PROLIFERASI PROTOCORM LIKE BODIES (PLBs) ANGGREKDendrobium HIBRIDA IN VITRO SEBAGAI RESPONS TERHADAP

PEPTON DAN AIR KELAPA DALAM MEDIA MS

(Skripsi)

Oleh

YENNI SOFIALITA NAINGGOLAN

FAKULTAS PERTANIANUNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG2016

ABSTRAK

PROLIFERASI PROTOCORM LIKE BODIES (PLBs) ANGGREKDendrobium HIBRIDA IN VITRO SEBAGAI RESPONS TERHADAP

PEPTON DAN AIR KELAPA DALAM MEDIA MS

Oleh

YENNI SOFIALITA NAINGGOLAN

Teknik kultur jaringan merupakan salah satu alternatif proliferasi anggrek dalam

jumlah banyak, seragam dan dengan waktu yeng relatif lebih singkat. Proliferasi

PLBs Anggrek dengan kultur jaringan dilakukan dengan menambahkan pepton

dan beberapa konsentrasi air kelapa dalam media kultur. Penelitian ini bertujuan

untuk mempelajari (1) Pengaruh pemberian pepton terhadap proliferasi PLBs dari

protocorm anggrek Dendrobium hibrida; (2) Pengaruh air kelapa terhadap

proliferasi PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida; dan (3)

Mengetahui ada tidaknya interaksi antara pepton dan air kelapa dalam

pengaruhnya terhadap proliferasi PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium

hibrida. Penelitian dilakukan dalam rancangan acak lengkap (RAL) dengan tiga

ulangan dan disusun dalam rancangan percobaan faktorial 2x4. Faktor pertama

berupa konsentrasi pepton, yaitu 0 dan 2 mg/l. Faktor kedua berupa konsentrasi

air kelapa, yaitu 0; 100; 200; dan 300 ml/l. Media dasar yang digunakan adalah

42Yenni Sofialita Nainggolan

MS (Murashige and Skoog) dan ekstrak tomat 200 g/l. Setiap unit percobaan

terdiri dari 1 botol kultur yang masing-masing botol berisi 5 cluster protocorm.

Setiap media perlakuan di perkaya dengan 20 gr/l sukrosa, dan sebelum tingkat

kemasaman media diatur menjadi 5,8 ditambah dengan pemadat media 7 gram

agar-agar. Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 1210C dengan tekanan

1,5 kg/cm2 selama 7 menit. Semua kultur anggrek dipelihara pada ruang kultur

bersuhu 26 ± 20C. Pengamatan dilakukan untuk variabel jumlah total PLBs,

bobot total PLBs, bobot 100 butir PLBs, dan pengamatan visual pada umur 8

MSP. Analisis data dilakukan menggunakan analisis ragam dan pemisahan nilai

tengah dilakukan dengan BNT 5%. Pada umur 7 hari setelah pengulturan eksplan

berupa protocorm Dendrobium hibrida yang dikulturkan di media perlakuan,

mulai teramati mengalami proliferasi PLBs. Hasil penelitian pada protocorm

Anggrek Dendrobium hibrida berumur 8 MSP menunjukkan bahwa (1) Pemberian

2 gr/l pepton dalam media MS (Murashige and Skoog) dan ekstrak tomat 200 gr/l

tanpa air kelapa, dapat meningkatkan pertambahan jumlah PLBs dan bobot total

PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida dibandingkan tanpa pemberian

2 gr/l pepton ke dalam media MS (Murashige and Skoog) yang ditambah estrak

tomat 200 gr/l dan tanpa air kelapa, (2) Pemberian beberapa konsentrasi air kelapa

mulai dari 100, 200, dan 300 ml/l tanpa pepton dapat meningkatkan pertambahan

jumlah PLBs dan bobot total PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida.

Konsentrasi air kelapa 200 ml/l merupakan media terbaik untuk meningkatkan

pertambahan jumlah PLBs dan bobot total PLBs, (3) Pengaruh pepton terhadap

proliferasi protocorm like bodies (PLBs) dan bobot total PLBs anggrek

Dendrobium hibrida bergantung pada konsentrasi air kelapa, yaitu pada media

43Yenni Sofialita Nainggolan

tanpa air kelapa pemberian pepton dapat meningkatkan pertambahan jumlah PLBs

dan bobot total PLBs. Namun pada media yang diberi air kelapa, penambahan

pepton justru menurunkan pertambahan jumlah PLBs dan bobot total PLBs.

Kata kunci: Air kelapa, Dendrobium, in vitro, Pepton, PLBs, Proliferasi,Protocorm,

PROLIFERASI PROTOCORM LIKE BODIES (PLBs) ANGGREKDendrobium HIBRIDA IN VITRO SEBAGAI RESPONS TERHADAP

PEPTON DAN AIR KELAPA DALAM MEDIA MS

Oleh

Yenni Sofialita Nainggolan

ProposalSebagai Salah Satu Syarat untuk Memperoleh gelar

SARJANA PERTANIAN

FAKULTAS PERTANIANUNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG2016

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Kota Medan pada tanggal 1 Maret 1994, yang merupakan

anak pertama dari lima bersaudara pasangan Bapak Hotman Nainggolan dan Ibu

Lasmavera Sipayung.

Jenjang pendidikan formal yang telah Penulis lalui yaitu Sekolah Dasar (SD) Citra

Insani Bumi Depasena Kecamatan Rawajitu Timur pada tahun 2006, Sekolah

Menengah Pertama (SMP) Negri ) 01 Rawajitu Timur pada tahun 2009, dan

Sekolah Menengah Atas (SMA) Yayasan Pendidikan Universitas Lampung (YP

UNILA) PADA TAHUN 2012. Pada tahun 2012, Penulis melanjutkan

pendidikan di Jurusan Agroteknologi Konsentrasi Agronomi Fakultas Pertanian

Universitas Lampung (UNILA) melalui jalur Mandiri.

Pada tahun 2015 Penulis mengikuti Praktik Umum di Balai Penelitian Tanaman

Hias (BALITHI) Segunung Pacet Cianjur, Jawa Barat. Selama menjadi

mahasiswa di Universitas Lampung Penulis pernah menjadi asisten praktikum

untuk mata kuliah Fisiologi Tumbuhan dan Perbanyakan Tanaman pada semester

genap tahun ajaran 2014/2015.

Dengan Rasa Syukur Kupersembahkan Karya Kecil Ini untuk:Mama dan Bapak yang telah mengajariKu tentang kehidupan, memberi dukungandan selalu tulus menyayangiKu, Adik-adikKu tersayang Kiki, Novri, Selin, dan

Ales, serta Inang dan keluarga besarKu yang selalu mendukung

Sukses cepat tercapai bila kita fokus pada apa yang kitainginkan, bukan pada hal yang kita takuti

Masa depan adalah milik mereka yang menyiapkan hariini

SANWACANA

Puji Syukur Penulis panjatkan ke pada Tuhan Yang Maha ESA karena berkat

kasih dan karunia-NYA sehingga Penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.

Selama melakukan penelitian hingga selesainya skripsi ini, Penulis telah banyak

mendapatkan bimbingan,dukungan, dan motivasi dari berbagai pihak. Oleh

karena itu, Penulis mengucapkan terima kasih setulis hati kepada:

1. Ibu Prof. Dr. Ir. Yusnita, M.Sc. selaku Pembimbing Utama yang telah

membimbing dan memberikan ilmu, pengetahuan, nasehat, saran, kesabaran,

dan motivasi selama Penulis melaksanaan penelitian hingga selesainya

penulisan skripsi ini.

2. Ibu Sri Ramadiana, S.P., M.Si. selaku Pembimbing kedua dan Dosen

Pembimbing Akademik yang telah memberikan ilmu, pengetahuan, nasehat,

saran, kesabaran, motivasi dan bimbingan skripsi kepada penulis.

3. Bapak Akari Edy, S.P., M.Si. selaku Penguji bukan Pembimbing atas saran

dan kritik yang dapat bermanfaat dan membangun untuk perbaikan skripsi ini.

4. Prof. Dr. Ir. Irwan Sukri Banuwa, M.Si., selaku Dekan Fakultas Pertanian,

Universitas Lampung.

5. Ibu Prof. Dr. Ir. Sri Yusnaini, M.Si. selaku Ketua Jurusan PS Agroteknologi

Fakulta Petanian Universitas Lampung.

6. Kedua orangtua Penulis Bapak Hotman Nainggolan dan Ibu Lasmavera

Sipayung yang Penulis sayang dan cintai karena telah memberikan doa, kasih

sayang, motivasi baik moril maupun materil untuk masa depan dan cita-cita

penulis .

7. Keluarga Penulis adikku Jelli Kiki Oktransiska Nainggolan, Roma Novriyanti

Nainggolan, Ade Marselina Nainggolan, Reza Morales Nainggolan, dan

Opungku, terimakasih atas doa, kasih sayang, motivasi kepada Penulis.

