UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI FRAKSI SEDIAAN BUAH …
60
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI FRAKSI SEDIAAN BUAH MERAH PAPUA (Pandanus conoideus Lam.) DENGAN METODE DPPH (2,2-DIFENIL-1-PIKRILHIDRAZIL) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS SKRIPSI diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan Program Sarjana (S1) pada Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Al-Ghifari Oleh: TRI PURNOMO DIA171435 UNIVERSITAS AL-GHIFARI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM JURUSAN FARMASI BANDUNG 2019
Transcript of UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI FRAKSI SEDIAAN BUAH …
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI FRAKSI SEDIAAN
BUAH MERAH PAPUA (Pandanus conoideus Lam.) DENGAN
METODE DPPH (2,2-DIFENIL-1-PIKRILHIDRAZIL)
MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
SKRIPSI
diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan Program Sarjana (S1) pada Jurusan FarmasiFakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Al-Ghifari
Oleh:
TRI PURNOMO
DIA171435
UNIVERSITAS AL-GHIFARI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU
PENGETAHUAN ALAM
JURUSAN FARMASI
BANDUNG
2019
LEMBAR PENGESAHAAN
Setelah membaca skripsi ini dengan seksama, menurut pertimbangan kami telah memenuhipersyaratan ilmiah sebagai suatu skripsi
Bandung, 06 Desember 2019
Menyetujui,
Pembimbing I Pembimbing II
Ginayanti Hadisoebroto M.Si.,Apt Ita Inayah M.Pd
JUDUL : UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI FRAKSI
SEDIAAN BUAH MERAH PAPUA (Pandanus conoideus
Lam.) DENGAN METODE DPPH (2,2-DIFENIL-1-
PIKRILHIDRAZIL) MENGGUNAKAN SPEKTRO-
FOTOMETRI UV-VIS
PENYUSUN : TRI PURNOMO
NIM : DIA171435
i
ABSTRAK
Antioksidan adalah senyawa yang dapat mencegah proses oksidasi radikal bebas.Radikal bebas tanpa kita sadari terbentuk secara terus-menerus di dalam tubuh.Mengkonsumsi bahan alam yang kaya antioksidan dapat menjadi upaya untukmenurunkan terjadinya penyakit degeneratif, misalnya kardiovaskular, kanker,aterosklerosis, dan osteoporosis. Salah satu buah yang memiliki kandunganantioksidan tinggi adalah buah merah. Tujuan dari penelitian ini adalah untukmenentukan aktivitas antioksidan yang terdapat pada sediaan buah merah(Pandanus conoideus Lam.) dengan metode Spektrotometri Uv-Vis menggunakanpereaksi DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil). Proses ekstraksi dilakukan dengancara sentrifugasi, dilakukan secara berulang hingga diperoleh total volume ekstrakcair 168 ml. Proses fraksinasi terhadap sediaan dilakukan dengan menggunakanpelarut non-polar (n-heksan), semi-polar (etil asetat) dan polar (air), denganmenggunakan corong pisah. Fraksi kemudian dikeringkan dengan cara diuapkandi atas penangas air menggunakan cawan penguap. Dari hasil pengujian diperolehIC50 n-heksan 36,550 ppm, IC50 etil asetat 31,520 ppm, IC50 air 34,298 ppm, danIC50 sediaan ekstrak buah merah 56,12 ppm. Sedangkan vitamin C sebagai larutanpembanding memiliki nilai IC50 8,90 ppm. Dapat disimpulkan bahwa fraksi etilasetat memiliki aktivitas antioksidan yang paling tinggi.
Kata Kunci : Antioksidan, Buah Merah, DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil),Spektrofotometri UV-Vis
ii
ABSTRACT
Antioxidants are compounds that can prevent the process of oxidation of freeradicals. Unconsciously, free radicals are formed continuously in the body.Consuming natural ingredients that are rich in antioxidants can be an effort toreduce the occurrence of degenerative diseases, such as cardiovascular disease,cancer, atherosclerosis and osteoporosis. One of the fruits that has a highantioxidant content is red fruit. The purpose of this study was to determine theantioxidant activity found in red fruit preparations (Pandanus conoideus Lam.),with the UV-Vis spectrophotometric method using DPPH (2,2-Diphenyl-1-Pikrilhidrazil) reagent. The extraction process was carried out by repeatedcentrifugation until obtained the total volume of the liquid extract was 168 ml.The fractionation process of the preparations was carried out using non-polar (n-hexane), semi-polar (ethyl acetate) and polar (water) solvents, using a separatingfunnel. Then the fraction dried by evaporating over a water bath using anevaporator cup. From the test results obtained IC50 n-hexane was 36.550 ppm,IC50 ethyl acetate 31.520 ppm, IC50 water 34.298 ppm, and IC50 of red fruitextract was 56.12 ppm. Meanwhile, vitamin C as a comparison solution has anIC50 value of 8.90 ppm. It can be concluded that the ethyl acetate fraction has thehighest antioxidant activity.
Keywords: Antioxidants, Red Fruit, DPPH (2,2-Diphenyl-1-Pikrilhidrazil), UV-Vis Spectrophotometry
iii
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kami panjatkan ke hadirat Allah SWT, karena atas ridho
dan karuniaNya, penulis diberikan kekuatan dan kemampuan untuk
menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Antioksidan dari Fraksi
Sediaan Buah Merah Papua (Pandanus conoideus Lam.) dengan Metode DPPH
(2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil) Menggunakan Spektrofotometri UV-VIS”. Tujuan
penyusunan skripsi ini adalah untuk memenuhi salah satu syarat mendapatkan
gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Al-Ghifari.
Penulis menyadari sepenuhnya akan segala keterbatasan pengetahuan dan
kemampuan yang penulis miliki, sehingga dalam penulisan ini masih banyak
kekurangan dan hasilnya masih jauh dari kesempurnaan. Penyusunan skispsi ini
tidak akan terselesaikan dengan baik tanpa bantuan berbagai pihak, baik secara
moril maupun materil. Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih
kepada :
1. Bapak Dr. H. Didin Muhafidin, S.I.P., M.Si, selaku Rektor Al-Ghifari
Bandung.
2. Bapak Ardian Baitariza M.Si., Apt, selaku Dekan Fakultas MIPA Universitas
Al-Ghifari, Bandung.
3. Ibu Ginayanti Hadisoebroto M.Si., Apt, selaku Ketua Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Al-Ghifari
Bandung, sekaligus menjadi pembimbing I yang telah memberikan petunjuk
iv
dan bimbingan dalam penyelesaian skripsi ini.
4. Ibu Ita Inayah M.Pd., selaku pembimbing II yang telah memberikan petunjuk
dan bimbingan dalam penyelesaian skripsi ini.
5. Seluruh dosen yang telah memberikan ilmunya selama masa perkuliahan, dan
seluruh staf dan karyawan Universitas Al-Ghifari Bandung.
6. Kepada ibu, bapak, dan keluarga tercinta yang telah memberikan
dukungannya selama masa perkuliahan.
7. Kepada teman-teman konversi, regular maupun non-regular yang telah
bersama- sama menyelesaikan skripsi ini.
8. Sahabat bermain Playstation 3 Liga 1 Sumbersari yaitu Sahid, Sastra, Rizki
Holis, Karbinianus, Heribertus, Cristian Fernando, Toni Permadi dan seluruh
sahabat seperjuangan angkatan tahun 2017 yang telah bersama-sama dalam
menimba ilmu.
Penulis menyadari dalam penyusunan skripsi ini tidak lepas dari kesalahan
dan kekurangan, karenanya kritik dan saran dangat diharapkan. Akhir kata, penulis
berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca pada umumnya dan
penulis pada khususnya, Aamiin.
