Protocolo para medición de alas de Drosophila melanogaster

Regresión Progenitor Progenie.

Las fotos de las alas se encuentran dispuestas en la carpeta de proyectos del computador de GETEG.

Se encuentran organizadas en las siguientes carpetas; Parental 1, Parental 2, F1 Machos, F1 Hembras, Parentales 1 F1, Parentales 2 F1, F2 Machos +, F2 Machos b, F2 Hembras + y F2 Hembras b.

Cada una de estas carpetas contienen una serie de fotografías, cada una de estas fotografías recibe como nombre un número, este número indica la replica a la cual pertenece. De esta manea podemos reconstruir la linealidad de cada repetición, por ejemplo podemos estar seguros que el P1.2 y el P2. 2 dieron origen a la progenie F1.2, y que de toda esta progenie solo un individuo fue elegido para el análisis, pues deberían de ser todos ““genéticamente iguales””. Los Parentales F1.2, equivalen a los individuos hermanos de esta replica (la .2), tanto macho como hembra. Así los Parentales F1.2 macho y Parentales F1.2 Hembra, dan origen a la progenie F2.2 Machos +, F2.2 Machos b, F2.2 Hembras + y F2.2 Hembras b.

El ala de D. melanogaster presenta diferentes tipos de venas en intersecciones entre ellas que serán nuestro sujeto de estudio (Figura 1).

Figura 1. En esta figura se enumeran las intersecciones de izquierda a derecha, solo por conveniencia en el proceso de organización.

Debido a las diferentes posiciones en que quedaron organizadas las fotografías, para facilitar la identificación de cada una de las intersecciones, a continuación se muestran las 4 distintas posiciones de las alas y sus correspondientes números (Figura 2).

Figura 2. Diferentes posiciones de las alas de D. melanogaster en las fotografías tomadas. Antes de comenzar las mediciones identifique el esquema que se ajusta a la fotografía que pretende medir, después de definir uno de los cuatro esquemas, básese en la numeración de este esquema para realizar sus mediciones.

Para comenzar el proceso de medición abra el programa tpsDig2, vaya a la pestaña “File”, “Imput source”, “File” en esta ventana busque la fotografía que pretende medir (si es necesario puede utilizar en esta ventana la opción “File””All graphics” para visualizar los archivos, si no están presentes) escoja la fotografía a medir y de click en aceptar.

Después de abrir la imagen en este programa, la resolución es muy alta y es muy difícil trabajar en una imagen tan grande, así que se puede ajustar el tamaño en los botones (+) ó (-) en la barra de herramientas.

Cuando tenga la imagen en un tamaño apropiado, vaya a la barra de herramientas y una el botón “Image edit tolos”, en esta ventana vaya a la pestaña “Measure”. En esta pestaña digite el número “1”en el espacio de “Reference Length” y seleccione a continuación en la pestaña desplegable la opción “Milimeters”.

Luego unda click en la opción “Set scale”, esta opción le permitirá fijar la medida base para las posteriores mediciones, para este caso la medida que determine en la imagen equivaldrá a 1 mm. Diríjase a la fotografía y hunda click en la línea debajo del numero “0” de la gradilla presente en la foto justo en medio de las alas, y luego hunda click exactamente en la línea que llega a 40. Se fijará una línea en la fotografía, luego vaya a la ventana de “Image tools” que ha permanecido abierta y de click en “ok”. Repita este procedimiento cada vez que pierda la escala de medición.

Después de definir la escala de medición, determine si se encuentra midiendo el ala derecha o izquierda. El ala derecha se reconoce por que la graduación del papel milimetrado bajo el ala se encuentra borrosa con respecto a la del otro lado, esto es debido a la ubicación de un papel calcante sobre el portaobjetos en los momentos de las mediciones.

Básese en los esquemas de las posiciones de las alas (Figura 2), para establecer las posiciones de su numeración. Comience a realizar las mediciones simplemente dado click en el punto de intersección que pretende comenzar y luego otro click al punto que pretende llegar, la distancia de esta medición que acaba de realizar, se muestra en la parte inferior de la ventana “Image edit tools”.

Nota:

Cada vez que realice una nueva medición, el dato de la medición anterior desaparecerá

Consigne los datos en la plantilla de Excel puesta a disposición para este proceso

Cuando haya terminado la medición y salga del Programa “NO GUARDE NINGUN CAMBIO” la idea es mantener las fotografías intactas para posteriores verificaciones.