Kolesterol (Bio'12)

7/27/2019 Kolesterol (Bio'12)

1/15

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

MENETAPKAN KADAR KOLESTEROL

MUHAMAD HUSNU ABADI

G1C 009 037

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS MATARAM

2012


2/15

ACARA II

MENETAPKAN KADAR KOLESTEROL

A. PELAKSANAAN PRAKTIKUM

1. Tujuan Praktikum : Untuk menentapkan kadar kolesterol pada serum.

2. Hari, tanggal Praktikum : Sabtu, 16 Oktober 2012

3. Tempat Praktikum : Laboratorium Kimia Dasar Fakultas MIPA Universitas

Mataram.

B. LANDASAN TEORI

Kolestrol merupakan steroid yang terbanyak di dalam tubuh manusia. Kolestrol

memiliki struktur dasar inti steroid yang mengandung gugus metil, gugus hidroksi yang

terikat pada cincin pertama, dan rantai alkil. Kandungan kolestrol dalam darah berkisar

200-220 mg/Dl. Kolestrol dalam tubuh dibentuk di dalam liver, dan berasal dari makanan

(Zulfikar, 2010).

Kolesterol adalah lipid yang terdapat pada membran sel pada jaringan hewan, dan

ditransportasikan ke plasma darah pada hewan tersebut. Sebagian besar kolesterol di

dalam tubuh kita disintesa oleh tubuh dan juga diambil dari sumber makanan. Kolesterol

memainkan peranan penting dalam proses biokimia misalnya sebagai komponen membran

sel dan sintesa berbagai hormon steroid ( Sudarma,2009:84).

Kolesterol merupakan jenis lemak normal yang ada dalam darah, tetapi kolesterol

dalam konsentrasi tinggi dapat menyebabkan terjadinya aterosklerosis yang akhirnya akan

berdampak pada penyakit jantung koroner. Tetapi kolesterol juga berperan penting dalam

proses biokimia untuk komponen penyusun membran sel dan sintesa berbegai hormon

steroid (Rahayu, 2005).

Adanya kolestrol dapat ditentukan dengan menggunakan beberapa reaksi warna. Salah

satu diantaranya adalah reaksi Salkowski. Apabila kolestrol dilarutkan dalam kloroform

dan larutan ini dituangkan di atas larutan asam sulfat pekat dengan hati-hati, maka bagian


3/15

asam berwarna kekuningan dengan flouresensi hijau bila dikenai cahaya. Bagian

kloroform akan berwarna biru dan yang berubah menjadi merah dan ungu. Larutan

kolestrol dalam kloroform bila ditambah anhidrida asam asetat dan asam sulfat pekat,

maka larutan tersebut mula-mula akan berwarna merah, kemudian biru dan hijau. Ini

disebut reaksi Lieberman Burchard. Warna hijau yang terjadi ini ternyata sebanding

dengan konsentrasi kolestrol. Karenanya reaksi Lieberman Burcharddapat digunakan

untuk menentukan kolestrol secara kuantitatif (Poedjiadi, 2007: 74-76).

Kolesterol merupakan suatu jenis zat lemak (sterol) yang sangat jenuh (poly saturated

fat), merupakan zat lilin dan agak keras, yang berwarna putih kekuning-kuningan.

Kebanyakan ditemukan dalam lemak hewani. Kolesterol memiliki beberapa fungsi di

antaranya adalah (1) diperlukan terutama dalam pembentukan darah, (2) sebagai

pembentuk dinding sel, (3) sebagai bahan dasar pembentukan vitamin D di kulit dengan

bantuan sinar matahari, (4) pembentuk hormone sex, (5) disalurkan ke kelenjar bawah

otak dan kelenjar adrenalin, (6) disalurkan ke dalam empedu guna membantu pencernaan

makanan dan menyerap lemak dan lain sebagainya (Anonim, 2009).

Kadar kolesterol HDL yang tinggi merupakan suatu tanda yang baik

sepanjang kolesterol LDL kurang dari 150 mg/dL. Selain itu terdapat juga trigliserida

yang merupakan suatu hasil dari metabolisme makanan, bukan saja yang berbentuk lemak

tetapi juga makanan yang berbentuk karbohidrat dan protein yang berlebihan, yang tidak

seluruhnya dibutuhkan sebagai sumber energi. Kadar trigliserida ini akan meningkat bila

kita mengkonsumsi kalori berlebihan, lebih besar daripada kebutuhan (Siswono, 2001).