Bandung, Desember 2019
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ................................................................................................LEMBAR PENGESAHAN .....................................................................................ABSTRAK ............................................................................................................. iABSTRACT ........................................................................................................... iiKATA PENGANTAR ......................................................................................... iiiDAFTAR ISI.......................................................................................................... vDAFTAR GAMBAR ......................................................................................... viiiDAFTAR TABEL ............................................................................................... ixDAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... x
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................ 1
1.1 Latar Belakang................................................................................ 1
1.2 Rumusan Masalah........................................................................... 2
1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................ 3
1.4 Manfaat Penelitian .......................................................................... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA....................................................................... 4
2.1 Buah Merah..................................................................................... 4
2.1.1 Deskripsi.................................................................................. 4
2.1.2 Klasifikasi................................................................................ 5
2.1.3 Morfologi................................................................................. 6
2.1.4 Habitat ..................................................................................... 6
2.1.5 Kandungan Buah Merah.......................................................... 7
2.2 Radikal Bebas ................................................................................. 8
2.3 Antioksidan..................................................................................... 11
2.4 DPPH .............................................................................................. 12
2.5 Vitamin C........................................................................................ 14
2.6 Fraksinasi ........................................................................................ 15
2.7 Spektofotometri UV-VIS................................................................ 18
2.7.1 Teori Spektrofotometri Ultraviolet........................................ 18
2.7.2 Hukum Lambert Beer ............................................................ 21
2.7.3 Penggunaan Spektrofotometri Ultraviolet............................. 22
vi
2.7.4 Analisis Kualitatif.................................................................. 23
2.7.5 Analisis Kuantitatif................................................................ 23
2.7.6 Peralatan Untuk Spektrofotometri......................................... 24
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ........................................................ 27
3.1 Alat.................................................................................................. 27
3.2 Bahan .............................................................................................. 27
3.3 Waktu dan Tempat Penelitian......................................................... 27
3.4 Pengumpulan Sampel ..................................................................... 27
3.5 Penyiapan Sampel........................................................................... 27
3.6 Metode Fraksinasi........................................................................... 28
3.6.1 Fraksinasi N-Heksan ............................................................. 28
3.6.2 Fraksinasi Etil Asetat............................................................. 28
3.6.3 Fraksinasi Air ........................................................................ 28
3.6.4 Fraksinasi Sediaan Ekstrak Buah Merah............................... 28
3.7 Uji Aktivitas Antioksidan ............................................................... 29
3.7.1 Penyiapan DPPH ................................................................... 29
3.7.2 Penentuan Panjang Gelombang............................................. 29
3.7.3 Pembuatan Larutan Standar................................................... 29
3.7.4 Uji Aktivitas Antioksidan...................................................... 29
3.7.5 Metode Penetapan Kadar....................................................... 30
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 31
4.1 Panjang Gelombang Maksimum..................................................... 31
4.2 Sentrifugasi dan Pengeringan Sampel ............................................ 32
4.3 Aktivitas Antioksidan Baku Pembanding Vitamin C ..................... 32
4.4 Aktivitas Antioksidan Fraksi N-Heksan ......................................... 33
4.5 Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat ........................................ 34
4.6 Aktivitas Antioksidan Fraksi Air .................................................... 35
4.7 Aktivitas Antioksidan Fraksi Sediaan Ekstrak Buah Merah .......... 36
4.8 Perhitungan IC50 ............................................................................. 38
vii
BAB V SIMPULAN DAN SARAN ................................................................... 40
5.1 Simpulan ......................................................................................... 40
5.2 Saran ............................................................................................... 40
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 41
LAMPIRAN........................................................................................................ 44
viii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Tanaman Buah Merah .......................................................................... 5
2.2 Reaksi antara DPPH dengan Antiradikal Bebas .................................. 13
2.3 Struktur Kima Asam Askorbat............................................................. 14
4.1 Panjang Gelombang DPPH.................................................................. 32
4.2 Kurva Inhibisi Vitamin C..................................................................... 33
4.3 Kurva Inhibisi N-Heksan ..................................................................... 34
4.4 Kurva Inhibisi Etil Asetat .................................................................... 35
4.5 Kurva Inhibisi Air ................................................................................ 36
4.6 Kurva Inhibisi Sediaan Ekstrak............................................................ 37
ix
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil Pengukuran Vitamin C .................................................................. 33
4.2 Hasil Pengukuran N-Heksan .................................................................... 34
4.3 Hasil Pengukuran Etil Asetat ................................................................... 35
4.4 Hasil Pengukuran Air............................................................................... 36
4.5 Hasil Pengukuran Sediaan Minyak .......................................................... 37
4.6 Sifat Antioksidan...................................................................................... 39
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Diagram Alir ........................................................................................ 44
2 Hasil Dokumentasi Penelitian.............................................................. 45
3 Certificate Of Analysis ......................................................................... 47
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Antioksidan adalah senyawa yang dapat mencegah proses oksidasi
radikal bebas (Darmawati dkk. 2016). Radikal bebas tanpa kita sadari
terbentuk secara terus-menerus di dalam tubuh baik berupa proses
metabolisme sel normal, peradangan, kekurangan gizi, serta akibat respon
terhadap pengaruh dari luar tubuh, misalnya polusi lingkungan, ultraviolet
(UV), dan asap rokok. Radikal bebas sering dihubungkan dengan berbagai
peristiwa fisiologis misalnya peradangan, penuaan, dan penyebab kanker
(Bhaigyabati dkk. 2011).
Kecenderungan masyarakat Indonesia saat ini adalah memilih
pemanfaatan produk-produk alami yang diyakini melindungi tubuh dari
berbagai penyakit karena cenderung tidak memiliki efek samping. Oleh
karena itu, pemanfaatan bahan alam sebagai alternatif pengobatan menjadi
pilihan yang tepat. Mengkonsumsi bahan alam yang kaya antioksidan dapat
menjadi upaya untuk menurunkan terjadinya penyakit degeneratif, misalnya
kardiovaskular, kanker, aterosklerosis, dan osteoporosis. Buah dan sayuran
adalah penyedia vitamin dan mineral yang merupakan sumber dari
phytochemical yang berfungsi sebagai antioksidan dan mekanisme pelindung
lainnya (Slavin dan Liyod, 2012).
Salah satu buah yang memiliki kandungan antioksidan tinggi adalah
buah merah (Sarungallo dkk, 2015). Pada beberapa tahun terakhir ini, buah
2
merah (Pandanus conoideus Lam.) mulai banyak digunakan untuk
pengobatan alternatif terhadap beberapa penyakit degeneratif dan kanker.
Buah merah yang paling banyak dipakai adalah species Pandananus
conoideus dengan buah merah marum, agak pendek dan biji agak besar
dibandingkan dengan spesies yang lainnya (Budi dan Paimin, 2005).
Dalam penelitian diketahui buah merah mengandung karoten dan
tokoferol yang merupakan senyawa antioksidan tinggi. Buah merah
(Pandanus conoideus Lam.) merupakan tanaman asli dari Provinsi Papua,
Indonesia. Buah ini memiliki panjang 68- 110 cm dan diameter 10-15 cm,
berwarna merah, dan mengandung minyak dalam jumlah besar. Bagi
masyarakat lokal, diyakini bahwa buah merah dapat mengobati beberapa
penyakit degeneratif seperti kanker, arteosklerosis, rheumatoid arthritis, dan
stroke (Budi dan Paimin, 2004). Ekstrak minyak buah merah mengandung
vitamin E (α dan γ-tokoferol) (Sarungallo dkk, 2015), β-karoten (Sarungallo
dkk, 2015), dan juga menunjukkan aktivitas antioksidan (Rohman dkk, 2010).
Dalam penelitian ini akan dilakukan pengujian mengenai studi
penentuan kadar antioksidan pada sediaan buah merah Papua yang beredar di
masyarakat dengan metode Spektrofotometri Uv-Vis pada panjang
gelombang 400-800 nm.
1.2 Identifikasi Masalah
Bagaimana aktivitas dari sediaan dan fraksi antioksidan yang terdapat
dalam fase air dan fase minyak dari sediaan buah merah (Pandanus conoideus
Lam.) setelah diukur menggunakan Spektrofotometer Uv-Vis dan metode
3
DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil)?
1.3 Tujuan Penelitian
Untuk menentukan aktivitas antioksidan yang terdapat pada sediaan
ekstrak buah merah (Pandanus conoideus Lam.) dengan menggunakan
Spektrofotometer Uv-Vis dan metode DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil)
1.4 Manfaat Penelitian
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui dan memberikan informasi
khususnya kepada masyarakat mengenai aktivitas antioksidan pada buah
merah (Pandanus conoideus) sehingga dapat bermanfaat untuk dijadikan
bahan referensi dan bahan pertimbangan bagi penelitian selanjutnya.
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Buah Merah (Pandanus Conoideus Lam.)
2.1.1 Deskripsi
Buah merah (Pandanus conoideus) merupakan jenis tanaman yang
termasuk ke dalam famili pandanaceae dan tanaman ini ditemukan secara
endemik di wilayah Papua (Malik, 2009). Terdapat lebih dari 30 jenis buah merah
yang tumbuh di wilayah Papua, 4 diantaranya yang banyak dibudidayakan adalah:
a. Buah merah panjang yang memiliki bentuk silindris, ujung tumpul dan
pangkal menjantung.
b. Buah merah pendek memiliki bentuk silindris, ujung lancip dan pangkal
menjantung
c. Buah merah cokelat memiliki bentuk silindris, ujung tumpul dan pangkal
menjantung.
d. Buah kuning memiliki warna kuning dan bentuk silindris, ujung tumpul
dengan pangkal menjantung (Budi dan Paimin, 2005).
Buah tersusun dari ribuan biji yang tersusun bebas membentuk kulit
buah. Biji berukuran kecil memanjang 9-13 mm dengan bagian atas meruncing.
Bagian pangkal biji menempel pada bagian jantung. Sedangkan ujungnya
membentuk totol-totol dibagian kulit buah. Biji berwarna hitam kecoklatan
dibungkus daging tipis berupa lemak. Daging buah dapat berwarna kuning, coklat,
atau merah bata tergantung jenisnya (Budi dan Paimin, 2005). Buah merah
(Pandanus conoideus) berbentuk silindris, ujung tumpul, dan pangkal
5
menjantung. Panjang buah mencapai 96-102 cm dengan diameter 15-20 cm.
Bobot buah mencapai 7-8 kg (Limbongan, 2009). Buah merah mengandung
senyawa antioksidan dengan kandungan yang cukup tinggi yaitu karotenoid
12.000 ppm, beta-karoten 700 ppm, dan tokoferol 11.000 ppm (Budi dan Paimin,
2000).
Gambar 2.1 Makroskopis Buah Merah (Lebang dkk, 2004)
2.1.2 Klasifikasi
Buah merah termasuk jenis tanaman pandan-pandanan (Pandanus).
Diperkirakan ada sekitar 600 jenis tanaman yang tergolong dalam genus
Pandanus, salah satunya adalah buah merah. Klasifikasi buah merah adalah
sebagai berikut (Budi dan Paimin, 2005). :
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Angiospermae
Subkelas : Monocotyledonae
Ordo : Pandanales
Famili : Pandanaceae
6
Genus : Pandanus
Spesies : P. Conoideus
2.1.3 Morfologi
Pada dasarnya terdapat lebih dari 30 jenis atau kultivar buah merah di
Papua. Secara garis besar diketahui ada empat kultivar yang banyak
dikembangkan karena memiliki nilai ekonomis, yaitu kultivar buah merah
panjang, buah merah pendek, cokelat, dan kuning serta warna, bentuk, dan ukuran
buah masing- masing jenis berbeda-beda. Kultivar buah merah panjang memiliki
buah berbentuk silindris, ujung tumpul, dan pangkal menjantung. Panjang buah
mencapai 96-102 cm dengan diameter 15-20 cm. Bobot buah mencapai 7-8 kg.
Warna buah merah bata saat muda dan merah terang saat matang, buah dibungkus
daun pelindung berbentuk melancip dengan duri pada tulang utama sepanjang
8/10 bagian dari ujung (Budi dan Paimin, 2005).
