Spektrofotometri UV-Vis merupakan salah satu teknik analisis spektroskopi yangmemakai sumber radiasi eleltromagnetik ultraviolet dekat (190-380) dan sinar tampak(380-780) dengan memakai instrumen spektrofotometer (Mulja dan Suharman, 1995:26).Spektrofotometri UV-Vis melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekulyang dianalisis, sehingga spektrofotometri UV-Vis lebih banyak dipakai untuk analisiskuantitatif ketimbang kualitatif (Mulja dan Suharman, 1995: 26).Spektrofotometer terdiri atas spektrometer dan fotometer. Spektrofotometermenghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometeradalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditranmisikan atau yang diabsorpsi.Spektrofotometer tersusun atas sumber spektrum yang kontinyu, monokromator, selpengabsorpsi untuk larutan sampel atau blangko dan suatu alat untuk mengukur pebedaanabsorpsi antara sampel dan blangko ataupun pembanding (Khopkar, 1990: 216).Spektrofotometer UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap sampel yangberupa larutan, gas, atau uap. Untuk sampel yang berupa larutan perlu diperhatikanpelarut yang dipakai antara lain:1. Pelarut yang dipakai tidak mengandung sistem ikatan rangkap terkonjugasi padastruktur molekulnya dan tidak berwarna.2. Tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis.3. Kemurniannya harus tinggi atau derajat untuk analisis.(Mulja dan Suharman, 1995: 28).

Komponen-komponen pokok dari spektrofotometer meliputi:1. Sumber tenaga radiasi yang stabil, sumber yang biasa digunakan adalah lampuwolfram.2. Monokromator untuk memperoleh sumber sinar yang monokromatis.3. Sel absorpsi, pada pengukuran di daerah visibel menggunakan kuvet kaca atau kuvetkaca corex, tetapi untuk pengukuran pada UV menggunakan sel kuarsa karena gelastidak tembus cahaya pada daerah ini.4. Detektor radiasi yang dihubungkan dengan sistem meter atau pencatat. Peranandetektor penerima adalah memberikan respon terhadap cahaya pada berbagai panjanggelombang (Khopkar, 1990: 216).

http://digilib.ump.ac.id/files/disk1/14/jhptump-a-fitriyani-662-2-babII.pdf

2.4.3 Hukum Lambert-Beer

Hukum Lambert-Beer (Beers law) adalah hubungan linearitas antara absorban dengan konsentrasi larutan analit (Dachriyanus, 2004).Menurut hukum Lambert, serapan (A) berbanding lurus dengan ketebalan lapisan (b) yang disinari : A= k. b Dengan bertambahnya ketebalan lapisan, serapan akan bertambah. Menurut Hukum Beer, yang hanya berlaku untuk cahaya monokromatis dan larutan yang sangat encer, serapan (A) dan konsentrasi (c) adalah proporsional: A= k. c Jika konsentrasi bertambah, jumlah molekul yang dilalui berkas sinar akan bertambah, sehingga serapan juga bertambah. Kedua persamaan ini digabungkan dalam hukum Lambert-Beer, maka diperoleh bahwa serapan berbanding lurus dengan konsentrasi dan ketebalan lapisan: A= k . c. b Universitas Sumatera Utara Umumnya digunakan dua satuan c (konsenterasi zat yang menyerap) yang berlainan, yaitu gram per liter atau mol per liter. Nilai tetapan (K ) dalam hukum Lambert-Beer tergantung pada sistem konsentrasi mana yang digunakan. Bila c dalam gram perliter, tetapan tersebut disebut dengan absorptivitas (a) dan bila dalam mol per liter tetapan tersebut adalah absorbtivitas molar (). Jadi dalam sistem yang direkombinasikan, Hukum Lambert-Beer dapat mempunyai dua bentuk: A= a. b. c g/liter atau A= . b. c mol/liter Penandaan lain untuk a adalah ekstingsi spesifik, koefisien ekstingsi, dan absorbsi spesifik, sedangkan adalah koefisien ekstingsi molar (Day and Underwood, 1999). Ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam analisis dengan spektrofotometri ultraviolet yaitu: 1. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum

Panjang gelombang yang digunakn untuk analisis kuantitatif adalah panjang gelombang dimana terjadi absorbansi maksimum. Untuk memperoleh panjang gelombang serapan maksimum dapat diperoleh dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku dengan konsentrasi tertentu.

