i

SKRIPSI

BAYU PRASAJA

UJI AKTIVITAS FRAKSI n-HEKSANA, ETIL

ASETAT, DAN ETANOL BIJI JINTEN HITAM

(Nigella sativa Linn.) TERHADAP

PERTUMBUHAN Lactobacillus acidophilus

SECARA IN VITRO

PROGRAM STUDI S-1 FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG

2012

ii

Lembar Pengesahan

UJI AKTIVITAS FRAKSI n-HEKSANA, ETIL

ASETAT, DAN ETANOL BIJI JINTEN HITAM (Nigella

sativa Linn.) TERHADAP PERTUMBUHAN

Lactobacillus acidophilus SECARA IN VITRO

SKRIPSI

Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada

Program Studi Farmasi

Fakultas Ilmu Kesehatan

Universitas Muhammadiyah Malang

2012

Oleh :

BAYU PRASAJA

NIM : 08040018

Disetujui Oleh:

Pembimbing I Pembimbing II

Drs. Herra Studiawan, M.S, Apt Ahmad Shobrun Jamil S.si, M.P.

NIP 195703101986011001 NIP UMM 11309070469

iii

KATA PENGANTAR

Segala puji bagi Allah SWT yang telah memberikan ridho dan rahmat-Nya

sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul, “ Uji Aktivitas

Fraksi n-Heksana, Etil Asetat, dan Etanol Biji Jinten Hitam (Nigella sativa Linn.)

Terhadap Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus Secara In Vitro.”

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak,

maka tugas akhir ini tidak akan terwujud. Untuk itu pada kesempatan ini saya

menyampaikan ucapan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:

1. Drs. Herra Studiawan M.S. Apt., sebagai dosen pembimbing.

2. Ahmad Shobrun Jamil S.Si, M.P., sebagai dosen pembimbing.

3. Siti Rofida S.Si, Apt., sebagai dosen penguji.

4. Engrid Juni A. S.Farm, Apt., sebagai dosen penguji.

5. Tri Lestari Handayani M.Kep. Sp Mat., selaku Dekan Fakultas Ilmu

Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang.

6. Dra. Uswatun Chasanah M.Kes. Apt., selaku Ketua Prodi Jurusan Farmasi

FIKES Universitas Muhammadiyah Malang.

7. Dra. Lilik Yusetyani Apt. Sp. FRS selaku Kepala Laboratorium Kimia

Terpadu II Universitas Muhammadiyah Malang.

8. dr. Hawin Nurdiana M.Kes. selaku Kepala Laboratorium Mikrobiologi

Universitas Muhammadiyah Malang.

9. Staf Laboratorium Kimia Terpadu II UMM.

10. Staf Laboratorium Mikrobiologi UMM.

11. Ayahanda Muhammading, ibunda Emmy Sulistiani A. beserta keluarga

tercinta.

12. Teman-teman seperjuangan kelompok skripsi bahan alam yang senasib

sepenanggungan.

13. Sahabat, teman, dan seluruh keluarga besar Farmasi Universitas

Muhammadiyah Malang.

14. Semua pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan tugas akhir ini

yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.

iv

Penulis menyadari bahwa penulisan tugas akhir ini masih jauh dari

sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik yang

membangun bagi suksesnya penelitian berikutnya. Akhir kata, semoga tugas akhir

penulisan skripsi ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Malang, 5 juli 2012

Penulis

v

RINGKASAN

Nigella sativa L. telah banyak digunakan di Negara timur tengah untuk

pengobatan alami selama lebih dari 2000 tahun. Tanaman ini dipercaya oleh

masyarakat Asia, khususnya Timur Tengah dan Asia Tenggara memiliki khasiat

pengobatan yang sangat banyak yang didasari oleh pengetahuan dan keyakinan

masyarakat terhadap sabda Rasulullah SAW yang menyatakan bahwa “ Habbatus

sauda’ (Nigella Sativa L.) adalah obat dari segala penyakit kecuali kematian”.