2.1.4 Habitat
Buah merah termasuk tanaman endemik. Secara umum habitat asal
tanaman ini adalah hutan sekunder dengan kondisi tanah lembab. Tanaman ini
ditemukan tumbuh liar di wilayah Papua dan Papua New Guinea. Di wilayah
Papua, tanaman buah merah ditemukan tumbuh di daerah dengan ketinggian
antara 2-2.300 m di atas permukaan laut. Hal ini menunjukkan bahwa tanaman
buah merah dapat tumbuh di mana saja di wilayah Papua, mulai dataran rendah
hingga dataran tinggi. Buah merah juga bisa ditemukan di bagian utara Maluku
yang menyebar dari daerah pantai hingga daerah pegunungan (Budi dan Paimin,
2005). Pada dasarnya terdapat lebih dari 30 jenis atau kultivar buah merah di
7
Papua. Namun, secara garis besar diketahui ada empat kultivar yang banyak
dikembangkan karena memiliki nilai ekonomis, yakni kultivar merah panjang,
merah pendek, cokelat, dan kuning. Warna, bentuk, dan ukuran buah masing-
masing jenis itu berbeda-beda. Kultivar merah panjang memiliki buah berbentuk
silindris, ujung tumpul, dan pangkal menjantung.
2.1.5 Kandungan Buah Merah
Buah merah (Pandanus conoideus) mengandung beberapa senyawa aktif
yang penting sebagai agen antikanker diantaranya tokoferol, β-karoten, dan
karoten. Buah merah juga mengandung banyak kalori penambah energi, kalsium,
serat, protein,vitamin B1, vitamin C dan sedikit asam kaprat, asam laurat, asam
miristat, asam linoleat, asam dekonoat, omega 3, omega 6 dan omega 9 (Hadad
dkk, 2005). Oleh karena itu, buah merah memiliki potensial untuk dikembangkan
sebagai bahan baku obat penyakit-penyakit degeneratif seperti gangguan jantung,
lever, kanker, kolesterol, diabetes, asam urat, osteoporosis, serta sebagai
antiinfeksi dan HIV. Tokoferol merupakan bentuk vitamin yang larut dalam
lemak yang berperan penting dalam tubuh. Senyawa ini dikenal juga sebagai
vitamin E yang berfungsi dalam pertahanan terhadap peroksidasi asam lemak dan
sebagai antioksidan dengan memutuskan berbagai reaksi rantai radikal bebas
(Pratiwi, 2009). Karoten secara kimia adalah suatu zat yang disintesis secara
biokimia dari delapan satuan isoprena, dan terbagi dalam dua bentuk utama yaitu
α-karoten dan β-karoten (Mun’im dkk, 2006).
Buah merah juga memiliki kandungan zat penting yang dibutuhkan oleh
tubuh yaitu karatenoid. Karotenoid berperan dalam membentuk respon imun yang
8
lebih baik, perlindungan terhadap kanker, dan juga berfungsi sebagai antioksidan.
Secara umum karotenoid, β-karoten dan α-karoten dikenal untuk mengurangi
radikal bebas. Radikal bebas dapat menyebabkan kerusakan sel yang bersifat
karsinogenik. Aktivitas antioksidan dari karotenoid adalah alasan dibalik efek
antikanker dan peningkatan sistem kekebalan tubuh (Wyeth, 2008). Buah merah
juga mengandung asam lemak yang mempunyai peran penting bagi tubuh
diantaranya asam oleat, asam palmitoleat dan asamα-linolenat.
2.2 Radikal Bebas
Radikal bebas adalah suatu senyawa atau molekul yang memiliki satu
atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya. Adanya elektron yang
tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut reaktif mencari pasangan
dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul yang berada di
sekitarnya. Senyawa yang mudah teroksidasi secara umum adalah senyawa yang
berikatan kovalen. Ikatan kovalen akan sangat berbahaya karena ikatan yang
digunakan secara bersama-sama pada orbital terluarnya. Senyawa yang memiliki
ikatan kovalen umumnya merupakan molekul-molekul besar (biomakromolekul),
yaitu lipid, protein maupun DNA. Target utama radikal bebas adalah protein,
asam lemak tak jenuh dan lipoprotein serta unsur DNA termasuk karbohidrat.
Asam lemak tak jenuh merupakan molekul yang paling rentan terhadap serangan
radikal bebas. Radikal bebas memiliki reaktivitas yang tinggi, yaitu sifatnya yang
sangat menarik atau menyerang elektron disekelilingnya. Senyawa radikal bebas
juga dapat mengubah suatu molekul menjadi radikal bebas. Senyawa radikal
bebas di dalam tubuh dapat merusak asam lemak tak jernih ganda pada membran
9
sel yang mengakibatkan dinding sel menjadi rapuh. Senyawa radikal bebas ini
berpotensi merusak DNA sehingga mengacaukan sistem info genetika dan
berlanjut pada pembentukan sel kanker. Jaringan lipid juga akan dirusak oleh
senyawa radikal bebas sehingga terbentuk peroksida yang memicu munculnya
penyakit degeneratif (Winarsi, 2013).
Reaksi oksidatif tidak hanya menyerang komponen lipid, melainkan
juga komponen penyusun sel lainnya, seperti protein, lipoprotein, maupun DNA.
Radikal bebas dapat merusak 3 senyawa penting yang berperan untuk
mempertahankan integritas (Lampe, 2010), yaitu :
a. Asam lemak, terutama asam lemak tidak jenuh yang merupakan komponen
penting fosfolipid penyusun membran sel.
b. DNA, yang merupakan perangkat genetik sel.
c. Protein, yang berperan sebagai enzim, reseptor, antibodi dan penyusun matriks
serta sitoskeleton.
Mekanisme reaksi radikal bebas paling tepat dibayangkan sebagai suatu
deret reaksi-reaksi bertahap, yaitu (Fessenden, 1992):
a. Inisiasi
Tahap inisiasi ialah pembentukan awal radikal-radikal bebas. Dalam
klorinasi metana, tahap inisiasi adalah pemaksapisahan (cleavage) homolitik
molekul Cl2 menjadi dua radikal bebas klor. Energi untuk reaksi ini diberikan
oleh cahaya ultraviolet (UV) atau oleh pemanasan campuran ke temperatur
yang sangat tinggi.
b. Propagasi
10
Setelah terbentuk, radikal bebas klor mengawali sederetan reaksi
sehingga terbentuk radikal bebas baru. Secara kolektif, terbentuknya reaksi ini
disebut tahap propagasi dari reaksi radikal bebas. Pada hakikatnya,
pembentukan awal beberapa radikal bebas akan mengakibatkan
perkembangbiakan radikal bebas baru dalam suatu reaksi pengabdian diri (self
perpetuating) yang disebut reaksi rantai. Sebagai tahap propagasi pertama,
radikal bebas klor yang reaktif merebut sebuah atom hydrogen dari molekul
metana, menghasilkan radikal bebas metal dan HCl. Radikal bebas metal itu
juga reaktif. Dalam tahap propagasi kedua, radikal bebas metil merebut sebuah
atom klor dari dalam molekul Cl2. Tahap ini menghasilkan salah satu dari
produk keseluruhan klorometana. Produk ini juga menghasilkan ulang radikal
bebas klor, yang nantinya dapat merebut atom hidrogen dari molekul metana
lain dan memulai deret propagasi selanjutnya.
c. Terminasi
Daur propagasi terputus oleh reaksi-reaksi pengakhiran (termination).
Reaksi apa saja yang memusnahkan radikal bebas atau mengubah radikal
bebas menjadi radikal yang stabil dan tidak reaktif, dapat mangakhiri daur
propagasi radikal bebas. Klorinasi metana diakhiri terutama oleh
bergabungnya radikal-radikal bebas, inilah pemusnahan radikal bebas.
Senyawa apa saja yang mudah terurai menjadi radikal bebas dapat bertindak
sebagai satu inisiator. Satu contoh ialah peroksida (ROOR), yang mudah
membentuk radikal bebas karena energi disosiasi ikatan RO-RO hanyalah
sekitar 35 kkal/mol, lebih rendah daripada kebanyakan ikatan.
11
2.3 Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa yang menangkap radikal bebas
(Prakash, 2011). Antioksidan digunakan untuk menghambat autooksidasi. Fenol-
fenol, senyawa dengan gugus OH yang terikat pada karbon cincin aromatik,
merupakan antioksidan yang efektif. Produk radikal bebas senyawa-senyawa ini
terstabilkan secara resonansi dan karena itu tidak reaktif dibandingkan dengan
kebanyakan radikal bebas lain. Vitamin E dan flavonoid adalah suatu antioksidan
alamiah yang dijumpai dalam minyak-minyak nabati (Fessenden, 1992).
Dalam pengertian kimia, antioksidan adalah senyawa-senyawa pemberi
elektron, tetapi dalam pengertian biologis lebih luas lagi, yaitu semua senyawa
yang dapat meredam dampak negatif oksidan, termasuk enzim-enzim dan
protein-protein pengikat logam (Rohman, 2012).
Berdasarkan sumbernya, antioksidan digolongkan menjadi 3 kelompok,
yaitu antioksidan primer, antioksidan sekunder dan antioksidan tersier:
a. Antioksidan primer
Antioksidan primer adalah antioksidan yang sifatnya sebagai pemutus
reaksi berantai (chain-breaking antioxidant) yang bisa bereaksi dengan
radikal-radikal lipid dan mengubahnya menjadi produk-produk yang lebih
stabil. Antioksidan primer bekerja untuk mencegah pembentukan senyawa
radikal baru, yaitu mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang
berkurang dampak negatifnya sebelum senyawa radikal bebas bereaksi.
Antioksidan primer mengikuti mekanisme pemutusan rantai reaksi radikal
12
dengan mendonorkan atom hidrogen secara cepat pada suatu lipid yang
radikal, produk yang dihasilkan lebih stabil dari produk awal (Sayuti, 2015).
b. Antioksidan sekunder
Antioksidan sekunder bekerja dengan cara mengkelat logam yang
bertindak sebagai pro-oksidan, menangkap radikal dan mencegah terjadinya
reaksi berantai. Antioksidan sekunder berperan sebagai pengikat ion-ion
logam, penangkap oksigen, pengurai hidroperoksida menjadi senyawa non
radikal, penyerap radiasi UV atau deaktivasi singlet oksigen (Sayuti, 2015).
c. Antioksidan tersier
Kelompok antioksidan tersier meliputi sistem enzim DNA-repair dan
metionin sulfoksida reduktase. Enzim-enzim ini berfungsi dalam perbaikan
biomolekuler rusak akibat rekativitas radikal bebas (Yuliani, 2010).
