Jurnal Biologi Indonesia diterbitkan oleh Perhimpunan Biologi Indonesia. Jurnal ini memuat hasil penelitian ataupun kajian yang berkaitan dengan masalah biologi yang diterbitkan secara berkala dua kali setahun (Juni dan Desember).

Editor Ketua

Prof. Dr. Ibnu Maryanto Anggota

Prof. Dr. I Made Sudiana Dr. Deby Arifiani

Dr. Izu Andry Fijridiyanto

Dewan Editor Ilmiah

Dr. Abinawanto, F MIPA UI

Dr. Achmad Farajalah, FMIPA IPB

Prof. Dr. Ambariyanto, F. Perikanan dan Kelautan UNDIP

Dr. Didik Widiyatmoko, Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya-LIPI

Dr. Dwi Nugroho Wibowo, F. Biologi UNSOED

Dr. Gatot Ciptadi F. Peternakan Universitas Brawijaya

Dr. Parikesit, F. MIPA UNPAD

Dr. Faisal Anwari Khan, Universiti Malaysia Sarawak Malaysia

Assoc. Prof. Monica Suleiman, Universiti Malaysia Sabah, Malaysia

Dr. Srihadi Agungpriyono, PAVet(K), F. Kedokteran Hewan IPB

Y. Surjadi MSc, Pusat Penelitian ICABIOGRAD

Drs. Suharjono, Pusat Penelitian Biologi-LIPI

Dr. Tri Widianto, Pusat Penelitian Limnologi-LIPI

Dr. Witjaksono Pusat Penelitian Biologi-LIPI

Sekretariat Eko Sulistyadi M.Si, Dewi Citra Murniati M.Si, Hetty Irawati PU, S.Kom

Alamat d/a Pusat Penelitian Biologi - LIPI

Jl. Ir. H. Juanda No. 18, Bogor 16002 , Telp. (021) 8765056 Fax. (021) 8765068

Email : jbi@bogor.net; ibnu_mar@yahoo.com; eko_bio33@yahoo.co.id; hetttyipu@yahoo.com Website : http://biologi.or.id

Jurnal Biologi Indonesia : Akreditasi: No. 657/AU3/P2MI-LIPI/07/2015.

JURNAL BIOLOGI INDONESIA

Diterbitkan Oleh:

Perhimpunan Biologi Indonesia

Bekerja sama dengan

PUSLIT BIOLOGI-LIPI

OBITUARI

Redaksi Jurnal Biologi Indonesia telah kehilangan seorang editor penelaah Dr. Ir Sri Sulandari, M.Sc.

yang telah berpulang kerahmat Allah SWT pada tanggal 18 Agustus 2015 Jam 16.10 di RSCM,

Jakarta. Jabatan terakhir almarhumah sebagai Peneliti Madya/IVc di Pusat Penelitian Biologi-LIPI

sebagai ahli DNA Molekuler yang menekuni kajian DNA pada ayam lokal Indonesia dan berbagai

hidupan liar khususnya pada burung. Tiga tahun terakhir sangat aktif berusaha menyelamatkan

populasi kambing Gembrong di Kabupaten Karanganyar, Bali. Almarhumah meninggalkan seorang

suami Prof. Dr. Muladno, MSA yang bekerja sebagai guru besar di Fakultas Peternakan, Institut

Pertanian bogor dan saat ini juga sebagai Direktur Jendral Peternakan dan Kesehatan Hewan,

Kementerian Pertanian, serta dua anak laki-laki Aussie Andry Vermarchnanto M. dan Endyea

Mendelian.

Jurnal Biologi Indonesia yang diterbitkan oleh PERHIMPUNAN BIOLOGI INDONESIA bekerjasama

dengan PUSLIT BIOLOGI-LIPI. Edisi volume 11 No. 2 tahun 2015 memuat 15 artikel lengkap dan

satu artikel tulisan pendek. Penulis pada edisi ini sangat beragam yaitu dari Balai Besar Penelitian

Veteriner-Deptan, Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik

Pertanian, Bogor, Balai Penelitian Tanaman Sayuran Lembang, Bandung, Departemen Konservasi

Sumberdaya Hutan dan Ekowisata, Fakultas Kehutanan-IPB, Dept. Biokimia FMIPA-IPB, Institut

Sains dan Teknologi Nasional Jakarta, Pusat Penelitian dan Pengembangan Sumberdaya Pesisir &

Laut, Balitbang Kelautan & Perikanan, Kementerian Kelautan & Perikanan, Departemen Manajemen

Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB. Program Studi Manajemen

Sumberdaya Perairan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan-Universitas Maritim Raja Ali Haji-

Tual, Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya–LIPI, Puslit Biologi-LIPI, Puslit Bioteknologi-LIPI.

