Laporan Identifikasi Bakteri E-coli

8/10/2019 Laporan Identifikasi Bakteri E-coli

http://slidepdf.com/reader/full/laporan-identifikasi-bakteri-e-coli 1/12



pada urin Anda ditemukan kadar leukosit j-ang tinggi di dalam urin melebihi batas normal 4.1-

10.9 dengan satuan 109/L. Hal itu menandakan adanya infeksi. Infeksi saluran kemih terbagi

menjadi dua jenis, yaitu dengan penyulit dan tidak dengan penyulit.

Infeksi saluran kencing dengan penyulit adalah terjadinya infeksi saluran kencing diakibatkan

adanya sumbatan pada saluran kencing, yaitu sumbatan pada prostat atau adanya batu pada

saluran kemih. Biasanya pada penderita batu ureter atau batu saluran kemih akan terjadi gesekan

batu dengan dinding epitel (kulit) saluran ureter atau dinding epitel (kulit) vesika urinaria,

sehingga menyebabkan adanya kandungan eritrosit di dalam hasil pemeriksaan urin.

Infeksi saluran kemih tidak dengan penyulit adalah terjadinya infeksi saluran kencing

diakibatkan oleh bakteri atau kuman yang masuk ke dalam saluran kencing yang dapat masuk

dari luar, misalnya dari air ketika membersihkan sehabis buang air.

Infeksi saluran kemih dapat menyerang segala usia, baik pria maupun wanita. Namun yang

paling sering terkena biasanya adalah wanita. Mungkin hal ini disebabkan saluran ureter pada

wanita lebih pendek dibandingkan dengan pria, bedanya sekitar 3-5 sentimeter.

Escherichia coli, atau biasa disingkat E. coli, adalah salah satu jenis spesies utama bakteri

gram negatif. Pada umumnya, bakteri yang ditemukan oleh Theodor Escherich ini dapat

ditemukan dalam usus besar manusia. Kebanyakan E. Coli tidak berbahaya, tetapi beberapa,

seperti E. Coli tipe O157:H7, dapat mengakibatkan keracunan makanan yang serius pada

manusia. E. Coli yang tidak berbahaya dapat menguntungkan manusia dengan memproduksi

vitamin K2, atau dengan mencegah baketi lain di dalam usus.

E. coli banyak digunakan dalam teknologi rekayasa genetika. Biasa digunakan sebagai vektor

untuk menyisipkan gen-gen tertentu yang diinginkan untuk dikembangkan. E. coli dipilih karena

pertumbuhannya sangat cepat dan mudah dalam penanganannya.

B. Maksud

Maksud dari pelaksanaan praktikum ini adalah untuk mengidentifikasi

bakteri Escherichia coli dalam sampel yang digunakan . Selain itu, praktikum juga

dimaksudnkan untuk mengetahui jenis dari bakteri Escherichia coli dalam sampel.

C.Tujuan

Tujuan dari pelaksanaan praktikum ini adalah untuk mengisolasi dan mengidentifikasi

bakteri Escherichia coli dan penyakit-penyakit yang ditimbulkannya.



BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A.Tinjauan Umum Eschericia coli

Escherichia coli pertama kali diidentifikasikan oleh dokter hewan Jerman, Theodor

Escherich dalam studinya mengenai sistem pencernaan pada bayi hewan. Pada tahun 1885,

beliau menggambarkan organisme ini sebagai komunitas bakteri coli dengan membangun segala

perlengkapan patogenitasnya di infeksi saluran pencernaan. Nama “Bacterium coli” sering

digunakan sampai pada tahun 1991. Ketika Castellani dan Chalames menemukan genus

Escherichia dan menyusun tipe spesiesE. Coli

B. Klasifikasi Escheri chia coli

Superdomain : Phylogenetica

Filum : Proteobacteria

Kelas : Gamma Proteobacteria

Ordo : Enterobacteriales

Family : Enterobacteriaceae

Genus : Escherichia

Spesies : Escherichia coli

C. Morfologi

E. coli merupakan kuman berbentuk batang pendek (koko basil) Gram negatif, ukuran

0,4-0,7μm X 1,4μm, sebagian gerak positif dan beberapa strain mempunyai kapsul. Escherichia