Jika kadar kolesterol normal (kurang dari 200 mg/dL) maka seseorang dapat dikatakan

aman dari penyakit jantung koroner. Jika kadar kolesterol di dalam darah berkisar antara

200 mg/dL sampai 239 mg/dL maka di dalam darah terdapat kadar LDL normal dan kadar

HDL tinggi serta trigliserida di dalam darah sehingga resiko penyakit jantung masih

relative rendah. Namun, jika kadar total kolesterol di dalam dalah mencapai 240 mg/dL

atu lebih memiliki resiko terkena penyakit jantung koroner dua kali lipat daripada kadar

kolesterol normal karena terrdapat kadar LDL yang tinggi dan kadar HDL yang rendah di

dalam darah (Artikel: Sumber Informasi Kesehatan Anda, 2009).

C. ALAT DAN BAHAN PRAKTIKUM


4/15

1) Alat-alat Praktikum :

Kertas label

Kuvet

Labu takar

Penangas air

Penjepit tabung reaksi

Pipet tetes

Pipet volume 5ml

Rak tabung reaksi

Rubber bulb

Spektrofotometer UV-VIS

Stopwatch

Tabung reaksi+tutup

Tissue

2) Bahan-bahan Praktikum :

Aquadest 3 ml

Alkohol absolut 2.5 ml

Asam asetat glasial 4 ml

Asam sulfat (H2SO4) pekat 3 ml

Colour reagent 4 ml

Petroleum benzena 5 ml pada pengujian serum

Serum kolesterol rendah

Serum kolesterol tinggi

Serum kolesterol standar


5/15

D. SKEMA KERJA

1. Uji sampel

2 buah tabung reaksi bertutup

Masing-masing dimasukkan 2.5 mL alkohol

+ 0.1 mL serum kolesterol rendah pada tabung 1 (kocok)

+ 0.1 mL serum kolesterol rendah pada tabung 2 (kocok)

@ tabung + 5 mL petroleum benzena (tabung ditutup rapat)

Dicampur 30 detik

Hasil

@ tabung + 3 mL aquadest (dikocok 10-15 menit)

Didiamkan

Terbentuk 2 lapisan

Lapisan atas lapisan bawah

Dimasukkan dalam tabung reaksi lain

Diuapkan dalam penangas air (80C) sampai cairan tinggal sedikit

Didinginkan (dibiarkan mengering)

Hasil

@tabung +4 ml colour reagent

dalam penangas air 5 menit

Didinginkan pada suhu kamar

Sampel

Hasil

Tabung reaksi blanko

+ 4 ml asam asetat glasial

Blangko

2 lapisan2 lapisan

Diambil lapisan atas

Dikocok

Didiamkan dalam ruan ela

+3 ml asam sulfat pekat


6/15

2. Kurva kalibrasi

Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3

Masing-masing tabung di + 0.5 ; 1.0 ; 2.0 (mL)

kolesterol standar 0.05 mg/mL petroleum benzen

Diuapkan sampai kering dalam penangas air (80C)

Sisanya yang tertinggal diuapkan pada suhu kamar

Hasil

+4 ml colour reagent

Didinginkan pada suhu kamar

+ 3 ml asam sulfat pekat

2 lapisan

Dikocok

Didiamkan dalam ruang gelap

Diukur A dan %T pada = 560 nmHasil

E. HASIL PENGAMATAN

1. Uji sampel

No PerlakuanHasil Pengamatan

Kolesterol rendah Kolesterol tinggi

1. Ke dalam 2 tabung reaksi

dimasukkan 2.5 mL alkohol.

Warna alkohol

bening Warna Alkohol

bening .

2. +0.1 ml serum, dikocok Warna awal serum

cream, setelah

dikocok warnanya

menjadi putih

keruh.

Warna awal serum

crream, setelah

dikocok warnanya

menjadi putih

keruh.


7/15

3. + 5 ml petroleum benzen,

tabung ditutup rapat dan

dikocok 10 detik.

Campuran ada 2

fase. Atas bening

dan bawah putih

keruh.

Campuran ada 2

fase. Atas bening

dan bawah putih

keruh

4 +3 mL aquadest (dikocok 10-15dmenit ). Didiamkan hingga

terbentuk 2 lapisan.

Diambil lapisan atas (bening)

dan dimasukkan ke tabung

reaksi yang lain.

Terbentuk 2lapisan. Atas

benimg dan bawah

putih keruh.

