Laporan Lab. Reaksi Asam Sitrat

7/29/2019 Laporan Lab. Reaksi Asam Sitrat

1/14

PRODUKSI ASAM SITRAT DARI Aspergillus niger DALAM

BIOREAKTOR

ABSTRAK

Percobaan mengenai produksi asam sitrat dalam bioreaktor menggunakan

Aspergillus niger telah dilakukan. Medium propagasi untuk inokulum terdiri dari

Gula pasir; Ekstrak tauge 20% (b/v); (NH4)2SO4; KH2PO4. Medium fermentasi

terdiri dari Gula pasir 15% (b/v); (NH4)2SO4 0,6% (b/v); KH2PO4 0,3% (b/v); pH

medium fermentasi 6,0. Kondisi selama fermentasi, yaitu suhu : 291oC; Agitasi

150 rpm dan lama proses fermentasi selama 5 hari. Produksi asam sitrat tertinggi

terjadi pada hari ke 5 sebesar 9,024 g/l. Kadar glukosa meningkat sampai hari ke 3

(208, 75 g/l) kemudian menurun sampai hari ke 5 (101 g/l). Sedangkan

konsentrasi biomassa tertinggi pada hari ke 3 (16,8079 g/l) dengan laju

pertumbuhan spesifik sebesar 0.165/hari. Koefisien Y x/s = 0.054 g biomassa/ g

glukosa; koefisien Y p/x = 0.91 g asam sitrat/ g biomassa, sedangkan koefisien Y

p/s = 0,023 g asam sitrat/ g glukosa.

PENDAHULUAN

Asam sitrat adalah asam organik yang secara alami terdapat pada buah-

buahan seperti jeruk, nenas dan pear. Asam sitrat pertama kali diekstraksi dan

dikristalisasi dari buah jeruk, sehingga asam sitrat hasil ektraksi dari buah-buahan

ini dikenal sebagai asam sitrat alami.

Wehner (1893) pertama kali melaporkan produksi asam sitrat sebagai hasil

sampingan pada fermentasi produksi asam oksalat dengan menggunakanPenicillium glaucum. Tahun 1917, Currie juga melaporkan bahwa Aspergillus

niger dapat menghasilkan asam sitrat pada medium pH rendah dengan kadar gula

tinggi. Sejak saat itu asam sitrat diproduksi secara komersial dengan

menggunakan kapang A. niger.

Dewasa ini telah diketahui banyak jenis kapang yang dapat menghasilkan

asam sitrat, seperti A. niger, A. awamori, A. fonsecaeus, A. luchuensis, A. wentii,

A. saitoi, A. flavus, A. clavatus, A. fumaricus, A. phoenicus, Mucor viriformis,

1


2/14

Ustulina vulgaris dll. Selain kapang, beberapa bakteri dan kamir juga dapat

memproduksi asam sitrat, diantaranya: Brevibacterium, Corynebacterium,

Arthrobacter dan Candida.

Kapang A. niger merupakan mikroorganisme yang dapat tumbuh dan

banyak digunakan secara komersial dalam produksi asam sitrat, asam glukonat,

dan beberapa enzim seperti pektinase dan amilase (Broekhuijsen et al., 1993;

Okada, 1985). A. niger mampu mensintesis asam sitrat dalam medium fermentasi

ekstraseluler dengan konsentrasi yang cukup tinggi, jika dibiakkan dalam media

yang kadar garamnya rendah dan mengandung gula sebagai sumber karbon (Hang

et al., 1977; Ji et al., 1992).

Asam sitrat (C6H8O7) banyak digunakan dalam industri terutama industri

makanan, minuman, dan obat-obatan. Kurang lebih 60% dari total produksi asam

sitrat digunakan dalam industri makanan, dan 30% digunakan dalam industri

farmasi, sedangkan sisanya digunakan dalam industri pemacu rasa, pengawet,

pencegah rusaknya rasa dan aroma, sebagai antioksidan, pengatur pH dan sebagai

pemberi kesan rasa dingin. Dalam industri makanan dan kembang gula, asam

sitrat digunakan sebgai pemacu rasa, penginversi sukrosa, penghasil warna gelap

dan penghelat ion logam. Dalam industri farmasi asam sitrat digunakan sebgai

pelarut dan pembangkit aroma, sedangkan pada industri kosmetik digunakan

sebagai antioksidan (Bizri & Wahem, 1994).