Berdasarkan jenisnya, antioksidan dapat dibedakan menjadi 4
golongan,yaitu:
1. Antioksidan enzimatik (SOD, glutation peroksidase, katalase),
2. Antioksidan hidrofilik (asam askorbat, GSH, asam urat),
3. Antioksidan lipofilik (tokoferol, flavonoid, karotenoid),
4. Antioksidan pereduksi (glutation reduktase, dehidroaskorbat reduktase).
2.4 DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)
Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) adalah suatu senyawa radikal
nitrogen. DPPH akan mengambil atom hidrogen yang terdapat dalam suatu
senyawa, misalnya senyawa fenol. Mekanisme terjadinya reaksi DPPH ini
berlangsung melalui transfer elektron. Larutan DPPH yang berwarna ungu
13
memberikan serapan absorban maksimum pada 517 nm. Larutan DPPH ini akan
mengoksidasi senyawa dalam ekstrak tanaman. Proses ini ditandai dengan
memudarnya warna larutan dari ungu menjadi kuning (Prakash, 2011).
Metode DPPH mudah digunakan, cepat, cukup teliti dan mudah untuk
mengukur kapasitas antioksidan dengan menggunakan radikal bebas DPPH.
Metode DPPH dapat digunakan untuk sampel padatan, larutan dan tidak spesifik
untuk komponen antioksidan tertentu. Elektron bebas dalam radikal DPPH
memberikan absorbansi maksimum pada 517 nm dan berwarna ungu (Prakash,
2011).
Gambar 2.2. Rumus Struktur 1,1-diphenyl-2-picrylehydrazyl
Metode DPPH berfungsi untuk mengukur elektron tunggal seperti
aktivitas transfer hidrogen juga untuk mengukur aktivitas penghambatan radikal
bebas. Pada uji DPPH, penangkapan radikal diikuti dengan monitoring penurunan
absorpsi yang terjadi karena reduksi oleh radikal (Prakash, 2011).
Adanya senyawa yang bereaksi sebagai antiradikal akan mereduksi
radikal DPPH menurut reaksi:
14
Gambar 2.3. Reaksi antara DPPH dengan Antiradikal Bebas
Akibatnya penambahan senyawa yang bereaksi sebagai antiradikal bebas
akan menurunkan konsentrasi DPPH. Adanya penurunan konsentrasi DPPH akan
menyebabkan penurunan absorbansi dibandingkan dengan absorbansi bebas
control yang tidak diberi dengan senyawa uji yang diduga mempunyai aktivitas
antiradikal (Rohman, 2005).
2.5 Vitamin C
Vitamin C adalah salah satu antioksidan sekunder yang memiliki
kemampuan menangkap radikal bebas dan mencegah terjadinya reaksi berantai.
Berbagai penelitian yang dilakukan vitamin C digunakan dalam beberapa tingkat
konsentrasi untuk dapat mengetahui aktivitas antioksidan, yaitu kemampuan
untuk dapat meredam radikal bebas dengan menggunakan metode DPPH (Sayuti,
2015).
Vitamin C sebagai sumber antioksidan memiliki manfaat bagi tubuh
antara lain membantu menjaga pembuluh-pembuluh kapiler, meningkatkan
penyerapan asupan zat besi, menghambat produksi nitrosamine, zat pemicu
kanker dan memperbaiki sistem kekebalan tubuh. Senyawa yang digunakan
sebagai pembanding (kontrol positif) dalam uji aktivitas penangkapan radikal
hidroksil dalam penelitian ini adalah vitamin C (Cahyadi, 2008).
15
Gambar 2.4. Struktur Kima Asam Askorbat
Dalam keadaan murni, vitamin C berbentuk kristal putih dengan berat
molekul 176,13 dengan rumus bangun C6H8O6, dengan titk lebur 190-192oC
(Depkes RI, 2014).
Asam askorbat dapat meningkatkan fungsi imun, dengan menstimulasi
produksi interferon (protein yang melindungi sel dari serangan virus). Vitamin ini
dapat menstimulasi kemotaksis dan respon proliferasi netrofil, serta melindungi
sel dari serangan radikal bebas yang diproduksi oleh netrofil teroksidasi. Asam
askorbat dinyatakan dapat memacu kerja sintesis factor humoral, terutama
antibody IgG dan IgM. Vitamin C mampu mereduksi radikal superoksidasi,
hidroksil, asam hipoklorida dan oksigen reaktif yang berasal dari netrofil dan
monosit yang teraktifasi.
2.6 Fraksinasi
Fraksinasi pada prinsipnya adalah proses penarikan senyawa pada suatu
ekstrak dengan menggunakan dua macam pelarut yang tidak saling bercampur.
Pelarut yang umumnya dipakai untuk fraksinasi adalah n-heksan, etil asetat, dan
metanol. Untuk menarik lemak dan senyawa non polar digunakan n-heksan, etil
asetat untuk menarik senyawa semi polar, sedangkan metanol untuk menarik
senyawa- senyawa polar. Dari proses ini dapat diduga sifat kepolaran dari
16
senyawa yang akan dipisahkan. Sebagaimana diketahui bahwa senyawa-senyawa
yang bersifat non polar akan larut dalam pelarut yang non polar sedangkan
senyawa-senyawa yang bersifat polar akan larut dalam pelarut yang bersifat polar
juga (Mutiasari, 2012).
Kolom kromatografi dikemas kering (biasanya dengan penjerap mutu
KLT 10-40 μm) dalam keadaaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan
maksimum. Vakum dihentikan, pelarut yang kepolarannya rendah dituangkan ke
permukaan penjerap lalu divakumkan lagi. Kolom dihisap sampai kering dan siap
dipakai. Cuplikan dilarutkan ke dalam pelarut yang cocok, dimasukkan langsung
pada bagian atas kolom atau pada lapisan penjerap dan dihisap sampai kering
pada setiap pengumpulan fraksi. Oleh karena itu, kromatografi vakum cair
menggunakan tekanan rendah untuk meningkatkan laju aliran fase gerak
(Hostettmann dkk, 1995).
Kromatografi vakum cair merupakan modifikasi dari kromatografi kolom
gravitasi. Metode ini lebih banyak digunakan untuk fraksinasi sampel dalam
jumlah besar (10-50 g). Kolom yang digunakan biasanya terbuat dari gelas
dengan lapisan berpori pada bagian bawah. Ukuran kolom bervariasi tergantung
ukurannya. Kolom disambungkan dengan penampung eluen yang dihubungkan
dengan pompa vakum. Pompa vakum akan menghisap eluen dalam kolom,
sehingga proses pemisahan berlangsung lebih cepat. Penggunaan tekanan
dimaksudkan agar laju aliran eluen meningkat sehingga meminimalkan terjadinya
proses difusi karena ukuran silika gel yang biasanya digunakan pada lapisan
kromatografi lapis tipis (KLT) sebagai fasa diam dalam kolom yang halus yaitu
17
200-400 mesh. Kolom yang digunakan berukuran lebih pendek dari pada kolom
kromatografi gravitasi dengan diameter yang lebih besar (5- 10 cm). Kolom KVC
dikemas kering dalam keadaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan
maksimum. Sampel yang akan dipisahkan biasanya sudah diadsorbsikan ke
dalam silika kasar terlebih dahulu (ukuran silika kasar 30-70 mesh) agar
pemisahannya lebih teratur dan menghindari sampel langsung menerobos
kedinding kaca tanpa melewati adsorben terlebih dahulu, yang dapat berakibat
gagalnya proses pemisahan. Pelarut yang kepolarannya rendah dituangkan ke
permukaan penyerap yang sebelumnya sudah dimasukkan sampel. Kolom dihisap
perlahan-lahan ke dalam kemasan dengan memvakumkannya. Kolom dielusi
dengan campuran pelarut yang cocok, mulai dengan pelarut yang kepolarannya
rendah lalu kepolaran ditingkatkan perlahan-lahan. Kolom dihisap sampai kering
pada setiap pengumpulan fraksi, sehingga kromatografi vakum cair disebut juga
kolom fraksinasi (Atun, 2014).
Kromatografi kolom merupakan salah satu contoh kromatografi adsorbsi.
Senyawa yang dipisahkan dengan kromatografi kolom memiliki mekanisme yang
sama dengan jenis kromatografi lain yaitu berkaitan dengan perbedaan gaya-gaya
antarmolekul dalam sampel dengan fase gerak dan antara komponen dengan fasa
diam. Prinsip kerja kromatografi kolom yaitu zat cair sebagai fasa gerak akan
membawa cuplikan senyawa mengalir melalui fasa diam sehingga terjadi
interaksi berupa adsorbsi senyawa-senyawa tersebut oleh padatan dalam kolom.
Kecepatan bergerak suatu komponen dalam cuplikan tergantung pada seberapa
besar/lama komponen tersebut tertahan oleh padatan penyerap dalam kolom.
18
Hasil yang diperoleh berupa fraksi-fraksi senyawa (eluat) yang ditampung pada
bagian bawah kolom (Rubiyanto, 2016).
Beberapa jenis pelarut dan fasa gerak untuk kromatografi kolom menurut
deret Trappe. Deret ini menggambarkan kekuatan elusi pelarut-pelarut dengan
kolom yang menggunakan padatan penyerap silika gel:
Air murni<metanol<etanol<propanol<aseton<etil asetat<dietil
eter<kloroform<metilen klorida<benzena<toluena<trikloro etilen<karbon
tetraklorid<sikloheksana<heksana
Urutan pelarut-pelarut diatas menunjukkan bahwa semakin turun
kepolarannya maka semakin bertambah kekuatan pelarut tersebut untuk
mengelusi senyawa yang teradsorbsi oleh silika gel (Rubiyanto, 2016).
2.7 Spektrofotometri UV-Vis
Spektrofotometer merupakan alat yang digunakan untuk mengukur energi
secara relatif jika energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan, dan diemisikan
sebagai fungsi dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu. Sedangkan
fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang
diabsorbsi (Khopkar, 2008).
