � ���� ������ �,� ����� ���� ������������

���� ����� ���� ���� ���� ��� ���� �� ��� �������� -�

������ �� ��� ��� ��� �� @���5������ �� ����� �����

�� ���� "���� ������ ��� ����# ��� �� ����������

��(�� � �� �� � ��� ������ �� � ���� �� @���5������

�� ���� �� ���� ����� ���� � ��� � ��� �������� �� ���

������ �� �� � �� �� �������� �� �������� �� @���5

������ .������ ����� 9�� *����� ���� ���� ����� ����

��� � ���� � ���� �� �� �� ����� �������� ������

!����������� ���� ���� ��� ������ ������ �� ����

���� �8���/��6 � ) ��� ��� ���� ���� �� ��� ����� ���� ��

��� �� ����� ������� �� �� ��� �� ����� ����� ��

!����������� ����� 0�&� ?�� ����� � � � ��

.���������: @� ��� ����=�� ��� �� �� ������ ��

��� ��� ������� �� @���5������ �� ���� �� ����� ���

���� � ��� �� �� ���( �� ��� ��� �����

��� � �� ���� ��� ���� �8;��3 ��� ����� ��

������ ��� ������ ���� �� �� ����� �������� �����5

���� �� ������ ��� ���� ����� -� �� �� �� ��������

�� ��� �� � ����� �� /3 �� ����� 0�& �8; � ��� � ��(�� ���

��� ������ ����� ���� �� ������ �� ���� ����� ��

���� 0�& ����� �� ��� ���� "���� �# ���� *����� ���

�������� ����� ������ �� �� �������� ���������� �� �� ����

���� ���� �������� �� �������� ��*�� �� ���� ���� ��

����=�� ��� ��� � � ���� � �� � ����� ���� ��

������ ��� �� ������ �� ������ ���� �� ������ ��� ��

���� ���� �� �� �� ����� ��3 � )��� � *� �� ���� ���

���� ���� ����� ���� ��� �� �������� �� ������

���� ����� ������� ������� �� ��� ��� � ���� ��� ���

� ��� -����� �� ���� ���� ��� ���� ������ "9���� 8#�

�� ������� � ��� ����� ����� �� ���� �� � � ��� �������

�� �� � ���� ����� �� �� ����� ��� ��� � �� ���� ��� �

����� �� �� ����� ����� ��� ���� �� ����� ��� "9���� �#� -�

� ��� ��(�� ���� � � ���� ����� �� �� � ������� ��� �� ��

��� ��� � ��� � ������� ��� �� ����� �� �� ���� �

��� ���� ������ � �� ����� ��� ����

���������� ��� ����� �� �� � ���� � �� ������ ����

�� ���� ����� ��� -- ").--# �8, � ) ����� �� ���� ��� ��

�� ������ ���� ��� �� �� ���� ���� ���� �� >��

������� ��� ���� ��� ���� ���� �� A����� -���� "��

����� ��� ������# �� ������ ��� �� 0�& ���� �� ��� ��

�! ��� ����� =�� � &��� �� ��� �������� "@�# .����5

�����:��� ��� �������� 2������� � ��� ��/ �� ����� ��

�� � �! ��� ����� �� ���� ������ �� ���� �����5��� ��

������ � ���� ���� :�� � �� ���( ���� �� .���������: @�

��� ��� ������� �� *���� � ���� �����5��( ��� �� �����

�������� ��� ������ ���� ��� ��� ��� ���� ��� ���� ����� �� �!

��� ������ 2��������� ������ ���( �� �! ���� ���� ���� ���

������� ����� �� �� � �! ��� ����� �8� � >������ ������ ��

����� �� �� � �! ��� ����� ���� � ��� .�1 ����� "�� ����

�������� � � ��� ��� ������� ��� ����������� �������# ��� �����

��6 � B����� �� �� �� ��� ������� �� �� ����� ����

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� @ # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

�� �� ���� ���� ��� ����� �� ��� �� ���� �� ���

�������� ��� "�� ���� �� �� ��� ������������ ����

).-� ).--� ��� ).---#� ��� � �� ��� �� � ����� ���� ��

��� ���� ����� �� �� �� � ).--� -� �� �� �����

���� ��� �� ��(�� ������� ������� ���� ���� �� ��

�� �� ��� ������ �,�<�8;��/��6�,+ � !����������� � ����

�� �� �� ���� ���� ������� ��*���� �� �� ���� ���

���� ������� "���� >?! *��� ����# � ���� ������ �!