Proses fermentasi asam sitrat dapat dilakukan dengan sistem terendam,

fermentasi kultur permukaan. Fermentasi kultur terendam dibagi dua yaitu

dilakukan pada fermentor berpengaduk dan pada air lift fermentor. Sedangkan

pada fermentasi kultur permukaan dapat menggunakan media cair maupun media

padat. Fermentasi sistem terendam lebih sulit dilakukan dibandingkan prosedurpermukaan, tetapi dapat dilakukan secara curah, proses curah terumpani, atau

sinambung. Fermentasi curah digunakan untuk substrat glukosa, dan curah

terumpani lebih layak diterapkan untuk untuk tetes tebu. Biakan sinambung

mempunyai produktivitas yang lebih tinggi (Mangunwidjaja & Suryani, 1994).

Produksi asam sitrat pada proses fermentasi dipengaruhi oleh beberapa

faktor diantaranya adalah jenis media, pH media, waktu fermentasi, suhu, aerasi,

dan mikroorganisme yang digunakan. Faktor yang paling menentukan adalah

2


3/14

media tumbuh (substrat) dan mikroorganisme yang digunakan (Friedrich et al.,

1994).

Pada umumnya hasil samping pertanian dan perkebunan seperti jerami

padi, onggok, bagas, dan kulit kakao masih mengandung lignoselulosa. Limbah

ini masih mengandung pati, protein, lemak, dan senyawa kimia lainnya. Dengan

teknologi fermentasi, hasil samping ini dapat dimanfaatkan lebih lanjut menjadi

produk lain yang berguna seperti pangan, pakan ternak, pelarut organik, asam-

asam organik seperti asam sitrat dan lain-lain (Judoamidjojo et al., 1989).

TUJ UAN

Percobaan bertujuan untuk mempelajari produksi asam sitrat pada proses

fermentasi menggunakan A. niger.

METODOLOGI

Bahan yang diguankan dalam percobaan ini:

Mikroorganisme : Aspergillus nigerberumur 5 hari.

Medium propagasi untuk inokulum terdiri dari:

Gula pasir 15 gram

Ekstrak tauge 20% (b/v) 11 ml

(NH4)2SO4 450 mg

KH2PO4 225 mg

Semuanya bahan kemudian dilarutkan dalam 100 ml akuades, pH 6,0

Medium fermentasi terdiri dari:

Gula pasir 15% (b/v)

(NH4)2SO4 0,6% (b/v)KH2PO4 0,3% (b/v)

pH medium fermentasi 6,0

Kondisi fermentasi : Suhu : 291oC

Agitasi 150 rpm

Lama 5 hari

3


4/14

Alat yang digunakan adalah spektrofotometer, tabung reaksi, gelas ukur,

timbangan, vortex, erlenmeyer, labu ukur, pipet, kertas pH, shaker, autoklaf,

kertas saring, oven, alat titrasi dan alat vakum.

Prosedur kerja:

1. Membuat media propagasi dengan komposisi yang sudah ditentukan.Namun, gula dipisahkan dari bahan lainnya. Lalu semua bahan disterilisasi

pada suhu 121oC selama 15 menit dan dinginkan.

2. Melakukan inokulasi dengan suspense spora A.niger sebanyak 2% (v/v).Selanjutnya hasil inokulasi pada media propagasi yang telah diinkubasi ini

disebut inokulum.3. Kemudian lakukan inkubasi pada incubator goyang pada suhu 291oC

(suhu kamar) selama 24 jam.

4. Bioreaktor tangki pengaduk (CSTR) yang akan digunakan juga dilakukansterilisasi.

5. Membuat media fermentasi dengan komposisi yang telah ditentukan dalamErlenmeyer 1000 ml dengan melarutkan 900 ml media dan inokulum 100

ml. Namun gula dan bahan lainnya dpisahkan. Kemudian disterilisasi pada

suhu 121oC, 15 menit dan dinginkan.

