Oleh Linda Mulyati 1011E1011

Dosen PembimbingYati Supriatin, S.Pd.,MSi

PERBANDINGAN KUALITAS PREPARAT KLAMIDOSPORA Candida albicans YANG TERBENTUK

PADA MEDIA CMA FORMULA DENGAN MEDIA CMA MODIFIKASI

DAFTAR ISTILAH

Kualitas Preparat Klamidospora Candida

albicans

Menunjukan morfologi Klamidospora Candida albicans

mulai dari bentuk, warna, ukuran, serta letak dari

klamidospora pada pseudohifa yang terbentuk dengan jelas.

Media CMA ModifikasiMedia CMA dengan

penambahan sukrosa 0,8% sebagai sumber karbon yang terdapat pada gula tepung

LATAR BELAKANG

Candida albicans menghasilkan

klamidospora pada media pertumbuhan

Corn Meal Agar

Telah dilakukan penelitian Modifikasi Media CMA oleh

Febrianti, 2009 yang kemudian disempurnakan oleh Al-Iman,

2010 .

Dengan adanya preparat permanen, akan

membantu menunjang proses pembelajaran

praktikum dilaboratorium pendidikan.

RUMUSAN MASALAH

Apakah Candida albicans dapat membentuk Klamidospora pada media CMA Modifikasi?

Jika Klamidospora terbentuk pada media CMA Modifikasi, bagaimana gambaran morfologi klamidospora pada media CMA Formula dan CMA

Modifikasi?

Bagaimana gambaran morfologi klamidospora Candida albicans dengan metode Agar Block Culture dan metode Streak Plate?

TUJUAN PENELITIAN

Untuk mengetahui bagaimana gambaran morfologi klamidospora pada media CMA

Formula dan CMA Modifikasi.

Untuk mengetahui apakah Candida albicans dapat membentuk

Klamidospora pada media CMA Modifikasi.

Untuk mengetahui bagaimana gambaran morfologi klamidospora Candida albicans dengan metode Agar Block Culture dan

metode Streak Plate.

MANFAAT PENELITIAN

Dapat membantu dan berguna sebagai media pembelajaran mahasiswa

Sekolah Tinggi Analis Bakti Asih dalam mengamati Klamidospora Candida albicans yang murni terbentuk dari modifikasi media Corn Meal Agar.

HIPOTESIS PENELITIAN

Klamidospora Candida albicans dapat terbentuk pada media Corn

Meal Agar Modifikasi.

Terdapat perbedaan waktu pembentukan klamidospora Candida albicans pada media CMA Formula

dan media CMA Modifikasi.

Morfologi klamidospora Candida albicans yang terbentuk dengan metode Agar Block Culture lebih bagus dari pada metode Streak Plate.

TINJAUAN PUSTAKA

Klamidospora

Spora aseksual yang dibentuk dari hifa, berbentuk bulat dan berdinding tebal. Spora pada hifa dapat ditengah (Interkalar), ditepi (Lateral), dan diujung (Terminal). Dapat terbentuk dalam 24 jam

pada suhu ruang (25 ± 2 oC)

Candida albicans

Candida albicans merupakan jamur dimorfik karena kemampuannya untuk tumbuh dalam dua bentuk yang berbeda yaitu sebagai sel tunas yang

akan berkembang menjadi blastospora dan menghasilkan kecambah yang akan membentuk hifa semu. Serta dapat membentuk klamidospora

pada media tertentu seperti pada media CMA.

Corn Meal Agar

salah satu media pertumbuhan jamur yang Agar diformulasikan untuk memperlihatkan karakteristik

morfologi atau fisiologi dalam Candida albicans, dan membedakannya dari Candida spp, lainnya yaitu

kemampuan membentuk klamidospora.

