33

LAMPIRAN

Lampiran 1. Sterilisasi Alat

Semua alat dibungkus dengan kertas buram

Dimasukkan ke dalam plastik

Diikat dengan tali jagung

Disterilisasi dengan Autoklav pada suhu 121oC selama 15 menit

34

Lampiran 2. Pengambilan Sampel

Cumi-cumi segar

Tinta cumi-cumi

Dicuci dengan air bersih

Dilakukan pembedahan dengan gunting steril

Saluran tinta dan organ lain dipisahkan

Kantung tinta diambil dan disayat

Ditampung dalam botol steril warna coklat

35

Lampiran 3. Pembuatan Ekstrak Tinta Cumi-cumi

Disiapkan 3 bejana

Dimasukkan 5 ml tinta cumi-cumi pada masing-masing bejana

Ditambahkan penyari etanol 96%, kloroform, dan n-heksan 15 ml

Ditutup dan dibiarkan selama 5 hari dan terlindung dari cahaya, sesekali diaduk

Disaring dan ampas dibasahi kembali dengan cairan penyari hingga diperoleh 20

ml

Ditempatkan dalam bejana tertutup, dan disimpan kembali selama 2 hari terhindar

dari cahaya

Naptuang atau dipipet cairan bagian atas yang telah terpisah dari endapan dan

dipekatkan di atas waterbath

Ekstrak cair

36

Lampiran 4. Pembuatan Media PDA

Ditimbang 3,9 gr serbuk PDA

Dimasukkan ke dalam erlenmeyer ukuran

100 ml

Ditambahkan aquadest ad 100 ml

Dipanaskan dan diaduk ad homogen

Didinginkan pada suhu 45oC diukur pH ±7

Disterilkan dengan autoklav pada suhu 121oC selama 15 menit

37

Lampiran 5. Pembuatan Reagen

BaCl2 1% (b/v)

H2SO4 1% (v/v)

Ditimbang serbuk BaCl2 sebanyak 1 gram

Dilarutkan dengan aquadest ke dalam labu

ukur ad 100 ml

Dipipet H2SO4 sebanyak 1 ml

Dilarutkan dengan aquadest ke dalam labu

ukur ad 100 ml

38

Lampiran 6. Pembuatan Suspensi Mc Farland

Dimasukkan BaCl2 1% 0,05 ml ke dalam

tabung reaksi

Ditambahkan H2SO4 1% sebanyak 9,95

ml

Dikocok ad homogen

39

Lampiran 7. Peremajaan Kultur Jamur

Koloni jamur diambil dengan jarum ose

steril

Digoreskan pada media agar miring/datar

Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 20-

25oC selama 48 jam.

40

Lampiran 8. Penyiapan Suspensi jamur

Diambil koloni jamur dari stok peremajaan

dengan jarum ose steril

Disuspensikan dalam 10 ml NaCl 0,9 %

Diukur kekeruhan dengan standar 0,5 Mc

Farland

41

Lampiran 9. Uji Zona Hambat

Diambil 1 ml suspensi jamur inokulum

Masing-masing dimasukkan ke dalam 3 buah petri kosong

Ditambahkan 20 ml media PDA steril yang telah dicairkan dan didinginkan pada

suhu 45oC

Dihomogenkan membentuk angka delapan dan didiamkan hingga mengeras

Dibuat 6 buah sumur menggunakan aluminium silinder (diameter ± 6 mm)

Dimasukkan kontrol: etanol 96%, kloroform, dan n-heksan. Tinta cumi-cumi

Ekstrak etanol 96%, kloroform, dan n-heksan pada masing-masing sumur

Diinkubasi pada suhu 20-25oC selama 24-48 jam

Diukur zona hambat yang terbentuk

42

Lampiran 10. Sketsa Perlakuan Uji Zona Hambat pada Media PDA

\

+

Keterangan :

P01 : etanol 96% sebagai kontrol pada ulangan pertama

P11 : kloroform sebagai kontrol pada ulangan pertama

P21 : n-heksan sebagai kontrol pada ulangan pertama

P31 : Ekstrak etanol 96% tinta cumi-cumi pada ulangan pertama

P41 : Ekstrak kloroform tinta cumi-cumi pada ulangan pertama

P53 : Ekstrak n-heksan tinta cumi-cumi pada ulangan pertama

Catatan : sketsa merupakan contoh pengambilan secara acak

PII3

P01 P11

P31

P41P51

P21

43

Lampiran 10. Alat Dan Bahan yang Digunakan

Alat-alat yang disterilisasi Alat-alat yang telah dibungkus untuk disterilisasi

Serbuk media PDA

44

Lampiran 11. Komposisi Media Potato Dextrose Agar (PDA)

Komposisi : 39 gram/L

Yang terdiri dari :

Potato infusion : 4,0 g

D (+) Glukose : 20,0 g

Agar-agar : 15,0 g