6. Kemudian melakukan inokulasi inokulum.7. Pengambilan sample dilakukan setiap hari selama 5 hari.8. Pada setiap pengamatan, yang diamati adalah sebagai berikut :

- pH : dilakukan dengan mengukur pH cairan fermentasi dengan pHmeter

- Biomassa : dilakukan dengan menyaring cairan fermentasi pada kertassaring yang telah dikeringkan dan diketahui bobotnya. Biomassa

dihitung sebagai bobot residu kering hasil penyaringan per ml cairan

kultivasi

- Gula sisa : dilakukan dengan metoda DNS. Memasukkan 1 ml sampelke dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan pereaksi DNS

sebanyak 3 ml. Lalu larutan dipanaskan dalam air mendidih selama 5

menit, kemudian didinginkan pada suhu kamar. Blanko dibuat dengan

mengganti sampel dengan 1 ml akuades. Lalu mengukur

4


5/14

absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang

gelombang 550 nm. Kurva standar dibuat untuk pengukuran gula

dengan metode DNS. Hasil mengukuran diplotkan pada kurva standar

sehingga dapat diketahui kadar gula sisa.

- Total asam : Pengukuran asam organic dilakukan dengan metodetitrasi. Mengambil 10 ml sampel kemudian dititrasi dengan larutan

NaOH 0.1 N yang telah distandarisasi. Titrasi dilakukan dengan

bantuan indicator PP. Titrasi dihentikan bila telah terbentuk warna

merah muda. Penentuan kadar total asam organic tertitrasi adalah :

192

10

/

HASIL

Produksi asam sitrat meningkat selama proses fermentasi dan maksimum

sebesar 9,024 g/l pada hari ke 5. Kadar glukosa meningkat sampai hari ke 3 (208,

75 g/l) kemudian menurun sampai hari ke 5 (101 g/l). Sedangkan konsentrasi

biomassa tertinggi pada hari ke 3 (16,8079 g/l) (Tabel 1 & Gambar 1) dengan laju

pertumbuhan spesifik sebesar 0.165/hari (Gambar 2). Koefisien Y x/s = 0.054 gbiomassa/ g glukosa, nilai ini menunjukkan bahwa dalam 1 gram glukosa

terbentuk 0,054 g biomassa. Koefisien Y p/x = 0.91 g asam sitrat/ g biomassa,

nilai ini menunjukkan bahwa dalam 1 gram biomassa terbentuk 0,91 g asam sitrat.

Koefisien Y p/s = 0,023 g asam sitrat/ g glukosa, nilai ini menjunjukkan bahwa

dalam 1 g glukosa terbentuk 0,023 asam sitrat (Gambar 3-5).

Tabel 1. Data pengamatan selama proses fermentasi

hari ke- pH biomassa

(g/l)

glukosa

(g/l)

asamsitrat

(g/l)

ln

biomassa

0 4,5 6,37 57,25 0 1,851649

1 2 11,50 151,75 2,496 2,442197

2 2 15,46 158,5 4,608 2,738107

3 2 16,81 208,75 5,952 2,821851

4 2 15,98 160,75 6,912 2,771427

5 2 16,41 101 9,024 2,797633

5


6/14

0

50

100

150

200

250

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

0 1 2 3 4 5 6

biomassa asamsitrat glukosa

gluko

sa

(g/l)

asam

sitrat(g/l)d

an

biomassa(g/l)

Gambar 1. Kurva pertumbuhan biomassa, konsentrasi asam sitrat yang terbentuk,

dan konsentrasi glukosa selama proses fermentasi

y=0.165x+2.156

R=0.671

00.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

0 1 2 3 4 5 6

lnbiomassa

harike

Gambar 2. Kurva laju pertumbuhan spesifik

y=0.023x+2.919

R=0.145

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

0 50 100 150 200

Gambar 3. Kurva yield asam sitrat per substrat (Yp/s)

6


7/14

0

2

4

6

8

10

12

0

Gamb

Gamba

Gambar

2

0

2

4

6

8

10

0

ar 4. Kurva

5. Kurva

. Kurva p

50

2

yield bio

ield asam

rubahan p

10

y=0.