coli tumbuh baik pada hampir semua media yang biasa dipakai di laboratorium mikrobiologi

pada media yang dipergunakan untuk isolasi kuman enterik. Sebagian besar strain E. coli tumbuh

sebagai koloni yang meragi laktosa. E. coli bersifat mikroaerofilik. Beberapa strain bila ditanam

pada agar darah menunjukkan hemolisis tipe beta (Karsinah, 1994). Koloni yang berwarna merah

pada agar Mac Conkey menunjukkan bahwa basil memfermentasi laktosa dan bersifat non

patogen di dalam intestin (Gibson, 1996).

T empat yang paling sering terkena infeksi Escherichia coli adalah saluran kemih, saluran

empedu, dan tempat-tempat lain di rongga perut. Bakteri ini juga menghasilkan enterotoksin

penyebab diare. Escherichia coli memproduksi enterotoksin yang tahan panas dapat

menyebabkan diare yang ringan, sedangkan enterotoksin yang tidak tahan panas dapat

menyebabkan sekresi air dan klorida ke dalam lumen usus, menghambat reabsorbsi natrium

(Jawetz et al., 2005).



D. Antigen

Escherichia coli memiliki antigen O tersusun dari komplek polisakarida-phospolipid

dengan fraksi protein yang tahan terhadap pemanasan, sehingga antigen O dikenal sebagai

antigen permukaan yang tahan panas (heat-stable). Antigen K merupakan antigen kapsul atau

amplop. Antigen K terletak di atas antigen O dan mencegah antigen O kontak dengan antibodi O.

tersusun dari lipopolisakarida Antigen fimbria terletak pada fimbria (pili), yang merupakan

penonjolan pada dinding sel dan tersusun dari protein. Antigen H merupakan antigen flagela,

protein dan tidak tahan panas (Gross,1997).

Antigen yang digunakan untuk menentukan serotipe adalah sebagai berikut:

1) Somatik atau antigen O. Dituliskan menggunakan numeral Arabik; sebagai contoh, O33

(Carter, 2004). Antigen O merupakan bagian terluar dinding sel lipopolisakarida dan

terdiri unit berulang lipopollisakarida. Beberapa polisakarida spesifik O mengandung

gula unik. Antigen O tahan terhadap panas dan alcohol dan biasanya dideteksi dengan

cara aglutinasi bakteri. Antibodi terhadap antigen O adalah IgM. Sedangkan tiap jenis

enterobacteriaceae digabungkan dengan kelompok khusus O sehingga tiap organisme

tunggal dapat membawa beberapa antigen O yang sama dengan E. coli. E. coli dapat

bereaksi silang dengan beberapa spesies providencia, klebsiella, dan salmonella.

Biasanya antigen O berhubungan dengan penyakit khusus pada manusia, misalnya tipe

spesifik O dari E. coli ditemukan pada diare dan infeksi saluran kemih (Brooks, 1995).

2) Antigen K (permukaan atau amplop). Ada lebih dari 80 Antogen K yang berbeda-beda.

Dituliskan menggunakan numeral Arabik; contoh, K4 (Carter, 2004). Antigen K

merupakan bagian luar dari antigen O pada beberapa, tetapi tidak pada semua

enterobacteriaceae. Beberapa antigen K adalah polisakarida, termasuk antigen K dari E.

coli dan yang lainnya protein. Antigen K dapat berpengaruh pada reaksi aglutinasi

dengan antisera O dan mereka dapat dihubungkan dengan virulensi misalnya strain E.

coli memproduksi K1 yang merupakan penyebab utama pada meningitis neonatal, dan

antigen K dari E. coli menyebabkan perlekatan bakteri pada sel epithelial yang

memungkinkan invasi ke sistem gastrointestinal atau saluran kemih) (Brooks, 1995).

3) Antigen H atau flagella. Ditulis dengan H diikuti dengan numeral Arabik; contoh, H2.