��� ����� ��� ���� �� ���� ���� � ���� �� ���� �� @� �� ��

���� >?!� � � ���� ��� �� ��� �� �� �� � ��*� ��������

�� ��� ���� �,, �

�����������

�� .���������: @� �� ������� ������ � ������ ��*�5

���� ������ ���� �� � � ���� �� � ������������� ��� ���

������� ��� ��� ������ ���� ���� �� � ������� ������� � ��

������� ��� �� ������������ � � � � � �=���� �� �����

����=�� ��� ������ 0�� ���� ��� �� ���� ���

�������� ���� ����� � ��� ��� �� ����5�� ���� �� �������

�� ��� � ���� ������ ���� �� ��� ���� �����5��( ���� ��

����� ��*����� ������� ����� �� �� ������ ���� �

��(�� ���� ���� �� �� ������� ������ ��������� ���� �� ��

�� ����� �� ����5�� ���� �� ����� �������� �� �!

���� ���� �+6 � ��� � ���� � � ��,�,/ � �� �� ������

�������� �� ������ ��� ���� ���� �� ����� ��������

���� ���������� ���������� �� �� ������ '� ���� ��

������� ���� �� C� ������� �� 1������ ��� �� 2���5

�� � � �� ��� A������� � ���� ����� � �� �� ����

�������� �� ���������� ���� ���� ��� @���5������

�� ����� ��� � ����� �� ��� �� �������� ���� �� ����

�))������ +�8�������

����� �� .���������: @� ���������� ��*����� ���� "0�&#

���� ������ �� �� ��� ����5�� ���� =�� �

"MC2#

�� �� 0�& ������ �������� H���0�&���� ������ �� .���

".C#

�� �� �����5������� 0�& ���� ������� � ����� ��� ��

H���0�&��� ��������

"�2A#

�� �� >����� *���� ��� ���� H���0�&��� ������� ��

��� .���������: @� 0�&�

">0�#

�2��$� ��� ���

9��� ����� �� �� : >��� '�D� 1������ ��� A�B� @������ �

��������� � (�������� !�� � �� ����� ����� �� ����� � ��� � ���

� ������ ����� ���� ��� �� ��� ����� ������� �� �� &�2�

@��������

!������� �� ������ ������� �� 9�� 28 �� �� �� �� �� &�2�

@����� �� 2���� "&2@2# ��� ��� ����� �� ��������� *��� ��

������� � ��� �� �� &2@2 �� �� &�2� @������� � �� �� � ��� �

��� ��� ������� �� �� ������� ��� ����� ������� �������� ��� ���� ��

�� � �� ����������� ������� ��� � � ��������� ��� �� ����������� �

���� �� �� &2@2 �� ��� ���� ��������

����� ������%������

��� ��� ��� ����� �� *������F �!E� .������ �� *���5

���F �!E N:. C:�� !������ �� ����F �!E N:. C:� �O>

:!@ @C!� ���������� �����J�������J������ ����F �!E >@O

@C!� )��� �� ����F �!E N:. C:� �O> :!@ >@O @C!�

( 8 � �� �

8� '��� !9� 9�(��� B� 2���� ?>� E������� ? "�;8�# ��*����� ����� ����� ��

�� �� ���� ������ :���� "��������F !�������F 2 ��� �����#� O��� D C���2� 8//F +/,7,�<�

�� B��� �. "8<<+# ���������� ���5���� ��� ����5 �� ���������� �� ��������� ���� ��� 2 �� �/,F 8,+378,,8�

�� 1��� � "�;;<# ����� ��� ���� ��� ��� ����� ��� � ���������� �

�� �� �������� ���� �� � ���� .�� 1 2� ' �3/F 8<378<6�

+� '����� D�� .���� 0� 1� ������ CC "�;;+# )��� ������ ���� ����� ������� $$����%% ���� -�F 1����� 4� C��� N� ������ ����� B���� ���

>��� '����F 2������5A����� �,87�/,�

,� >���� . "8<33# A������� �� �� ���� ���������� ��� E� C����� 9������F

� ������� ��� ���������� 4������ @�� �F ,87,6�

/� 1� ������ CC "8<<6# ����� ���F ���� � ����� (����P ���� 4 �� 4���8�F +�67++��

3� !������� �>� E�����(�5)���� 4� C��� N� B���5@������ 0� 9�� :