R

y=0.7

R

4 6

assa per su

itrat per bi

selama p

054x+2.860

=0.503

50

12x 0.427

=0.818

8

bstrat (Yx/

200

)

10

massa (Y

12

/x)

oses fermentasi7


8/14

PEMBAHASAN

pH medium

pH medium dalam proses fermentasi sangat penting. Pada proses awal

fermentasi diketahui bahwa pH medium sebesar 4,5 kemudian menurun pada hari

ke 2 sampai ke 5 sebesar 2,0 (Gambar 6). Pada awal fermentasi merupakan awal

saat spora mulai terbentuk untuk memulai germinasi. Sedangkan selama proses

fermentasi untuk produksi asam sitrat diperlukan pH 2. pH yang rendah akan

mengurangi resiko kontaminasi pada saat fermentasi oleh mikroorganisme lain.

pH yang rendah juga menghambat produksi dari asam organik yang tidak

diinginkan (misalnya asam glukonat, asam oksalat) dan hal ini membuat

perbaikan asam sitrat dari media cair. Pengambilan amonia dalam proses

germminasi spora menyebabkan dilepaskannya proton pada pH rendah setelah

fase germinasi terbentuk. Menurut Papagianni (1995), meningkatnya pH menjadi

4,5 selama fase produksi akan menurunkan hasil asam sitrat sampai 80%.

pH pada media juga mempengaruhhi produksi asam sitrat dari A. niger

karena beberapa enzim yang berperan dalam siklus TCA sensitif terhadap pH. pH

yang rendah selama fermentasi untuk produksi asam sitrat yang optimal

diperlukan pH sekitar 2. Jika kondisi tersebut tidak diperoleh hasil produksi akan

berkurang (Mattey, 1992). Papagianni (1995) & Papagianni et al. (1999)

melaporkan bahwa pH mempengaruhi morfologi dan produktivitas asam sitrat

dari A. niger dari hasil data kuantitatif. Morfologi dengan agregat yang kecil dan

filament yang pendek berkaitan dengan meningkatnya produksi asam sitrat pada

pH sekitar 2,0 0,2. Pada pH 1,6 morfologi akan berkembang abnormal (bulbous

hyphae) dan produksi asam sitrat akan menurun secara drastis. Pada pH 3,0

agregat mempunyai bentuk perimeter yang lebh panjang dan terbentuk asam

oksalat.

Sintesis asam sitrat

Dari gambar 1, diperlihatkan bahwa konsentrasi asam sitrat meningkat

seiring lamanya waktu fermentasi. Konsentrasi tertinggi diperoleh pada hari ke-5

sebesar 9,024 g/l.

8


9/14

Asam sitrat merupakan senyawa antara pada siklus kreb (siklus asam

trikarboksilat). Lintasan reaksi katabolik yang mendahului pembentukan asam

sitrat ini diantaranya adalah lintasan glikolisis dan lintasan Entner-Doudoroff yang

menyediakan senyawa antara asam piruvat yang merupakan senyawa kunci dalam

metabolisme sel. Sebagian besar (80%) dari glukosa diubah menjadi piruvat

melalui lintasan glikolisis. Piruvat akan mengalami dekarboksilasi dan berikatan

dengan koenzim-A membentuk asetil-CoA dan selanjutnya masuk kedalam siklus

krebs untuk bergabung dengan oksaloasetat membentuk asam sitrat. Piruvat juga

bisa langsung masuk ke siklus krebs dengan bantuan enzim piruvat karboksilase

yang mengubah piruvat menjadi oksaloasetat.

Gambar 7. Skema reaksi metabolik dalam produksi asam sitrat

(Sumber: Pagianni, 2007)s

Mekanisme pembentukan asam sitrat dapat dilihat pada gambar 7.