Salah satu kandungan dari Nigella sativa L. adalah minyak atsiri. Komponen

utama minyak atsiri (timokuinon, timohidrokuinon, ditimokuinon, timol) dan

tannin terbukti mampu menghambat pertumbuhan bakteri dan fungi. Oleh karena

itu, dikakukan penelitian mengenai aktivitas fraksi n-heksana-etil asetat-etanol biji

Nigella sativa L. terhadap bakteri Lactobacillus acidophilus.

Metode yang digunakan adalah metode dilusi tabung yang kemudian diganti

dengan metode difusi cakram karena beberapa faktor, metode ini digunakan untuk

mengetahui aktivitasnya dengan penentuan Konsentrasi Hambat Minimum

(KHM). Pada metode dilusi tabung, fraksi uji Nigella sativa dilarutkan dalam

DMSO dan MRS Broth sedangkan pada metode difusi cakram fraksi uji Nigella

sativa dilarutkan dalam tween dan aquadest steril. Media pertumbuhan yang

digunakan untuk penentuan KHM pada metode dilusi tabung dan difusi cakram

adalah MRS Broth dan MRSA. Pada difusi cakram digunakan Amoksisilin

sebagai kontrol positif.

Hasil penelitian diperoleh bahwa dari ketiga fraksi uji (fraksi n-Heksana, etil

asetat, dan etanol) biji Nigella sativa L., terdapat dua fraksi uji (fraksi n-heksana

dan fraksi etil asetat) yang memiliki aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri

Lactobacillus acidophilus. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dari fraksi n-

heksana biji Nigella sativa terhadap Lactobacillus acidophilus sebesar 15,625

mg/ml sedangkan dari fraksi etil asetatnya sebesar 250 mg/ml.

Hasil penelitian yang diperoleh ini diharapkan dapat memberikan

informasi untuk penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas fraksi n-heksana, etil

asetat, dan etanol biji Nigella sativa terhadap bakteri Lactobacillus acidophilus

secara in vivo dan penentuan dosis maksimal pengkonsumsian biji Nigella sativa

yang aman bagi pertumbuhan bakteri probiotik sehingga mampu mencegah

ketidakseimbangan flora normal di dalam saluran pencernaan manusia. Dengan

demikian, penelitian tersebut akan melengkapi informasi kesehatan dan ilmiah

yang tepat tentang pengkonsumsian serbuk biji Nigella sativa yang aman kepada

konsumen, yang selama ini secara teratur mengkonsumsi produk olahan serbuk

biji Nigella sativa.

vi

DAFTAR ISI

Halaman

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................... ii

LEMBAR PENGUJIAN ................................................................................... iii

KATA PENGANTAR ...................................................................................... iv

RINGKASAN ................................................................................................... vi

ABSTRAK ........................................................................................................ vii

ABSTRACT ...................................................................................................... viii

DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL .............................................................................................. xii