2.7.1 Teori Spektrofotometri Ultraviolet
Spektrofotometri Serapan merupakan pengukuran suatu interaksi antara
radiasi elektromagnetik dan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Teknik yang
sering digunakan dalam analisis farmasi meliputi Spektrofotometri Ultraviolet,
Cahaya tampak, Inframerah dan Serapan Atom. Jangkauan panjang gelombang
untuk daerah ultraviolet adalah 190-380 nm, daerah cahaya tampak 380-780 nm,
19
daerah inframerah dekat 780-3000 nm, dan daerah inframerah 2,5-40 µm atau
4000-250 cm-1 (Ditjen POM, 1995).
Radiasi ultraviolet dan sinar tampak diabsorpsi oleh molekul organik
aromatik, molekul yang mengandung elektron-π terkonjugasi dan atau atom yang
mengandung elektron-n, menyebabkan transisi elektron di orbital terluarnya dari
tingkat energi elektron dasar ke tingkat energi elektron tereksitasi lebih tinggi.
Besarnya serapan radiasi tersebut sebanding dengan banyaknya molekul analit
yang mengabsorpsi sehingga dapat digunakan untuk analisis kuantitatif
(Satiadarma, 2004).
Gugus fungsi yang menyerap radiasi di daerah ultraviolet dekat dan daerah
tampak disebut khromofor dan hampir semua khromofor mempunyai ikatan tak
jenuh. Pada khromofor jenis ini transisi terjadi dari π→π*, yang menyerap pada λ
max kecil dari 200 nm (tidak terkonjugasi), misalnya pada >C=C< dan -C≡C-.
Khromofor ini merupakan tipe transisi dari sistem yang mengandung elektron π
pada orbital molekulnya. Untuk senyawa yang mempunyai sistem konjugasi,
perbedaan energi antara keadaan dasar dan keadaan tereksitasi menjadi lebih kecil
sehingga penyerapan terjadi pada panjang gelombang yang lebih besar.
Gugus fungsi seperti –OH, -NH2 dan –Cl yang mempunyai elektron-
elektron valensi bukan ikatan disebut auksokhrom yang tidak menyerap radiasi
pada panjang gelombang lebih besar dari 200 nm, tetapi menyerap kuat pada
daerah ultraviolet jauh. Bila suatu auksokhrom terikat pada suatu khromofor,
maka pita serapan khromofor bergeser ke panjang gelombang yang lebih panjang
(efek batokhrom) dengan intensitas yang lebih kuat. Efek hipsokhrom adalah
20
suatu pergeseran pita serapan ke panjang gelombang lebih pendek, yang sering
kali terjadi bila muatan positif dimasukkan ke dalam molekul dan bila pelarut
berubah dari non polar ke pelarut polar (Dachriyanus, 2004).
Secara eksperimental, sangat mudah untuk mengukur banyaknya radiasi
yang diserap oleh suatu molekul sebagai fungsi frekuensi radiasi. Suatu grafik
yang menghubungkan antara banyaknya sinar yang diserap dengan frekuensi
(panjang gelombang) sinar merupakan spektrum absorpsi. Transisi yang
dibolehkan (allowed transition) untuk suatu molekul dengan struktur kimia yang
berbeda adalah tidak sama sehingga spectra absorpsinya juga berbeda. Dengan
demikian, spectra dapat digunkan sebagai bahan informasi yang bermanfaat untuk
analisis kualitatif. Banyaknya sinar yang diabsorpsi pada panjang gelombang
tertentu sebanding dengan banyaknya molekul yang menyerap radiasi, sehingga
spectra absorpsi juga dapat digunakan untuk analisis kuantitatif (Gandjar dan
Rohman, 2007).
Hal–hal yang harus diperhatikan dalam analisis Spektofotometri
Ultraviolet adalah:
1. Pemilihan Panjang Gelombang Maksimum
Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah panjang
gelombang dimana terjadi serapan maksimum. Untuk memperoleh panjang
gelombang serapan maksimum, dilakukan dengan membuat kurva hubungan
antara absorbansi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku pada
konsentrasi tertentu.
2. Pembuatan Kurva Kalibrasi
21
Dibuat seri larutan baku dari zat yang akan dianalisis dengan berbagai
konsentrasi. Masing–masing absorbansi larutan dengan berbagai konsentrasi
diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara absorbansi
dengan konsentrasi. Bila hukum Lambert-Beer terpenuhi maka kurva
kalibrasi berupa garis lurus.
3. Pembacaan absorbansi sampel atau cuplikan
Absorbansi yang terbaca pada Spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai
0,6. Anjuran ini berdasarkan anggapan bahwa pada kisaran nilai absorbansi
tersebut kesalahan fotometrik yang terjadi adalah paling minimal (Gandjar
dan Rohman, 2007).
2.7.2 Hukum Lambert Beer
Menurut Hukum Lambert, serapan berbanding lurus terhadap ketebalan sel
yang disinari. Menurut Hukum Beer, yang hanya berlaku untuk cahaya
monokromatik dan larutan yang sangat encer, serapan berbanding lurus dengan
konsentrasi (banyak molekul zat). Kedua pernyataan ini dapat dijadikan satu
dalam Hukum Lambert-Beer, sehingga diperoleh bahwa serapan berbanding lurus
terhadap konsentrasi dan ketebalan sel, yang dapat ditulis dalam persamaan:
A = a.b.C g/liter atau A = ε . b. C mol/liter
Keterangan:
A = serapan (tanpa dimensi)
a = absorptivitas (g-1 cm-1)
b = ketebalan sel (cm)
C = konsentrasi (g. l-1)
22
ε = absorptivitas molar (M-1cm-1)
Jadi dengan Hukum Lambert-Beer konsentrasi dapat dihitung dari ketebalan
sel dan serapan. Absorptivitas merupakan suatu tetapan dan spesifik untuk setiap
molekul pada panjang gelombang dan pelarut tertentu.
Menurut Roth dan Blaschke 1981, absorptivitas spesifik juga sering
digunakan sebagai ganti absorptivitas. Harga ini memberikan serapan larutan 1%
(b/v) dengan ketebalan sel 1 cm sehingga dapat diperoleh persamaan:
A = . b . C
Keterangan :
= absorptivitas spesifik (ml g-1 cm-1)
b = ketebalan sel (cm)
C = konsentrasi senyawa terlarut (g/100 ml larutan)
2.7.3 Penggunaan Spektrofotometri Ultraviolet
Pada umumnya spektrofotometri ultraviolet dalam analisis senyawa organik
digunakan untuk:
1. Menentukan jenis khromofor, ikatan rangkap yang terkonjugasi dan
auksokhrom dari suatu senyawa organik.
2. Menjelaskan informasi dari struktur berdasarkan panjang gelombang serapan
maksimum suatu senyawa.
3. Mampu menganalisis senyawa organik secara kuantitatif dengan
menggunakan hukum Lambert-Beer (Dachriyanus, 2004).
23
2.7.4 Analisis Kualitatif
Kegunaan Spektrofotometri Ultraviolet dalam analisis kualitatif sangat
terbatas, karena rentang daerah radiasi yang relatif sempit hanya dapat
mengakomodasi sedikit sekali puncak absorpsi maksimum dan minimum, karena
itu identifikasi senyawa yang tidak diketahui tidak memungkinkan.
Penggunaannya terbatas pada konfirmasi identitas dengan menggunakan
parameter panjang gelombang puncak absorpsi maksimum, λmax, nilai
absorptivitas, a, nilai absorptivitas molar, ε, atau nilai ekstingsi, A1%, 1cm, yang
spesifik untuk suatu senyawa yang dilarutkan dalam suatu pelarut dan pH tertentu
(Satiadarma, 2002).
2.7.5 Analisis Kuantitatif
Penggunaan utama Spektrofotometri Ultraviolet adalah dalam analisis
kuantitatif. Apabila dalam alur Spektrofotometer terdapat senyawa yang
mengabsorpsi radiasi, akan terjadi pengurangan kekuatan radiasi yang mencapai
detektor. Parameter kekuatan energi radiasi khas yang diabsorpsi oleh molekul
adalah absorban (A) yang dalam batas konsentrasi rendah nilainya sebanding
dengan banyaknya molekul yang mengabsorpsi radiasi dan merupakan dasar
analisis kuantitatif. Penentuan kadar senyawa organik yang mempunyai gugus
khromofor dan mengabsorpsi radiasi ultraviolet-sinar tampak, penggunaannya
cukup luas. Konsentrasi kerja larutan analit umumnya 10 sampai 20 µg/ml, tetapi
untuk senyawa yang nilai absorptivitasnya besar dapat diukur pada konsentrasi
yang lebih rendah. Senyawa yang tidak mengabsorpsi radiasi ultraviolet-sinar
tampak dapat juga ditentukan dengan Spektrofotometri Ultraviolet-Sinar tampak,
24
apabila ada reaksi kimia yang dapat mengubahnya menjadi khromofor atau dapat
disambungkan dengan suatu pereaksi khromofor (Satiadarma, 2004).
2.7.6 Peralatan Untuk Spektrofotometri
Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitans atau serapan
suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Alat ini terdiri dari spektrometer
yang menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan
fotometer sebagai alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang
diabsorpsi (Khopkar, 1990; Day and Underwood, 1981).
Berikut ini adalah uraian bagian-bagian spektrofotometer:
1. Sumber-sumber Lampu
Lampu panjang digunakan untuk daerah UV pada panjang gelombang dari
190-350 nm, sementara lampu halogen kuarsa atau lampu tungsten digunakan
untuk daerah visibel (pada panjang gelombang antara 350-900 nm).
2. Monokromator
Digunakan untuk memperoleh sumber sinar yang monokromatis. Alatnya
dapat berupa prisma ataupun grating. Untuk mengarahkan sinar
monokromatis yang diinginkan dari hasil penguraian.
a. Celah (Slit)
Celah monokromator adalah bagian yang pertama dan terakhir dari suatu
sistem optik monokromator pada Spektrofotometer. Celah monokromator
berperan penting dalam hal terbentuknya radiasi monokromator dan
resolusi panjang gelombang.