Apabila tidak ada flagella , dituliskan dengan NM (nonmotil) (Carter, 2004). Antigen H

terletak pada flagella dan denaturasi atau dihilangkan oleh panas atau alkohol. Mereka

dapat diawetkan dengan pemberian formalin pada varian bakteri yang motil. Antigen H

mengadakan aglutinasi dengan antibodi H , biasanya Ig G. Penentu dalam antigen H

merupakan fungsi dari rangkaian asam amino pada protein flagella (flagellin) (Brooks,

1995).



E. Gejala Klinis

Escherichia coli adalah spesies yang paling penting dari genus Escherichia dan

merupakan flora normal yang dapat menyebabkan infeksi pada saluran kencing, luka, bakterimia,

septisemia dan meningitis serta infeksi gastrointestinal (Gaani A, 2003).

Sehubungan dengan infeksi pada usus dikenal lima jenis Escherichia coli, yaitu:

1) Enteropathogenik Escherichia coli (EPEC)

EPEC menyebabkan diare pada bayi atau anak – anak kurang dari 1 tahun dan

jarang pada orang dewasa dengan gejala berupa demam tidak tinggi, muntah, malaise dan

diare.

2) Enterotoxigenik Escherichia coli (ETEC)

ETEC menyebabkan diare pada anak – anak dan dewasa di daerah tropis dan

subtropics pada Negara yang sedang berkembang. Infeksi ETEC ditandai dengan gejala

demam rendah dan tinja encer.

3) Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC)

EIEC menyebabkan diare mirip dengan yang disebabkan oleh shigella, baik pada

anak – anak maupun orang dewasa. Tinja agak encer bahkan seperti air, mengandung

nanah, lender dan darah dengan gejala panas dan malaise.

4) Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC)

EHEC dikenal sebagai penyebab diare hemorhagik dan colitis serta hemolytic

uremic syndrome(HUS) yang ditandai dengan jumlah trombosit berkurang, anemia

hemolitik dan kegagalan ginjal. Tinja encer berair, mengandung darah dan abdomen

terasa sakit, kram serta demam rendah atau tanpa demam.

5) Enterodherant Escherichia coli (EAEC)

EAEC menyebabkan diare dengfan cara menempel kuat pada permukaan mukosa

usus dengan gejala tinja encer berair, muntah, dehidrasi, dan biasanya sakit pada

abdomen.

F. Media Selektif

a) Media Mac Conkay Agar (MCA)

Escherichia coli merupakan salah satu bakteri gram negative (merah) sehingga

pertumbuhannya cocok dengan media Mac Conkay Agar (MCA). Pertumbuhan bakteri

yang baik ditandai dengan koloni bulat, sedang-besar, keeping-cembung, merah keruh

dan smooth.

b)

Media Endo Agar

Endo agar merupakan media yang baik untuk pertumbuhan bakteri Escherichia

coli. Pertumbuhan yang baik ditandai dengan koloni besar-besar, elevasi cembung,

smooth dan berwarna merah tua metalik.



c) Media EMBA (Eosin Methylen Blue Agar)

Pada media ini pertumbuhan bakteri dapat dilihat dengan koloni tampak sedang,

keeping, smooth, berwarna hijau metalik dan terkadang ditengahnya koloni terdapat

warna ungu.



BAB III

METODE KERJA

A. Alat

Alat yang dibutuhkan dalam praktikum ini adalah sebagai berikut :

Objek Glass

Plate

Ose bulat dan ose lurus

Lampu spiritus

Bak pewarnaan

Tabung reaksi

Mikroskop

Pipet tetes

Incubator

Korek gas

B. Bahan

Bahan yang dibutuhkan dalam praktikum ini adalah sebagai berikut :

1.

Sampel: A

2. Reagen

NaCl 0,9 %

KOH 10%

Safranin

CGV (Carbol Gentian Violet)

Alcohol 96%

Lugol

Indicator methyl red

α- naftol

3. Media

Media BHIB (Brain Heart Infussion Broth)

Media MCA (Mac Conkay Agar)

Media ENDO Media

Media EMBA (Eosin Methylen Blue) Media KIA

Media SIM (Sulfur Indol Motility)

Media Urea

Media MR/VP



Media SCA (Simon Citrat Agar)

Media Gula-gula (glukosa, sukrosa, maltose, laktosa, dan manitol)

C. Metode Kerja

Langkah-langkah dalam pemeriksaan bakteri Escherichia coli adalah sebagai berikut :

Hari pertama (I)

1. Penanaman sampel pada media pemupuk BHIB

a) Ambil sampel A lalu centrifuge selama 15 menit.

b) Buang supernatanya. Dengan menggunakan ose ambil endapan dan tanam pada

media BHIB.

c) Di incubator selama 18-24 jam pada suhu 37˚C.