Jurnal Biologi Indonesia mengucapkan terima kasih dan penghargaan kepada para pakar yang telah

turut sebagai penelaah dalam Volume 11 No 2, Desember 2015:

Dr. Niken Tunjung Murti Pratiwi, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB

Dr. Agus Prijono Kartono, Fakultas Kehutanan IPB

Ir. Drs. Eko Harsono MSi, Puslit Limnologi-LIPI

Dra. Donowati Tjokrokusumo M.Phil, Pusat Teknologi Bioindustri, BPPT

Ir. M. Syamsul Arifin Zein MSi, Puslit Biologi LIPI

Drh. Anang S. Achmadi MSc, Puslit Biologi LIPI

Dr. Yuyu S. Poerba, Puslit Biologi LIPI

Ir. Dwi Agustiyani MSc, Puslit Biologi LIPI

Dr. Apon Zaenal Mustopa, Puslit Bioteknologi LIPI

Dr. Yopi Puslit Bioteknologi LIPI

Dr. Joeni S. Rahajoe, Puslit Biologi LIPI

Dr. Wartka Rosa Farida, Puslit Biologi LIPI

BIOLOGI

Halaman

Efikasi Vaksin Inaktif Bivalen Avian Influenza Virus Subtipe H5N1 (Clade 2.1.3. dan Clade

2.3.2) di Indonesia

169

NLP. Indi Dharmayanti & Risa Indriani

Klon-klon Kentang Transgenik Hasil Persilangan Terseleksi Tahan terhadap Penyakit

Hawar Daun Phytophthora infestans Tanpa Penyemprotan Fungisida di Empat Lapangan

Uji Terbatas

177

Alberta Dinar Ambarwati, Kusmana, & Edy Listanto

Penambahan Inokulan Mikroba Selulolitik pada Pengomposan Jerami Padi untuk Media 187

Tanam Jamur Tiram Putih (Pleurotus ostreatus)

Iwan Saskiawan

Identifikasi Molekular dan Karakterisasi Morfo-Fisiologi Actinomycetes Penghasil Senyawa

Antimikroba

195

Arif Nurkanto & Andria Agusta

Populasi dan Kesesuaian Habitat Langkap (Arenga obtusifolia Mart.) 205

di Cagar Alam Leuweung Sancang, Jawa Barat

Didi Usmadi, Agus Hikmat, Joko Ridho Witono, & Lilik Budi Prasetyo

Optimasi Produksi Enzim Amilase dari Bakteri Laut Jakarta (Arthrobacter arilaitensis )   215

Awan Purnawan, Y. Capriyanti, PA. Kurniatin, N. Rahmani, & Yopi

Pengaruh Antioksidan Eksopolisakarida dari Tiga Galur Bakteri Asam Laktat pada Sel

Darah Domba Terinduksi tert-Butil Hidroperoksida (t-BHP)

225

Fifi Afiati, Nina Ainul Widad, & Kusmiati

Ekosistem Lamun sebagai Bioindikator Lingkungan di P. Lembeh, Bitung, Sulawesi Utara 233

Agustin Rustam, Terry L. Kepel, Mariska A. Kusumaningtyas, Restu Nur Afi

Ati, August Daulat, Devi D. Suryono, Nasir Sudirman, Yusmiana P. Rahayu,

Peter Mangindaan, Aida Heriati, & Andreas A. Hutahaean

Identification of Bioactive Compound from Microalga BTM 11 as Hepatitis C Virus RNA 243

Helicase Inhibitor

Apon Zaenal Mustopa, Rifqiyah Nur Umami, Prabawati Hyunita Putri, Dwi

susilaningsih, & Hilda Farida

Kemampuan Cerna Protein dan Energi Metabolisme Perkici Pelangi (Trichoglossus

haematodus )

253

Rini Rachmatika & Andri Permata Sari

Optimasi Enzim α-Amilase dari Bacillus amyloliquefaciens O1 yang Diinduksi Substrat

Dedak Padi dan Karboksimetilselulosa

259

Yati Sudaryati Soeka, Maman Rahmansyah, & Sulistiani

Kajian Aspek Ekologis dan Daya Dukung Perairan Situ Cilala 267

Niken T.M. Pratiwi, Sigid Hariyadi, Inna Puspa Ayu, Aliati Iswantari,

Novita MZ, & Tri Apriadi

Halaman

Penanda Genetik Tarsius (Tarsius spp.) dengan Menggunakan Gen Cytochrome Oxidase I

(COI) DNA Mitokondria (mtDNA) Melalui Metode Sekuensing

275

 Wirdateti, Sri Wijayanti Wulandari, & Paramita Cahyaningrum Kuswandi

Carboxymethyl Cellulose Hydrolyzing Yeast Isolated from South East Sulawesi, Indonesia 285

Atit Kanti

Uji Bakteri Simbiotik dan Nonsimbiotik Pelarutan Ca vs. P dan Efek Inokulasi Bakteri pada

Anakan Turi (Sesbania grandiflora L. Pers.)

