PRAKTIKUM BLOK 10

PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

Pewarnaan Ziehl Neelsen, termasuk pewarnaan tahan asam. biasanya dipakai untuk

mewarnai golongan Mycobacterium (M. tuberculosis dan M. leprae) dan Actinomyces.

Bakteri genus Mycobacterium dan beberapa spesies nocardia pada dinding selnya

mengandung banyak zat lipid (lemak) sehingga bersifat permeable dengan pewarnaan

biasa. Bakteri tersebut bersifat tahan asam (+) terhadap pewarnaan tahan asam.

Pewarnaan tahan asam dapat digunakan untuk membantu menegakkan diagnosa

tuberculosis.

Bahan pemeriksaan TB biasanya berupa sputum yang diambil dari pasien tersangka KP

(Koch pulmonum), tetapi dapat pula diambil dari lokasi lain seperti cairan otak (Liquor

Cerebro Spinalis), getah lambung, urine, ulkus, dll. Pembacaan BTA sputum

mempergunakan skala IUATLD (International Union Against Tuberculosis and Lung

Diseases). Tingkat positivitas dapat memperkirakan berat ringannya infeksi KP pada

penderita.

Pewarnaan Ziehl Neelsen

Pewarnaan diferensial yang membedakan bakteri tahan asam dengan bakteri yang bukan

tahan asam.

Prinsip pewarnaan :

Bakteri tahan asam (BTA) tahan terhadap pencucian dengan alkohol asam, walau telah

dicuci dengan alkohol asam bakteri tahan asam tidak melepaskan zat warna yang telah

diikatnya.

Bakteri tahan asam akan berwarna merah, dan bakteri tidak tahan asam berwarna biru.

Alat dan bahan :

1. Mikroskop

2. Objek gelas

3. Carbol Fuchsin 0,3 %

4. Alkohol Asam 3 % ( Alkohol + HCl konsentrasi 3 %)

5. Methylen Blue 0,3 %

6. Ose

7. Lampu Bunsen/Lampu spiritus

8. Oil Immersi

Cara membuat sediaan :

1. Bersihkan objek gelas, beri label

2. Sterilkan ose, dinginkan

3. Ambil 1 ose sputum yang kental (hijau kuning) letakkan diatas objek gelas,

ratakan.

4. Sediaan biarkan kering pada suhu kamar.

5. Setelah kering fiksasi denga melewatkkan diatas nyala api sebanyak 3 x,

sediaan siap untuk diwarnai.

Cara Pewarnaan :

1. Sediaan dituangi Carbol Fuchsin sampai penuh

2. Panaskan selama 3-5 menit sampai keluar uap pertama jangan sampai

mendidih.

3. Biarkan dingin selama 5 menit

4. Cuci dengan air

5. Dekolorisasi denga alkohol asam 10-30 detik.

6. Cuci dengan air

7. Tuangi dengan methylen blue selama 20-30 detik

8. Cuci dengan air

Pembacaan Denga Skala IUATLD

1. Tidak ditemukan BTA dalam 100 lp, disebut negatif

2. Ditemukan 1-9 BTA dalam 100 lp, ditulis jumlah kuman yang ditemukan

3. Ditemukan 10-99 BTA dalam 100 lp, disebut + atau (1+)

4. Ditemukan 1-10 BTA dalam 1 lp, minimal 50lp, disebut ++ atau (2+)

5. Ditemukan >10 BTA dlam 1 lp, minimal 20lp, disebut +++ atau (3+)

Tugas :

1. Membuat sediaan

2. Melakukan pewarnaan

3. Mengamati dengan mikroskop

4. Menggambar hasil pengamatan.

LAPORAN PRAKTIKUM BLOK 10PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

Nama : NIM :Tanggal : 10 September 2014 Grup :

1. Pewarnaan Ziehl Neelsen

2. Koloni M. tuberculosisMedia : Ogawa