Hari Kedua (II)

1. Lakukan pewarnaan gram

a) Ambil suspensi bakteri pada BHIB.

b) Buat apusan pada objek glass yang bersih dan bebas lemak. Setelah kering, fiksasi

sediaan.

c) Warnai sediaan dengan CGV selama 1-2 menit kemudian bilas dengan air mengalir.

d) Tetesi sediaan dengan lugol selama 45 detik-1 menit, bilas dengan air mengalir.

e)

Lunturkan sediaan dengan alcohol 96% sampai warna luntur, bilas dengan air.f) Tetesi sediaan zat warna safranin selam 1 menit, bilas dengan air.

g) Setelah preparat kering, amati dibawah mikroskop dengan perbesaran objektif 100.

2. Penanaman pada media selektif MCA, ENDO, dan EMBA

a) Dengan menggunakan ose steril ambil suspensi bakteri pada BHIB lalu goreskan

dipermukaan media MCA, ENDO, dan EMBA.

b) Incubator selama 18-24 jam dengan suhu 37˚C.

Hari Ketiga (III)

1.

Lakukan Pewarnaan gram dengan mengambil koloni yang sesuai pada media MCA,

ENDO, dan EMBA.

2. Penanaman pada media TSIA.

Dengan menggunakan ose lurus (nahl), tusuk media TSIA sampai dasar tabung

dan buat goresan pada daerah miring.

3. Penanaman pada media biokimia dan gula-gula.

Dengan koloni yang sama, ambil dan tanam pada media biokimia (SIM, SCA,

urea, dan MR/VP), dan gula-gula (glukosa, sukrosa, maltose, manitol, dan laktosa)

Hari keempat(IV)

Amati perubahan yang terjadi pada media TSIA, SIM, SCA, MR/VP, urea,

glukosa, laktosa, maltose, sukrosa, dan manitol.

Untuk media SIM tabahkan dengan reagen covac’s 2-3 tetes.



Untuk media MR ditetesi dengan indicator Methyl Red 3 tetes.

Untuk media VP ditetesi dengan KOH 10% 4 tetes dan α- naftol 12 tetes.

Hasil pengamatan disesuaikan dengan tabel biokimia untuk menentukan jenis bakteri.



BAB IV

HASIL PENGAMATAN

Hasil Pengamatan

Hari kedua (II)

a) Terjadi kekeruhan pada media BHIB yang menandakan adanya pertumbuhan bakteri

pada media tersebut.

b) Bakteri berbentuk bacil dan streptobacil. Bakteri berwarna merah artinya bakteri luntur

pada pelunturan dengan alcohol, namun mampu mengikat zat warna pembanding yaitu

safranin sehingga berwarna merah.

Hari ketiga (III)

a) Media Mac Conkay Agar (MCA)

Pada media MCA didapatkan hasil berupa kuran koloni kecil-sedang, berwarna merah

muda (rose), smooth, dan cembung

b) Media ENDO agar

Pada media ENDO agar didapatkan koloni dengan ukuran sedang ,bulat, berwarna merah

muda-tua metalik, agak keping, smooth, dan cembung.

c) Media EMBA (Eosin Methylen Blue)

Tak ada pertumbuhan (TAP)

Hari keempat (IV)1. Media TSIA

Seluruh bagian pada media TSIA mengalami perubahan menjadi kuning, baik

pada lereng ataupun dasar. Ini menunjukkan bahwa bakteri mampu menfermentasikan

ketiga gula-gula dalam media TSIA (glukosa, laktosa, dan sukrosa) sehingga

menghasilkan asam yang membuat media berwarna kuning.

Tidak terdapat endapan hitam pada media yang menandakan bahwa bakteri

tidak memiliki enzim desulfurase. Enzim tersebut digunakan menghidrolisis asam amino

dengan gugus samping – SH sehingga akan menghasilkan H2S yang bereaksi dengan

FeSO4 dan membentuk endapan hitam FeS.