295

Sri Widawati

TULISAN PENDEK 309

Mating behavior of Slow Loris (Nycticebus coucang ) at Captivity

Wartika Rosa Farida & Andri Permata Sari

Optimasi Produksi Enzim Amilase dari Bakteri Laut Jakarta (Arthrobacter arilaitensis)

(Optimation of Amylase Enzyme Production from Jakarta Marine Bacterium (Arthrobacter arilaitensis)

A. Purnawan1, Y. Capriyanti2, PA. Kurniatin2, N. Rahmani1, & Yopi1.

1. Puslit Bioteknologi LIPI Jl. Raya Bogor Km 46 cibinong Bogor. 2. Dept. Biokimia FMIPA IPB Jl. Agatis Darmaga Bogor

Email :awan001@lipi.go.id

Memasukkan: Januari 2015, Diterima: April 2015

ABSTRACT

Amylase is one of the most important industrial enzymes which can be used in a number of industrial processes including food industry, textile, paper industry, renewable energy, and pharmaceutical. This study reports the environmental conditions and nutrient media for amylase production from marine bacterium Arthrobacter arilaitensis. Various parameters such as substrate concentration, pH medium, temperature of fermentation, co-substrate, and nitrogen source was determined to obtain the optimum conditions. Maximum amylase enzyme production was obtained at starch concentration 1%, pH 7, temperature fermentation 30°C, co-substrate maltose with activity 2.7 U/mL. While the addition of several nitrogen sources was given decreased amylase activity, such as addition casein was decreased the activity into 2.3 U/mL. Keywords: Arthrobacter arilaitensis, amylase activity, optimization, co-substrate, pH, temperature, substrate,

nitrogen source

ABSTRAK Amilase merupakan salah satu enzim yang penting dalam industri yang aplikasinya sangat luas pada berbagai proses industri mulai dari industri makanan, tekstil, industri kertas, energi terbarukan, hingga bidang farmasi. Penelitian ini berfokus untuk mendapatkan kondisi lingkungan serta nutrien media yang optimum untuk produksi amilase dari bakteri laut Arthrobacter arilaitensis. Berbagai parameter seperti konsentrasi substrat, pH medium, suhu fermentasi, ko-substrat, dan sumber nitrogen telah ditentukan. Produksi enzim amilase maksimum didapatkan pada konsentrasi substrat pati 1%, pH 7, suhu 30oC, maltosa sebagai ko-substrat produksi dengan aktivitas 2.7 U/mL. Sedangkan penambahan beberapa sumber nitrogen memberikan pengaruh terhadap penurunan aktivitas amilase, seperti kasein menurunkan aktivitas enzim amilase menjadi 2.3 U/mL.

Kata Kunci: Arthrobacter arilaitensis, aktivitas amilase, optimasi, ko-substrat, pH, suhu, substrat, sumber nitrogen

PENDAHULUAN

Penggunaan enzim dalam dunia industri

semakin meluas disebabkan oleh semakin

pesatnya perkembangan teknologi aplikasi

enzim, teknologi fermentasi, dan rekayasa

genetika. Salah satunya adalah enzim amilase.

Amilase merupakan kelompok enzim yang

mempunyai kemampuan untuk memutuskan

ikatan glikosida pada amilum. Enzim α-amilase

(1,4- α-D-glukan glukano hidrolase, E.C.3.2.1.1)

adalah enzim kunci dalam metabolisme organisme

hidup yang menggunakan pati sebagai sumber

karbon dan sumber energi. Enzim α-amilase

berupa endo-enzim yang dapat menghidrolisis

ikatan α-1,4-glikosida pada unit polimer pati

yang berantai lurus atau bercabang menghasilkan

glukosa (Regulapati et al. 2007).

Enzim ini memiliki aplikasi dengan skala

yang luas, juga membuka area baru dari

banyaknya proses bioteknologi yang bersifat

komersial mulai dari industri tekstil, hidrolisis

pati, bir, roti, sirup, pemanis buatan, etanol,

detergen, industri kertas, industri penyulingan,

energi terbarukan, hingga bidang farmasi

(Pandey et al. 2000; Rani et al. 2003;

Sivaramkrishnan et al. 2006; Bozic et al. 2011).

Amilase merupakan enzim industri yang paling

penting yang menyumbang sekitar 30% dari

produksi enzim dunia sebagai contoh produksi

amilase oleh Bacillus licheniformis dan

Aspergillus sp. sekitar 300 ton enzim murni

pertahun (Sivaramkrishnan et al. 2006). Oleh

karena itu meskipun enzim amilase telah banyak

diisolasi dan dikristalisasi, eksplorasi sumber

amilase yang lebih efisien masih dibutuhkan

216

(Ahmadi et al. 2010).

Sumber α-amilase dapat diperoleh dari

tumbuhan, hewan dan mikroorganisme. Amilase

yang berasal dari mikroba dapat menghasilkan

enzim yang besar, sehingga banyak dimanfaatkan

sebagai enzim industri (Tanjildizi et al. 2005).