Capuran ada 2lapisan. Atas

bening, bawah putih

keruh.

5 Diuapkan dalam penangas air

(80C) sampai cairan tinggal

sedikit, setelah itu dibiarkan

mengering padat pada suhu

kamar (T=25o).

Cairan bening Cairan bening

.

6 + 4 mL colour reagent Kuning bening Kuning bening

7 Dimasukkan ke penangas air

selama 5 menit, T=80oC

Warna menjadi

bening, tabung

terasa panas.

Warna menjadi

bening, tabung

terasa panas.

8 +3 ml asam sulfat pekat

Dimasukkan dalam ruang gelap.

Kuning bening,

tinggi.

Coklat keunguan,

tinggi.

9 Diukur A dan %T pada = 560

nm

0.03 A

12.5% T

2.5 A

22.2% T

1

Pembuatan Blanko

1 ml serum + 4ml asam asetat

glasial.

Warna menjadi

bening dan ada

gumpalan putih.

Warna menjadi

bening dan ada

gumpalan putih.

2 +3 ml asam sulfat pekat

Didiamkan dalam ruang gelap

Warna menjadi

coklatWarna larutan

menjadi coklat


8/15

3 Diukur A dan %T pada = 560

nm

-0.043 A

99.5% T

2,5 A

99.5% T

2. Kurva kalibrasi

No

.

Perlakuan

Hasil Pengamatan

Tab. 0.5 ml Tab. 1 ml Tab. 2 ml

1 @tabung + larutan

kolesterol standar 0.05

mg/ml petroleum benzen.

warna awal cream warna awal cream warna awal cream

2 Diuapkan sampai kering

di penangas air pada T

80oselama 5 menit dan

sisanya diuapkan pada T

kamar.

Larutan berwarna

bening

Larutan berwarna

bening

Larutan berwarna

bening

3 + 3 ml colour reagent Warna menjadi

kuning bening

Warna menjadi

kuning bening

Warna menjadi

kuning bening

4 Diuapkan pada penangas

air dan didinginkan pada

suhu kamar.

Tidak ada

perubahan warna.

Tidak ada

perubahan warna.

Tidak ada

perubahan warna.

5 + 3ml asam sulfat pekat Terbentuk 2

lapisan, atas

minyak, bawahputih keruh.

Tabung terasa

panas.

Terbentuk 2

lapisan, atas


Tabung terasa

panas.

Terbentuk 2

lapisan, atas


Tabung terasa

panas.

6 Dikocok dan didiamkan

dalam ruang gelap

Warna larutan

menjadi bening.

Warna larutan

menjadi bening

kekuningan.

Warna larutan

menjadi

kekuningan, lebih

pekat dari tabung

1ml.

7 Diukur A dan %T pada

= 560 nm

0.008A 0.033A 0.028 A


9/15

097.8% T 092.5% T 093.5% T

F. ANALISA DATA

1. Persamaan Reaksi

2. Perhitungan

Perhitungan T

A = -Log T

T = 10-A

Transmitan

T = T x 100

T1 V = 0,5 mL

A = 0.008 A


10/15

T = 097,8 (Kurva Kalibrasi)

T1 = 10-A

= 10-0,008

= 0,981

T1 = 0,981 x 100

= 98,1 (Kurva Perhitungan)

T2 V = 1 mL

A = 0.033 A


T2 = 10-A

= 10-0,033

= 0,926

T2 = 0,926 x 100


T3 V = 2 mL

A = 0.028 A


T3 = 10-A

= 10-0,028

= 0,937

T3 = 0,937 x 100



11/15

Kolesterol volume 0.5 mL

Kadar kolesterol standar = 1.25 mg

Massa = V x kadar

= 0.5 mLx 0.05 mg/mL

= 0.025 mg

Kolesterol volume 1 mL

Kadar kolesterol standar = 0.05 mg/mL

Massa = V x kadar

= 1.0 mLx 0.05 mg/mL

= 0.05 mg

Kolesterol volume 2 mL

Kadar kolesterol standar = 0.05 mg/mL

Massa = V x kadar

= 2.0 mLx 0.05 mg/mL petroleum eter

= 0.1 mg

3. Kurva kalibrasi

Berdasarkan kurva didapatkan persamaan y = 0.344x + 0.0022Penentuan kadar kolesterol pada serum