8. Keluarga besar di laboratorium kultur jaringan UNILA sekaligus sahabat

seperjuangan, Rezlinda Nurbaiti, Yanti Marchelina, Ria Rizky Lestari, Wiwik

Ferawati, Resti Astria, Syanda Giantara Kepala Mega, dan Vanny Unjunan

Sari atas bantuan, kerjasama, persaudaraan dan motivasi dari awal hingga

akhir penelitian.

9. Mbak Hayane Adeline Warganegara, S. P, Mbak Habibah, S.P, Mbak Defika,

S.P, Mbak vivi, S.P, Mbak pipit dan Mbak Maya, S.P, atas persaudaraan dan

bantuannya kepada Penulis.

10. Teman-teman Agroteknologi ’12 Selly Novitasari Sitio, Rina Yunika Sari,

Windari Anggraini, Santia Putri dan semuanya yang tidak dapat di sebutkan

satu per satu atas bantuan dan pesahabatannya.

11. Teman dan Sahabat Sejak Sekolah Dasar (SD) dan Sekolah Menengah

Pertama (SMP) Septifa Gagarin, Dian Retno Wati, Duga Novitasari, dan Rike

Anifta atas bantuan dan motivasi selama penulis menempuh pendidikan di

perguruan tinggi.

Semoga Tuhan Yang Maha Esa membalas kebaikan mereka semua dan semoga

skripsi ini dapat bermanfaat bagi seluruh pembaca. Amin

Bandar Lampung, Desember 2016

Penulis

Yenni Sofialita Nainggolan

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR ISI.............................................................................................. i

DAFTAR TABEL ..................................................................................... iii

DAFTAR GAMBAR................................................................................. v

I. PENDAHULUAN................................................................................ 1

1.1 Latar Belakang ............................................................................... 1

1.2 Perumusan Masalah ....................................................................... 5

1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................... 5

1.4 Landasan Teori............................................................................... 5

1.5 Kerangka Pemikiran....................................................................... 8

1.6 Hipotesis ........................................................................................ 10

II. TINJAUAN PUSTAKA...................................................................... 11

2.1 Anggrek Dendrobium .................................................................... 11

2.2 Perkecambahan Anggrek Dendrobium .......................................... 12

2.3 Teknik Kultur In Vitro ................................................................... 13

2.4 Eksplan........................................................................................... 15

2.5 Media Kultur In Vitro .................................................................... 16

2.6 Air Kelapa ...................................................................................... 18

2.7 Tomat ............................................................................................. 20

III.METODOLOGI PENELITIAN ........................................................ 22

3.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan .................................................... 22

3.2 Alat dan Bahan............................................................................... 22

3.3 Rancangan Percobaan, Pengamatan, dan Analisis Data ................ 23

3.4 Pelaksanaan Penelitian................................................................... 24

3.4.1 Persiapan Botol Kultur dan Sterilisasi Alat ........................ 24

3.4.2 Pembuatan Ekstrak Tomat ................................................... 24

3.4.3 Pembuatan Media Perlakuan .............................................. 25

3.4.4 Eksplan dan Penanaman...................................................... 27

3.4.5 Pemeliharaan Kultur ........................................................... 28

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 29

4.1 Hasil Penelitian .............................................................................. 29

4.1.1 Perkembangan Umum Kultur Protocorm Anggrek

Dendrobium Hibrida ........................................................... 29

4.1.2 Rata-rata Pertambahan Jumlah PLBs............................. ... 30

4.1.3 Bobot Total PLBs ................................................................. 31

4.1.4 Bobot 100 Butir PLBs .......................................................... 33

4.1.5 Pengamatan Visual dan Foto............................................... 33

4.2 Pembahasan.................................................................................... 34

V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................... 41

5.1 Kesimpulan .................................................................................... 41

5.2 Saran .............................................................................................. 42

DAFTAR PUSTAKA................................................................................ 43

LAMPIRAN............................................................................................... 47

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Komposisi nutrisi dan vitamin per 100 gram pada bahan

adenda tomat. ........................................................................................ 20

2. Komposisi vitamin, mineral, dan sukrosa dalam air kelapa muda dan tua. 21

3. Komposisi media MS............................................................................ 27

4. Jumlah kandungan Nitrogen pada media dasar dan perlakuan. ............ 37

5. Peranan masing-masing unsur hara dan vitamin dalam media kultur... 48

6. Data asli pertambahan jumlah PLBs anggrek Dendrobium hibrida 8 MSP. 49

7. Hasil analisis ragam dengan Statistix 8 pada rata-rata pertambahan jumlah

PLBs anggrek Dendrobium hibrida 8 MSP (data asli). ........................ 50

8. Hasil pemisahan nilai tengah rata-rata pertambahan jumlah PLBs anggrek

Dendrobium hibrida 8 MSP sebagai respons terhadap konsentrasi pepton dan

air kelapa menggunakan uji BNT 5% dengan Statistix 8. .................... 50

9. Hasil uji Bartlett dengan Statistix 8 pada rata-rata pertambahan jumlah PLBs

anggrek Dendrobium hibrida 8 MSP. ................................................... 51

10. Data asli bobot total PLBs anggrek Dendrobium hibrida 8 MSP. ........ 51

11. Hasil analisis ragam dengan Statistix 8 pada bobot total PLBs anggrek

Dendrobium hibrida 8 MSP ................................................................. 51

12. Hasil pemisahan nilai tengah rata-rata bobot total PLBs anggrek Dendrobium

hibrida 8 MSP sebagai respons terhadap konsentrasi pepton dan air kelapa

menggunakan uji BNT 5% dengan Statistix 8. ..................................... 52

13. Hasil uji Bartlett dengan Statistix 8 pada rata-rata bobot total PLBs anggrek

Dendrobium hibrida 8 MSP. ................................................................ 52

14. Data asli bobot 100 butir PLBs anggrek Dendrobium hibrida 8 MSP.. 52

15. Hasil analisis ragam dengan Statistix 8 pada rata-rata bobot 100 butir PLBs

anggrek Dendrobium hibrida 8 MSP .................................................. 53

16. Hasil uji Bartlett dengan Statistix 8 pada rata-rata bobot 100 butir PLBs 53

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1. (A) Bahan tomat yang digunakan sebagai adenda media (B) Tomatditimbang sesuai dengan kebutuhan (C) Tomat dihaluskanmenggunakan blander .......................................................................... 25

2. Protocorm hasil penyebaran polong telah berproliferasi menjadiPLBs pada 12 MSP (B) Eksplan protocorm yang dipindahkandi media perlakuan selama 8 MSP (C) Penanaman eksplandi media perlakuan (D) Eksplan yang terkontaminasi. ......................... 28

3. Eksplan protocorm pada salah satu media perlakuan pada saat awalPengulturan (B) Protocorm Like Bodies (PLBs) pada mediaMS (murashige and skoog) dengan penambahan 200 g/l ekstrak tomat dan200 ml/l air kelapa yang berumur 4 minggu pengulturan(C) Protocorm Like Bodies (PLBs) pada media yang samadengan umur 8 minggu pengulturan dan siap untuk diamati. ............... 29

4. Rata-rata pertambahan jumlah PLBs pada kultur in vitro anggrekDendrobium hibrida 8 minggu pengulturan sebagai respons terhadapkonsentrasi pepton dan air kelapa. Nilai tengah yang diikuti dengan hurufyang tidak sama tidak berbeda nyata dengan uji BNT pada taraf 5%berdasarkan data transformasi. (BNT 5%= 69,643). ............................ 30

5. Rata-rata pertambahan bobot total PLBs pada kultur in vitro anggrekDendrobium hibrida 8 minggu pengulturan sebagai respons terhadapkonsentrasi pepton dan air kelapa. Nilai tengah yang diikuti dengan hurufyang tidak sama tidak berbeda nyata dengan uji BNT pada taraf 5%berdasarkan data transformasi. (BNT 5%= 412,28). ............................ 32

6. Penampilan PLBs anggrek Dendrobium hibrida pada 8 MSP . ............ 35

7. (A) Terdapat beberapa PLBs yang sudah terlihat primodiadaun pada 8 minggu pengulturan (B) Pengamatan visual PLBs yang menjadiprimordia daun sudah berakar ............................................................... 36

1

I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Anggrek adalah tanaman hias yang banyak diminati di Indonesia dan memiliki

nilai ekonomis yang tinggi baik sebagai bunga potong maupun tanaman hias

dalam pot (Kasutjianingati dan Irawan, 2013). Di dunia kurang lebih anggrek

terdiri dari 25.000-30.000 spesies, sedangkan di Indonesia jumlahnya

diperkirakan mencapai 5000 spesies (Puspitaningtya, 1999). Salah satu genus

anggrek terbesar adalah Dendrobium dari famili Orchidaceae. Genus anggrek ini

merupakan kekayaan sumber daya genetik Indonesia yang banyak terdapat di

kawasan timur, seperti Papua dan Maluku. Namun, sumber daya genetik tersebut

belum dimanfaatkan secara optimal sebagai tetua dalam persilangan untuk

menghasilkan keturunan yang memiliki karakteristik sesuai dengan yang

diinginkan konsumen (Uesato, 1996).