Beberapa laporan menyebutkan α-amilase yang

dihasilkan oleh bakteri berbeda dengan yang

dihasilkan oleh jamur, contoh Bacillus dan

Aspergillus sp. diteliti sebagai sumber yang

berguna untuk industri (Silva et al. 2011). Saat

ini mikroba yang banyak digunakan untuk

produksi amilase berasal dari tanah, mikroba

yang berasal dari laut belum banyak

dimanfaatkan padahal karateristik mikroba laut

sangat unik dan spesifik, yaitu tahan pada

salinitas/NaCl tinggi, suhu, cahaya, dan

lingkungan ekstrim lainnya. Komunitas mikroba

dari jenis bakteri, arkea, protista dan fungi

bersel tunggal merupakan biomasa laut terbesar.

Jumlah total sel bakteri di laut diperkirakan

sebanyak 3,6x1029 jumlah koloni/mL dengan

total kandungan karbon selulernya sebesar

3x1017g (Whitman et al. 1998). Keanekaragaman

yang sangat tinggi ini mendorong banyaknya

penelitian yang menggunakan mikroba laut,

termasuk pencarian sumber enzim amilase baru.

Sebagai contoh hasil isolasi mikroba laut

Brevibacterium sp. dari perairan laut Muara

Kamal Jakarta, diperoleh satu isolat yang

berpotensi menghasilkan enzim amilase dengan

aktifitas 2.9 U/mL, stabil pada pH 8 dan substrat

pati 2% (Rahmani et al. 2011).

Peningkatan produksi amilase dapat

dilakukan dengan mengatur kondisi lingkungan

pertumbuhannya, sehingga amilase yang

dihasilkan dapat diaplikasikan dalam dunia

industri. Tujuan penelitian ini adalah menentukan

kondisi optimum fermentasi yang meliputi

konsentrasi substrat, pH media, suhu fermentasi,

ko-substrat karbon, dan ko-substrat nitrogen

untuk produksi amilase dari mikroba laut

Arthrobacter arilaitensis.

BAHAN DAN CARA KERJA

Pembuatan media peremajaan isolat,

sebanyak 3.8 gram Artificial Sea Water (ASW),

0,5 gram pati komersial, 0,5 gram agar, 0,1

gram yeast extract dan 0,5 gram pepton. Semua

bahan dilarutkan di dalam 100 mL akuades

kemudian disterilisasi. Media yang telah

ditanami isolat diinkubasi pada suhu 30 ºC

selama 3 hari.

Isolat mikroba yang digunakan dalam

penelitian ini berasal dari Kepulauan Seribu,

Jakarta. Hasil skrining 50 isolat dengan

menggunakan larutan kalium Iodida – Iodida

(5.0 gram Kalium Iodida dan 1.0 gram Iod

dilarutan dengan 330 mL akuades) diperoleh

enam isolat yang berpotensi menghasilkan

enzim amilase, dari enam isolat dipilih satu

isolat untuk penelitian ini.

Parameter yang dioptimasi pada media

produksi amilase dari bakteri laut Arthrobacter

arilaitensis terdiri dari optimasi konsentrasi

substrat, pH, suhu fermentasi, ko-substrat, dan

sumber nitrogen. Pembuatan media produksi

yaitu disiapkan sebanyak 3,8% ASW, 0,1%

yeast extract dan 0,5% pepton, dan 0,5% pati

komersial dengan analytical grade sebagai

substrat media produksi.

Optimasi konsentrasi substrat dilakukan

pada 10 mL media prekultur dan 30 mL media

kultur. Variasi konsentrasi substrat yang

digunakan adalah konsentrasi 1%, 2,5%, dan

5%. Selanjutnya isolat segar diinokulasi ke

dalam media prekultur, diinkubasi dengan

kecepatan 150 rpm selama 24 jam pada suhu

30ºC, media prekultur dimasukan kedalam

media kultur selanjutnya di inkubasi kembali

selama 120 jam. Setiap 24 jam dilakukan

pengambilan sampel kultur untuk pengujian

pertumbuhan sel bakteri dan aktivitas enzimnya

untuk mengetahui konsentrasi optimum dalam

media produksi.

Optimasi pH produksi dilakukan dalam

media produksi yaitu dengan konsentrasi

substrat optimum yang telah diperoleh dari

pengujian sebelumnya sebesar 1%. Variasi pH

media yang digunakan adalah pH: 5, 6, 7, 8, dan

9. Optimasi suhu fermentasi dilakukan pada

variasi suhu 20oC, 30oC, 40oC, dan terakhir

50oC. Optimasi ko-substrat media ditambahkan

variasi ko-substrat yaitu maltosa, galaktosa,

glukosa, dan sukrosa dengan konsentrasi

masing-masing 0,5%. Optimasi sumber nitrogen

menggunakan media variasi ammonium sulfat,

urea, kasein, dan tripton dengan konsentrasi

masing-masing 0,5%.