25
b. Filter Optik
Cahaya tampak yang merupakan radiasi elektromagnetik dengan panjang
gelombang 380-780 nm merupakan cahaya putih yang merupakan
campuran cahaya dengan berbagai macam panjang gelombang. Filter
optik berfungsi untuk menyerap warna komplementer sehingga cahaya
tampak yang diteruskan merupakan cahaya yang berwarna sesuai dengan
warna filter optik yang dipakai.
c. Prisma dan kisi (grating)
Prisma dan kisi merupakan bagian monokromator yang terpenting.
Prisma dan kisi pada prinsipnya mendispersi radiasi elektromagnetik
sebesar mungkin supaya didapatkan revolusi yang baik dari radiasi
polikromatis.
3. Kuvet
Pada pengukuran di daerah tampak, kuvet kaca atau kuvet kaca corex dapat
digunakan, tetapi untuk pengukuran pada daerah UV kita harus menggunakan
sel kuarsa karena gelas tidak tembus cahaya pada daerah ini. Umumnya tebal
kuvet adalah 10 mm, tetapi yang lebih kecil ataupun yang lebih besar dapat
digunakan. Sel yang biasa digunakan berbentuk persegi, tetapi bentuk silinder
dapat juga digunakan. Kuvet yang bertutup digunakan untuk pelarut organik.
Sel yang baik adalah kuarsa atau gelas hasil leburan yang homogen.
4. Detektor
Detektor merupakan salah satu bagian dari Spektrofotometer yang penting
oleh sebab itu detektor akan menemukan kualitas dari Spektrofotometer
26
adalah mengubah signal elektronik. Peranan detektor penerima adalah
memberikan respon terhadap cahaya pada berbagai panjang gelombang.
5. Suatu amplifier (penguat) dan rangkaian yang berkaitan yang membuat
isyarat listrik dapat untuk diamati.
6. Sistem pembacaan yang memperlihatkan besarnya isyarat listrik (Rohman,
2007).
27
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Alat Penelitian
Alat yang digunakan adalah labu ukur 100 mL (Iwaki pyrex), labu ukur 50
mL (Iwaki pyrex), labu ukur 25 mL (Iwaki pyrex), labu ukur 10 mL (Iwaki pyrex),
gelas kimia (Schott duran), corong, rotary vaporator (IKA), neraca analitik
(Shimadzu), spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu Corporation UV-1800),
sentrifugator, pipet volume, pipet, spatel, kaca arloji, dan vial.
3.2 Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan adalah sediaan buah merah (Pandanus conoideus
Lam), aquadest, etil asetat, n- heksan, etanol 96%, DDPH, asam askorbat (Vit C).
3.3 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Agustus hingga November 2019 di
Laboratorium Instrumen, Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam (FMIPA), Universitas Al-Ghifari, Bandung, Jawa Barat.
3.4 Pengumpulan Sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah sediaan buah merah
(Pandanus conoideus Lam) yang diambil dari Jayapura, Papua.
3.5 Penyiapan Sampel
7ml sediaan ditambahkan 7 ml aquadest lalu disentrifugasi menggunakan
alat sentrafugator dilakukan secara berulang sebanyak total sediaan 168 ml.
28
3.6 Metode Fraksinasi
3.6.1 Fraksinasi N-Heksan
Proses pemisahan zat aktif dengan pelarut non-polar n-heksan dengan
menggunakan corong pisah (metode fraksinasi). Fraksi air 40mL ditambahkan
pelarut n-heksan dikocok dalam corong pisah, menghasilkan n-heksan dan air,
dilakukan secara berulang (tiga kali pengulangan). Fraksi kemudian dikeringkan
dengan cara diuapkan di atas penangas air menggunakan cawan penguap.
3.6.2 Fraksinasi Etil Asetat
Proses pemisahan zat aktif dengan pelarut semi-polar etil asetat dengan
menggunakan corong pisah (metode fraksinasi). Fraksi air 40mL ditambahkan
pelarut etil asetat dikocok dalam corong pisah, menghasilkan etil asetat dan air,
dilakukan secara berulang (tiga kali pengulangan). Fraksi kemudian dikeringkan
dengan cara diuapkan di atas penangas air menggunakan cawan penguap.
3.6.3 Fraksinasi Air
Hasil akhir setelah proses pemisahan oleh pelarut n-heksan dan pelarut etil
asetat yang telah dilakukan, kemudian fraksi air dikeringkan dengan cara
diuapkan di atas penngas air menggunakan cawan penguap.
3.6.4 Fraksinasi Sediaan Ekstrak Buah Merah
80mL hasil sentrifugasi sediaan minyak ekstrak buah merah (Pandanus
conoideus Lam.) diambil 20 lalu diupkan dengan penangas air menggunakan
cawan penguap. Namun karena ekstrak tidak mengering, langsung ke proses
pengenceran 10:100 (100 ppm) dengan menimbang 10mg sediaan ekstrak
29
(mengandung minyak) dan dilarutkan dalam labu ukur 100mL menggunakan
ethanol 96%
3.7 Uji Aktivitas Antioksidan
3.7.1 Penyiapan DPPH
Sebanyak 4 mg DPPH dilarutkan dengan etanol 96% dalam labu ukur 100
mL hingga diperoleh konsentrasi 40 ppm (0,004%). Larutan dijaga pada suhu
rendah dan terlindung dari cahaya untuk segera digunakan (Fu Kuang, dkk.,
2009).
3.7.2 Penentuan Panjang Gelombang
Sebanyak 2 mL larutan DPPH 40 ppm ditambahkan 1 ml etanol 96% dan
didiamkan selama ± 30 menit. Kemudian dilakukan pengukuran λmaks dengan
spektrofometer UV-VIS pada panjang gelombang 400 – 800 nm. ( Rahayu dkk,
2010).
3.7.3 Pembuatan Larutan Standar
Asam askorbat digunakan sebagai pembanding dengan konsentrasi 2, 4. 6,
8, 10 ppm. Diambil sebanyak 1 mL asam askorbat kemudian ditambahkan 2 mL
DPPH 40 ppm ke dalam tiap konsentrasi larutan asam askorbat, didiamkan
kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum. (Sri
Maryam dkk,. 2013). Kemudian dihitung dengan persamaan IC50 y=bx + a
3.7.4 Uji Aktivitas Antioksidan
Konsentrasi sampel uji berupa fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, fraksi air,
dan sediaan minyak buah merah (Pandanus conoideus Lam), dengan masing-
masing larutan induk yaitu 100 ppm dibuat berbagai konsentrasi yaitu 2, 4, 6, 8,
30
dan 10 ppm. Dari konsentrasi larutan uji diambil sebanyak 1 mL lalu ditambahkan
larutan DPPH sebanyak 2 mL ke dalam masing-masing larutan uji, kemudian
diinkubasi selama 30 menit. Blangko yang digunakan adalah larutan etanol 96%.
Absorbansi diukur menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada λ = 515,5 nm.
Uji aktivitas antioksidan dapat dihitung berdasarkan nilai peredaman radikal
bebas (%) dengan rumus sebagai berikut:
% ℎ = . − .. × 100%Persen inhibisi aktivitas antioksidan dari berbagai konsentrasi ekstrak dibuat
persamaan regresi linier. Aksis (sumbu x) adalah konsentrasi sampel dan ordinat
(sumbu y) adalah persen inhibisi aktivitas antoksidan, sehingga y = ax + b. Nilai
IC50 dihitung ketika persen aktivitas antioksidan sebesar 50% yaitu konsentrasi
larutan yang mampu memberikan perendaman DPPH sebesar 50% (Molyneux,
2004).
3.7.5 Metode Penetapan Kadar
Diukur serapan larutan sampel menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
pada panjang gelombang 400-800 nm. Kadar antioksidan sediaan buah merah
(Pandanus conoideus Lam) dihitung menggunakan persamaan IC50 yang telah
didapat.
31
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Panjang Gelombang Maksimum
Dalam penelitian ini dilakukan pengujian mengenai studi penentuan kadar
antioksidan pada sediaan buah merah Papua yang beredar di masyarakat dengan
metode spektrofotometri uv-vis pada panjang gelombang 400-800 nm. Tujuannya
untuk menentukan aktivitas antioksidan yang terdapat pada sediaan ekstrak buah
merah (Pandanus conoideus Lam.) dengan menggunakan Spektrofotometer Uv-
Vis dan metode DPPH (2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil). Manfaatnya untuk
mengetahui dan memberikan informasi khususnya kepada masyarakat mengenai
aktivitas antioksidan pada buah merah (Pandanus conoideus) sehingga dapat
bermanfaat untuk kesehatan.
Uji aktivitas antioksidan pada esktrak buah merah dilakukan dengan
menggunakan DPPH dengan alasan ujinya sederhana, mudah, cepat dan peka.
Serta hanya memerlukan sedikit sampel (Utomo dkk., 2008). Pengukuran aktivitas
antoksidan pada sampel dilakukan pada panjang gelombang 517 nm, yang
merupakan panjang gelombang maksimum DPPH. Adanya aktivitas antioksidan
dari sampel mengakibatkan terjadinya perubahan warna pada larutan DPPH dalam
etanol dari warna ungu kehitaman berubah menjadi sedikit lebih terang dari warna
awalnya. Perubahan warna ini terjadi saat radikal DPPH ditangkap oleh
antioksidan yang melepas atom hidrogen untuk menangkap DPPH-H stabil.
Diketahui bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak buah merah, maka semakin
32
kuat ekstrak buah merah menghambat radikal bebas. Hal ini dapat dijelaskan
bahwa dengan adanya aktivitas antioksidan dari sampel mengakibatkan perubahan
warna pada larutan DPPH yang berwana ungu kehitaman berubah menjadi lebih
terang.
Gambar 4.1. Panjang Gelombang DPPH
Setelah dilakukan pengukuran λmaks DPPH 40 ppm dengan spektrofometer
UV-VIS pada panjang gelombang 400 – 800 nm, diperoleh λmaks = 515,5 nm
dengan absorbansi 0,779. Dengan bentuk spektrum seperti pada Gambar 4.1.