. Pembuatan kurva kalibrasi Dilakukan dengan membuat seri larutan baku dalam berbagai konsentrasi kemudian asorbansi tiap konsentrasi di ukur lalu dibuat kurva yang merupakan Universitas Sumatera Utara hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi. Kurva kalibrasi yang lurus menandakan bahwa hukum Lambert-Beer terpenuhi. 3. Pembacaan absorbansi sampel

Absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai 0,8 atau 15% sampai 70% jika dibaca sebagai transmitan. Hal ini disebabkan karena pada kisaran nilai absorbansi tersebut kesalahan fotometrik yang terjadi adalah paling minimal (Rohman, 2007).2.4.3 Analisis Kuantitatif Analisis kuantitatif spektrofotometri dapat dilakukan dengan dua metode yaitu: 1. Metode Regresi

Analisis kuantitatif dengan metode regresi yaitu dengan menggunakan persamaan garis regresi yang didasarkan pada harga serapan dan larutan standar yang dibuat dalam beberapa konsentrasi, paling sedikit menggunakan 5 rentang konsentrasi yang meningkat yang dapat memberikan serapan linier, kemudian di plot menghasilkan suatu kurva yang disebut dengan kurva kalibrasi. Konsentrasi suatu sampel dapat dihitung berdasarkan kurva tersebut. 2. Metode Pendekatan

Analisis kuantitatif dengan cara ini dilakukan dengan membandingkan serapan standar yang konsentrasinya diketahui dengan serapan sampel. Konsentrasi sampel dapat dihitung melalui rumus perbandingan C = As. Cb/ Ab Keterangan: As = Serapan sampel Universitas Sumatera Utara Ab = Serapan standar Cb = Konsentrasi standar C = Konsentrasi sampel (Holme, 1983)http://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/32035/4/ChapterII.pdfPada umumnya terdapat dua tipe instrumen spektrofotometer yaitu single-beam dan double-beem.a. Single-beam Instrument.Single-beam instrument dapat digunakan untuk kuantitatif denganmengukur absorbansi pada panjang gelombang tunggal. Single-beaminstrument mempunyai beberapa keuntungan yaitu sederhana, harganyamurah, dan mengurangi biaya yang ada merupakan keuntungan yangnyata. Beberapa instrumen menghasilkansingle-beam instrument untukpengukuran sinar ultra violet dan sinar tampak. Panjang gelombangpaling rendah adalah 190 sampai 210 nm dan paling tinggi adalah 800sampai 1000 nm.b. Double-beem Instrument.Double-beam dibuat untuk digunakan pada panjang gelombang 190sampai 750 nm. Double-beam instrumentdimana mempunyai dua sinaryang dibentuk oleh potongan cermin yang berbentuk V yang disebutpemecah sinar. Sinar pertama melewati larutan blangko dan sinar keduasecara serentak melewati sampel, mencocokkan fotodetektor yang keluarmenjelaskan perbandingan yang ditetapkan secara elektronik danditunjukkan oleh alat pembaca.Perbedaan kedua jenis spektrofotometer tersebut hanya pada pemberiancahaya, dimana pada single-beam, cahaya hanya melewati satu arah sehingga nilaiyang diperoleh hanya nilai absorbansi dari larutan yang dimasukan.Spektrofotometer double-beam, nilai blanko dapat langsung diukur bersamaandengan larutan yang diinginkan dalam satu kali proses yang sama.Spektrofotometri adalah pengukuran absorbansi selektif radiasielektromagnetik yang dipakai untuk analisis kualitatif dan kuantitatif senyawakimia. Keuntungan utama dari metode spektrofotometri yaitu dapat menetapkankadar suatu zat yang sangat kecil (Bassett, 1991). Banyak kelebihan yangdimilikinya, antara lain :a. Dapat digunakan secara luas dalam pengukuran secara kualitatif dankuantitatif untuk senyawa senyawa anorganik maupun senyawaanorganik.b. Kepekaan tinggi, karena dapat mengukur dalam satuan ppm (part permillion), bahkan ppb (part per billion) sehingga dapat mengukurkomponen trace (renik).c. Sangat selektif bila suatu komponen x akan siperiksa dalam suatucampuran, dengan cara mengatur panjang gelombang cahaya dimanahanya komponen x yang akan mengadsorbansi cahaya tersebut(Underwood,A.L. 1983).

http://digilib.unimed.ac.id/public/UNIMED-Undergraduate-22526-BABII.pdf