1. Latar Belakang Kultur jaringan merupakan salah satu cara perbanyakan tanaman secara vegetatif. Kultur jaringan merupakan teknik perbanyakan tanaman dengan cara mengisolasi bagian tanaman seperti daun, mata tunas, serta menumbuhkan bagian-bagian tersebut dalam media buatan secara aseptik yang kaya nutrisi dan zat pengatur tumbuh dalam wadah tertutup yang tembus cahaya sehingga bagian tanaman dapat memperbanyak diri dan bergenerasi menjadi tanaman lengkap (Tribowo, 2008).Metode kultur jaringan dikembangkan untuk membantu memperbanyak tanaman, khususnya untuk tanaman yang sulit dikembangbiakkan secara generatif. Bibit yang dihasilkan dari kultur jaringan mempunyai beberapa keunggulan, antara lain: mempunyai sifat yang identik dengan induknya, dapat diperbanyak dalam jumlah yang besar sehingga tidak terlalu membutuhkan tempat yang luas, mampu menghasilkan bibit dengan jumlah besar dalam waktu yang singkat, kesehatan dan mutu bibit lebih terjamin, kecepatan tumbuh bibit lebih cepat dibandingkan dengan perbanyakan konvensional (Zulkarnain, 2009).Teknik kultur jaringan (kultur in vitro) mensyaratkan kondisi steril baik ruang, peralatan, bahan maupun seluruh rangkaian kerjanya. Hal ini disebabkan karena pertumbuhan eksplan didalam kultur harus selalu dalam kondisi aseptis. Untuk itu semua tahapan pelaksanaan teknik kultur in vitro harus dilaksanakan didalam laboratorium dan harus ditunjang oleh organisasi serta perlengkapan laboratorium yang memadai serta tata cara kerja yang teliti dari si peneliti. Laboratorium sebaiknya mempunyai pembagian ruangan yang diatur sedemikian rupa sehingga tiap kegiatan terpisah satu dengan yang lainnya, tetapi masih dapat saling berhubungan dan mudah dicapai. Alat-alat yang digunakan dalam kultur jaringan tumbuhan harus steril. Maka dari itu dalam laboratorium bioteknologi terdapat ruangan- ruangan khusus yaitu ruang masak, ruang persiapan, ruang transfer/tanam, ruang inkubasi/kultur. Maka berdasarkan hal tersebut di atas, perlu di lakukan pengenalan ruang dan alat-alat dalam praktikum kultur jaringan tumbuhan. Hal ini di harapkan dapat membantu jalannya praktikum kultur jaringan tumbuhan selanjutnya.2. TujuanTujuan yang ingin dicapai pada pelaksanaan praktikum ini yaitu untuk memahami ruang-ruang dan alat laboratorium kultur jaringan tumbuhan. 3. Alat dan bahan a. Laboratorium kultur jaringan tumbuhan b. Botol kultur dan penutupnyac. Rak botol kulturd. Kompor gase. Tabung gasf. Timbangan g. Shaker h. Kulkasi. Almari bahan j. Rak botol kulturk. Karetl. Pinset m. Scalpel n. Autoclaveo. Sprayerp. Laminar Air Flow (LAF)q. Bentuke aneh, durung ngerti jengener. Bunsen Bahan a. Alkohol 70% dan 96% b. Spirtusc. Fungsida sistemik (misalnya merk benlate, previcur N, derosal 500 EC)d. Bakterisida sistemik (misalnya streptomycine)e. Deterjenf. Larutan pemutih pakaian g. HgCl2h. Tween-20i. Akuades steril 4. Cara Kerja1. Praktikan mengikuti asisten masuk dalam ruangan. 2. Asisten menjelaskan alat-alat yang digunakan dalam kultur jaringan3. Praktikan mencatat nama alat dan fungsi masing-masing alat tersebut.4. Memindahkan catatan tersebut pada buku penuntun.5. Mendokumentasikan alat-alat yang ada di Laboratorium kultur jaringan tumbuhan

5. Hasil dan PembahasanNONama Ruang Fungsi Karakteristik ruanganAlat yang ada di dalamnya

1Ruang MasakUntuk mensterilisasi alat kultur jaringan dengan menggunakan autoclaveSuhu ruangan, ruangan tertutup, steril. 1. Botol kultur2. Rak botol kultur dan tutupnya3. Kompor gas4. Tabung gas5. Autoclave

2Ruang Persiapan Ruangan ini dipergunakan sebagai tempat untuk mempersiapkan eksplan, medium dan alat-alat. Suhu ruangan, ruangan tidak lembab, tertutup, steril.1. Shaker2. Timbangan 3. Kulkas4. Almari bahan

3Ruang Steril/transferRuang transfer merupakan ruangan dimana semua kegiatan aseptis dimulai. Kegiatan yang dilakukan meliputi : sterilisasi, isolasi bagian-bagian tanaman dan penanaman eksplan dalam medium. Suhu ruangan, tidak lembab, tertutup, steril1. Laminar air flow2. Lampu Bunsen 3. Scalpel 4. Pinset5. Karet6. Sprayer7. Belum tahu namanya

4Ruang InkubasiRuangan ini dipergunakan untuk memelihara eksplan yang telah ditanam pada medium secara aseptis. Suhu sesuai dengan kebutuhan (AC), Intensitas cahaya yang baik dari lampu fluorescent adalah antara 100-400 foot candel (1000-4000 lux). Tertutup, Steril. 1. Rak-rak kultur 3-4 tingkat dengan lampu fluorescent, jarak tiap tingkat 40 - 50 cm.