4.2 Sentrifugasi dan Pengeringan Sampel
Dari hasil sentrafugasi pemisahan air dan sediaan minyak buah merah yang
mengandung zat aktif antioksidan diperoleh 84mL fraksi air, dan 84mL minyak
sediaan ekstrak buah merah (Pandanus conoideus Lam.). Kemudian dari ekstrak
kering masing-masing fraksi diperoleh yaitu dari mulai fraksi n-heksan kering
2mg, fraksi etil asetat 2mg, dan fraksi air 60mg.
4.3 Aktivitas Antioksidan Baku Pembanding Vitamin C
Larutan standar dibuat dengan berbagai konsentrasi tertentu yaitu dengan
33
cara melarutkan bahan vitamin c murni dengan etanol dengan perbandingan
10:100 (100 ppm) di encerkan dalam 10mL (100 ppm) larutan induk dan di bagi
menjadi 5 konsentrasi uji yaitu 2,4,6,8, dan 10 ppm. Penggunaan etanol sebagai
pelarut karena vitamin c dapat larut dalam etanol. Kemudian diperoleh hasil
persamaan IC50 yaitu 8,90 ppm
Tabel 4.1. Hasil Pengukuran Vitamin C
Konsentrasi Absorbansi Abs. dpph(blanko)
% Inhibisi
2 0,712
0,779
8,514 0,638 18,066 0,529 32,098 0,425 45,3710 0,338 56,57
Gambar 4.2. Kurva Inhibisi Vitamin C
4.4 Aktivitas Antioksidan Fraksi N-Heksan
Dari hasil penelitian aktivitas antioksidan sediaan buah merah (Pandanus
conoideus Lam.), fraksi n-heksan dimana 2mg fraksi n-heksan kering di encerkan
dalam 20mL (100 ppm) larutan induk dan diencerkan menjadi 5 konsentrasi uji
yaitu 2,4,6,8, dan 10 ppm menghasilkan % inhibisi sebagai berikut ;
y = 0.0481x + 0.2401R² = 0.9966
0
0.2
0.4
0.6
0.8
0 2 4 6 8 10 12
abso
rban
si
konsentrasi
% inhibisi Vit C
34
Tabel 4.2. Hasil Pengukuran Fraksi N-Heksan
Konsentrasi AbsorbansiAbs. dpph(blanko)
% Inhibisi
2 0,515
0,779
33,8894 0,527 32,3496 0,533 31,5788 0,544 30,16610 0,554 28,883
Gambar 4.3. Kurva Inhibisi Fraksi N-heksan
Dengan persamaan y=bx + a dari gambar kurva n-heksan diatas diperoleh
hasil yaitu IC50 = 36,550 ppm. Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan,
aktivitas antioksidan dari fraksi n-heksan dengan IC50 = 36,550 ppm. sesuai tabel
4.6 memiliki sifat antioksidan yang sangat kuat.
4.5 Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat
Dari hasil penelitian aktivitas antioksidan sediaan buah merah (Pandanus
conoideus Lam.), fraksi etil asetat dimana 2mg fraksi etil asetat kering di encerkan
dalam 20mL (100 ppm) larutan induk dan diencerkan menjadi 5 konsentrasi uji
yaitu 2,4,6,8, dan 10 ppm menghasilkan % inhibisi sebagai berikut ;
y = 0.0048x + 0.5061R² = 0.9926
0.510.520.530.540.550.56
0 2 4 6 8 10 12
abso
rban
si
konsentrasi
Hasil fraksi N-Heksan
35
Tabel 4.3. Hasil Pengukuran Fraksi Etil Asetat
Konsentrasi AbsorbansiAbs. dpph(blanko)
% Inhibisi
2 0,571
0,779
26,74 0,574 26,3166 0,577 25,9318 0,578 25,54510 0,582 25,289
Gambar 4.4. Kurva Inhibisi Fraksi Etil Asetat
Dengan persamaan y=bx + a dari gambar kurva etil asetat diatas diperoleh
hasil yaitu IC50 = 31,520 ppm. Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan,
aktivitas antioksidan dari fraksi air dengan IC50 = 31,520 ppm sesuai tabel 4.6
memiliki sifat antioksidan yang sangat kuat.
4.6 Aktivitas Antioksidan Fraksi Air
Dari hasil penelitian aktivitas antioksidan sediaan buah merah (Pandanus
conoideus Lam.), fraksi air dimana 6mg fraksi air kering di encerkan dalam 60mL
(100 ppm) larutan induk dan diencerkan menjadi 5 konsentrasi uji yaitu 2,4,6,8,
dan 10 ppm menghasilkan % inhibisi sebagai berikut ;
y = 0.0013x + 0.5685R² = 0.9959
0.570.5720.5740.5760.578
0.580.5820.584
0 2 4 6 8 10 12
abso
rban
si
konsentrasi
inhibisi fraksi etil asetat
36
Tabel 4.4. Hasil Pengukuran Fraksi Air
Konsentrasi AbsorbansiAbs. dpph(blanko)
% Inhibisi
2 0,546
0,779
29,914 0,555 28,7546 0,569 27,2148 0,582 25,28810 0,597 23,491
Gambar 4.5. Kurva Inhibisi Fraksi Air
Dengan persamaan y=bx + a dari gambar kurva air diatas diperoleh hasil
yaitu IC50 = 34,298 ppm. Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan,
aktivitas antioksidan dari fraksi air dengan IC50 = 34,298 ppm sesuai tabel 4.6
memiliki sifat antioksidan yang sangat kuat.
4.7 Aktivitas Antioksidan Fraksi Sediaan Ekstrak Buah Merah
Dari hasil penelitian aktivitas antioksidan sediaan buah merah (Pandanus
conoideus Lam.), dimana 10mg sediaan ekstrak diencerkan dalam 100mL (100
ppm) larutan induk dan diencerkan menjadi 5 konsentrasi uji yaitu 2,4,6,8, dan 10
ppm menghasilkan % inhibisi sebagai berikut ;
y = 0.0065x + 0.5311R² = 0.9936
0.540.550.560.570.580.59
0.6
0 2 4 6 8 10 12
abso
rban
si
konsentrasi
inhibisi fraksi air
37
Tabel 4.5. Hasil Pengukuran Sediaan Ekstrak
Konsentrasi AbsorbansiAbs. dpph(blanko)
%Inhibisi
2 0,594
0,779
23,7484 0,600 22,9786 0,609 21,8238 0,618 20,66810 0,629 19,256
Gambar 4.6. Kurva Inhibisi sediaan minyak
Dengan persamaan y=bx + a dari gambar kurva sediaan ekstrak diatas
diperoleh hasil yaitu x = 56,12 ppm. Berdasarkan hasil penelitian yang telah
dilakukan, aktivitas antioksidan dari fraksi air dengan IC50 = 56,12 ppm sesuai
tabel 4.6 memiliki sifat antioksidan yang kuat.
Antioksidan adalah senyawa yang dapat mencegah proses oksidasi radikal
bebas (Darmawati dkk. 2016). Radikal bebas sering dihubungkan dengan berbagai
peristiwa fisiologis misalnya peradangan, penuaan, dan penyebab kanker
(Bhaigyabati dkk. 2011). Kecenderungan masyarakat Indonesia saat ini adalah
memilih pemanfaatan produk-produk alami yang diyakini melindungi tubuh dari
berbagai penyakit karena cenderung tidak memiliki efek samping. Oleh karena
itu, pemanfaatan bahan alam sebagai alternatif pengobatan menjadi pilihan yang
y = 0.0044x + 0.5836R² = 0.9903
0.59
0.6
0.61
0.62
0.63
0.64
0 2 4 6 8 10 12
abso
rban
si
konsentrasi
inhibisi sediaan minyak
38
tepat. Mengkonsumsi bahan alam yang kaya antioksidan dapat menjadi upaya
untuk menurunkan terjadinya penyakit degeneratif. Buah dan sayuran adalah
penyedia vitamin dan mineral yang merupakan sumber dari phytochemical yang
berfungsi sebagai antioksidan dan mekanisme pelindung lainnya (Slavin dan
Liyod, 2012). Salah satu buah yang memiliki kandungan antioksidan tinggi adalah
buah merah (Sarungallo dkk, 2015). Dalam penelitian diketahui buah merah
mengandung karoten dan tokoferol yang merupakan senyawa antioksidan tinggi.
Buah merah (Pandanus conoideus Lam.) merupakan tanaman asli dari Provinsi
Papua, Indonesia. Ekstrak minyak buah merah mengandung vitamin E (α dan γ-
tokoferol) (Sarungallo dkk, 2015), β-karoten (Sarungallo dkk, 2015), dan juga
menunjukkan aktivitas antioksidan (Rohman dkk, 2010).
4.8 Perhitungan IC50
Parameter yang digunakan untuk menilai daya antioksidan suatu
bahan dalam kategori lemah, kuat atau sangat lemah adalah menggunakan
IC50. IC50 merupakan besarnya konsentrasi larutan uji yang mampu
menurunkan 50% absorbansi DPPH dibandingkan dengan larutan blangko
(Molyneux, 2003). Semakin kecil nilai IC50 berarti semakin tinggi aktivitas
antioksidan bahan tersebut.
Nilai koefisien kolerasi yang diperoleh tersebut menunjukkan bahwa data
probit dari sediaan ekstrak dan fraksi buah merah dan vitamin C hampir
mendekati 1 yang artinya nilai tersebut linear, karena terdapat korelasi antara %
inhibisi dengan konsentrasi. Senyawa yang tergolong sangat kuat memiliki
nilai IC50 kurang dari 50 mg/L, sementara senyawa yang tergolong kuat
39
memiliki nilai IC50 antara 50-100 mg/L, dan senyawa yang tergolong sedang
memiliki nilai IC50 antara 101-150 mg/L, sedangkan senyawa yang tergolong
sangat lemah memiliki nilai IC50 antara 151-200 mg/L (Molyneux, 2003).
Berdasarkan kategori tersebut maka dapat dikatakan bahwa sediaan ekstrak
dan fraksi buah merah dan vitamin C tergolong antioksidan yang sangat kuat.