12/15

1. Pada serum kolesterol tinggi

Absorbansi kolesterol tinggi : 2.5

. y = 0.344x + 0.0022

2,5 = 0.344x + 0.0022

2.5 - 0,0022 = 0.344x

2,4978 = 0,344x

. x =344.0

978.2

= 7,261 mg

Jadi, kadar kolesterol pada serum kolesterol tinggi adalah :

= 7,261 mg / 0,1 mL= 72,6 mg/ mL

= 7260 mg / 100 mL

2. Pada serum kolesterol rendah

Absorbansi kolesterol rendah : 0,03

. y = 0.344x + 0.0022

0,03 = 0.344x + 0.0022

0,03 - 0,0022 = 0,344x

0,0278 = 0,344x

. x =344,0

0278,0

= 0,0808 mg

Jadi, kolesterol pada serum kolesterol rendah adalah :

= 0,081 mg / 0,1 mL

= 0,81 mg / mL

= 81 mg / 100 mL

G. PEMBAHASAN

Praktikum kali ini berjudul Menetapkan Kadar Kolesterol. Sesuai dengan

judulnya, praktikum ini bertujuan untuk menentukan kadar kolesterol total dalam sampel

serum darah. Kolesterol total adalah jumlah kolesterol ester dan kolesterol bebas di dalam

darah. Metode yang digunakan dalam praktikum ini adalah reaksi Lieberman-Burchard.

Adapun kelebihan reaksi Lieberman-Burchard adalah reaksinya berjalan cepat, reagen


13/15

bersifat stabil, realtif mudah, sensitivitas cukup tinggi dan tidak terganggu oleh hormon

steroid (Ardianto dkk., 2010).

Kolesterol merupakan suatu sterol jenis lemak normal di dalam darah yangdibutuhkan tubuh untuk sintesis berbagai macam hormone steroid (Ardianto dkk., 2010).

Dalam konsentrasi tinggi, kolesterol akan mengkristal dalam bentuk Kristal tidak

berwarna, tidak berasa dan tidak berbau, dan memiliki titik lebur sekitar 0 sampai 1510C.

Jika kolesterol terdapat pada pembuluh darah maka akan terjadi penyempitan pembuluh

darah karena kolesterol akan mennyebabkan terjadinya penebalan pada dinding pembuluh

darah sehingga kelembutan dan kelenturan pembuluh darah akan berkurang. Hal tersebut

menyebabkan terjadinya gangguan pada aliran darah sehingga jantung harus memompa

darah lebih keras lagi untuk menstabilkan aliran darah sehingga menimbulkan resiko

penyakit jantung (Poedjadi, 2007).

Penambahan alkohol absolut, dan petroleum benzen bertujuan untuk melarutkan

kolesterol, Kolesterol sangat sukar larut karena kolesterol memiliki gugus fungsi yang

polar akan tetapi kolesterol juga memiliki ring yang cukup panjang sehingga

menyebabkan kolesterol bersifat nonpolar. Pengocokan dilakukan dengan alat setrifugasi,

ini bertujuan agar kolesterol tercampur dengan pelarut petroleum benzen dan alcohol

absolut. Penambahan aquades bertujuan untuk memisahkan lapisan larutan kolesterol

dengan komponen lain karena kolesterol cenderung bersifat sedikit polar bila dilihat dari

gugus fungsi OH nya. Selanjutnya penguapan pada suhu 800C. Dilakukan pada suhu ini

karena pelarut (etanol absolut dan petroleum benzene) mempunyai titik didih pada

kisaran suhu tersebut. setelah menguapkan pelarut, yang tersisa hanya kolesterol yang

akan diuji warnanya. Penambahan colour reagen (1.0 mg FeCl3.6H2O/mL asam asetat

glasial) berfungsi untuk melarutkan kolesterol dengan bantuan pemanasan. Penambahan

H2SO4 pekat bertujuan untuk membentuk kompleks warna (Ardianto dkk., 2010). Pada

praktikum didapatkan 2 lapisan warna yakni coklat keunguan (bawah) dan kuning

bening (atas). Warna coklat keunguan in i meru pak an bagian da ri asam den gan

flourosensi hijau bila dikenai cahaya(Poedjiadi, 2007). Sedangkan pada saat

sebelum pengukuran dengan spektrofotometer larutan kolesterol di tempatkan pada

kondisi gelap dikarenakan karena sifat dari kolesterol yang dapat menyerap cahaya,

kolesterol dapat berubah menjadi 7-dihidroksikolesterol yang diubah menjadi vitamin D

bila terkena sinar (Fessenden, 1986).