METODE PENELITIAN

JENIS PENELITIAN Jenis penelitian ini adalah Eksperimen laboratorium yaitu kajian penelitian di mana semua variabel bebas yang berpengaruh namun tidak relevan

dengan masalah yang sedang diselidiki dminimalkan (Kerlinger, 1990).

DESAIN PENELITIANDesain penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah perbandingan

kelompok parametrik yaitu membandingkan Morfologi Klamidospora Candida albicans pada media CMA modifikasi sebagai kelompok perlakuan dengan

morfologi klamidospora Candida albicans pada media CMA formula sebagai kelompok control dengan metode agar block culture dan metode Streak Plate.

LOKASI DAN WAKTU

Lokasi : Penelitian dilakukan di Laboratorium Biologi Sekolah Tinggi Analis Bakti Asih

Waktu : Waktu yang diperlukan untuk penelitian ini adalah dari bulan September sampai dengan bulan November

Alur kerja metode Agar Block CultureDisiapkan satu Gelas Kimia dan satu Erlenmeyer

Dimasukan gula tepung 0,8% kedalam gelas kimia ditambah ±7,5 g tepung maizena, tambahkan 50 ml

aquadest

Dipanaskan Erlenmeyer pada suhu ±60oC masukan isi gelas kimia, dipanaskan hingga mendidih

Diotoklaf pada suhu dan tekanan 121oC selama 15 menit, pHnya diukur

Dimasukan media yang telah diotoklaf kedalam cawan petri steril secara aseptic, kemudian diamkan hingga membeku

Diinokulasi Candida albicans pada pengenceran ke-4x pada media CMA modifikasi dan media CMA formula secara aseptic metode Agar Block Cultures

Diinkubasi dalam suhu ruangan selama 7 hari

Dibuat pengenceran standar Mc Farlan Candida albicans sampai pengenceran ke-4x

Cover glass yang telah diwarnai, diletakan pada kaca objek, dilakukan perekatan dengan entelan. Tunggu 30 menit hingga mengering.

Diangkat cover glass dari agar block, Difiksasi, di lakukan pewarnaan dengan cat gram

Diamati morfologi Klamidospora dan pseudohifa dibawah mikroskop dimulai dari pembesaran 10x10 hingga 100x10 oleh 3 orang panelis

Dimasukan ±4,5g agar swallow kedalam Erlenmeyer,

Disiapkan satu Gelas Kimia dan satu Erlenmeyer

Dimasukan gula tepung 0,8% kedalam gelas kimia ditambah ±7,5 g tepung maizena, tambahkan 50 ml

aquadest

Dipanaskan Erlenmeyer pada suhu ±60oC masukan isi gelas kimia, dipanaskan hingga mendidih

Diotoklaf pada suhu 121oC selama 15, diukur pHnya

Dimasukan media yang telah diotoklaf kedalam cawan petri steril secara aseptic, kemudian diamkan hingga membeku

Setelah 24 jam inokulasikan lgi jamur Candida albicans pada media CMA yang lain dengan metode Streak Plate

Diinkubasi dalam suhu ruangan selama 4 hari

Diinokulasikan jamur Candida albicans pada media CMA dari media SDA dengan metode strak plate

Di lihat setiap 24 jam selama 4 hari berturut-turut dengan dibuat 3 preparat awetan dari setiap plate dengan pewarnaan gram dan menggunakan perekat

entelan sebagai perekatnya

Diamati morfologi Klamidospora dan pseudohifa dibawah mikroskop dimulai dari pembesaran 10x10 hingga 100x10 oleh 3 orang panelis