Sifat Antioksidan berdasarakan IC50 (Molyneux, 2004) dapat dilihat pada
Tabel.4.6
Tabel 4.6. Sifat Antioksidan
Nilai IC50(ppm)
SifatAntioksidan
<50 Sangat Kuat50-100 Kuat100-150 Sedang150-200 Lemah
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan diperoleh aktivitas antioksidan
dari sediaan ekstrak buah merah aktivitas antioksidannya kuat dengan IC50 =
56,12 ppm. Sedangkan fraksi lain seperti fraksi n-heksan dengan IC50 = 36,550
ppm, fraksi etil asetat IC50 = 31,520 ppm, dan fraksi air IC50 = 34,298 ppm sesuai
tabel 4.6 memiliki sifat antioksidan yang sangat kuat.
40
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan
bahwa sediaan ekstrak buah merah memiliki aktivitas antioksidan kuat dengan
IC50 = 56,12 ppm dan fraksi lain seperti fraksi n-heksan memiliki IC50 = 36,550
ppm, fraksi etil asetat memiliki IC50 = 31,520 ppm, dan fraksi air memiliki IC50 =
34,298 ppm yang sesuai tabel IC50 memiliki sifat antioksidan yang sangat kuat.
5.2 Saran
Adapun saran dari penulis adalah perlunya penelitian selanjutnya
mengenai perbedaan IC50 dari sediaan ekstrak buah merah (Pandanus Conoideus
Lam.) dan fraksi lainnya seperti fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan.
41
DAFTAR PUSTAKA
Atun, Sri. Metode Isolasi dan Identifikasi Struktur Senyawa Organik BahanAlam. Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur, 2014.
Budi, I Made. 2001. Kajian Kandungan Zat Gizi dan Sifat Fisiko KimiaBerbagai Jenis Minyak Buah Merah (Pandanus conoideus Lamk) HasilEkstraksi secara tradisional di Kabupaten Jayawijaya Irian Jaya. Tesis.Institut PertanianBogor.
Budi, I Made. 2000. Kajian Kandungan Zat Gizi dan Sifat Fisika KimiaBerbagai Jenis Minyak Buah Merah (Pandanus conoideus Lam.) HasilEkstraksi secara Tradisional di Kabupaten Jayawijaya Propinsi IrianJaya. TesisProgram Pasca Sarjana. IPB-Bogor.
Budi, M. & Paimin, F.R. 2004. Red Fruits (Pandanus conoideus Lam.). PenebarSawadaya. Jakarta.
Bhaigyabati TT, Kirithika J, Ramya K, Usha. 2011. Phytochemical constituensand antioxidant activity of various extracts of corn silk (Zea mays L).Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences.2(4): 986-993.
Cahyadi, Wisnu., Analisis dan Aspek Kesehatan. Jakarta: Bumi Aksara, 2008.
Dachriyanus., 2004., Analisis Struktur Senyawa Organik SecaraSpektroskopi., Andalas University Press., Padang
Darmawati, Niartiningsih A, Syamsuddin R, Jompa J. 2016. Analisis kandungankarotenoid rumput laut Caulerpa sp. yang dibudidayakan di berbagaijarak dan kedalaman. Seminar Nasional Inovasi IPTEK PerguruanTinggi untuk Meningkatkan Kesejahteraan Masyarakat. 29-30 Agustus2016. Hal 196-201. 236
Day and Underwood., Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Kelima., Erlangga.,Yogyakarta
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan., 2014., FarmakopeIndonesia Edisi V., Departemen kesehatan Republik Indonesia.., Jakarta
------------. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Depkes RI, 1995.
Fessenden, R. J., Fessenden, J. S. Kimia Organik Jilid I Edisi Ketiga.Terjemahan dari Organic Chemistry oleh Hadyana Pudjaatmaka. Jakarta:Erlangga, 1994.
Gandjar, I.G., dan Rohman, A., 2007., Kimia Farmasi Analisis., PustakaPelajar., Yogyakarta
Hadad M, Oktivia T. 2005. Eksplorasi dan konservasi tanaman buah merah(Pandanus conoideus Lamk.) dalam upaya pengelolaan sumberdaya
42
genetik yang berkelanjutan. Lokakarya Nasional Pengelolaan danPerlindungan Sumberdaya Genetik di Indonesia: Manfaat Ekonomi untukMewujudkan Ketahanan Nasional. Hal 81- 92.
Khopkar, S. M., 2008., Konsep Dasar Kimia Analitik., UI Press., Jakarta
Khopkar, S. M., 2009., Konsep Dasar Kimia Analitik., UI Press., Jakarta
Lampe, JW. Health Effect of Vegetables and Friut: asseing mechanisms ofaction in Human Experimental studies. American journal of ClinicalNutrition, Vol. 70, No.3, 2010.
LebangA, Amiruddin, Limbongan J, Kore, Pambunan GI, dan Budi IM. 2004.Pelepasan Varietas Buah Merah Mbarugum, Laporan Usulan Kerja SamaBalai Pengawasan dan Sertifikasi Benih Tanaman Pangan dan HortikulturaProvinsi Papua dengan Balai Pengkajian Teknologi Pertanian Provinsi Papua.
Limbongan J, Uhi HT. 2005. Penggalian Data Pendukung Domestikasi danKomersialisasi Jenis, Spesies dan Varietas Tanaman Buah di ProvinsiPapua, Prosiding Lokakarya I Domestikasi dan Komersialisasi TanamanHortikultura: 55-82.
Limbongan J, Malik A.2009. Peluang Pengembangan Buah Merah (Pandanusconoideus Lamk.) di Provinsi Papua. Jurnal Litbang Pertanian, 28(4): 134-136.
Maryam, S., Hadisoebroto, G., 2013., Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak DanFraksi Buah Blueberry (Ganus vaccinium) Dengan Metode DPPH., JurnalSabdariffarma Tahun 2013 Vol 1: 9-13., Bandung., Jurusan Farmasi FMIPAUniversitas Al-Ghifari.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl(DPPH) For Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin JournalScience Technology., 26(2) : 211-219.
Mutiasari, IR. Identifikasi Golongan Senyawa Kimia Fraksi Aktif, Journal.Jakarta: FMIPA-UI, 2012.
Prakash, Aruna, Fred Rigelholf and Eugene Miller. Antioksidant Activity.Medallion Laboratories, 2011.
Rahayu, D. S., Kusrini., D., Fachriyah, E ., 2010,. Penentuan AktivitasAntioksidan dari Ekstrak Etanol Daun Ketapang ( Terminalia catappaL., ), Dengan Metode DPPH ( 1,1-Difenil – 2-Pikrilhidrazil )., Semarang.,Jurusan Kimia FMIPA Universitas Diponegoro., Hal 4.
Rohman, A., Sugeng, R. dan Diah, U. “Antioxidant Activities, Total PhenolicandFalvonoid Contents of Ethyl Acetate Extrct of Mengkudu(Morindacitrifolia, L.) Fruit and Its Fractions”. Fakultas Farmasi.Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta. 2005.
43
Rohman, A., Riyanto, S., Yuniarti, N., Saputra, W. R.,Utami, R. & Mulatsih, W.2010. Antioxidant activity, total phenolic, and total flavaonoid of extractsand fractions of red fruit (Pandanus conoideus Lam). International FoodResearch Journal, 17: 97-106.
Rohman, Abdul. Daya Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kemuning (MurayyaPaniculata L.) Secara in-vitro. Majalah Farmasi Indonesia, 16 vol.3: 136140. 2012.
Rubiyanto, Dwiarso. Teknik Dasar Kromatografi. Yogyakarta: Deepublish,2016.
Saptarini, M. N., Herawati, I. E., 2015. Comparative Antioxidant Activity on theFicusbenjamina and Anona reticulate Leaves. International Journal ofPublic Health Science (IJPHS), VOL.IV., NO. 1., Bandung., Hal 21-26.
Sarungallo, Z.L., Hariyadi,P., Andarwulan,N., & Purnomo,E.H. 2015.Characterization of Chemical Properties, Lipid Profile, Total Phenol andTocopherol Content of Oils Extracted from Nine Clones of Red Fruit(Pandanus conoideus). Kasetsart Journal -Natural Science, 49(2): 237-250.
Sarungalloa, Z.L., Hariyadia,P.,Andarwulana,N., Purnomo,E.H. & Wadad, M.2015. Analysis of α-cryptoxanthin, β-cryptoxanthin, α-carotene, and β-carotene of Pandanus conoideus oil by high-performance liquidchromatography (HPLC). Procedia Food Science, 3: 231–243.
Sayuti, Kesuma, M.S. Antioksidan Alami dan Sintetik. Padang: AndalasUniversity Press, 2015.
Slavin, J.L & Lloyd B. 2012. Health Benefits of Fruits and Vegetables.Advances in Nutrition, 3: 506-516.
Sutiadarma., 2004., Analisis Struktur Organik secara Spektroskopi., UGMPress., Yogyakarta
Winarsi, Hery. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisius.2013.
Yuliani, Dewi. Kajian Aktivitas Antioksidan Fraksi Etanol Jintan Hitam(Nigella sativa L.). Malang: Jurusan Kimia Fakultas Sains dan TeknologiUIN. 2010.
44
Lampiran 1 Diagram Alir
Sentrafugasi
Sampel
Fraksinasi
Analisa Data
Uji Antioksidan
Air N-Heksan
Hasil
Pembahasan
Etil Asetat Sediaan Minyak
Kesimpulan
Metode DPPH Pembanding Vit C
Gambar 3.1. Diagram Alir
45
Lampiran 2 Dokumentasi Penelitian
No. Keterangan Gambar1 Pembuatan larutan
induk 100 ppm
2 Proses pengencerandengan konsentrasi2,4,6,8,10 ppm
3 Pencampuran sampeluji dan DPPH
4 Inkubasi 30 menitsetelahpencampuran
46
5 Sentrifugasi
6 Proses fraksinasi
7 Dpph dan sampel yangakan di masukkankedalamSpektrofotometri
8 Pembacaan panjanggelombang
47
49
