1

Nina Salamah

Disampaikan dalam seminar Nasional PERHIPBA

Fakultas Kedokteran UNS di Hotel Sahid Raya Surakarta, 9 November 2011

UJI SITOTOKSISITAS SENYAWA HASIL ISOLASI AKAR PASAK BUMI (Eurycoma longifolia, Jack)

TERHADAP PENGHAMBATAN PERTUMBUHAN SEL MIELOMA

2

Latar Belakang

EPIDEMIOLOGY :

• 7,6 juta orang meninggal di dunia (2005)

• Penyebab kematian kedua (20%) di Amerika

• Keberhasilan pengobatan rendah

• Pembedahan

• Penyinaran

• Kemoterapi

•Obat Herbal

obat alam dari China telah terbukti memiliki efek anti kanker melalui mekanisme :

• induksi apoptosis & diferensiasi

• peningkatan sistem imun

• penghambatan angiogenesis

(Sengupta et al., 2004)

KANKER

Pengobatan anti kanker

Pasak bumi (Eurycoma longifolia, Jack) adalah salah satu tanaman asli Indonesia yang memiliki potensi anti kanker

EPIDEMIOLOGY :

• 7,6 juta orang meninggal di dunia (2005)

• Penyebab kematian kedua (20%) di Amerika

• Keberhasilan pengobatan rendah

EPIDEMIOLOGY :

• 7,6 juta orang meninggal di dunia (2005)

• Penyebab kematian kedua (20%) di Amerika

• Keberhasilan pengobatan rendah

KANKER KANKER KANKER KANKER

• Pembedahan

• Penyinaran

• Kemoterapi

•Obat Herbal

Pengobatan anti kanker obat alam dari China telah

terbukti memiliki efek anti kanker melalui mekanisme :

• induksi apoptosis & diferensiasi

• peningkatan sistem imun

• penghambatan angiogenesis

(Sengupta et al., 2004)

• Pembedahan

• Penyinaran

• Kemoterapi

•Obat Herbal

Pengobatan anti kanker

3

Latar Belakang (lanjutan..)

Eurycoma longifolia

Aktivitas anti kanker ( in vitro )

• Ekstrak MeOH, BuOH, CHCl3, air sitotoksik terhadap sel KB, DU-145, RD, MCF-7, CaOV-3 (Nurhanan et al, 2005)

• Eurycomanone terbukti Sitotoksik terhadap kultur sel-KB,

fibrosarcoma, melanoma, kanker paru, kanker payudara dan kanker kolon (Kardono et al., 1991; Chan et al., 2004)

• Eurycomanone terbukti menginduksi apoptosis pada Sel HeLa (Nurkhasanah and Pihie, 2006)

Isolat Senyawa hasil isolasi akar pasak bumi, memiliki potensi anti angiogenesis mulai kadar 15 μg/ml dan peningkatan konsentrasi isolat akar pasak bumi meningkatkan aktivitas penghambatan angiogenesis (Salamah, 2010).

Potensi Efek sitotoksik Isolat senyawa akar Pasak Bumi

?

4

Tujuan Khusus

•Melakukan isolasi senyawa berpotensi anti kanker dari akar pasak bumi (E. longifolia). •Mengetahui aktivitas senyawa yang terkandung dalam akar pasak bumi dalam menghambat pertumbuhan sel Mieloma

Tujuan Umum

Mengetahui efek Sitotoksik senyawa hasil isolasi akar pasak bumi terhadap sel mieloma.

