LAPORAN PRAKTIKUM BIOKOMPATIBILITAS

1. Prinsip kerja Laminar flow yaitu membunuh dan menghilangkan bakteri yang terbawa

dari udara pada ruangan untuk membuat suasana ruangan menjadi steril. Alat ini

berfungsi untuk mensterilkan ruangan yang akan digunakan untuk percobaan agar

tidak ada kontaminasi bakteri yang terdapat di udara (Batchelor, 2002)

2. MTT assay bekerja berdasarkan pada perubahan garam tetrazolium (MTT) menjadi

formazan dalam mitokondria sel fibroblas. Formazan adalah kompleks substrat enzim

yang dibentuk oleh MTT dan enzim suksinat dehidrogenase pada mitokondria sel

MTT berwarna kuning. MTT diabsorbsi ke dalam sel fibroblas. Enzim mitokondrial

suksinat dehidrogenase melalui reaksi reduksi dapat memecah MTT. Enzim tersebut

terdapat pada bagian matriks mitokondria dan partikel kecil pada krista. Enzim

mitokondrial suksinat dehidrogenase yang bekerja mengkonversi MTT menjadi kristal

formazan berwarna biru dan warna biru menandai bahwa sel tersebut hidup.

Terbentuknya warna biru karena perubahan ikatan rangkap menjadi ikatan selang

seling dari senyawa MTT menjadi formazan. Ikatan selang seling ini disebut dengan

gugus kromofor (Siregar,2011)

Gambar 1. Reaksi reduksi MTT menjadi formazan (Nevi, 2009)

3. Cara menghitung jumlah sel hidup pada uji MTT adalah warna biru yang terbentuk

pada konversi MTT menjadi formazan. Semakin kuat intensitas warna biru yang

terbentuk, absorbansi akan semakin tinggi, hal ini menunjukkan bahwa semakin

banyak MTT yang diabsorbsi ke dalam sel hidup dan dipecah melalui reaksi reduksi

oleh enzim reduktase dalam rantai respirasi mitokondria, sehingga formazan yang

terbentuk juga semakin banyak. Absorbansi ini yang digunakan untuk menghitung

persentase sel hidup sebagai respon. Intensitas warna biru yang terbentuk berbanding

langsung dengan jumlah sel yang aktif melakukan metabolisme. Sehingga jika

intensitas warna ungu semakin besar, maka berarti jumlah sel hidup semakin banyak.

(Siregar, 2011)

4. Uji sitotoksik digunakan untuk menentukan parameter nilai IC50. Nilai IC50

menunjukkan nilai konsentrasi yang menghasilkan hambatan proliferasi sel sebesar

50% dan menunjukkan besar atau kecilnya toksisitas suatu senyawa terhadap sel.

Nilai ini digunakan sebagai dasar untuk melakukan uji pengamatan kinetika sel. Nilai

IC50 dapat menunjukkan potensi sitotoksik pada suatu senyawa. Semakin besar harga

IC50 maka senyawa tersebut semakin tidak toksik. Akhir dari uji sitotoksisitas dapat

memberikan informasi persen dari sel yang mampu bertahan hidup (Meiyanto, 2003)

Cara Perhitungan IC50 (Dyaningtyas, 2012)

1. Melihat perbedaan absorbansi kontrol pelarut dengan kontrol sel.

2. Kontrol sel berisi media kultur + sel, sedangkan kontrol pelarut berisi media kultur +

sel + DMSO dengan konsentrasi terbesar pada seri konsentrasi) % DMSO terbesar

dilihat dari konsentrasi DMSO dalam seri konsentrasi sampel yang paling pekat.

Kontrol media berisi media kultur

Jika absorbansi kontrol pelarut sama dengan kontrol sel maka hitung prosentase sel

hidup dengan rumus berikut :

Prosentase sel hidup = (Absorbansi perlakuan – Absorbansi kontrol media) x 100%

(Absorbansi kontrol sel – Absorbansi kontrol media)

Jika absorbansi kontrol pelarut lebih rendah dari absorbansi kontrol sel maka hitung

prosentase sel hidup dengan rumus berikut :

Prosentase sel hidup = (Absorbansi perlakuan – Absorbansi kontrol media) x 100%

(Absorbansi kontrol pelarut – Absorbansi kontrol media)

DAFTAR PUSTAKA

Batchelor, G. (2000). Introduction to Fluid Mechanics.

Dyaningtyas. 2012. Cancer Chemoprevention Research Center Fakultas Farmasi UGM.

Meiyanto BS Sugiyanto, , AE Nugroho, UA Jenie. 2003. Aktivitas antikarsinogenik senyawa

yang berasal dari tumbuhan. Majalah Farmasi Indonesia 14 (4), 216-225

Nevi Y. 2009. Perbedaan biokompatibilitas saponin dari buah sapindus rarak DC dengan

larutan NaOCl 5% sebagai bahan irigasi saluran akar. Proceedings RDM&E-III FKG-

USU. Medan.

Siregar, Siti Nursani. 2011. Sitotoksisitas Ekstrak Lerak (Sapindus rarak DC) Terhadap Sel

Fibroblas Sebagai Bahan Irigasi Saluran Akar Secara In Vitro. USU Repository