Penetuan kadar kolesterol dalam serum ditentukan dengan pengukuran absorban


14/15

pada = 560, karena pada panjang gelombang tersebut diperoleh absorban yang satabil

(Rahayu, 2005). Kurva kalibrasi dibuat dengan mengalurkan grafik antara konsentrasi

kolesterol (mg) dengan absorban masing-masing sehingga diperoleh persamaan y =

0.344x+0,0022. Nila y merupakan nilai absorban sampel (kolesterol) dan x merupakan

kadar total kolesterol dalam 100 mL darah. Dari hasil pengukuran absorban, diperoleh

nilai absorban A sebesar 2,5 untuk serum tinggi dan 0.03 pada serum rendah. Perbedaan

nilai absorbansi antara serum rendah dan serum tinggi berhubungan dengan kadar total

kolesterol pada serum-serum tersebut. Berdasarkan perhitungan dari persamaan regresi

grafik, diperoleh kadar kolesterol total serum tinggi sebesar 7260 mg/ 100 mL dan 81 mg/

100 mL untuk serum rendah. Kadar total kolesterol dalam untuk serum rendah tergolong

rendah karena 200 mg/100 mL. Dalam darah manusia kadar kolesterol normal

adalah terdapat kadar kolesterol berkisar antara 150-200 mg/100 mL, sehingga kadar

kolesterol dalam serum rendah di bawah normal, sedangkan kadar kolesterol dalam

serum tinggi di atas/sangat melebihi normal. Kadar kolesterol total merupakan jumlah

kadar HDL, LDL dan trigliserida (kolesterol ester + kolesterol bebas) di dalam darah.

H. KESIMPULAN

Pada sampel serum darah kolesterol tinggi terdapat 7260 mg/ 100 mL. Sedangkan

pada serum darah kolesterol rendah terdapat 81 mg/ mL. Hasil yang dperoleh seperti

terbalik antara sampel serum tinggi dan rendah. Hal ini bisa terjadi karena factor human

error. Tetapi dapat disimpulkan bahwa pada serum darah kolesterol tinggi memiliki kadar

kolesterol yang sangat tinggi, karena kadarnya di atas 200 mg per 100 mL darah, dan pada

serum darah kolesterol rendah memiliki kadar kolesterol yang sangat rendah, karena

kadarnya di bawah 200 mg per 100 mL darah


15/15

DAFTAR PUSTAKA

Anonym. 2009. Apa Arti Tes Kolesterol Anda. Majalah Kesehatan

http://www.mangkukmerah.com, diakses 28 Oktober 2012.

Ardianto dkk,. 2010. Laporan Resmi Analisis Klinik Penetapan Kadar Kolesterol Total

dengan Metode Enzimatik. Golongan I: FKK 2008.

Fessenden, R.J., and Fessenden, J.S. 1986.Kimia Organik jilid 2. Jakarta : Erlangga.

Poedjiadi, Anna. 2007.Dasar-Dasar Biokimia. Jakarta: UI Press.

Rahayu, Tuti (2005) Kadar Kolesterol Darah Tikus Putih (Rattus Norvegicus L) Setelah

Pemberian Cairan Kombucha Per-Oral (Blood Cholesterol Degree Of White Rat

(Rattus Norvegicus L) After Getting Kombucha Fluid Per-Oral). Sains dan teknologi,

6 (2). Pp. 85-100. Issn 1411-5174

Siswono. 2001. Bahaya dari Kolesterol Tinggi. Gizi.net. http://www.gizi.net/cgi-

bin/berita/fullnews.cgi?newsid997059568,35248, diakses 28 Oktober 2012.

Sudarma. 2009.Kimia Bahan Alam. Mataram: Universitas Mataram.

Zulfikar. 2010. Steroid. www.chem-is-try.org, diakses 28 Oktober 2012.
http://www.mangkukmerah.com/http://www.gizi.net/cgi-bin/berita/fullnews.cgi?newsid997059568,35248http://www.gizi.net/cgi-bin/berita/fullnews.cgi?newsid997059568,35248http://www.chem-is-try.org/http://www.mangkukmerah.com/http://www.gizi.net/cgi-bin/berita/fullnews.cgi?newsid997059568,35248http://www.gizi.net/cgi-bin/berita/fullnews.cgi?newsid997059568,35248http://www.chem-is-try.org/

Kolesterol (Bio'12)

Documents

Transcript of Kolesterol (Bio'12)