Karakteristik yang sesuai dengan selera konsumen terhadap Dendrobium

ditentukan oleh warna, ukuran, bentuk, susunan, jumlah kuntum per tangkai,

panjang tangkai, dan daya tahan kesegaran bunga. Selain itu, selera konsumen

dipengaruhi oleh produsen dan tren di luar negeri (Soerojo, 1992). Permintaan

pasar anggrek cenderung meningkat setiap tahunnya, namun perkembangan

produksi anggrek di Indonesia masih relatif lambat (Widiastoety, 1998). Produksi

2

tanaman anggrek di Indonesia pada tahun 2005 – 2009 mengalami peningkatan.

Pada tahun 2005 produksi anggrek 7.902.403 tangkai, tahun 2006 10.703.444

tangkai, tahun 2007 9.484.393 tangkai, tahun 2008 15.430.040 tangkai, dan pada

tahun 2009 16.205.949 tangkai. Sedangkan pada tahun 2010 mengalami

penurunan yaitu 14.050.445 tangkai dan pada tahun 2011-2014 kembali

mengalami peningkatan. Pada tahun 2011 produksi anggrek sebesar 15.490.256

tangkai, tahun 2012 20.727.891 tangkai, tahun 2013 20.277.672 tangkai, dan pada

tahun 2014 24.633.789 tangkai (BPS, 2010). Indonesia juga telah melakukan

ekspor anggrek tetapi daya saing anggrek Indonesia di pasar luar negeri masih

sangat rendah karena mutu anggrek yang diproduksi juga masih rendah oleh

karena itu, diperlukan penyediaan bibit dalam jumlah banyak dan dalam waktu

yang singkat serta bebas dari penyakit.

Penyediaan bibit anggrek dapat dilakukan baik secara generatif maupun secara

vegetatif. Secara generatif, benih tanaman anggrek diperoleh dengan cara

mengecambahkan biji hasil persilangan atau silang dalam. Akan tetapi, menurut

Hendaryono (2000) biji anggrek tidak memiliki cadangan makanan, namun di

alam, anggrek dapat bersimbiosis dengan mycorrhiza dimana mycorrhiza akan

mensuplai bahan-bahan organik sehingga biji mampu untuk berkecambah

walaupun dalam persentasi sangat kecil. Sedangkan perbanyakan secara vegetatif

dapat dilakukan dengan cara stek, pemisahaan rumpun, atau pemotongan keiki

yang keluar dari ujung batang dan cloning melalui teknik kultur in vitro.

Perbanyakan secara vegetatif merupakan alternatif yang efektif dan efisien untuk

mendapatkan tanaman baru dengan sifat yang sama dengan induknya dan dalam

3

jumlah yang banyak. Perbanyakan anggrek secara vegetatif dengan sistem

konvensional membutuhkan waktu yang lama dan kondisi bibit rawan terhadap

penyebaran penyakit. Oleh karena itu, untuk meningkatkan produksi tanaman

anggrek maka dilakukan perbanyakan anggrek secara vegetatif yang lebih cepat,

dalam jumlah yang banyak, dan memiliki sifat yang sama dengan induknya yaitu

melalui teknik kultur in vitro.

Kultur jaringan merupakan teknik untuk menumbuhkembangkan bagian tanaman

baik berupa sel, jaringan ataupun organ dalam keadaan aseptik secara in vitro,

yang ditandai dengan kondisi kultur aseptik, penggunaan media buatan yang

mengandung nutrisi lengkap, zat pengatur tumbuh (ZPT) serta kondisi ruang

kultur, suhu dan pencahayaan yang terkontrol (Yusnita, 2003). Kelebihan dari

Teknik kultur in vitro adalah dapat memperbanyak tanaman dalam waktu yang

relatif singkat, menghasilkan jumlah tanaman yang seragam dalam jumlah

banyak, tanaman bebas virus dengan cara penumbuhan sel bebas virus dari

tanaman induk yang terserang atau terinfeksi virus. Pengembangbiakan tanaman

dengan teknik kultur in vitro dapat dilakukan setiap saat dan tidak bergantung

musim (Karjadi dan Buchory, 2008).

Salah satu yang menyebabkan keberhasilan dalam kultur jaringan adalah

tersedianya eksplan yang baik dan media kultur yang akan digunakan. Eksplan

adalah bagian tanaman yang akan digunakan sebagai bahan inisiasi kultur

sedangkan media tanam dalam kultur jaringan dapat menggunakan media cair

atau padat, untuk media padat harus menggunakan agar-agar atau gelrite. Media

yang sering digunakan dalam perbanyakkan anggrek adalah media Murashige and

4

Skoog atau yang lebih dikenal dengan media MS. Media yang digunakan untuk

pengecambahan biji harus mengandung air (akuades) sebagai pelarut, garam-

garam makro, garam-garam mikro, sukrosa, sumber karbohidrat, vitamin, ZPT

serta suplemen lain seperti senyawa-senyawa nitrogen organik dan asam-asam

organik (Gamborg dan Skyluk, 1981). Menurut Wetter dan Constabel (1991)

keistimewaan dari media MS adalah media MS mengandung nitrat, kalium, dan

amonium yang tinggi.

Salah satu eksplan yang dapat digunakan adalah PLBs (protocorm like bodies).

PLBs adalah proses terbentuknya embrio somatik tanpa melalui pembentukan

kalus. Proses ini dikenal dengan sebutan embriogenesis somatik (Smith, 2000).

Pada kasus dimana biji anggrek sulit untuk berkecambah dan ketersediaannya

sangat terbatas, maka proliferasi protocorm untuk mendapatkan PLBs (Prtocorm

like bodies) dalam jumlah yang banyak akan sangat bermanfaat untuk

menghasilkan propagul atau bibit anggrek dalam jumlah banyak. Ketersediaan

PLBs anggrek dalam jumlah banyak bermanfaat untuk tujuan konservasi,

komersial, maupun untuk mempelajari rekayasa genetika tanaman. Penambahan

ekstrak tomat, pepton dan air kelapa pada media MS dapat meningkatkan

proliferasi PLBs anggrek, hal ini dikarenakan bahan-bahan suplemen tersebut

merupakan sumber asam amino, peptida, vitamin dan zat pengatur tumbuh alami.

Air kelapa diketahui dapat menstimulasi pertumbuhan embrio dalam kultur

jaringan (Pierik, 1987).

5

1.2 Perumusan Masalah

Penelitian ini dilakukan untuk menjawab beberapa masalah seperti berikut ini:

1. Apakah pemberian pepton dapat berpengaruh terhadap proliferasi PLBs dari

protocorm anggrek Dendrobium hibrida?

2. Apakah penambahan air kelapa dapat memberikan respon yang positif terhadap

proliferasi PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida?

3. Apakah terdapat interaksi antara pepton dan air kelapa dalam pengaruhnya

terhadap proliferasi PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida?

1.3 Tujuan penelitian

Berdasarkan identifikasi dan perumusan masalah, maka tujuan dari dilakukannya

penelitian ini adalah sebagai berikut:

1. Mempelajari pengaruh pemberian pepton terhadap proliferasi PLBs dari

protocorm anggrek Dendrobium hibrida.

2. Mempelajari pengaruh air kelapa terhadap proliferasi PLBs dari protocorm

anggrek Dendrobium hibrida.

3. Mengetahui ada tidaknya interaksi antara pepton dan air kelapa dalam

pengaruhnya terhadap proliferasi PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium

hibrida.

1.4 Landsan Teori

Dalam rangka menyusun penjelasan teoritis terhadap pertanyaan yang telah

dikemukakan, penulis menggunakan landasan teori sebagai berikut.

6

Nilai ekonomis anggrek yang tinggi dan peluang pasar anggrek luas sehingga

anggrek dapat dijual dengan bentuk bibit dalam botol (in vitro), tanaman hias pot,

dan sebagai bunga potong. Antusias masyarakat terhadap anggrek menunjukkan

peningkatan yang konsisten dari waktu ke waktu. Namum, ketersediaan bibit

anggrek secara konvensional belum dapat memenuhi kebutuhan masyarakat.

Oleh karena itu, teknik kultur in vitro dirasa cukup efektif untuk menyediakan

bibit anggrek dalam jumlah banyak, seragam dan dengan waktu yang relatif

singkat.