5

Studi Anti Kanker

Kanker:

Penyakit seluler dengan ciri adanya sifat pertumbuhan yang tidak terkendali diikuti dengan proses invasi ke jaringan dan penyebaran (metastasis) ke bagian organ tubuh yang lain

CIRI-CIRI FISIOLOGI SEL KANKER

• Tumbuh tanpa kontrol (Proliferasi)

• Immortal (Apoptosis)

• Angiogenesis

• Invasif dan metastasis

6

Studi Akar Pasak Bumi

Kandungan kimia

• eurikumanon • dihidroksieurikumarol • dehidroklaineanon • 9-metoksikantin-6-one • dll

Aktivitas farmakologi

• Antitumor (Jiwajinda et al., 2002) • Antiplasmodial (Jiwajinda et al., 2002) • Afrodisiak (Ang et al, 1997-2004)

Penggunaan empirik

• Ulkus mulut • Nyeri lambung • Gangguan pencernaan • Meningkatkan libido

Eurycoma longifolia

7

Skema Isolasi Senyawa dari akar Pasak Bumi Serbuk akar pasak bumi (200 g)

MeOH

Sari MeOH Residu

VLC (Pelarut dengan gradien polaritas)

I II III IV V VI

KLT preparatif

Isolat A Isolat B

Uji Sitotoksisitas

Pengumpulan bahan sterilisasi Preparasi sel Pembuatan ekstrak alat Pembuatan media biakan Maserasi pembiakan sel Mieloma Hasil ekstrak dipekatkan Pemanenan sel perhitungan jumlah sel perlakuan sel fraksinasi:dgn VLC Uji Sitotoksisitas isolasi dengan KLT preparatif IC 50

Isolat senyawa

BAGAN PENELITIAN

100 µl suspensi sel (1 x 104 sel)

100 µl senyawa uji

24 jam

ditambah 10 µl MTT dalam PBS

ditambah 100 µl larutan SDS (HCI 0,01 N)

4 jam

diamkan semalam

Hitung % viabilitas, kemudian konversi ke dalam nilai probit

Harga IC50

UJI SITOTOKSIS TERHADAP SEL MIELOMA

Uji aktivitas sitotoksik OD kontrol – OD Sampel

% viabilitas = × 100% OD Kontrol

Parameter yang digunakan untuk mengetahui ketoksikan sediaan uji adalah IC50 yang diperoleh dengan persamaan regresi linier dari grafik antara log konsentrasi dan probit.

Nilai probit diperoleh dari konversi persen kehidupan pada tabel probit (Siswandono dkk., 2000a). Selanjutnya ditarik garis lurus yang paling baik melalui titik-titik yang ada (berdasarkan perhitungan program regresi linier) dan ditentukan konsentrasi pada garis ini yang menyatakan 50% kehidupan (probit = 5).

Antilogaritma titik ini disebut Inhibition Consentration (IC50)

11

Hasil Identifikasi serbuk akar pasak bumi secara mikroskopik

Jaringan penguat Parenkim Sklereida

Sklereida dan serabut Sklereida bentuk kubus

Gambaran mikroskopik ciri-ciri serbuk akar pasak bumi sesuai

yang tertulis dalam Materia Medika V (Anonim, 1989) .

12

CHCl3 : MeOH : H2O = 6,5 :2,5:0,4

Profil KLT preparatif di bawah UV 254 nm fase diam silika dan

fase gerak = kloroform: metanol: air = 6,5: 2,5: 0,4

Isolat A

Isolat B

Hasil Isolasi hasil fraksi dengan KLT Preparatif

13

Identifikasi kemurnian isolat dengan KLT CHCl3:MeOH:H2O= 6,5:2,5:0,4

Gambar KLT hasil purifikasi pada lampu UV 254 nm. fase diam = silika GF 254 nm, fase gerak= kloroform: metanol: air = 6,5: 2,5: 0,4

Isolat Senyawa

No Kadar (ug/ml) % Kematian Sel Mieloma

1 200 70,61 2 100 67,16 3 50 62,57 4 25 56.37 5 12,5 24,80 6 6,25 14.93 7 3,125 10.91 8 1,562 1.84

C. HASIL UJI SITOTOKSIK ISOLAT SENYAWA AKAR PASAK

BUMI TERHADAP PENGHAMBATAN PERTUMBUHAN SEL

MIELOMA

Gambar . Sel Mieloma kontrol (A) dan Sel Mieloma perlakuan isolat kadar 100 ug/ml (B)

KESIMPULAN

Aktivitas sitotoksik senyawa

hasil isolasi akar pasak bumi

adalah sebesar 22,4 µg/ml

(IC50

)

TERIMA KASIH