"�;;3# ����� ��� �������� F ����% ���� � ����� ��� � ����P !���4������ :� ������ 3�F <687<<��

6� '����� :4� 1������� '-� )���� 1� :���� D� )�� �� '� � ��� "�;8�#

>����� �� �� � �� ���� ��� ������( �� ���� ���� �� �� ������

������� ��� �� >�� ������� ?������� .��(� 9������� &2!� '��� :�� 2 � 66F8;�,78;,;�

<� '����� :4� 2���� �'� ����� !:2� A�� ������ 1 "�;8�# >�������

����� ����� ������������ � � ����� �� � ���� ��� ������(� .C02 0?46F ,38/+� >0-F 8;�8�38J������������;;,38/+�

8;� ���( @:� 1�������� D.� 2�(������ :� @����� .:� .�� 4�� � ��� "�;8�#

! �������� �� �����5������ ��� �����5�������� � ���=� �� ��

���� ���� �� ����� �������� �� ������ ��� ���� �����5���� ������ �� ���������� ���� ���� � � ���*� ����� 1� ��F �3,7�66�

88� 9��� ���59���� 1� 1� 1� :���� .� :���� 1� ������� 9� � ��� "�;8;#

2����� ������ �� ���� ����� ��( ��� �� �� ���� '�������� �� ���� ������� �� ���"� ������� C�� !� D !=��� 1 �6F �<�7�</�

8�� .���� 0� ����� 1.� C ���� :>!� '��� :1� 0%>����� !@� � ��� "�;;�#

�� �� ����� ����� �� � �����5��( ��� ��� ���� �� �������� ����

��������� ���� ����� 4������ :� ������ ,F �3;7�6��

8�� 2�Q� �� D!� B���� 2� ?���5���� �� 1� 1���RQ���51��RQ�� !� B���� .� ���� "�;8;# )��� �����5��( ���� ��� �� ���� �� �� �� )���

��������� 1� '��� ���� ,6F 8+,78,+�

8+� )��( �:� !�� @ "�;;/# 2������ ���� � ������ ��� ���� �� ����� >�

!=��� 0�� 3;F 8,,78/;�

8,� >��� 4':� 2���� @)� '� B5D� 2 ������ .� ?���� �� � ��� "�;;�#

���������� ��� ����� ��� ����� �� ����� �� ������ ���� �� ���� ����� ���

-- �� �������� ��� ������ ����� -�� D 2�� 4��� :� ������ ,�F 888,788���

8/� ������� 9C� '���� N� 2���� �� 2����� @� 2���� D� � ��� "�;;/#

��� ������ ���� �� ����� � ������ ���� �� �� ���� �����5��( ��� ��

���� �� �� 4���� ���� ��� -�� D 2�� 4��� :� ������ ,/F �/,7�/6�

83� C� :.� '����� D�� @�� 1>� D������ 1)� B���5@������ 0 "�;;3#

!� ��� ���� ��� ����� (������ ����P !�������� ������������ �� ��

*�������� ��� ����� �� ����� D 4*� :�� '��� 4 �� �+/F �/7++�

86� :���� 4:� ��� )��( 1 "�;8�# �������� ���� ���F �������

��������� �� ������ ��� ����P @��� ����� '��� 86F �,�<7�,�,�

8<� ������ D:� ������� 9C� @���5@�� '� C��� 4!� @���� �D� � ��� "�;;6#

�� ����� �� ����� ���� ����� ���� ��� �� �������� ��� -���5

.� ��� ��5�������� ����� D !��� :� ������ 8;,F 8/,678/38�

�;� .������ EC� .���� D)� 1�� �� E'� .���� 2)� :���� 4� � ��� "�;;�# ��

������� �� ���� ��*� � ����� ��� �� �� �������� �(���� ����� �������� ���� .�� ?�� ! �� 2 � &2! <<F 63�,763�;�

�8� A����� 2� :��� >E� :� �� @)� 1� ������ CC "�;;/# ������ ���

������� ����� �� ���� ������ ��� ���� ���� ��� �� �� ��� ( ���� ��� ��

>����� �� ��� 9������ E� ��� >� !=��� 0�� /<F 88<78�3�

��� 9���5C��� D� O�(� !C� '����� @�� 9��( ') "�;;�# .����������� ��

�� ����� �������� ���� ����� ��� ������� ��� ( ���� ����� ���

��� ���� ���� � !��� 4������ :� ������ /6F ��8+7���6�

��� 2(�� 1� E� ����(� C�� 1� ������ CC "�;;6# :� ������ ��������

��������� �� ��� ( ���� ��� �� �� ���� ��� ����������� ������� ���� ���

����� �� �� ���� ��������� :�� 4 �� .��� 2� �/�F 6,7<6�

�+� .���� 0� '����� D� "�;;/# '� ����� �������� ��� ��� �� ���� ���� ����

���� ��� �� �� �(���� ���� ������ �� ��� ������� ���� �����5

�������� 8/2 �1?! � ���=�� >� !=��� 0�� /<F 3<766�

�,� 1��� �� !��� �� '��� �� !����� :� >���� �� � ��� "�;8�# '� ����� ���������

�� ���� ����� ��� �� � ��������� ���� � � �������(� -2:4 D� 6

!���� �;8�� >0-F 8;�8;�6J�����;8��8�3�

�/� 2������� 2� >2���� �O� .� �� N:� '���� 4C� >2���� :E� � ��� "�;;<#

'� ����� ������� ��� ���� ����� ���5�� ���� �������� ���� ��

�� �������� ���� ���������� ���� ���� -2:4 D �F ,8�7,�8�

�3� !������ !� B���� E� :�� � � "�;8�# :���� ��������� �� �� �� �����

�������� �� ���� ���� ����� ��� ������ 9������� ����� 4������

:� ������ 8,F �;/�7�;3��

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� C # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1

�6� ��Q���� !� 1�������51 C:� .������ A� ������� C9� !�Q����59��� � "�;8�#

2���� �� �� ����� �������� �� ��� ������� ��5�������� ���� � ���� �� �� ���� ����� ���� -2:4 D /F ,;�7,8��

�<� @�� �� @>� @����� � @'� 2���� 4�0� :���� .:� 2���� @@O� � ���

"�;8�# :������� ������ �� ������ ��� ���� �����5��� �� ������� �����"� ������ ����� :� ��� 4 �� /,F 8;3/78;6/�

�;� B��� ��� >����(� 4!� >2���� �O� !���� @C� .� �� N:� � ��� "�;8;#>�5� ��� ���� ��� � �������� ���5�������� �� ����� 2 �� ��;F

�;+7�;6�

�8� 2������� 2� )����� �:� :���� : "�;8;# ������� ���� ����������*����� �� ������ �������� .C02 0?4 ,F <,,+� >0-F 8;�8�38J��������

����;;;<,,+���� E����� �!� .� �� N:� ��� C:� >2���� �O� O����� >@� � ��� "�;8�#

.���������: �� ������� �������� �� ������� ����� �� ��� ������ ������ ������ D :� ������ :�� 66F 8;�78;<�

��� 4����� &� 1����� �� '�� (� B� 4�� :� '����� 4� "8<6<# -������� ���

��� � ����� �� ����� ����������� �� ���� ��F ���� ��������� �� ��� ����� ��� 8/2 �������� 1?!� ?� � ! �� 1 83F 36+�736,��

�+� 2�� (������ 4� C�� ( ) "8<<�# ?� �� � �� ��� ����� ������ -�F@�������� :� 0%>����� !@� ������ B������( �� ?� '� �����

2������ � C�����F ! ���� .�� 8,�786<�

�,� @��(��� � D.� E����� �! "�;;6# ���5(������ ������� ����� ���� ��������5� ��� �����F ����� ����� ��� ���� �� ���� �� ������ ������ !���

4������ :� ������ 3+F 36�6736�8��/� : >����� >� .�� :?� @����� � D� ?���� ( 4.� >2���� �O� � ��� "�;8�#

!� ������� @���� ��*����� ���� *��� �� ���( ��� ����� �� �������������� ����� �� �� ���� ��� �� ���� -2:4 D /F /8;7/86�

�3� ����( E1 "8<<�# ?��5�������� ����������� ����� �� ���� ��

�������� ��� ���� !� D 4 �� 86F 88378+���6� ������� D@� E� ���(� D� 2�������� D� '������� E� '����� 9>� � ��� "�;8;#

H--:4 ����� ������ �� ����5���������� �������� =�� ��� ����� ?��:���� 3F ��,7��/�

�<� 2(�� 1� :��� >E� 1���� 41� A� D>� 1� ������ CC "�;;/# :� ������

�������� �� �� ���� �� ������ ����� ���� ��� �� ��� ( ������ ������ ��� �� ��� ( ����5���� ����������� �������� !��� 4������ :� ������

3�F ,</�7,<3��+;� .�� E� )� >� 4�� D!� )��� ? "�;;/# ����� ��������� �� �� �����

�������� �� ���� ���� ��5� ���� �� @��� �� !��(� ������� !���4������ :� ������ 3�F 8/6;78/6��

+8� '����� 0� '�5>�� 4� E�����(�5)���� 4� E������ ! "�;;3# ����� ��5

������� �� ��� ( ���� ��� �� 1� 2� ���� ����� 4������ :� ������ <F8<<,7�;;/�

+�� 1� !::� !���Q�� 2>� D��� :���� 1C� 9��� ���59���� 1'� .���� @� D��� � ���"�;;<# '� ����� ������� �� ���� ���� �� '�������� ���� �� ����

������� �� ���"� ������� D !��� :� ������ 8;/F 8�3678�63�

+�� 1�Q�� (� B� >��� B� 2���� ��( 4� C� �N "8<<<# >���������� �� ���� �� ����5

�� ��� ��� �� �� ���� ��� �� ��� "����� �� ������� C�# ��� ��( "#������ ���� C�#�

!��� 2��� 4 �� 8�F ��<7�,;�

++� O�����(�� !E� 2����������� N?� :�(���� !! "�;;8# !� ������ �� ���� ������� 4� ��� $ ����� � ��������� 4/ ���� �� ��� ������� ��� ������� ��*������ 2���

'��� '�� �� ��F 8,�,78,�;�

+,� 1����� 4� E������ ! "�;88# :� ������ ��� �� ����F ��������� ���

������ -�F >����(� O� 2������ ?� ������ ����� 1�F !� 4 ���� ��

���������� ?� N��(F 2������� +,87+/+�

+/� !���(� C� 2����� ?� '�5>�� 4� E�����(�5)���� 4� C��� N� � ��� "�;;<#

����� �� � � ���������� ��������� ���� �� �� '�� ( '��� >�� "''>#

�������� �� %���� �� ����� 94:2 :� ������ 4 �� 3;F ,8,7,�+�

+3� '���� >@� :��� �' "�;;,# >������ �� �� ���� �� ���� ���� �� ����

��� ��� �������� ���� �� @��� '����� 1�� 4������ :� ������ 3F 88/�7

883+�

+6� >���� �!� O����� !� B�� E� 1�� �� E'� )���� �!� � ��� "�;88# 2������

��������� �� �� ����� �������� �� �� �� � �� ���������� ���� ����� :��

4 �� .��� 2� +�/F �<7+;�

+<� @��� :!� 2��� 1.� : C������� :1� E����� �! "�;88# :� ������ �������

�� ��������� ���� ���� �� !������ ������ 94:2 :� ������ 4 �� 3/F 8;<7

8�;�

,;� ?��������� .� .������ 2E "�;;<# .�������� ���� ��������� �� ��������

�� ����� ������� �� ���� ���� �� �� � ��� ��� �� �� ���� ���������������� ���� �� @��� �� :������ 94:2 :� ������ 4 �� /<F �6+7�<+�

,8� :�� �(� :4� B��� -� B����� �> "�;8;# �����5�� ���� �� �����

������F ����� (������ ��� �� �������� ��� �����5����� ���� ��

-���� ���� '��� ,;F //�7/3+�

,�� E��� >-� A����� 2A "�;88# )��� ���� ��� "��� -# �� �������

�������� � ������� ���� � ��� �� �������� �� ����� 2 � 1� 8F 87,�

,�� )���� 'C� .�� �!� >����� 4! "�;;+# ����� ��� �� �� @��� '�����

1�� -�F 1����� 4� C��� N� ������ ����� B���� ��� >��� '����F

2������5A����� /<78;+�

,+� .���� ( 9D� :���� .D� )���� 'C� '���� >@ "�;88# �� ����� �� ��� �����

���� ��� �������� � .C02 .������ 3F 8;;�86�� >0-F 8;�8�38J��������

�����8;;�86��

,,� @��� :!� .���� O!� E����� �! "�;8�# ��������� �� >?! ���������

����� ��� ����������� �� ����� �������� ����� 94:2 :� ������ 4 ��

6�F +/67+33�

,/� E������ 4�4� 2������ 4� 1������ �� '��� !�� B���5@������ 0

"�;8;# '� ����� �������� �� ��� ���=����� @��� '����� 1� ���� ����

���� ��5 ��� � �5� ��� ��� �� ����� �� ����� �� ���� .C02 0?4 ,F

8;+;8�

!������ � ������� �� =���'� �� &������ � ���

��5 5#? K �%� � ��� �� 1< # ������ ;<1- K 4 ���� @ K $���� 11 K �BC@<1