Kultur jaringan merupakan teknik untuk menumbuhkembangkan bagian tanaman

baik berupa sel, jaringan ataupun organ dalam keadaan aseptik secara in vitro,

yang ditandai dengan kondisi kultur aseptik, penggunaan media buatan yang

mengandung nutrisi lengkap, ZPT serta kondisi ruang kultur, suhu dan

pencahayaan yang terkontrol (Yusnita, 2003). Dalam teknik kultur in vitro

dibutuhkan media tanam berupa media kultur yang mengandung seluruh hara

essensial bagi tanaman. Komponen media kultur berupa garam mineral, air, gula,

asam amino, vitamin, ZPT, dan pemadat media. Senyawa organik lainnya seperti

air kelapa, ekstrak tomat, pepton dapat ditambahkan ke dalam media guna untuk

merangsang dan meningkatkan pertumbuhan tanaman (Lakitan, 1995).

Media yang sering digunakan untuk mengecambahkan biji anggrek adalah media

MS (Murashige and Skoog, 1962) dibandingkan dengan media kultur lainnya.

Hal ini karena media MS memiliki kandungan garam-garam yang lebih tinggi dari

pada media lain. Selain itu, kandungan nitratnya juga lebih tinggi (Zulkarnain,

2009).

7

Hasil penelitian Lisdianah (2008) menunjukkan bahwa media yang tidak diberi

tripton berbeda nyata terhadap yang diberi tripton dalam meningkatkan persentase

protocorm yang membentuk primordia daun. Sedangkan dari analisis ragam

diketahui bahwa tripton tdak berpengaruh terhadap bobot 100 butir protocorm.

Pemberian air kelapa ke media growmore secara signifikan meningkatkan

persentase protocorm yang membentuk primordia daun.

Hidayati (2007) melaporkan hasil penelitiannya bahwa penambahan pepton 0,5-2

g/l dapat meningkatkan bobot 100 butir protocorm pada media yang digunakan

dalam perkecambahan biji anggrek dan persentase protocorm yang membentuk

primordia daun aggrek Dendrobium hibrida pada media 1/2 MS pada umur 8

minggu setelah tanam dibandingkan dengan tanpa pepton. Hal ini diperkuat

dengan penelitian Kristianti (2011) untuk jenis anggrek Phalaeonopsis hibrida

yang menyatakan bahwa penambahan berbagai konsentrasi pepton berpengaruh

nyata pada variabel jumlah daun.

Hasil penelitian Sari (2008) menunjukkan bahwa penggunaan media dasar

growmore dengan penambahan pepton dapat digunakan sebagai alternatif media

1/2 MS pada perkecambahan biji anggrek Dendrobium. Sedangkan Indrawati

(2008) menyatakan bahwa penambahan tripton ke dalam media 1/2 MS, Vacin

and Went, dan Hyponex dapat meningkatkan pertumbuhan protocorm yang lebih

baik dari pada tanpa tripton.

Air kelapa merupakan endosperm cair yang tebentuk setelah terjadi pembuahan

antara inti sperma dan inti sel telur yang menghasilkan zygot atau embrio yang

akan menjadi tanaman baru. Didalam air kelapa terdapat kandungan komponen

8

aktif, seperti mioinositol, leuoantosianin dan sitokinin. Diphenylurea yang

berperan dalam aktivitas pembelahan sel juga terdapat didalam air kelapa

(George, 1996). Sedangkan Arditti dan Ernst (1992) menyatakan bahwa air

kelapa mengandung auksin, prekusor, sitokinin, nitrogen, asam amino, koenzim,

asam-asam organik, vitamin, gula, dan gula alkohol.

Menurut Arditti dan Ernst (1992) Pepton adalah salah satu sumber nitrogen yang

berasal dari hasil penguraian oleh enzim pankreas hewan dengan kandungan

berbagai asam amino dan vitamin, dimana terdapat 16,16 % total kandungan

nitrogen pada pepton. Vitamin yang terkandung dalam pepton adalah piridoksin,

biotin, thiamin, asam nikotinat, dan riboflavin. Sedangkan beberapa jenis asam

amino yang terkandung didalam pepton adalah arginin, asam aspartat, sistein,

asam glutamate, glisin, histidin, iso leusin, leusin, lisin, metionin, enilalanin,

triptofan, tirosin, dan valin.

1.5 Kerangka Pemikiran

Berdasarkan landasan teori yang telah dikemukakan, berikut ini disusun kerangka

pemikiran untuk memberikan penjelasan teoritis terhadap perumusan masalah.

Anggrek merupakan salah satu tanaman hias yang banyak digemari di Indonesia,

hal ini dikarenakan anggrek dapat menjadi bunga potong maupun tanaman hias

dalam pot. Salah satu jenis anggrek yang banyak dikenal di kalangan masyarakat

pecinta tanaman hias adalah anggrek Dendrobium yang memiliki warna, bentuk,

dan ukuran bunga yang menarik. Oleh karena itu, permintaan konsumen terhadap

anggrek dari tahun ke tahun terus meningkat. Seiring dengan meningkatnya

9

permintaan pasar terhadap anggrek, penyediaan bibit anggrek cenderung susah

dan lambat. Hal ini dikarenakan penyediaan bibit anggrek dengan perbanyakan

generatif yaitu melalui biji banyak mengalami kendala seperti biji anggrek sangat

kecil dan tidak memiliki endosperm, selain itu waktu yang relatif lama.

Salah satu cara yang efektif dalam menyediakan bibit anggrek adalah dengan

teknik in vitro. Dalam perbanyakan dengan teknik in vitro diperlukan media

tanam dan lingkungan tumbuh yang optimal untuk menjaga dan meningkatkan

pertumbuhan tanaman. Media tanam dapat berupa media cair atau padat, yang

mengandung suplai unsur hara, garam-garam mineral, sumber karbohidrat,

vitamin, ZPT serta suplemen lainnya yang digunakan untuk perkecambahan biji,

pembesaran protocorm serta pertumbuhan dan perkembangan seedling anggrek.

Media yang sering digunakan dalam teknik kultur in vitro adalah media MS

(Murahige and Skoog, 1962) hal ini dikarenakan media MS mengandung unsur

makro, mikro A, mikro B, vitamin, dan gula, seperti yang sering dilaporkan pada

penelitian-penelitian sebelumnya. Akan tetapi, hanya menggunakan media MS

dirasa kurang optimal sehingga dimodifikasi dengan penambahan ekstrak tomat,

pepton dan berbagai konsentrasi air kelapa.

Asam amino merupakan sumber nitrogen organik. Senyawa yang sering

digunakan sebagai sumber nitrogen organik yaitu pepton, pepton dapat berperan

dalam pembelahan sel. Dari penelitian-penelitian sebelumnya, maka fenomena ini

menimbulkan pertanyaan. Apakah biji yang berkecambah memang lebih banyak,

ataukah biji yang berkecambah menjadi protocorm selanjutnya akan mengalami

proliferasi dimedia dengan penambahan pepton. Oleh karena itu, dalam

10

percobaan ini digunakan eksplan berupa protocorm yang dikulturkan dimedia.

Dalam pengkulturan biji anggrek atau perbanyakan PLBs, kensentrasi air kelapa

yang ditambahkan ke dalam media dapat memegang peranan penting.

1.6 Hipotesis

Berdasarkan kerangka pemikiran, dapat disimpulkan hipotesis sebagai berikut ini:

1. Penambahan pepton dapat meningkatkan proliferasi PLBs dari protocorm

anggrek Dendrobium hibrida.

2. Penambahan air kelapa dapat meningkatkan proliferasi PLBs dari protocorm

anggrek Dendrobium hibrida.

3. Terdapat interaksi antara pepton dan air kelapa dalam pengaruhnya terhadap

proliferasi PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida.

11

II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Anggrek Dendrobium

Anggrek merupakan salah satu tumbuhan berbiji dari famili Orchidaceae yang

banyak diminati karena bentuk dan warna bunganya menarik sehingga dapat

digunakan sebagai bahan baku industri bunga potong, tanaman pot atau hiasan

taman. Famili Orchidaceae merupakan herba menahun kerap kali epifit.

Kebanyakan memiliki akar rimpang atau batang yang membesar (pseudobulbs),

bertepi daun rata, kerap kali berdaging, hampir selalu berseling dua baris. Bunga

berkelamin dua dan memiliki bibir (labellum) yang berbeda-beda. 2 Bakal buah

tenggelam, beruang satu. Biji berjumlah sangat banyak, mudah bertaburan, dan

ringan (Van Steenis, 1997). Anggrek dapat dijumpai hampir disetiap tempat di

dunia, kecuali Antartika dan padang pasir. Tanaman anggrek yang sedemikian

banyak jumlahnya, secara morfologi hampir sama, hanya lingkungan hidupnya

saja yang berbeda, tergantung habitat asalnya (Gunawan, 2007).

Anggrek Dendrobium merupakan tanaman berbunga indah yang tersebar luas di

pelosok dunia termasuk di Indonesia, kontribusi anggrek Indonesia dalam

khasanah anggrek dunia cukup besar. Dari 20.000 spesies anggrek yang terbesar

di seluruh dunia 6.000 diantaranya berada di hutan- hutan Indonesia.