217

A B

Aktivitas amilase ditentukan dengan

menggunakan metode DNS dan gula pereduksi

yang dibebaskan ditentukan dengan menggunakan

metode DNS (Miller 1959). Ekstraksi amilase

dipertahankan pada suhu dingin minimal 4ºC

(Liu et al. 2011) untuk menjaga aktivitas enzim.

Identifikasi bakteri dilakukan secara molekuler

dengan menganalisis sebagian gen 16S rDNAnya.

Gen 16S rDNA diamplifikasi dengan menggunakan

primer 9F (5’-AGRGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)

and 1492R (5’-ACGGYTACCTTGTTAYGACTT-

3’) Burggraf et al. 1992. Amplifikasi dilakukan

dengan campuran reaksi yang mengandung

DNA bakteri, primer 9F dan 1492R masing-

masing 10 pmol 2 µl, larutan Go Taq (promega)

26 µl serta ddH2O 20 µl. Adapun kondisi reaksi

PCR ialah 95 oC, 2 menit (1 siklus); 95 oC, 30

detik, 65 oC, 1 menit, 72 oC, 2 menit (10 siklus);

95 oC, 30 detik, 55 oC, 1 menit, 72 oC, 2 menit

(30 siklus) serta 72 oC, 2 menit (1 siklus). PCR

produk disequensing di First Base Malaysia.

Hasil sekuen selanjutnya dibandingkan dengan

database di Gen Bank menggunakan BLAST

algorithm.

HASIL

Analisa kualitatif aktivitas amilase dari

Arthrobacter arilaitensis

Isolat bakteri laut Arthrobacter arilaitensis

dapat tumbuh dalam media padat pati 0.5% pada

hari ke-3. Isolat bakteri laut Arthrobacter

arilaitensis yang tumbuh dapat dilihat dari

terbentuknya pelikel putih pada media (Gambar

1a), sedangkan potensi bakteri dalam memproduksi

amilase ditentukan berdasarkan nisbah antara

diamter zona bening (halo) dengan diameter

koloni bakteri. Zona bening terbentuk akibat

amilase yang dibebaskan keluar sel bakteri untuk

memecah makromolekul karbohidrat menjadi

oligosakarida (Gambar 1b).

Konsentrasi pati optimum untuk produk amilase

dari Arthrobacter arilaitensis

Pertumbuhan sel bakteri dan akivitas

amilase pada berbagai konsentrasi substrat yang

diuji bisa dilihat pada Gambar 2 dan Gambar 3.

Pertumbuhan maksimum bakteri terjadi pada

jam ke-48, hal ini ditandai dengan meningkatnya

nilai OD secara drastis. Fase stationer terlihat pada

jam 72 dan mulai mengalami fase kematian dari

jam ke-72 hingga jam ke-120 (Gambar 2). Hasil

analisis aktivitas amilase yang dilakukan

menunjukkan puncak tertinggi terjadi pada jam

ke-72 pada masing-masing konsentrasi pati

yang diuji dengan aktivitas enzim sebesar 2,6 U/

mL untuk konsentrasi 1%, diikuti dengan

konsentrasi 2,5% sebesar 2,3 U/mL, dan 2,2 U/

mL pada konsentrasi 5% (Gambar 3).

pH optimum produksi amilase dari Arthrobacter

arilaitensis

Titik optimum kurva pertumbuhan sel

bakteri ditunjukkan pada jam ke-24 dimana

pertumbuhan sel bakteri sedang berada pada

fase log. Fase stasioner terlihat pada jam ke-48

hingga jam ke-72, lalu setelah jam ke-72 bakteri

menuju fase kematian (Gambar 4). Hasil

analisis aktivitas amilase pada media produksi

dengan pH 7 menunjukkan hasil tertinggi

dengan nilai sebesar 2,1 U/mL, diikuti pH 9

sebesar 1,9 U/mL, pH 6 sebesar 1,5 U/mL, lalu

pH 8 sebesar 1,5 U/mL, dan terakhir pH 5

dengan nilai aktivitas enzim sebesar 1.4 U/mL.

Titik optimum dicapai pada jam ke-72 pada

semua kondisi pH (Gambar 5).

Suhu optimum pertumbuhan bakteri

Nilai absorbansi tertinggi pada kurva

pertumbuhan sel bakteri untuk masing-masing

kondisi suhu ditunjukkan pada jam ke-24,

dimana pertumbuhan sel bakteri sedang dalam

fase log. Titik optimum ditunjukkan pada

kondisi suhu 30ºC. Fase stasioner terjadi pada

jam ke-48 hingga jam ke-72, lalu terjadi

Gambar 1. Bakteri laut Arthrobacter arilaitensis dalam media padat pati 0,5% (A), uji kualitatif aktivitas amilase Arthrobacter arilaitensis pada media ASW agar setelah pewarnaan dengan pewarna Lugol Iodin (tanda panah menun-jukan zona bening ) (B).