Laboratorium yang baik untuk pekerjaan teknik kultur jaringan harus memenuhi kriteria aman, bersih, memiliki organisasi dan penataan ruang yang sesuai. Kondisi bagian dalam laboratorium mutlak harus bersih, mulai dari lantai, dinding, meja, alat-alat yang digunakan, maupun udara diruangan laboratorium tersebut. Harus diusahakan semaksimal mungkin bebas dari debu, karena debu adalah sumber kontaminan yang paling potensial. Oleh karena itu laboratorium kultur jaringan harus tertutup rapat tanpa ada ventilasi. Jendela-jendela dibuat permanen dari kaca (tidak bisa dibuka). Didalam ruangan diberi pengatur udara (AC) untuk mempertahankan suhunya konstan (25-28)C. Lantai laboratorium juga harus dibersihkan secara rutin dengan antiseptik, meja dan dinding juga harus dibersihkan dengan larutan antiseptik. Ruangan didalam laboratorium harus dijaga tetap bersih dan bebas dari debu, hewan kecil dan insek. Praktikan yang akan masuk laboratorium harus melepas sepatunya dan harus mengenakan jas praktikum. Kebersihan laboratorium secara umum sangat menentukan keberhasilan kerja kultur jaringan.Pelaksanaan kerja kultur jaringan tumbuhan memiliki tahapan-tahapan dan urutan kerja yang khusus. Tahapan-tahapan kerja didalam laboratorium kultur jaringan dibagi dalam 4 kelompok yaitu: persiapan, inokulasi,pemeliharaan, dan aklimatisasi. Masing-masing tahapan pekerjaan tersebut harus terpisah satu dengan lainnya dan dengan menggunakan peralatan tersendiri.Didalam ruang masak Ruangan ini dipergunakan sebagai tempat untuk sterilisasi alat-alat kultur jaringan tumbuhan. Sesuai dengan fungsinya, fasilitas yang dibutuhkan didalam ruangan ini adalah Botol kultur Rak botol kultur dan tutupnya, Kompor gas. Tabung gas, Autoclave. Ruang persiapan, Ruangan ini dipergunakan sebagai tempat untuk mempersiapkan eksplan, medium dan alat-alat. Ruang persiapan biasanya dipergunakan untuk menyimpan medium dan alat-alat yang sudali steril, untuk menyimpan alat-alat gelas,bahan-bahan kimia dan pembuatan medium (ruang timbang). Persiapan eksplan yang dilakukan meliputi pencucian, pemotongan/pembuangan bagianbagian tanaman yang tidak dipergunakan serta perlakuan awal untuk mengurangi kontaminan yang ada dipermukaan tanaman. Persiapan medium meliputi penimbangan bahan kimia medium, pengenceran medium, penuangan kedalam wadah kultur dan sterilisasi. Sesuai dengan fungsinya, fasilitas yang dibutuhkan didalam ruangan ini adalah Shaker, Timbangan, Kulkas dam Almari bahan.Ruang steril atau ruang tanam merupakan ruangan dimana semua kegiatan aseptis dimulai. Kegiatan yang dilakukan meliputi : sterilisasi, isolasi bagian-bagian tanaman dan penanaman eksplan dalam medium. Kegiatan subkultur, sterilisasi medium dengan ultrafiltrasi juga dilakukan diruangan ini. Ruangan ini mutlak harus steril, sehingga sedapat mungkin bebas dari debu dan hewan kecil. Ruang transfer harus terisolir sedemikian rupa tetapi masih dapat berhubungan dengan ruang persiapan dan ruang inkubasi. Pintu penghubung harus selalu dalam keadaan tertutup. Sesuai dengan fungsinya, fasilitas yang dibutuhkan didalam ruangan ini adalah Laminar air flow, Lampu Bunsen, Scalpel, Pinset, Karet, Sprayer, Belum tahu namanya. Ruang inkubasi atau ruang kultur Ruang kultur merupakan ruang besar dengar kemungkinan perluasan bila diperlukan. Kebersihannya harus diperhatikan dan sedapat mungkn dihindari terlalu banyak keluar masuknya orang-orang yang tidak berkepentingan. Ruangan ini dipergunakan untuk memelihara eksplan yang telah ditanam pada medium secara aseptis. Botol-botol kultur diatur dengan menempatkannya pada rak-rak terbuka yang bertingkat (3-4 tingkat) dengan lampu fluorescent, jarak tiap tingkat 40-50 cm. Jarak antara rak harus diatur sedemikian rupa sehingga memudahkan lalulintas pemeriksa kultur. Didalam ruang kultur, lingkungan fisik diatur sedemikian rupa sehingga mendukung pertumbuhan yang optimal, untuk itu perlu ada pengaturan terhadap suhu dan cahaya. Unsur-unsur dan cahaya yang perlu diperhatikan adalah kualitas, lama penyinaran dan intensitas cahaya.

6. Kesimpulan Laboratorium kultur jaringan tumbuhan terdapat beberapa ruangan yaitu ruang masak untuk sterilisasi alat-alat, ruang persiapan tempat untuk mempersiapkan eksplan, medium dan alat-alat, ruang steril/tanam merupakan ruangan dimana semua kegiatan aseptis dimulai, dan ruang inkubasi untuk memelihara eksplan yang telah ditanam pada medium secara aseptis. 7. Daftar Pustaka