12

Secara umum sistematika tanaman anggrek Dendrobium menurut Yusnita (2010),

dapat diklasifikasikan sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermathophyta

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledonae

Ordo : Orchidales

Famili : Orchidaceae

Subfamili : Epidendroideae

Tribe : Epidendrae dendrobieae

Subtrib : Dendrobiinae

Genus : Dendrobium

2.2 Perkecambahan Anggrek Dendrobium

Biji anggrek tidak seperti biji tanaman lain pada umumnya karena biji anggrek

berukuran mikroskopis hampir seperti tepung dan dalam satu buah dihasilkan

jutaan biji. Selain itu, biji anggrek tidak dapat berkecambah begitu saja karena

bijinya tidak mempunyai cadangan makanan, akan tetapi biji anggrek pun mampu

berkecambah walaupun dalam persentase sangat kecil. Biji anggrek dapat tumbuh

secara alami jika mendapatkan tambahan makanan dari sejenis jamur yang hidup

di dalam akar anggrek dewasa yang disebut mycorrhiza (Hendaryono, 2000).

13

2.3 Teknik Kultur In Vitro

Karena sulitnya perkecambahan anggrek melalu teknik konvensional maka

digunakan teknik yang lebih mudah, efektif, dan efesien yaitu melalui teknik

kultur in vitro. Kultur jaringan merupakan teknik untuk menumbuhkembangkan

bagian tanaman baik berupa sel, jaringan ataupun organ dalam keadaan aseptik

secara in vitro, yang ditandai dengan kondisi kultur aseptik, penggunaan media

buatan yang mengandung nutrisi lengkap, ZPT serta kondisi ruang kultur, suhu

dan pencahayaan yang terkontrol (Yusnita, 2003).

Metode kultur jaringan berasal dari tahun 1902, ketika Gottlieb Haberlandt

memperlihatkan bahwa terdapat kemungkinan memelihara sel tumbuhan yang

sehat dalam media kultur. Schwann dan Schleiden merupakan pencetus teori

totipotensi pada tahun 1838 yaitu, bahwa setiap sel tanaman memiliki informasi

genetik dan perangkat fisiologis yang lengkap untuk tumbuh dan berkembang

menjadi tanaman utuh jika berada dalam kondisi yang sesuai (Yusnita, 2003)

Dalam kultur jaringan bagian tanaman yang terdiri atas sel-sel dan jaringan dibuat

sedemikian mungkin untuk ditanam disebuah media yang steril dan lingkungan

yang terkendali. Seperti teori totipotensi tersebut, bagian tanaman yang ditanam

di media tersebut ternyata dapat bertumbuh dan berkembang menjadi individu

baru bila kondisinya sesuai. Tanaman anggrek sendiri baru dapat dikulturkan

pada tahun 1922 oleh Knudson.

Perbanyakan tanaman dengan metode kultur jaringan memberi peluang besar

untuk menghasilkan bibit tanaman dalam jumlah besar dan dalam waktu yang

relatif singkat. Banyak kelebihan dalam penggunaan teknik perbanyakan tanaman

14

dengan metode kultur jaringan yaitu dapat dilakukan kapan saja, tidak bergantung

dan dipengaruhi oleh musim, dapat menghasilkan bibit dalam jumlah banyak,

serentak, dan bebas dari penyakit sehingga bibit yang dihasilkan sehat dan

seragam. Metode kultur jaringan merupakan cara alternatif untuk menghasilkan

bibit dalam jumlah banyak dan waktu yang relatif singkat (Hendaryono dan

Wijayani, 1994).

Perkembangbiakan atau regenerasi dalam kultur in vitro dapat dilakukan melalui

jalur organogenesis dan embriogenesis somatik, baik secara langsung maupun

tidak langsung melalui tahap kalus. Embriogenesis somatik adalah menumbuhkan

embrio (calon tanaman) dari sel somatik atau sel tanpa dibuahi. Dapat juga

didefinisikan sebagai proses regenerasi eksplan melalui pembentukan struktur

menyerupai embrio (embrioid) dari sel somatik yang telah memiliki calon akar

dan tunas. Embrio somatik dapat terbentuk melalui dua jalur, yaitu secara

langsung maupun tidak langsung (melewati fase kalus). Sedangkan

embriogenesis zygotic merupakan suatu proses dimana sel somatik berkembang

membentuk tumbuhan baru melalui fusi gamet (pembuahan).

Organogenesis merupakan proses pembentukan dan perkembangan tunas dari

jaringan meristem. Proses organogenesis dimulai dengan perubahan sel parenkim

tunggal atau sekelompok kecil sel, dimana selanjutnya membelah menghasilkan

suatu masa sel globuler atau meristemoid, bersifat kenyal dan berkembang

menjadi primordium pucuk atau akar. Kejadian ini dapat terjadi langsung pada

eksplan atau tidak langsung melalui pembentukan kalus.

15

Keberhasilan akan tercapai apabila kalus atau sel yang digunakan bersifat

embriogenik yang dicirikan oleh sel yang berukuran kecil, sitoplasma padat, inti

besar, vakuola kecil-kecil dan mengandung butir pati. Embrio somatik dapat

dihasilkan dalam jumlah besar dari kultur kalus, namun untuk tujuan perbanyakan

dalam skala besar, jumlahnya dapat lebih ditingkatkan melalui inisiasi sel

embrionik dari kultur suspensi yang berasal dari kalus primer Embrio somatik

dapat dicirikan dari strukturnya yang bipolar, yaitu mempunyai dua calon

meristem, yaitu meristem akar dan meristem tunas. Dengan memiliki struktur

tersebut maka perbanyakan melalui embrio somatik lebih menguntungkan dari

pada pembentukan tunas adventif yang unipolar. Di samping strukturnya, tahap

perkembangan embrio somatik menyerupai embrio zigotik. Pembentukkan

embrio somatik dapat digolongkan melalui beberapa tahap, yaitu tahap globular,

tahap hati, tahap torpedo, tahap kotiledon, tahap kecambah, dan tahap planlet.

2.4 Eksplan

Eksplan adalah bagian tanaman yang dijadikan bahan inokulum awal yang

ditanam dalam media yang akan menunjukkan pertumbuhan dan perkembangan

tertentu. Eksplan ini menjadi bahan dasar bagi pembentukan kalus yaitu bentuk

awal calon tunas yang kemudian mengalami proses pelengkapan tanaman seperti

daun, batang dan akar. Pemilihan bagian tanaman sebagai bahan eksplan

menentukan keberhasilan eksplan untuk dikulturkan. Pada dasarnya setiap bagian

tanaman dapat dijadikan sebagai bahan eksplan, tetapi dalam memilih bagian

tanaman yang akan dikulturkan harus mempertimbangkan faktor kemudahan

beregenerasi dan tingkat kontaminasinya. Eksplan dapat diletakkan pada media

16

dengan posisi sesuai asalnya yaitu bagian bawah eksplan menempel pada media

(posisi polar) atau dibalik sehingga bagian bawah menjadi di atas (posisi apolar).

Pada spesies tertentu hal ini akan mempengaruhi pertumbuhan akar dan tunas

yang muncul dari eksplan (Nusmawarhaeni et al., 2001).

2.5 Media Kultur In Vitro

Mata rantai pertama dalam pelaksanaan teknik kultur in vitro adalah persiapan

media tanam. Media merupakan faktor utama dalam perbanyakan dengan kultur

jaringan. Keberhasilan perbanyakan dan perkembangbiakkan

tanaman dengan metode kultur jaringan secara umum sangat bergantung pada

jenis media. Media tumbuh pada kultur jaringan sangat besar pengaruhnya

terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan serta bibit yang dihasilkannya.

Dalam media tanam diberikan berbagai garam mineral, air, gula, asam amino,

vitamin, zat pengatur tumbuh, pemadat media untuk pertumbuhan dan

perkembangan, dan terkadang arang aktif untuk mengurangi efek penghambatan

dari persenyawaan polifenol

(warna coklat hitam) yang keluar akibat pelukaan jaringan pada jenis-jenis

tanaman tertentu. Gula, asam amino, dan vitamin ditambahkan karena eksplan

yang ditanam tidak lagi sepenuhnya hidup secara autotrof melainkan secara

heterotrof atau mendapat suplai organik (Gunawan, 1995). Media tanam dalam

kultur jaringan adalah tempat untuk tumbuh eksplan. Media tanam ini harus

berisi semua zat yang dibutuhkan untuk menjamin pertumbuhan eksplan. Dengan

demikian keberhasilan kultur jaringan jelas ditentukan oleh media tanam dan

macam tanaman (Rahardja, 1988).