Dimasukan ± agar swallow kedalam Erlenmeyer, ditambahkan

Alur kerja metode Sreak Plate

CARA KERJAPembuatan Media CMA Formula

±0,85 g CMA Formula

Masukan Aquadest 50 ml

Panaskan sampai mendidih

Ukur pH

Autoklaf 121oC15 menit

Ditanam Candida albicans

Masukan ke cawan petri

Inkubasi

Dilakukan Pewarnaan Gram

Dibuat Preparat awetan

Pengamatan

Pembuatan Media CMA Modifikasi

Masukan Gula tepung dengan masing-masing konsentrasi 0,8%

Tepung Maizena

masing-masing ± 7,5g

Aquadest masing-

masing 50 mlAgar swallow ± 4,5g

Aquadest masing-

masing 100 ml

Panaskan hingga ± 60oC

Ukur pH

Autoklaf 121oC15 menit

Masukan ke cawan petri

Ditanam Candida albicans

Inkubasi

Dilakukan Pewarnaan Gram

Dibuat Preparat awetan

Pengamatan

Masukan Tepung maizena + Gula tepung yang sudah di homongenkan dengan 50 mL

aquadestPanaskan hingga mendidih

Inokulasi Candida albicans Metode Agar Block Culture

Potong agar 1 x 1 cm, angkat dan simpan di blok agar pada sela-sela agar

bekas potongan blok agar

Diinokulasi jamur Candida albicans pada pengenceran 4x di tengah pada 4 sisi potongan blok agar

Diberi kaca penutup steril

Diinkubasi selama 7 hari

pada suhu ruangan

Inokulasi Candida albicans dengan Metode Streak Plate

Ose bulat di sterilkan diatas api hingga membara

Diambil koloni dari media SDA secara aseptic

Diinokulasikan pada media CMA dengan

cara digoreskan pada permukaan agar dengan pola

tertentu, Diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang (25 ± 2oC)

Diamati setiap 24 jam dengan dibuat preparat

awetannya.

Diinokulasikan dri C.albicans 24 jam,

pada media CMA yang lalu dengan metode

streak plate

Diinkubasi selama 4 hari pada suhu ruang

(25 ± 2oC)

Pewarnaan Klamidospora dengan Cat Gram

1 ose koloniCandida albicans dri streak Plate

Keringkan kemudian

fiksasi

Kristal violet selama 1

menit

Bilas dengan

air perlahan

Lugol selama 1

menit

Bilas dengan

air perlahan

Cuci dengan alkohol 96% ±

2 detik

Bilas dengan

air perlahan

Safranin selama 30-

45 dtk

Bilas dengan

air perlahan

Keringkan

Ambil kaca penutup dari block agar

Pengawetan dan Perekatan

Tutup dengan

Kaca penutup

Oleskan entelan

pada sisi-sisi kaca

penutup

Letakan pada kaca objek

Oleskan Entelan

pada sisi-sisi kaca

penutup

Diamkan 30 menit

Ulangi pengolesan

Pengamatan

Streak Plate Agar Block Culture

Pengolahan dan Analisis Data

Untuk menilai kualitas Preparat Klamidospora Candida albicans akan dinilai oleh 3 orang panelis dengan membandingkan morfologi klamidospora yang terbentuk pada media CMA modifikasi dengan media CMA formula, serta metode penanaman jamur

yang berbeda yaitu metode Agar Block Culture dengan Metode Streak Plate.

HASIL PENGAMATAN

Klamidospora Candida albicans pada media CMA Modifikasi 0,8% pda hari ke-7 sebelum dan setelah diwarnai metode Agar Block Culture

Klamidospora

Pseudohifa

Klamidospora

Pseudohifa

Klamidospora Candida albicans pada media CMA Formula pada hari ke-7 sebelum dan setelah diwarnai Agar Block Culture

Pseudohifa

Klamidospora

Pseudohifa

Klamidospora Candida albicans pada media CMA Modifikasi dan media CMA Formula pada hari ke-1dengan metode Streak Plate setelah diwarnai dengan pewarnaan Gram

klamidospora

Pseudohifa CMA Formula CMA Modifikasi

Klamidospora

Pseudohifa

CMA Modifikasi

CMA FormulaKlamidospora

Pseudohifa

Klamidospora Candida albicans pada media CMA Modifikasi dan media CMA Formula pada hari ke-2 dengan metode Streak Plate setelah diwarnai dengan pewarnaan Gram