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiv

BAB I. PENDAHULUAN ................................................................................. 1

1.1. Latar Belakang ........................................................................................... 1

1.2. Rumusan Masalah ....................................................................................... 3

1.3. Tujuan Penelitian ........................................................................................ 4

1.4. Hipotesis . ..... ............................................................................................. 4

1.5. Manfaat Penelitian ...................................................................................... 4

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 5

2.1. Tinjauan Tentang Jintan Hitam ................................................................... 5

2.1.1. Klasifikasi ....................................................................................... 5

2.1.2. Nama Lain ....................................................................................... 5

2.1.3. Ekologi dan Penyebaran.................................................................. 6

2.1.4. Morfologi Tumbuhan ...................................................................... 6

2.1.5. Kandungan Tumbuhan .................................................................... 6

2.1.6. Khasiat Biji Jinten Hitam ................................................................ 9

2.1.7. Komponen Antimikroba Jinten Hitam ............................................ 10

2.1.8. Mekanisme Kerja Zat Aktif Jinten Hitam ....................................... 10

2.2. Tinjauan Tentang Ekstrak ........................................................................... 11

2.2.1. Definisi Ekstrak .............................................................................. 11

2.2.2. Proses Pembuatan Ekstrak .............................................................. 12

2.2.3. Fraksinasi ........................................................................................ 13

vii

2.3. Tinjauan Tentang Maserasi ......................................................................... 14

2.4. Tinjauan Tentang Probiotik ........................................................................ 14

2.5. Tinjauan Tentang Lactobacillus acidophilus .............................................. 17

2.5.1. Klasifikasi ....................................................................................... 17

2.5.2. Morfologi ........................................................................................ 17

2.5.3. Karakterisitik ................................................................................... 17

2.5.3. Manfaat Lactobacillus acidophilus ................................................. 18

2.6. Uji Kepekaan Terhadap Antimikroba secara In Vitro ................................ 19

2.6.1. Metode Dilusi .................................................................................. 19

2.6.2. Metode Difusi Cakram .................................................................... 19

2.6.3. Turbiditas Media Kaldu .................................................................. 20

2.6.4. Metode Bioautografik ..................................................................... 20

2.7. Kromatografi Lapis Tipis ............................................................................ 22

BAB III. KERANGKA KONSEPTUAL ........................................................... 24

BAB IV. METODE PENELITIAN ................................................................... 26

4.1. Rancangan Penelitian .................................................................................. 26

4.2. Lokasi Penelitian ......................................................................................... 26

4.3. Waktu Penelitian ......................................................................................... 26

4.4. Instrumen Penelitian ................................................................................... 26

4.5. Variabel Penelitian ...................................................................................... 27

4.5.1. Variabel Bebas ................................................................................ 27

4.5.2. Variabel Tergantuing ...................................................................... 27

4.6. Sterilisasi Alat ............................................................................................. 27

4.6.1. Sterilisasi Panas Kering .................................................................. 27

4.6.2. Sterilisasi Panas Basah .................................................................... 27

4.7. Definisi Operasional ................................................................................... 28

4.8. Prosedur Penelitian ..................................................................................... 28

4.8.1. Persiapan Bakteri Uji ...................................................................... 28

4.8.1.1. Kultur Pada Medium Selektif MRSA................................ 28

4.8.1.2. Preparasi Bakteri ............................................................... 28

4.8.2. Pembuatan Fraksi n-Heksana, Etil Asetat, dan Etanol Biji Jinten

Hitam .............................................................................................. 29

viii

4.8.3. Pembuatan Konsentrasi Fraksi n-Heksana, Etil Asetat, dan

Etanol Biji Jinten Hitam untuk Metode Dilusi Tabung .................. 30

4.8.4. Pengujian Bahan Antimikroba untuk Metode Dilusi Tabung ......... 30

4.8.5. Pembuatan Konsentrasi Fraksi n-Heksana, Etil Asetat, dan

Etanol Biji Jinten Hitam untuk Metode Difusi Cakram ................ 31

4.8.6. Pengujian Bahan Antimikroba untuk Metode Difusi Cakram ....... 31

4.8.7. Pengamatan Hasil ............................................................................ 32

4.9. Identifikasi Kandungan Kimia Ekstrak ....................................................... 32

4.9.1. Identifikasi Alkaloid ....................................................................... 32

4.9.2. Identifikasi Terpenoid ..................................................................... 33

4.9.3. Identifikasi Tanin dan Polifenol ...................................................... 34

4.9.4. Identifikasi Glikosida Saponin ........................................................ 34

4.9.5. Identifikasi Flavonoid ..................................................................... 35

4.10. Bagan Alur Penelitian ............................................................................... 36

4.11. Pengumpulan Data .................................................................................... 40

4.12. Analisis Data ............................................................................................. 40

BAB V HASIL PENELITIAN .......................................................................... 41

5.1. Hasil Penelitian .......................................................................................... 41

5.1.1. Hasil Pembuatan Ekstrak ................................................................. 41

5.1.2. Hasil Uji dengan Metode Dilusi Tabung Fraksi Biji Jinten Hitam . 42

5.1.3. Penentuan Konsentrasi Zona Hambat Fraksi Jinten Hitam dengan

Metode Difusi Cakram .................................................................... 43