17

Adapun kompisisi media kultur jaringan tanaman adalah sebagai berikut:

1) Air

Air merupakan komponen yang penting di dalam pengulturan eksplan karena 95%

dari media mengandung air. Untuk tujuan penelitian, digunakan air destilata,

dan untuk penelitian dengan materi eksplan dari protoplas, meristem dan sel

sebaiknya digunakan aquades. Dimana air destilata (air suling) tersebut telah

steril dari kontaminasi mikroorganisme atau substansi yang dapat merusak proses

perkembangan eksplan. Selain itu, air destilata merupakan air yang murni tidak

mengandung unsur-unsur mineral (Madigan, 2003).

2) Larutan Garam Anorganik

Tiap tanaman memerlukan setidaknya 6 elemen makronutrien, yaitu unsur yang

diperlukan dalam jumlah besar meliputi N, K, Mg, Ca, S, P dan 7 elemen

mikronutrien, yaitu unsur yang diperlukan dalam jumlah kecil meliputi Fe, Mn, B,

Mo, Cl (Wetherell, 1976). Unsur-unsur makro biasanya diberikan

dalam bentuk NH4NO3, KNO3, CaCl2.2H2O, MgSO4.7H2O, dan KH2PO4,

sedangkan unsur mikro biasanya diberikan

dalam bentuk MnSO4.4H2O, ZnSO4.4H2O, H3BO3, KI, Na2MoO4.2H2O5,

CuSO4.5H2O, dan CoCl2.6H2O (Hendaryono dan Wijayani, 1994).

Vitamin adalah bahan yang perlu ditambahkan dalam media kultur

in vitro, sebab sel bagian tanaman yang dikulturkan secara in vitro belum mampu

membuat vitamin sendiri untuk kehidupannya. Vitamin yang sering ditambahkan

ke dalam medium adalah tiamin (vitamin B1), asam nikotinat (niasin), piridoksin

(vitamin B6) (Indra, 2008).

18

3) Zat-zat organik

Senyawa kimia organik yang biasa dipakai sebagai sumber

energi dalam kultur in vitro adalah karbohidrat. Karbohidrat tersusun atas unsur-

unsur C, H, O sebagai elemen penyusun utama. Bahan-bahan organik yang

termasuk karbohidrat meliputi gula, pati, dan selulosa. Karbohidrat mempunyai

dua fungsi utama yaitu sebagai sumber energi untuk jaringan dan untuk

keseimbangan tekanan osmotik dalam media. Karbohidrat yang sering digunakan

adalah sukrosa meskipun terkadang diganti dengan glukosa dan fruktosa dapat

digunakan tetapi harganya lebih mahal hasilnya tidak selalu lebih baik dari pada

sukrosa. Konsentrasi sukrosa yang digunakan berkisar 1–5% (10 - 15 g/l), tetapi

untuk kebanyakkan pengkulturan konsentrasi optimum sukrosa adalah 2-

3%. Sedangkan kadar sukrosa untuk keperluan pengkulturan berkisar antara 2-

4%. Kadar sukrosa yang digunakan sebagai sumber energi untuk menginduksi

pertumbuhan eksplan dalam medium adalah 2 - 7%. Sukrosa bersifat labil

terhadap suhu tinggi sehingga apabila disterilkan dalam autoklaf bersama-sama

zat lain akan mengakibatkan penguraian sukrosa menjadi kombinasi antara

sukrosa, D-glukosa, dan D-fruktosa. Keuntungan dari penguraian

ini adalah terbentuknya aldosa (D-glukosa) dan ketosa (D-fruktosa) yang

melimpah ruah (Hendaryono danWijayani, 1994).

2.6 Air Kelapa

Menurut Yusnida (2006) air kelapa merupakan endosperm dalam bentuk cair yang

mengandung unsur hara dan zat pengatur tumbuh sehingga dapat menstimulasi

19

perkecambahan dan pertumbuhan. Air kelapa sudah sejak dahulu digunakan

sebagai campuran media. Konsentrasi air kelapa yang biasa digunakan adalah 7-

15% (70-150 ml/l) (Katuuk, 1989), dapat juga sampai 200 ml/l (Hendaryono &

Wijayani, 1994). Pada air kelapa selain mengandung bahan makanan seperti

asam amino, asam organik, gula dan vitamin juga terkandung sejumlah hormon

tumbuh seperti sitokinin 5,8 mg/l, auksin 0,07 mg/l dan giberelin serta senyawa

lain yang dapat memacu proses perkecambahan biji (Yusnida, 2006). Selain itu,

air kelapa juga digunakan untuk merangsang pertumbuhan tanaman karena

mengandung sejumlah besar zat-zat biokimia yang berperan untuk pertumbuhan

tanaman, juga berfungsi sebagai suplemen karena dapat memacu pertumbuhan

sel, jaringan, maupun organ pada tanaman, seperti biji dan akar pada teknik kultur

in vitro (Katuuk, 1989). Air kelapa dapat digunakan untuk mempertahankan

pertumbuhan jaringan yang diisolasi dari sumber yang berlainan. Kandungan air

kelapa disajikan dalam Tabel 1 berikut ini:

20

Tabel 1. Komposisi vitamin, mineral, dan sukrosa dalam air kelapa muda dan tuaKomposisi Air kelapa muda Air kelapa tua

(mg/100 ml) (mg/100 ml)

VitaminVitamin C 8,59 4,5Riboflavin 0,26 0,25Vitamin 0,6 0,62Inositol 2,3 2,21Biotin 20,52 21,5Piridoksin 0,03 -Thiamin 0,02 -MineralN 43 -P 13,17 12,5K 14,11 15,37Mg 9,11 7,52Fe 0,25 0,32Na 21,07 20,55Mn Tidak terdeteksi Tidak terdeteksiZn 1,05 3,18Ca 24,67 26,5Sukrosa 4,89 3,45

2.7 Tomat

Tomat (Solanum lycopersicum) merupakan salah satu tanaman yang sangat

dikenal oleh masyarakat Indonesia. Namun pemanfaatannya hanya sebatas

sebagai lalap dan bahan tambahan dalam masakan. Kandungan senyawa dalam

buah tomat di antaranya solanin (0,007%), saponin, asam folat, asam malat, asam

sitrat, bioflavonoid (termasuk likopen, α dan ß-karoten), protein, lemak, vitamin,

mineral dan histamin (Canene Adams et al., 2005). Beberapa studi in vitro

menemukan bahwa likopen memiliki aktivitas antioksidan yang paten. Likopen

merupakan salah satu kandungan kimia paling banyak dalam tomat, dalam 100

gram tomat rata-rata mengandung likopen sebanyak 3-5 mg (Giovannucci, 1999).

21

Berikut ini merupakan komposisi kandungan nutrisi dan vitamin yang terdapat

dalam tomat (Tabel 2).

Tabe 2. Komposisi nutrisi dan vitamin per 100 gram pada bahan adenda tomat.Komposisi Kadar (mg)

ProteinLemakKarbohidratKalsiumFosforBesiVitamin AVitamin B1Vitamin B2Vitamin CNiacinSeratAir

850330

4.6405240,5

623 IU0,6-

190,628110094

`Sumber: Botanical (2011)

22

III. BAHAN DAN METODE

3.1 Tempat dan Waktu Pelaksanaan

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman, Fakultas

pertanian, Universitas Lampung, yang dimulai pada bulan April sampai dengan

Juni 2016.

3.2 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya adalah laminar air low

cabinet (LAFC), botol kultur, plastik, karet, bunsen, pembakar bunsen (korek api),

pinset, spatula, kramik, cawan petri, erlenmeyer, gelas ukur, labu ukur, pH meter,

magnetic stirrer, timbangan elektrik, autoklaf, pipet, mistar, kertas label, dan alat

tulis.

Sedangkan bahan yang digunakan adalah protocorm anggrek Dendrobium hibrida

hasil persilangan anggrek berbunga merah besar dan D2278 yang diperoleh dari

laboratorium Kultur Jaringan Tanaman, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung,

spritus, agar-agar, air kelapa, pepton, media MS, dan tomat. Sedangkan untuk

tahap pemeliharaan fasilitas yang digunakan adalah ruang kutur yang berisi rak

kultur dan diatur dengan suhu 26 + 2 C, dan lampu fluoresens (TL)berintensitas 1.000 – 2.000 lux.

23

3.3 Rancangan Percobaan, Pengamatan dan Analisis Data

Percobaan ini dilakukan dengan menggunakan RAL (rancangan acak lengkap)

dengan 8 perlakuan, masing-masing diulang sebanyak 3 kali. Setiap unit

percobaan terdiri dari 1 botol kultur yang masing-masing botol berisi 5 cluster

protocorm.

Rancangan perlakuan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rancangan

perlakuan faktorial 2x4. Faktor pertama adalah penggunaan pepton (dengan 2 g/l

dan tanpa pepton) sedangkan faktor kedua adalah perbedaan konsentrasi air

kelapa (0, 100, 200, dan 300 ml/l). Media dasar yang digunakan adalah media

MS (Murashige and Skoog, 1962). Semua media perlakuan ditambahkan 200 g/l

ekstrak tomat dan 7 g/l agar.