Klamidospora Candida albicans pada media CMA Modifikasi dan media CMA Formula pada hari ke-3 dengan metode Streak Plate setelah diwarnai dengan pewarnaan Gram

Klamidospora

Pseudohifa

Klamidospora

Pseudohifa

CMA Modifikasi

CMA Formula

Klamidospora Candida albicans pada media CMA Modifikasi dan media CMA Formula pada hari ke-4 dengan metode Streak Plate setelah diwarnai dengan pewarnaan Gram

klamidospora

Pseudohifa

CMA Modifikasi

klamidospora

Pseudohifa

CMA Formula

Klamidospora Candida albicans yang terbentuk pada CMA Modifikasi dan media CMA Formula pada hari ke-2 yang diinokulasi dengan metode Agar Block Culture dari Candida albicans yang sebelumnya telah

dilakukan inokulasi pada media CMA Formula selama 24 jam,sebelum diwarnai dengan pewarnaan Gram

Klamidospora

Pseudohifa

Klamidospora

Pseudohifa

CMA Modifikasi

CMA Formula

Blastospora

Blastospora

PEMBAHASAN

Digunakan metode Agar Block Cultures dan metode Streak Plate

Pada Agar Block Culture Struktur jamur utuh, namun membutuhkan waktu lama

Pada metode Streak plate hanya membutuhkan waktu 24-36 jam , namun klamidospora yang terlihat tidak terlihat utuh seperti pada metode Agar Block

culture

Terdapat perbedaan yang sangat terlihat jelas dari morfologi klamidospora dan

pseudohida yang terbentuk dari penanaman Agar Block Culture dengan

metode Streak Plate.

Terdapat perbedaan pertumbuhan klamidospora pada media CMA modifikasi

dengan media CMA formula baik pada metode Agar Block Culture maupun metode

Streak Plate

Klamidospora dapat terbentuk pada media CMA modifikasi seperti yang terjadi pada

media CMA formula sebagai kontrol.

Sehingga dapat disimpulkan bahwa media CMA modifikasi dapat digunakan sebagai media alternative untuk pertumbuhan

jamur Candida albicans dalam membentuk Klamidospora.

SIMPULAN DAN SARAN

SIMPULAN

Candida albicans dapat membentuk klamidospora pada media CMA Modifikasi.

Klamidospora yang terbentuk pada Media CMA Modifikasi dan pada media CMA Formula, berbentuk bulat dan bulat lonjong, berwarna ungu muda-ungu tua, kecoklatan, pink ungu-pink kehitaman, letak terminal (diujung), lateral (ditepi) dan interkalar (ditengah) Pseudohifa yang berwarna ungu-ungu tua, dan membentuk percabangan. Klamidospora yang terbentuk pada media CMA modifikasi lebih banyak

daripada media CMA Formula

Klamidospora padaAgar Block Culture terbentuk dalam 7 hari berbentuk bulat, berwarna ungu muda-ungu , ukuran bervariasi,letak terminal dan pada percabangan pseudohifa. Pseudohifa panjang dan kurus-kurus,berwarna ungu muda-ungu dan membentuk

percabangan. Pada Streak Plate terbentuk dalam 24 jam berbentuk bulat dan bulat lonjong, berwarna ungu muda-ungu tua, kecoklatan, pink ungu hingga pink kehitaman, ukurannya relative sama, letak terminal (diujung), lateral (ditepi), dan interkalar (ditengah) pseudohifa.

Pseudohifa pendek-pendek dan lebih gemuk, berwarna ungu-ungu tua membentuk banyak percabangan.

SARAN

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan lebih dari satu Strain Candida albicans

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan jamur Candida albicans yang diambil dari sample yang mengalami kandidiasis kuku

TERIMA KASIH