Langkah pertama dari siklus tersebut, yaitu penyatuan asetil ko-A dengan asam

9


10/14

oksaloasetat untuk membentuk asam sitrat. Pertama-tama, asetil ko-A hasil dari

reaksi antara (dekarboksilasi oksidatif) masuk ke dalam siklus dan bergabung

dengan asam oksaloasetat membentuk asam sitrat. Setelah "mengantar" asetil

masuk ke dalam siklus Krebs, ko-A memisahkan diri dari asetil dan keluar dari

siklus. Kemudian, asam sitrat mengalami pengurangan dan penambahan satu

molekul air sehingga terbentuk asam isositrat. Lalu, asam isositrat mengalami

oksidasi dengan melepas ion H+, yang kemudian mereduksi NAD+ menjadi

NADH, dan melepaskan satu molekul CO2 dan membentukasam a-ketoglutarat

(baca: asam alpha ketoglutarat). Setelah itu, asam a-ketoglutarat kembali

melepaskan satu molekul CO2, dan teroksidasi dengan melepaskan satu ion H+

yang kembali mereduksi NAD+ menjadi NADH. Selain itu, asam a-ketoglutarat

mendapatkan tambahan satu ko-A dan membentuk suksinil ko-A. Setelah

terbentuk suksinil ko-A, molekul ko-A kembali meninggalkan siklus, sehingga

terbentukasam suksinat. Pelepasan ko-A dan perubahan suksinil ko-A menjadi

asam suksinat menghasilkan cukup energi untuk menggabungkan satu molekul

ADP dan satu gugus fosfat anorganik menjadi satu molekul ATP. Kemudian,

asam suksinat mengalami oksidasi dan melepaskan dua ion H+, yang kemudian

diterima oleh FAD dan membentuk FADH2, dan terbentuklah asam fumarat.Satu molekul air kemudian ditambahkan ke asam fumarat dan menyebabkan

perubahan susunan (ikatan) substrat pada asam fumarat, karena itu asam fumarat

berubah menjadi asam malat. Terakhir, asam malat mengalami oksidasi dan

kembali melepaskan satu ion H+, yang kemudian diterima oleh NAD+ dan

membentuk NADH, dan asam oksaloasetat kembali terbentuk. Asam

oksaloasetat ini kemudian akan kembali mengikat asetil ko-A dan kembali

menjalani siklus Krebs.Pada A. niger, fosfoenol piruvat dapat diubah langsung menjadi

oksaloasetat (tanpa melalui piruvat) oleh enzim fosfoenol piruvat karboksilase.

Reaksi tersebut membutuhkan ATP sebagai sumber energi, Mg2+, atau Mn2+, dan

K+, atau NH4+. Judoamidjojo dan Darwis (1992) menyatakan bahwa apabila

sumber karbon bukan glukosa, misalnya asam asetat, atau senyawa alifatik

berantai panjang (C9 C23), maka isositrat liase akan terinduksi sehingga

10


11/14

isositrat diubah menjadi glioksilat, selanjutnya glioksilat diubah menjadi malat

oleh sintetase. Bila glukosa ditambahkan siklus tersebut akan terhambat.

Pada pembentukan asam sitrat dalam proses fermentasi dibatasi oleh

ketersediaan beberapa unsur kelumit (P, Mn, Zn). Peranan ion logam dalam

proses ini belum diketahui secara menyeluruh. Nilai pH optimum sekitar 1,7

2,0. Jika pH lebih tinggi (alkalis) menyebabkan pembentukan asam asam oksalat

dan glukonat dalam jumlah banyak. Karenanya pengendalian kondisi proses

secara cermat merupakan prasyarat untuk mempertahankan keteraturan metabolik

dan mendukung pembentukan asam sitrat yang lebih banyak. Kondisi yang sesuai

tersebut memungkinkan stimulasi glikolisis untuk penyediaan aliran karbon yang

tidak terbatas ke dalam metabolisme antara. Akumulasi sitrat selanjutnya

tergantung pada pemasokan oksaloasetat (Mangunwidjaja & Suryani 1994).

Mangunwidjaja & Suryani (1994) juga menjelaskan bahwa kekurangan

mangan akan menurunkan aktivitas enzim dalam siklus asam trikarboksilat yang

diikuti oleh penurunan anabolisme. Gangguan metabolisme ini menyebabkan

perbedaan tingkat ion amonium intraselluler yang dapat membantu

menghilangkan penghambatan enzim fosfofruktose oleh sitrat. Mangan juga

terlibat dalam biokimia permukaan sel dan morfologi hifa. Kebutuhan oksigen

yang tinggi memungkinkan reoksidasi sitoplasma NADH tanpa pembentukan

ATP dan melibatkan suatu cabang respirasi alternatif yang berbeda dari rantai

respirasi normal.

Sumber karbon dalam proses fermentasi

Pada proses fermentasi ini, sumber gula yang digunakan adalah sukrosa.