5.1.4. Hasil Identifikasi Kandungan Kimia Fraksi Uji dengan KLT ......... 46

5.2. Analisis Data .............................................................................................. 47

5.2.1. One-Way ANOVA .......................................................................... 47

5.2.2. Deskriptif ........................................................................................ 48

BAB VI PEMBAHASAN ................................................................................. 50

BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................... 56

7.1. Kesimpulan ................................................................................................ 56

7.2. Saran .................................................................................................... 56

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 57

ix

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

II.1. Komposisi Asam Lemak yang Terkandung Dalam Nigella Sativa ..... 7

II.2. Komposisi Kimia dari Struktur Volatile Oil (Minyak Atsiri) Nigella

sativa L. ................................................................................................ 8

V.1. Hasil Maserasi Serbuk Tanaman Jinten Hitam (Nigella sativa L.) ..... 41

V.2. Hasil Uji Dilusi Tabung pada Perlakuan dengan Fraksi Etanol

Jinten Hitam ......................................................................................... 42

V.3. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Fraksi n-Heksana Jintan

hitam terhadap Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus .................... 43

V.4. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Fraksi Etil Asetat Jintan

hitam terhadap Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus .................... 44

V.5. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Fraksi Etanol Jintan

hitam terhadap Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus .................... 45

V.6. Hasil Skrining Fitokimia Fraksi n-Heksana, Etil Asetat, dan Etanol

Biji Jinten Hitam .................................................................................. 46

x

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1. Nigella sativa Linn .............................................................................. 5

2.2. Struktur Kimia Timokuinon ................................................................ 10

2.3. Struktur Kimia Timohidrokuinon ....................................................... 10

2.4. Lactobacillus acidophilus ................................................................... 17

3.1. Kerangka Konseptual .......................................................................... 25

4.1. Proses Pembuatan Fraksi n-Heksana, Etil Asetat, dan Etanol Biji

Jinten Hitam ........................................................................................ 36

4.2. Preparasi Bakteri Uji ........................................................................... 37

4.3. Proses Pembuatan Berbagai Konsentrasi Fraksi Jinten Hitam(DT) ... 37

4.4. Prosedur Penelitian dengan Metode Dilusi Tabung ............................ 38

4.5. Proses Pembuatan Berbagai Konsentrasi Fraksi Jinten Hitam(DC) ... 38

4.6. Prosedur Penelitian dengan Metode Difusi Cakram .......................... 39

5.1. Dilusi Tabung pada Perlakuan dengan Fraksi Etanol Jinten Hitam

(pada pengulangan ke-2) .................................................................... 42

5.2. Uji Difusi Cakram Fraksi n-Heksana Jinten Hitam (pada

pengulangan ke-3) .............................................................................. 44

5.3. Uji Difusi Cakram Fraksi Etil Asetat Jinten Hitam (pada

pengulangan ke-1) .............................................................................. 45

5.4. Uji Difusi Cakram Fraksi Etanol Jinten Hitam (pada pengulangan

ke-2) ................................................................................................... 46

5.5. Grafik Nilai Luas Zona Hambat Fraksi n-Heksana, Etil Asetat, dan

Etanol Jinten Hitam pada Berbagai konsentrasi ................................ 47

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Hasil Analisis Data ............................................................................. 60

2. Gambar Hasil Penelitian ..................................................................... 62

3. Surat Determinasi Bahan ................................................................... 68

4. Surat Pernyataan ................................................................................ 69

5. Daftar Riwayat Hidup ........................................................................ 70

xii

DAFTAR PUSTAKA

Abu-Zinadah, O.A., 2009. Using Nigella sativa to treat and heal chemical induced

wound of rabbit skin. J. King Abdulaziz Univ. Sci., 21: 335-346.

Alam, M.M., Yasmin, M., Nessa, J. and Ahsan, C.R., 2010. Antibacterial Activity

of Chloroform and ethanol Extracts of Black Cumin Seeds (Nigella sativa)

against Multi-Drug Resistant Human Pathogens Under Laboratory

Conditions. Journal of Medicinal Plants Research., Vol. 4(18), pp. 1901-

1905.