Pengamatan dilakukan setelah tanaman berumur 2 bulan atau kurang lebih 8

minggu setelah tanam.

Variabel yang diamati adalah:

1. Jumlah total PLBs yang terbentuk

Jumlah protocorm yang bertambah dihitung setelah tanaman berumur 8

minggu setelah tanam.

2. Bobot total PLBs

Penghitungan bobot total PLBs dilakukan dengan cara menimbang bobot

keseluruhan protocorm dalam satuan mili gram (mg).

3. Bobot 100 butir PLBs

Penghitungan bobot 100 butir PLBs dilakukan dengan cara menimbang 100

butir protocorm dalam satuan mili gram (mg).

24

4. Pengamatan visual dan foto

Pengamatan dilakukan dengan dua cara yaitu mengamatan dengan indra

pengelihatan (pengamatan visual) dan dengan pengamatan memalui foto.

Homogenitas ragam antar perlakuan diuji dengan uji Bartlett, sedangkan untuk

aditivitas diuji dengan uji Tukey. Bila kedua asumsi terpenuhi maka akan

dilanjutkan dengan analisis ragam. Pemisahan nilai tengah dilakukan dengan uji

BNT (Beda Nyata Terkecil) pada taraf 5%.

3.4 Pelaksanaan Penelitian

3.4.1 Persiapan botol kultur dan sterilisasi alat

Botol kultur yang akan digunakan dicuci dan di sterilkan menggunakan autoclaf

Bundenberg selama kurang lebih 2 jam dengan tekanan 1,5 kg/cm dengan suhu121 C. Kemudian botol kultur tersebut dan alat-alat lainnya yang akandigunakan seperti cawan petri, alat-alat diseksi (pinset, spatula, gunting), dan alat-

alat gelas lainnya disterilisasi kembali menggunakan autoclaf tommy selama 30

menit pada tekanan 1,5 kg/cm dan suhu 121 C.3.4.2 Pembuatan Ekstrak Tomat

Bahan adenda yang digunakan adalah tomat yang akan diolah menjadi ekstrak

tomat. Buah tomat yang digunakan adalah buah tomat yang dipilih berdasarkan

warna buah secara keseluruhan merah tua, tidak ada warna hijau dan tidak terlalu

keras (Gambar 1A). Sebelum diolah menjadi ekstrak, bahan adenda diukur

derajat brixnya dengan refraktometer yaitu alat yang digunakan untuk mengukur

25

kadar atau konsentrasi bahan terlarut seperti gula, garam, dan protein (Sarjana,

2008). Tomat memiliki derajat Brix sebesar 4%.

Pengolahan bahan adenda tomat menjadi ekstrak tomat diawali dengan pencucian

tomat dengan air aquades sampai bersih kemudian dilakukan sterilisasi tomat

dengan cara merendam tomat dengan 5% bayclin selama 5 menit. Kemudian

tomat dibilas dengan air mengalir sampai bersih. Selanjutnya tomat ditimbang

seberat 200 gram (Gambar 1B). Kemudian, buah tomat di-blander hingga halus

atau kurang lebih selama 5 detik (Gambar 1C). Buah tomat yang telah di-blander,

kemudian disaring dengan saringan teh setelah itu disaring kembali menggunakan

kapas. Setelah didapatkan ekstrak tomat kemudian dicampurkan ke dalam media

MS

Gambar 1. (A) Bahan tomat yang digunakan sebagai adenda media (B) Tomatditimbang sesuai dengan kebutuhan (C) Tomat dihaluskanmenggunakan blander

3.4.3 Pembuatan media perlakuan

Media dasar yang digunakan untuk perlakuan pada penilitian ini adalah media MS

(Murashige and Skoog, 1962) dengan penambahan ekstrak tomat 200 mg/l

kemudian dikombinasikan dengan dan tanpa pepton dan berbagai konsentasi air

kelapa (0, 100, 200, dan 300 ml/l).

A CB

26

Media MS dibuat dengan cara memasukkan larutan stok makro, mikro A, mikro

B, CaCl, Fe, Vitamin MS, dan Mio Inositol. Kemudian ditambahkan sukrosa

(gula) sebanyak 20 gr/l, dan air kelapa sesuai dengan konsentrasi yang digunakan

(0, 100, 200, dan 300 ml/l). Untuk media perlakuan yang menggunakan pepton,

diberian pepton sebanyak 2 g/l, lalu ditera hingga satu liter. Setelah larutan

selesai dibuat, langkah selanjutnya adalah mengukur pH menggunakan pH meter.

pH yang diinginkan adalah 5,8 jika kurang dari standar maka dilakukan

penambahan KOH dan jika lebih dari standar maka dilakukan penambahan Hcl.

Pada saat akan dimasak ditambahkan agar-agar sebanyak 7 g/l kemudian dimasak

sampai mendidih. Setelah itu dimasukkan ke dalam botol kultur yang sudah

disterilisasi sebanyak 30 ml/botol, lalu ditutup menggunakan plastik dan diikat

menggunakan karet gelang. Botol – botol yang sudah beriisi media kemudian di

autoclaf menggunakan autoclaf tommy selama 7 menit pada tekanan 1,2 kg/cmdan suhu 121 C. Berikut ini (Tabel 3) adalah komposisi yang terkandung dalammedia MS.

27

Tabel 3. Komposisi media MSSenyawa dalam Larutan Stok Konsentrasi Media

MS (mg/l)

NH4NO3 1.650KNO3 1.900KH2PO4 170MgSO4. 7H2O 370CaCl2. 2H2O 440MnSO4. H2O 16,9ZnSO. 7H2O 8,6H3BO3 6,2KI 0,83CuSO4. 5H2O 0,025CoCl2. 6H2O 0,025Na2. MoO4. 7H2O 0,25FeSO4. 7H2O 27,8Na2EDTA 37,3Tiamin-HCL 0,1Piridoksin-HCL 0,5Asam nikotinat 0,5Glisin 2,0Mio-inosital 100Sukrosa 20.000Agar-agar 7.000Air Kelapa 150 ml/lSumber (Yusnita, 2003).

3.4.4 Eksplan dan Penanaman

Eksplan yang digunakan adalah protocorm anggrek Dendrobium hibrida yang

berasal dari perkecambahan antara anggrek berbunga merah besar dan anggrek

D2278. Setelah polong siap dipanen, polong disebar ke dalam beberapa media,

kemudian setelah 3 bulan dilakukan subkultur dengan cara mengambil protocorm

yang terdapat pada media sebelumnya kemudian ditanam ke dalam media

perlakuan di dalam laminar air flow cabinet (LAFC). Dalam satu botol kultur

diisi 5 cluster yang setiap cluster jumlahnya beragam-ragam. Botol yang telah

berisi eksplan ditutup dengan plastik, dikat dengan karet gelang, dan diberi label

28

tanggal tanam dan identitas tanaman lalu botol dibungkus dengan plastik wrapp.

Setelah itu, botol kultur diletakkan pada rak yang berada di ruang kultur (Gambar

2).

Gambar 2. (A) Protocorm hasil penyebaran polong telah berproliferasi menjadiPLBs pada 12 MSP (B) Eksplan protocorm yang dipindahan di mediaperlakuan selama 8 MSP (C) Penanaman eksplan di media perlakuan(D) Eksplan yang terkontaminasi.

3.4.5 Pemeliharaan kultur

Semua kultur yang telah selesai ditanam, kemudian disimpan di dalam ruang

kultur yang terdapat rak kultur di dalamnya. Di atas rak kultur diberikan lampu

fluoresens (TL) dengan intensitas 1.000 – 2.000 lux, dan ruangan diatur pada suhu26 + 2 C secara terus menerus. Kultur dipelihara selama 2 bulan, kemudiandilakukan pengamatan pada masing-masing perlakuan.

BA

C D

V. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian ini, maka dapat diambil kesimpulan sebagai berikut:

1. Pemberian 2 gr/l pepton dalam media MS (Murashige and Skoog) dan ekstrak

tomat 200 gr/l tanpa air kelapa, dapat meningkatkan pertambahan jumlah

PLBs dan bobot total PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida

dibandingkan tanpa pemberian 2 gr/l pepton ke dalam media MS (Murashige

and Skoog) yang ditambah estrak tomat 200 gr/l dan tanpa air kelapa .

2. Pemberian beberapa konsentrasi air kelapa mulai dari 100, 200, dan 300 ml/l

tanpa pepton dapat meningkatkan pertambahan jumlah PLBs dan bobot total

PLBs dari protocorm anggrek Dendrobium hibrida. Konsentrasi air kelapa

200 ml/l merupakan media terbaik untuk meningkatkan pertambahan jumlah

PLBs dan bobot total PLBs.