Sukrosa akan dipecah menjadi fruktosa dan glukosa. Dari hasil pengamatan(Gambar 6), diketahui bahwa kadar glukosa meningkat sampai hari ke-3, baru

kemudian menurun sampai hari ke-5. Sel akan memasukkan fruktosa dan glukosa

ini dari luar sel ke dalam sel melalui mekanisme hidrolisis invertase sukrosa

(Boddy et al., 1993; Rubio & Maldonado, 1995). Menurut Kubicek dan Rohr

(1989) sukrosa baik untuk dijadikan sebagai sumber glukosa oleh A. niger karena

memiliki ikatan intervase mycelium ekstraselular yang kuat dan aktif pada pH

rendah sehingga hidrolisis sukrosa relatif lebih cepat. Gupta et al. (1976), Hossain

11


12/14

et al. (1984) dan Xu et al. (1989) melaporkan keunggulan penggunaan sukrosa

dari pada glukosa dan fruktosa pada proses fermentasi asam sitrat.

Aerasi

Industri produsen asam sitrat sejak lama tengah mengetahui bahwa variasi

dalam laju aerasi memiliki efek buruk bagi perolehan produksi. Jika laju aerasi

tertalu tinggi (contohnya kondisi yang biasa terjadi pada skala laboratorium),

tekanan parsial dari CO2 terlarut dalam medium dapat menjadi rendah.

Karbondioksida penting sebagai substrat bagi enzim piruvat karboksilase yang

memulihkan kembali cadangan oksaloasetat yang menjadi substrat sitrat sintase.

Co2 yang memadai dihasilkan dari reaksi piruvat dekarboksilase untuk

mencukupu kebutuhan stoikiometrik dari reaksi piruvat karboksilase, akan tetapi

aerasi yang berlebihan berakibat pada hilangnya CO2 (Papagianni, 2007).

McIntyre & McNeil (1997) dalam Papagianni (2007) menunjukkan bahwa

kadar CO2 yang meningkat dalam gas yang disemburkan memiliki efek buruk

terhadap konsentrasi sitrat akhir dan konsentrasi biomassa akhir. Efek oksigen

terlarut telah banyak dipelajari secara terperinci. Tekanan oksigen terlarut (DOT)

yang menurun bahkan dalam rentang waktu yang pendek dapat menyebabkan

perubahan ireversibel dalam produksi asam sitrat (Kubiceket al., 1980). A. niger

diketahui menggunakan dua jalur respirasi yang berbeda dalam produksi asam

sitrat. Sintesis asam sitrat bergantung pada jalur sensitive sianida selama fase

akhir fermentasi. Baik pertumbuhan maupun awal produksi asam sitrat

bergantung pada respirasi yang sensitif terhadap asam salisilhidroksamat

(SHAM=salicylhydroxyamic acid). Bypass sensitive SHAM dihasilkan di akhir

tropofase, dan komponen ubiquinol oksidase alternatif dari ini telah ditemukan.Keberadaan dari bypass-bypass ini dan arti pentingnya terhadap produksi asam

sitrat bukanah hal yang terjadi bersamaan. Produksi ATP pada tingkat substrat

melalui glikolisis kemungkinan mencukupi kebutuhan energy sel dan hanya ada

sedikit kebutuhan akan ATP yang lebiih banyak untuk dihasilkan melalui

fosforilasi oksidatif NADH. Konsentrasi ATP internal yang tinggi memiliki efek

penghambatan bagi enzim-enzim glikolisis, sehingga, enzim oksidase alternatif

untuk mendaur kembali NADH untuk glikolisis selanjutnya tampaknya menjadi

12


13/14

komponen ensial untuk mempertahankan aliran yang tinggi melalui jalur

glikolisis.

KESIMPULAN

Produksi asam sitrat tertinggi terjadi pada hari ke 5 sebesar 9,024 g/l.

Kadar glukosa meningkat sampai hari ke 3 (208, 75 g/l) kemudian menurun

sampai hari ke 5 (101 g/l). Sedangkan konsentrasi biomassa tertinggi pada hari ke

3 (16,8079 g/l) dengan laju pertumbuhan spesifik sebesar 0.165/hari. Koefisien Y

x/s = 0.054 g biomassa/ g glukosa; koefisien Y p/x = 0.91 g asam sitrat/ g

biomassa, sedangkan koefisien Y p/s = 0,023 g asam sitrat/ g glukosa.