218

penurunan pertumbuhan sel bakteri hingga jam

ke-120. Fase lag tidak terlihat pada kurva

pertumbuhan (Gambar 6). Nilai aktivitas

amilase pada suhu 20ºC, 30ºC, 40ºC, dan 50ºC

berturut-turut yaitu 1,7 U/mL, 2.4 U/mL, 1,9 U/

mL, dan terakhir 0,9 U/mL. Aktivitas amilase

menunjukkan jam ke-72 sebagai titik optimum

untuk semua kondisi suhu, namun aktivitas

amilase tertinggi ditunjukkan oleh suhu 30ºC

(Gambar 7).

Ko-subsrat optimum

Hasil analisis pertumbuhan sel bakteri

menunjukkan terjadinya fase log pada jam ke-

24. Fase stasioner pada jam ke-48 dan ke-72.

Setelah itu terjadi penurunan pertumbuhan sel

bakteri. Titik optimum terjadi pada jam ke-24

dengan glukosa dan maltosa sebagai ko-substrat

tinggi (Gambar 8). Aktivitas enzim amilase

menunjukkan hasil optimum pada maltosa

dengan nilai sebesar 2,7 U/mL, lalu galaktosa

sebesar 2,3 U/mL, sukrosa sebesar 2,2 U/mL,

dan terakhir sukrosa sebesar 2,0 U/mL. Titik

optimum terjadi pada jam ke-72 dengan maltosa

sebagai ko-substrat optimum (Gambar 9).

Sumber nitrogen optimum

Kasein merupakan sumber nitrogen terbaik

untuk bakteri laut Arthrobacter arilaitensis

dengan titik optimum pertumbuhan sel bakteri

pada jam ke-24 dan aktivitas enzim amilase

pada jam ke-72. Fase log terjadi pada jam ke-

24, lalu fase stasioner terjadi pada jam ke-48

hingga jam ke-72, dan terjadi penurunan

pertumbuhan sel bakteri mulai dari jam ke-72

(Gambar 10). Aktivitas enzim amilase sumber

Gambar 2. Pertumbuhan sel bakteri laut Arthrobacter arilaitensis pada konsentrasi pati (1, 2.5, 5)%.

Gambar 3. Aktivitas amilase dari bakteri laut Arthrobacter arilaitensis pada konsentrasi pati (1, 2.5, 5)%.

Gambar 4. Pertumbuhan sel bakteri laut Arthrobacter arilaitensis dengan berbagai kondisi pH: 5, 6, 7, 8, 9.

Gambar 5. Aktivitas amilase dari bakteri laut Arthrobacter arilaitensis dengan berbagai kondisi pH: 5 , 6, 7, 8, 9.

219

nitrogen kasein mempunyai nilai sebesar 2.3 U/

mL, lalu tripton sebesar 2,1 U/mL, urea sebesar

2,1 U/mL, dan terakhir dengan ammonium

sulfat dengan aktivitas enzim sebesar 1.7 U/mL

(Gambar 11).

Analisis sebagian gen 16S rDNA Bakteri

Amplifikasi daerah sebagian gen 16S

rDNA menghasilkan produk sekitar 1500 bp

(Gambar 12).

Isolat bakteri laut 76 diidentifikasi sebagai

Arthrobacter arilaitensis berdasarkan analisis

menggunakan BLAST.

PEMBAHASAN

Peremajaan bakteri laut penghasil enzim

amilase dilakukan dalam media pati 0.5% karena

umumnya tingkat pertumbuhan maksimal telah

dicapai pada kondisi tersebut. Bakteri laut

Arthrobacter arilaitensis tumbuh dalam media pati

0.5% saat hari ke-3. Berdasarkan hasil penelitian (Gambar

2), terlihat adanya penurunan jumlah pertumbuhan

sel bakteri mulai dari jam ke-72 hingga jam ke-120,

dimana bakteri mulai mengalami fase kematian.

Habisnya nutrisi dan akumulasi produk inhibitor

seperti asam adalah beberapa faktor yang

mempengaruhi kematian sel (Nurhajati et al.

2009). Fase pertumbuhan optimum untuk bakteri

laut Arthrobacter arilaitensis ditunjukkan berturut-

turut oleh konsentrasi substrat pati 1%, diikuti oleh

konsentrasi pati 2,5%, dan konsentrasi pati 5%.

Berbeda halnya dengan kondisi optimasi konsentrasi

substrat, untuk kurva pertumbuhan sel bakteri

kondisi pH (Gambar 4), suhu fermentasi (Gambar 6),

ko-substrat (Gambar 8), dan sumber nitrogen

(Gambar 10) yang mempunyai pola cenderung

sama yaitu, terjadinya titik tertinggi atau

optimum ketika jam ke-24 (fase log), lalu

terjadi fase stasioner dikisaran jam ke-48

hingga jam ke-72 selanjutnya terjadi fase

kematian. Pada kurva pertumbuhan sel bakteri

Gambar 6. Pertumbuhan sel bakteri laut Arthrobacter arilaitensis Pada berbagai suhu (°C) fermentasi.

Gambar 7. Aktivitas amilase dari bakteri laut Arthrobacter arilaitensis Pada berbagai suhu (°C) fermentasi.

