Penapisan Kegiatan anti mikroba dari Endofit Fungi

Terisolasi dari Sesbania grandiflora (L.) Pers.

Oleh :

LUNGGUHAN SIREGAR

1011014063

Pendahuluan Jamur endofit adalah mikro jamur yang menjajah atau hidup sehat dalam

jaringan tanaman tanpa menghasilkan apapun gejala atau efek negatif yang jelas untuk host mereka ( Hirsch dan Braun , 1992)

Jamur endofit mungkin bermanfaat bagi tanaman inang dengan memproduksi zat bioaktif untuk meningkatkan pertumbuhan dan daya saing inang di alam. Selain itu, mereka menghasilkan metabolit sekunder antimikroba , yang kini diakui sebagai bioaktif senyawa baru ( Carrol , 1988; Strobel et al , . 2004)

Endofitik yang berkaitan dengan tanaman obat Thailand dan termasuk asal-usul mereka , keanekaragaman hayati , interaksi endofit tanaman , peran mereka dalam ekologi , dan karakterisasi metabolit sekunder yang menarik ( Arnold , 2007; . Saikkonen et al , 2004) .

BAHAN DAN METODEKoleksi Tanaman Sampel

Daun dan batang dikumpulkan dari Sesbania grandiflora ( L. ) Pers . , dalam kawasan hutan dari Nakhon Nayok Provinsi , Thailand .

Isolasi jamur endofitik kemudian dibersihkan di bawah keran mengalir air selama 5 menit dan kemudian dikeringkan .

Daun dan fragmen ekstremitas disterilisasi dengan perendaman dalam etanol 70% selama 1 menit , 5 % larutan sodium hipoklorit selama 5 menit , dan air suling steril untuk 1 menit dua kali ( Chomcheon et al . , 2006) .

daun permukaan disterilkan dan batang dipotong menjadi potongan-potongan kecil sekitar 0,5 × 0,5 cm2 menggunakan pisau steril dan ditempatkan pada steril setengah kentang kekuatan dextrose agar piring .

Pelat diinkubasi pada suhu kamar selama 24-72 jam . Ujung hifa dari jamur endofit yang tumbuh keluar dari jaringan tanaman dipotong oleh padang rumput steril pipet dan dipindahkan ke setengah steril potato dextrose kekuatan lempeng agar .

Bakteri dan jamur Strain

Bakteri indikator termasuk Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

dua ragi indikator, yaitu, Candida albicans dan Cryptococcus neoformans 6 cetakan termasuk spp Rhizopus., Mucor spp., Aspergillus spp., Alternaria spp.,

Curvularia spp., dan Penicillium spp

Persiapan bakteri dan ragi Culture Setiap strain bakteri ditumbuhkan dalam darah plate agar pada suhu 37 ° C selama 24

jam untuk mendapatkan baru tumbuh kultur murni. Beberapa bakteri koloni dihentikan pada 0,85% NaCl. Suspensi dicampur selama 15 detik untuk memastikan homogenitas. suspensi bakteri diencerkan untuk mencocokkan kekeruhan 0,5 McFarland standar

dengan spektrofotometri (OD = 0,08-0,1 di 625 nm) sesuai dengan 1 × 10 8 CFU ml -1. Ragi dikultur pada potato dextrose agar plate pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam

kasus C. albicans, dan pada suhu kamar selama 48 jam dalam kasus C. neoformans. Inokulum dibuat seperti yang disebutkan di atas dan diukur OD = 0,12-0,15 pada 530

nm sesuai dengan 1-5 × 10 6 CFU ml -1. A

Agar Difusi Assay

Metode M7-A8, M27-A3, dan M38A untuk bakteri dan ragi.

endofit isolat jamur yang tumbuh pada kentang dextrose agar pada suhu kamar selama 7, 14, 21, dan 28 hari. Kemudian, mereka dipotong menjadi blok agar kecil dengan menggunakan gabus penggerek steril (7-mm diameter) dan ditempatkan pada diinokulasi pelat uji.

Pelat uji diinkubasi pada 37 ° C selama 24 jam untuk bakteri dan C. albicans dan selama 48 jam di kamar suhu dalam kasus C. neoformans.

Antibakteri atau aktivitas antijamur ditentukan oleh mengukur zona hambatan yang dihasilkan oleh endofit jamur terhadap pathogen bakteri.

Zona penghambatan lebih dari 9 mm diameter dianggap positif.

Persiapan culture Mold dan Assay antagonis Masing-masing strain jamur yang tumbuh pada kentang dextrose agar pada

suhu kamar selama 1-5 hari untuk mendapatkan kultur murni baru tumbuh sampai koloni diperkirakan 1-2 cm.

isolat jamur endofit dipotong menjadi blok agar kecil dengan menggunakan gabus penggerek steril (7-mm diameter).

Agar jamur endofit blok ditempatkan di piring uji diinokulasi pada sekitar 2 cm di mana kedua endofit dan indikator cetakan yang diinokulasi pada pelat media yang sama.

piring disimpan pada suhu kamar selama 1-5 hari dan perubahan harian dipantau.

Aktivitas antijamur ditunjukkan oleh miselia pertumbuhan jamur uji arah koloni antagonis dari endofit yang radius pertumbuhan. Tidak ada pertumbuhan miselia jamur indikator dianggap positif.

Hasil dan Pembahasan• total 69 endofit jamur terisolasi dari Sesbania grandiflora (L.) Pers.

• Sebagian besar endofit jamur (62 isolat, 89,86%) terisolasi dari batang dan hanya 10,14% (7 isolat) yang diisolasi dari daun.

• Genus yang tepat dari 28 isolat yang menunjukkan spektrum yang luas ampuh aktivitas antimikroba diidentifikasi berdasarkan pada koloni makroskopik dan spora atau konidia karakteristik (Ellis et al., 2007),

• . Hasil penelitian menunjukkan bahwa 23 (33,33%) dan 22 (31,88%) isolat bias menghalangi S. aureus dan B. subtilis, masing-masing, sedangkan 17 (24,64%) isolate bisa menghambat kedua S. aureus dan B. subtilis. Juga, lima (7,24%) isolat dan 13 (18,84%) isolat aktivitas antibakteri ditampilkan terhadap E. coli dan P. aeruginosa

• . Untuk antijamur kegiatan, 9 (13,04%) isolat dan 7 (10,14%) isolat menghambat C. albicans dan C. neoformans., Masing-masing. Lima isolate (7,25%) bisa menghambat kedua C. albicans dan C. neoformans

TERIMA KASIH