DAFTAR PUSTAK A

Bizri, N.J. dan A.L. Wahem. 1994. Citric Acid and Antimicrobials Affect

Microbiological Stability and Quality of Tomato J uice.J . of Food Science

59 (1) : 130-134

Boddy L.M., T. Berges, C. Barreau, M.H. Vainstain, M.J. Johnson dan D.J.

Balance. 1993. Purification and characterisation of an Aspergillus niger

invertase and its DNA sequence. Curr Genet24: 606.Broekhuijsen M.P, I.E. Mattern, R. Contreras, dan J.R. Kinghorn. 1993. Secretion

of Heterologons Protein by Aspergillus niger.J .Biotech. 31 : 135-145

Friedrich J., A. Cimerman, dan W. Steiner. 1994. Concomitant Biosynthesis of

Aspergillus niger Pectolytic Enzymes and Citric Acid on Sucrosa.J . Enzym

and Microbial Technology16 : 703-710

Gupta J.K., L.G. Heding dan O.B. Jorgensen. 1976. Effect of sugars, hydrogen

ion concentration and ammonium nitrate on the formation of citric acid by

Aspergillus niger. ActaMicrobiol Acad Sci Hung23: 637.

Hang Y.D, D.F. Splittstoessitr, R.E.E. Woodams, dan R.M. Sherman. 1977.Citric

Acid Fermentation of Brewery Waste.J . of Food Science. 42 (2) : 383-388

Hossain M., J.D. Brooks dan I.S. Maddox. 1984. The effect of the sugar source

on citric acid production by Aspergillus niger. Appl Microbiol Biotechnol

19: 3937.

13


14/14

14

Ji L.N., X.R. Zhao, dan H.Y. Yang. 1992. Effects of Trace Elements on Citric

Acid Fermentation by Aspergillus niger and Treatment of cane Molasses as

Raw Material.J . Industriall Microbiology22(2) : 16-21

Judoamidjojo M, E.G. Sa'id, dan L. Hartoto. 1989. Biokonversi. PAU-BIOTEK.

IPB. Bogor

Judoamidjojo M., A.A. Darwis dan E.G. Sa'id. 1992. Teknologi Fermentasi.

CV.Rajawali pers. Jakarta

Kubicek C.P. dan M. Rhr. 1989. Citric acid fermentation. Crit Rev Biotechnol4:

33173.

Mangunwidjaja D. dan A. Suryani. 1994.Teknologi Bioproses. Penebar Swadaya.

Jakarta

Mattey M. 1992. The production of organic acids. Crit Rev Biotechnol 12:87

132.

Okada, G. 1985. Purification and Properties of a Cellulase from Aspergillus

niger.J . Biochem. 49 (5) : 1257-1265.

Papagianni M, M. Mattey, M. Berovic dan B. Kristiansen. 1999. Aspergillus niger

morphology and citric acid production in submerged batch fermentation:

effects of culture pH, phosphate and manganese levels. Food TechnolBiotechnol37:16571.

Papagianni M. 1995. Morphology and citric acid production of Aspergillus niger

in submerged culture. PhD Thesis, University of Strathclyde.

Papagianni M. 2007. Advances in citric acid fermentation by Aspergillus niger:

Biochemical aspects, membrane transport and modeling. Biotechnology

Advances 25 (2007) 244263.

Rubio M.C. dan M.C. Maldonado. 1995. Purification and characterisation ofinvertase from Aspergillus niger. Curr Microbiol31:803.

Wehner. 1893 dalam Rusmana I. 2005. Petunjuk Praktikum Bioteknologi

Mikrobia. FMIPA IPB. Bogor.

Xu B.D., C. Madrit, M. Rhr dan C.P. Kubicek. 1989. The influence of type and

concentration of the carbon source on production of citric acid by

Aspergillus niger. Appl Microbiol Biotechnol30: 5538.

Laporan Lab. Reaksi Asam Sitrat

Documents

Transcript of Laporan Lab. Reaksi Asam Sitrat