Kloning gen atau molekuler adalah sekelompok salinan gen, bersifat identik yang direplikasi dari

satu gen dan dimasukkan kedalam sel inang. Kloning gen merupakan suatu terobosan baru, dengan

tujuan untuk mendapatkan sebuah gen yang mungkin dibutuhkan bagi kehidupan manusia. Kloning

gen meliputi serangkaian proses isolasi fragmen DNA spesifik dari genom suatu organisme,

penentuan sekuen atau fragmen DNA, pembentukan molekul DNA rekombinan, dan ekspresi gen

target dalam sel inang.

Tujuan Kloning Gen

1. Menentukan urutan basa nukleotida penyusun gen tersebut

2. Menganalisis atau mengidentifikasi urutan basa nukleotida pengendali gen tersebut

3. Mempelajari fungsi RNA / protein/enzim yang disandi gen tersebut

4. Mengidentifikasi mutasi yang terjadi pada kecacatan gen yang mengakibatkan penyakit

bawaan

5. Merekayasa organisme untuk tujuan tertentu, misalnya memproduksi insulin, ketahanan

terhadap hama, dll.

Sumber DNA untuk Diklon

a. DNA kromosom

b. cDNA (complementary DNA) yang disintesis menggunakan mRNA sebagai cetakan (template)

c. DNA yang dihasilkan dari perbanyakan menggunakan PCR

Bahan / Alat untuk Mengklon

1. Enzim endonuklease restriksi

2. Enzim ligase

3. Vektor

4. Inang (Host)

5. Metoda untuk memasukkan DNA ke dalam sel inang

Langkah – Langkah Kloning Gen :

1. Penentuan sekuen atau fragmen DNA

untuk memastikan fragmen DNA yang

diisolasi adalah gen target sesuai dengan

kehendak kita.

2. Pemotongan DNA sumber gen dan vektor

kloning menggunakan enzim restriksi

3. Menyisipkan potongan DNA sumber gen

ke dalam vektor kloning yang telah

dipotong dan disambung dengan bantuan

enzim DNA ligase

4. Hasil DNA rekombinan kemudian

ditransformasi ke dalam sel inang

(biasanya sel bakteri, misalnya strain E.coli

walaupun sel jenis lain dapat di gunakan)

untuk diproduksi lebih banyak.

5. Selanjutnya dilakukan proses pra Inkubasi,

dimana sel E.coli calon penerima plasmid

dipaparkan kepada ion positif kalsium

klorida (CaCl2). Perlakuan ini dilakukan

agar membran sel dan dinding sel bakteri

E.coli menjadi permeable terhadap

plasmid donor. Sehingga sel bakteri E.coli akan menjadi “kompeten” untuk dapat menerima

plasmid.

6. Pada proses inkubasi plasmid ditambahkan ke dalam suspensi sel E.coli kompeten. Suspensi sel

E.coli kompeten lainnya yang tidak ditambah plasmid sebagai kontrol

7. Sel kompeten (baik yang diberi plasmid maupun sebagai kontrol) dipaparkan sejenak selama 90

detik pada suhu 42oC. Langkah ini dilakukan dengan tujuan untuk dapat memaksimumkan

masuknya plasmid menembus membran dan dinding sel.

8. Selanjutnya adalah proses penyembuhan (Recovery). Sel-sel kompeten (baik yang diberi

plasmid maupun sebagai kontrol) ditumbuhkan dalam sebuah medium kaya nutrisi untuk

memberi kesempatan proses penyembuhan pada sel bakteri setelah mengalami cekaman dan

kejutan. Masa penyembuhan berlangsung satu waktu generasi (untuk E. coli berkisar antara 30

hingga 45 menit)

9. Di dalam sel inang, vektor melakukan replikasi yang dapat menghasilkan banyak turunan

identik, baik vektornya sendiri maupun gen yang dibawanya (gen target).

10. Ketika sel inang melakukan pembelahan, salinan molekul DNA rekombinan diwariskan pada

progeni dan terjadi proses replikasi vektor selanjutnya.

11. Setelah terjadi sejumlah besar pembelahan sel, maka akan dihasilkan koloni atau klon sel inang

yang identik.

12. Setiap sel dalam klon mengandung satu salinan atau lebih molekul DNA rekombinan;

sehingga dapat dikatakan bahwa gen yang dibawa oleh molekul DNA rekombinan telah diklon.

13. Gen target yang ada di dalam sel inang jika diekspresikan akan menghasilkan produk gen yang

kita inginkan.

DAFTAR PUSTAKA

http://animugibio.files.wordpress.com/2012/04/cloning2

Campbell,neil,A.2010.Biologi edisi 8 jilid 1. Erlangga : Jakarta

OLEH :

DEVI ISTIYANINGRUM

(3415102436)

PENDIDIKAN BIOLOGI REGULER 2010