Ali, O.,G. Basbulllbul, T. Aydin. 2007. Antimitotic and antibacterial effects of the

Nigella Sativa L. Seed. Caryologia. 60(2): 270-272.

Al-Jabre, S., Al-Akloby, O.M., Al-Qurashi, A.R. 2003. Thymoquinone, an Active

Principle of Nigella sativa, Inhibited Aspergillus niger. Pakistan J. Med.

Res. 42(3). Abstrak.

Andromeda, Meda. 2010. Formulasi Tanlet Kunyah Ekstrak Biji Jinten Hitam

(Nigella sativa L.) sebagai Anti-inflamasi dengan Kombinasi Bahan Pengisi

Xilito-Laktosa. Surakarta: Skripsi Program Sarjana Farmasi.

Anonim, 2010. Spesies Bakteri Probiotik dan Manfaatnya. Majalah Kesehatan.

Jum’at, 12 November 2010. http://majalahkesehatan.com/spesies-bakteri-

probiotik-dan-manfaatnya/. Diakses tanggal 28 Oktober 2011.

Anonim. 2011. Handbook TA Hayati. Bandung: Unpad. Hal 21-23

Ash-Shababithi Isham, Muh., Hazim, Amid Imar. 2005. Shahiih Muslim Bi

Syarhin-Nawawi. In: Soffandi J. Wawan, M.A.,(Eds.). Terjemah Syarah

Shahiih Muslim. Buku ke-9, Jakarta: Mustaqiim. Hal. 591.

Dalimartha, S, 2003, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, Jilid I, Cetakan III,

Trubus Ariwidya, Jakarta.

Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.

Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 5, 9-11.

Dzen SM, Roekistiningsih, Santoso S, Winarsih S, Sumarno, Islam S,

Noorhamdani AS, Murwani S, Santosaningsih D. 2003. Bakteriologi

Medik, Bayumedia Publishing. Malang, hal. 189.

El-Tahir, Kamal El-Din, Backeet, Dana M. (2006). The Black Seed Nigella sativa

Linnaeus-A Mine for multi Cures : A Plea For Urgent Clinical Evalution of

Its Volatile Oil. J T U Med Sc. 1 (1): 1-19.

Fitri, Y., 2008. Efek Diuretik Ekstrak Etanol 70% Daun Gandarusa (Justicia

gendarusa Burm. F) pada Tikus Putih Galur Wistar. Surakarta: Skripsi

Program Sarjana Farmasi

xiii

Halawani, Eman. (2009). Antibacterial Activity of Thymoquinone and

Thymohydroquinone of Nigella sativa L. and Their Interaction with Some

Antibiotics. Advances in Biological Research : 3 (5-6) : 148-152.

Hendrik. 2007. Habbatus Sauda', Thibbun Nabawi Dalam Menangani

Berbagai Penyakit dan Memelihara Kesehatan Tubuh. Jawa Tengah:

Pustaka Al- Ummat: 94-7; 120-1

Indriati, Gusti & Khaerati. (2009). Peluang Budidaya dan Manfaat Jintan Hitam

(Nigella sativa). Dalam Warta Penelitian dan Pengembangan Tanaman

Industri. Vol. 15 ; Hal : 23-25.

Julita, Nurma. Suyatno. 2012. Aktivitas Antibakteri Senyawa Flavonoid dari

Tumbuhan Paku Perak (Pityrogramma calomelanos). UNESA Journal of

Chemistry Vol. 1 No. 1.

List PH and Schmidt PC. 1989. Phytopharmaceutical Technology. Germany:

CRC Press Inc., pp 107-112.

Mashhadian, N.V., Rakhshandeh, H. 2005. Antibacterial and antifungal effects of

nigella sativa extracts against S. aureus, P. aureginosa, and C. albicans.

Pak J Med Sci 21(1): 47-52.