3. Pengaruh pepton terhadap proliferasi protocorm like bodies (PLBs) dan bobot

total PLBs anggrek Dendrobium hibrida bergantung pada konsentrasi air

kelapa, yaitu pada media tanpa air kelapa pemberian pepton dapat

meningkatkan pertambahan jumlah PLBs dan bobot total PLBs. Namun pada

media yang diberi air kelapa, penambahan pepton justru menurunkan

pertambahan jumlah PLBs dan bobot total PLBs.

42

5.2 Saran

Berdasarkan penelitian yang telah dilaksanakan, penulis menyarankan agar

dilakukan peningkatan konsentrasi pepton ke dalam media yang kandungan

garamnya rendah seperti media ½ MS (Murashige and Skoog).

DAFTAR PUSTAKA

Arditti, J. dan R. Ernst. 1992. Micropropagation of Orchid. New York: JhonWiley and Sons Inc.

Badan Pusat Statistika. 2010. Produksi Tanaman Anggrek Tahun 2005-2014.Indonesia.

Botanical. 2011. Tomato Natural Source of Lycopene. http://www.botanical-online.com. Diakses pada tanggal 27 Mei 2016.

Gamborg, O. L. dan J. P. Shyluk. 1981. Nutrition, Media, and Characteristic ofPlant Cell and Tissue Culture. dalam Gunawan, L. W., 1988. Teknik KulturJaringan. Institut Pertanian Bogor: Bogor.

Canene-Adams K., J. K. Campbell, S. Zaripheh, E. H.Jeffery, J. W. Erdman Jr.2005. The Tomato As a Functional Food. J. Nutr. 135: 1226–1230.

George, E. F. 1996. Plant Propagation by Tissue Culture. Handbook andDirectory of Commercial Laboratories. Exegetics Ltd. Basingstoke:England.

George, E.F., M.A. Hall, dan G.J De Klerk. 2008. Plant Propagation by TissueCulture 3rd Edition. Netherland: Springer Publishing.

Giovannucci, E. 1999. Tomatoes, tomato-based products, lycopene, and cancer:review of the epidemiologic literature. J. Natl. Cancer Inst. 91:317–331.

Gunawan, I. 2007. Perlakuan Sterilisasi Eksplan Anggrek Kuping Gajah(Bulbophyllum beccarii Rchb.f) dalam Kultur In Vitro. (Skripsi). InstitutPertanian Bogor.

Gunawan, L.W. 1995. Teknik Kultur Jaringan In Vitro dalam Hortikultura.Jakarta: Penebar Swadaya.

Hendaryono, D.P.S. dan A. Wijayani. 1994. Kultur Jaringan (Pengenalan danPetunjuk Perbanyakan Tanaman Secara Vegetatif Media). Yogyakarta:Penerbit Kanisius.

44

Hendaryono, D.P.S. 2000. Anggrek dalam Botol. Yogyakarta: Kanisius.

Hendaryono, D.P.S. 2007. Pembibitana Amggrek dalam Botol. Penerbit Kanisius:Yogyakarta.

Hidayati, R. D. 2007. Pengaruh Beberapa Konsentrasi Kinetin Atau Pepton PadaPerecambahab Biji Anggrek Dendrobium sp Secara In Vitro. (Skripsi).Universitas lampung.

Indra.2008. Media Pengembangan dan media Tanam dan Pertumbuhan.http://ekmonsaurus.com/data/media.PDF. Diakses pada tanggal 9 Mei 2016.

Indrawati, W. 2008. Hibridisasi Berbagai Tetua Anggrek Dendrobium OptimasiPengecambahan Biji Serta Aklimatisasi Planlet Untuk MenghasilkanHibrida Dendrobium Baru. (Tesis). Universitas Lampung.

Karjadi, A.K. dan A. Buchory. 2008. Pengaruh Auksin dan Sitokinin terhadapPertumbuhan dan Perkembangan Jaringan Meristem Kentang KultivarGranola. Bandung: Puslitbang Hortikultura.

Kasutjianingati dan R. Irawan. 2013. Alternative perbanyakan in-vitro anggrekbulan (Phalaenopsis amabilis). Jember: Departemen Produksi Pertanian.Politeknik Negeri.

Katuuk, J. R. P. 1989. Teknik Kultur Jaringan dalam Mikropropagasi Tanaman,Jakarta: Departemen Pertanian dan Kehutanan.

Kristianti, L. 2011. Pengaruh Ekstrak Touge dan Konsentrasi Pepton TerhadapPembesaran Seedling Phalaeonopsis Hibrida In vitro. (Skripsi). UniversitasLampung.

Lakitan, B. 1995. Dasar-Dasar Fisiologi Tumbuhan. Jakarta: PT. Raja GraindoPersada.

Lisdianah, N. Hibridisasi dan Pengaruh Air Kelapa dan Tripton TerhadapPerkecambahan Biji dan Pertumbuhan Protokorm Anggrek Dendrobium sp.(Skripsi). Universitas Lampung.

Madigan, M.T.2003. Brock Biology Of Microorganism. Amerika: PearsonEducation Inc.

Murashige, T. Dan F. Skoog. 1962. A Revised Medium for Rapid Growth andBioassasys with Tobacco Tissue Cultures. Physol Plant. 15:473-497.

Nusmawarhaeni, S. D. Prihartini, dan E.P. Pohan, 2001. Membuat TanamanCepat Berbuah. Jakarta: Penebar Swadaya.

45

Pierik, R.L.M. 1987. In Vitro Culture of Higher Plants. Netherlands: MartinusNijhoff Publishers.

Puspitaningtyas, O. M. 1999. Inventarisasi Jenis-Jenis Anggrek di Cagar AlamKersik Luway Kalimantan Timur. Bogor: Buletin Kebun Raya Indonesia.

Rahardja. 1988. Kultur Jaringan Teknik Perbanyakan Tanaman secara Modern.Jakarta: Penebar swadaya.

Rahayu, R.Y. 2007. Komposisi Kimia Rabbit Nugget dengan Komposisi FillerTepung Tapioka yang Berbeda. (Skripsi). Universitas Gajah Mada.

Ramadiana et al. 2008. Pengecambahan biji dan pertumbuhan seedlingPhalaenopsis Hibrida In Vitro pada dua media dasar dengan atau tanpaarang aktif. Jurnal Agrotropika. 16(2): 70-75.

Sari, A. P. 2008. Pengaruh Media Dasar 1/2 MS dan Growmore dan PemberianPepton Terhadap Pengecambahan Anggrek Dendrobiun In Vitro. (Skripsi).Universitas Lampung.

Sarjana, 2008. Penerapan Standar Penggunaan Pemanis Buatan Pada ProdukPangan. Jawa Tengah: Balai Pengkajian Teknologi Pertanian.

Smith, R. H. 2000. Plant Tissue Culture : techniques and experiments. London.:Academic press.

Soerojo. 1992. Pengembangan Usaha Peranggrekan di Indonesia. BuletinPerhimpunan Anggrek Indonesia. 5: 22-24.

Uesato, K. 1996. Influences of temperature on the growth of ceratophalae typeDendrobium. The Organizing Committee of 2nd Asia Pacific OrchidConference, Ujung Pandang. 1−4.

Van Steenis, C. G. G. J. 1997. Flora. Pradnya Paramita: Jakarta.

Wetter, L.R. dan F. Constabel. 1991. Metode Kultur Jaringan Tanaman (edisibahasa Indonesia). Bandung: ITB.

Widiastoety, D., N. Sovia, dan Syafni. 1998. Kultur embrio pada anggrekDendrobium. Jurnal Hortikultura.7(4): 860−863.

Widiastoety, D. 2001. Perbaikan Genetic dan Perbanyakan Bibit secara In Vitrodalam Mendukung Perkembangan Anggrek di Indonesia. Jurnal LitbangPertanian. 20(4): 138-143.

Widiastoety, D. dan Nurmalinda. 2010. Pengaruh Suplemen Nonsintetik terhadapPertumbuhan Planlet Anggrek Vanda. Jurnal Hortikultura. 20(1):60-66.

46

Wetherell, D. F. 1976. Plant Tissue Culture Series. New Jersey: Avery PublishingGroup Inc.

Yusnida, B. 2006. Pengaruh pemberian giberelin (GA3) dan air kelapa terhadapperkecambahan bahan biji anggrek bulan (Phalaenopsis amabilis bl) secarain vitro. Hayati. 2(2): 41-46.

Yusnita. 2003. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien.Jakarta: Agromedia Pustaka.

Yusnita. 2010. Perbanyakan In Vitro Tanaman Anggrek. Bandar Lampung:UniversitasLampung.

Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Jakarta: Bumi Aksara.

1 COVER.pdf2 ABSTRAK.pdf3 COVER DALAM.pdf4 Judul Skripsi (MENYETUJUI).pdf7 RIWAYAT HIDUP.pdf8 UCAPAN TRIMAKASIH.pdf9 SANWACANA.pdf10 DAFTAR ISI.pdfBAB I.pdfBAB II.pdfBAB III.pdfBAB V.pdfDAFTAR PUSTAKA.pdf