Gambar 8. Pertumbuhan sel bakteri laut Arthrobacter arilaitensis dengan berbagai ko-substrat.

Gambar 9. Aktivitas amilase dari bakteri laut Arthrobacter arilaitensis dengan berbagai ko-substrat.

220

tidak terlihat adanya fase lag, hal ini

dikarenakan pengukuran dilakukan 24 jam

sekali, sehingga perubahan yang terjadi dalam

kurun waktu kurang dari 24 jam tidak diketahui.

Pertumbuhan sel bakteri mencapai titik

optimum pada jam ke-24, terjadi pertumbuhan

yang sangat cepat, setelah jam ke-24 semua

bakteri dalam media produksi mengalami

penurunan jumlah pertumbuhan sel bakteri. Suhu

pertumbuhan optimum memungkinkan pertumbuhan

tercepat terjadi dalam waktu yang singkat yaitu

12-24 jam (Pelczar & Chan 2008).

Bakteri laut Arthrobacter arilaitensis

menunjukkan titik optimum yang berbeda pada

perlakuan optimasi konsentrasi substrat

dibandingkan dengan perlakuan optimasi

lainnya, dimana titik optimum bakteri lebih

lama terjadi. Hal ini disebabkan karena

konstanta laju pertumbuhan dari bakteri

memiliki nilai yang berbeda, yang tergantung

pada kemampuan metabolisme bakteri tersebut

(Dwipayana & Herto 2011). Awal fase adaptasi

yang dilakukan pada awal analisis juga

mempengaruhi perbedaan titik optimum,

dimana fase adaptasi ini dipengaruhi langsung

oleh medium, lingkungan pertumbuhan, serta

jumlah inokulum (Wahyu & Ikhsan 2010).

Analisis kurva pertumbuhan bakteri dibuat

untuk melihat fase-fase pertumbuhan dari

bakteri (Dwipayana & Herto 2011). Selain itu,

untuk mengetahui waktu dan umur kultur

mikroba yang akan dipanen (Prima Nanda

2013).

Konsentrasi pati optimum

Menurut Vishnu et al. (2014), pati dikenal

secara umum sebagai komponen nutrisi untuk

induksi enzim amilolitik. Begitu pula menurut

Hagihara et al. (2001) yang menyatakan bahwa

pati merupakan sumber karbon yang baik untuk

sintesis amilase oleh Arthrobacter arilaitensis

Konsentrasi pati yang akan digunakan dalam

media kultur menjadi hal yang penting karena

konsentrasi nutrien dapat mempengaruhi laju

pertumbuhan dan juga produk kultur.

Konsentrasi pati yang diuji pada penelitian ini

adalah 1%, 2,5%, dan 5%, dipilih berdasarkan

penelitian sebelumnya dengan sedikit modifikasi

(Rahmani et al. 2011).

Aktivitas enzim (Gambar 3) dapat dilihat

pada puncak tertinggi, terjadi pada jam ke-72

pada berbagai konsentrasi pati yang diuji

dengan aktivitas 2.1 U/mL pada jam ke- 72 ke

atas pertumbuhan sel bakteri mengalami fase

kematian . Kondisi lebih baik ditunjukkan oleh

konsentrasi substrat pati 1% yang merupakan

konsentrasi nutrien yang cocok untuk laju

pertumbuhan bakteri laut Arthrobacter arilaitensis

dalam memenuhi kegiatan metabolisme bakteri

tersebut. Kegiatan metabolisme bakteri yang

berjalan dengan baik membuat terjadinya

peningkatan hasil pertumbuhan sel bakteri

maupun aktivitas enzim amilasenya. Hidrolisis

Gambar 10. Pertumbuhan sel bakteri laut Arthrobacter arilaitensis pada berbagai sumber nitrogen.

Gambar 11. Aktivitas amilase dari bakteri laut Arthrobacter arilaitensis pada berbagai sumber nitrogen.

Gambar 12. Analisis sebagian gen 16S rDNA bakteri laut isolate 76, lane 1 DNA marker 1Kb, lane 2 produk PCR isolate 76.

221

pati menjadi molekul yang lebih sederhana

membuat konsentrasi substrat 2.5% dan 5%

memiliki laju pertumbuhan yang rendah dan

juga aktivitas enzim amilase yang lebih kecil

dibanding dengan konsentrasi substrat 1%

karena substrat pati saat dipecah menjadi

molekul yang lebih sederhana jumlahnya

menjadi tinggi dan menjadi penghambat. Hal

tersebut dikarenakan secara kinetik konsentrasi

rendah akan menjadi substrat pembatas,

sedangkan konsentrasi yang tinggi akan menjadi

substrat penghambat (Arnata 2009). Konsentrasi

substrat yang tinggi dapat menjadi penghambat

yang memperlambat proses hidrolisis.

pH optimum produksi

Nilai pH media pertumbuhan bakteri

mempunyai peranan yang sangat penting dengan

menginduksi perubahan morfologi bakteri dan

sekresi enzim (Gupta et al. 2003). Nilai pH juga

mempengaruhi penyerapan nutrisi dan aktivitas

fisiologi mikroba sehingga mempengaruhi

pertumbuhan biomassa dan pembentukan

produknya. pH optimum pertumbuhan mengacu

pada pH ekstraselular lingkungan sementara pH

intraselular harus relatif netral untuk mencegah

rusaknya makromolekul yang labil asam atau

alkalin dalam sel (Tedja 2009).