Mayang, Permata, K., 2009. Pengaruh Pemberian Ekstrak Jintan Hitam (Nigella

sativa) Terhadap Perubahan Histopatologik Hepar Mencit BALB/C yang

Diinfeksi Salmonella thyphirimum. Semarang: Skripsi Program Sarjana

Farmasi

Meida, Khalsovia. 2011. Perbandingan Efektivitas Ekstrak Etanol Bawang Putih

(Allium sativum) dengan Kloramfenikol sebagai Antimikroba Salmonella

thypi Secara In Vitro . Malang: Skripsi Program Sarjana Farmasi.

Moretti, A., D’Antuono, L.F., and Elementi, S. (2004) Essential Oils of Nigella

sativa L. and Nigella damascene L. Seed. Journal of Essential Oil

Research.

Nickaver, Bahman., Mojab, Faraz., Javidnia, Katoyun., Amoli, Mohammad Ali

Roodgar. (2003). Chemical Composition of The Fixed and Volatile Oils of

Nigella sativa L. From Iran. Naturforsch. 58c, 629-631.

O.A. Abu-Zinadah. (2009). Using Nigella sativa oil to Treat and Heal Chemical

Induced Wound of Rabbit Skin. J.K.A.U. 21(2) : 335-346.

Pratiwi,T . 2008. Mikrobiologi Farmasi. Penerbit Erlangga. Jakarta.

Randhawa, M.A., Al-Ghamdi, M.S. 2002. A review of pharmacotherapeutic

effects of Nigella sativa. Pakistan Medical Research Journal. 41: 2

Rios J.J., Recio M.C. and Villae, A., 1988. Screening Methods for Natural

Products with Antimicrobial Activity : A Review of The Literature Journal

xiv

of Etnopharmacology. Vol. 23. Elsifier Scientific Publisher Ireland Ltd, pp.

127-149

Sa’ad, Muhammad. 2009. Uji Aktivitas Penangkap Radikal Isolat A dan B Fraksi

IV Ekstrak Etanol Daun Dewandaru (Eugenia uniflora L) dengan Metode

DPPH. Surakarta: Skripsi Program Sarjana Farmasi.

Salminen, S. and A. Wright. Lactic Acid Bacteria. Microbiology and

Functional Aspects. 2nd

Ed. Mercel Dekker, Inc. New York.

Shakkashiri. 2009. Chemical of the week: ethanol. www.scifun.org. Kamis, 5

Februari 2009. http://scifun.chem.wisc.edu/chemweek/chemweek.html.

Diakses tanggal 1 Desember 2011.

Soeharsono, Adriani Lovita, Safitri Ratu, Sjofjan Osfar, Abdullah Sirajudin,

Rostika Rita, Lengkey A.W. Hendronoto, Musawwir Andi. 2010.

Probiotik; Basis Ilmiah, Aplikasi, dan Aspek Praktis. Bandung: Widya

Padjajaran. Hal 22, 47-54, 65, 70, 94, 123-124.

Stahl, Egon. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Spektroskopi.

Bandung: ITB.

Suryo, Joko. (2010). Herbal Penyembuh Gangguan Sistem Pernapasan.

Yogyakarta : Mizan Publika. Hal : 98-100.

Sugiarto Didik. Khasiat Jinten Hitam Untuk Menyembuhkan Penyakit Berat.

Kebahagiaan Terbesar. Senin, 11 Januari 2010.

http://www.didiksugiarto.com/2010/01/khasiat-jinten-hitam-untuk-

mengobati.html. diakses tanggal 1 Desember 2011.

Wiryawan, Adam. 2011. Analisis Mikrobiologi. Situs Kimia Indonesia Chem-is-

try.org. Minggu, 1 Januari 2011. http://www.chem-is-

try.org/materi_kimia/instrumen_analisis/analisis-mikrobiologi/analisis-

mikrobiologi/ Diakses tanggal 17 Desember 2011

Yulianti, Sufrida & Junaedi, Edi. (2006). Sembuhkan Penyakit Dengan

Habbatus Sauda’ (Jinten Hitam). Jakarta: Agromedia Pustaka.