Adanya ruangan kosong atau udara pada media menandakan bahwa bakteri

mampu menghasilkan gas.

2. Gula-gula

Hasil positif didapatkan pada seluruh gula-gula yang digunaka baik glukosa,

maltose, laktosa, sukrosa dan manitol. Hasil positif ditandai dengan adanya perubahan

warna indicator yang terdapat dalam media ini yaitu dari biru menjadi kuning. Perubahan

warna tersebut disebabkan karena bakteri yang tumbuh di dalamnya mampu

memfermentasikan gula-gula tersebut berupa produk asam.



3. SIM :

a) S (sulfur) : Bakteri tmenghasilkan sulfur. Hal ini ditandai dengan terbentuknya

endapan hitam pada media, karena bakteri ini mampu mendesulfurasi cysteine yang

terkandung dalam media SIM.

b) I (indol) : Reaksi indol hanya bisa dilihat ketika pertumbuhan bakteri pada media ini

ditambahkan dengan reagen Covac’s. Indol dikatakan positif jika terdapat cincin

merah pada permukaannya. Warna merah dihasilkan dari resindol yang merupakan

hasil reaksi dari asam amino tryptopan menjadi indol dengan penambahan Covac's.

Bakteri yang mampu menghasilkan indol menandakan bakteri tersebut menggunakan

asam amino tryptopan sebagai sumber carbon. Pada hasil pengamatan diperoleh Indol

positif sehingga dapat disimpulkan bakteri yang tumbuh mampu menggunakan asam

amino tryptopan sebagai sumber carbonnya.

c) M (motility) : Pergerakan bakteri dapat terlihat pada media ini berupa berkas putih di

sekitar tusukan. Adanya pergerakan ini bisa dilihat karena media SIM merupakan

media yang semi solid. Pada hasil pengamatan diperoleh motility positif. Hal ini

menandakan bakteri mempunyai alat gerak dalam proses pertumbuhannya.

4. MR

Setelah ditambahkan dengan indicator metil red, media berubah menjadi merah

(positif). Berarti terjadi fermentasi asam campuran (asam laktat, asam asetat, dan asam

formiat) oleh bakteri.

5. VP

Setelah penambahan KOH 10 % dan α-nafto 1 %, warna media tetap tidak berubah

(negative). Ini disebabkan bakteri tidak memfermentasikan butanadiol oleh bakteri.

6. Urea

Hasil yang didapat adalah negatif karena warna media tidak berubah menjadi warna

merah muda.

7.

Simmon’s Citrate

Didapatkan hasil negatif (-), sebab tidak terjadi perubahan warna pada media. Ini

disebabkan bakteri E.coli merupakan salah satu spesies yang tidak menggunakan sitrat

sebagai sumber karbon untuk metabolisme dengan tidak menghasilkan suasana basa.



BAB V

PENUTUP

A.Kesimpulan

Dari hasil pemeriksaan yang diperoleh dari identifikasi bakteri pada sampel air got

diperoleh ditemukan bakteri Escherichia coli sehingga dapat disimpulkan bahwa A mengandung

bakteri Escherichia coli.

B.Saran

Tubuh manusia merupakan media pertumbuhan mikroorganisme seperti bakteri yang

paling baik. karena hal tersebut, tubuh manusia menjadi sumber penularan penyakit yang paling

besar. Pada proses identifikasi bakteri frekuensi untuk terinfeksi dengan bakteri sangat tinggi.

Oleh karena itu, penggunaan Alat Pelindung Diri (APD) seperti masker, handscond, dan jas

laboratorium sangat dianjurkan. Selain itu, kebersihan dalam proses identifikasi juga sangat

diperlukan sehingga bakteri yang diisolasi bisa tumbuh dengan baik.

Oleh karena itu, sepatutnya lah kita menjaga kebersihan dan kesehatan diri kita dan

lingkungan. Dengan melakukan hal-hal tersebut, frekuensi terserang penyakit bisa

ditanggulangi.

Laporan Identifikasi Bakteri E-coli

Documents

Transcript of Laporan Identifikasi Bakteri E-coli