Nilai pH optimum media untuk pertumbuhan

bakteri laut Arthrobacter arilaitensis yaitu pH 7

(Gambar 4). Ketika pH media produksi

dinaikkan, yaitu pH 8 dan pH 9 terlihat adanya

penurunan jumlah sel bakteri dan aktivitas

enzim amilase yang dihasilkan. Hal ini sama

ketika pH media produksi berada di bawah pH

7, yaitu pH 5 dan pH 6 dimana terjadinya

penurunan aktivitas.

Media produksi dengan pH 7 merupakan

pH optimum untuk pertumbuhan sel dan

aktivitas enzim amilase (Gambar 5). Aktivitas

enzim berkaitan erat dengan strukturnya,

perubahan struktur dapat menyebabkan perubahan

aktivitas enzim. Enzim memiliki struktur native

tersier yang sensitif terhadap pH dan secara

umum denaturasi enzim terjadi pada nilai pH

sangat rendah atau tinggi (Copeland 2000).

Hasil penelitian ini menunjukkan hasil yang

sejalan dengan beberapa penelitian sebelumnya,

dimana pH optimum yang didapat yaitu pH 7,

seperti Bacillus spp. (Vidyalakshmi et al. 2009),

Bacillus licheniformis (Sankaralingam et al. 2012),

Bacillus subtilis strain XK-86 (Kolusheva & A.

Marinova 2007), dan Bacillus marini (Ashwini

et al. 2011).

Suhu optimum pertumbuhan bakteri

Suhu dapat mempengaruhi pola pertumbuhan

bakteri, juga dapat mempengaruhi laju pertumbuhan,

dan jumlah total pertumbuhan organisme

(Pelczar & Chan 2008). Setiap spesies bakteri

tumbuh pada suatu kisaran suhu tertentu, seperti

Bacillus spp. mempunyai suhu optimum 35ºC

(Vidyalakshmi et al. 2009), Arthrobacter

arilaitensis pada suhu 40ºC (Vishnu et al.

2014), Arthrobacter arilaitensis VITRKHB

dengan suhu optimum 45ºC (Bhaskara Rao et

al. 2013), dan Bacillus subtilis pada suhu 37ºC

(Amutha & Priya 2011). Hasil penelitian

menunjukkan bahwa suhu optimum untuk

bakteri laut Arthrobacter arilaitensis yaitu

sebesar 30ºC (Gambar 6). Hal tersebut dikarenakan

suhu yang terlalu rendah atau terlalu tinggi tidak

memungkinkan mikroorganisme untuk tumbuh.

Reaksi kimia dan enzimatik mikroorganisme

meningkat jika suhu meningkat, begitu pula

dengan laju pertumbuhannya. Namun, diatas

suhu tertentu protein tertentu dapat mengalami

denaturasi (Tedja 2009). Suhu pertumbuhan

optimum memungkinkan pertumbuhan tercepat

terjadi dalam waktu yang singkat yaitu 12-24

jam (Pelczar & Chan 2008). Hal ini sesuai

dengan hasil yang diperlihatkan pada Gambar 6,

dimana pertumbuhan sel bakteri mencapai titik

puncak pada jam ke-24. Pola pertumbuhan

bakteri terlihat sangat dipengaruhi suhu, karena

kenaikan 10ºC membuat kecepatan reaksi pun

naik berlipat ganda.

Aktivitas amilase dari bakteri laut Arthrobacter

arilaitensis juga mempunyai hubungan linier dengan

pertumbuhan sel bakteri, yaitu mempunyai nilai

optimum pada suhu 30ºC (Gambar 7). Hasil

yang sama ditunjukkan oleh bakteri Bacillus

licheniformis yang mempunyai suhu optimum

sebesar 30ºC untuk memproduksi enzim amilase

(Sankaralingam et al. 2012). Suhu 30ºC

memperlihatkan nilai aktivitas enzim amilase

yang paling tinggi dibandingkan yang lain

karena reaksi metabolisme mikroorganisme

dikatalisasi dengan baik oleh enzim (Rofi’i

2009).

222

Ko-substrat optimum

Sumber karbon memiliki efek untuk

mengubah strain produksi ataupun kondisi

lainnya (Ashwini et al. 2011). Sifat dan

konsentrasi sumber karbon bergantung pada

mikroorganisme yang akan dikulturkan (Tedja

2009). Penambahan sumber karbon dalam

bentuk karbohidrat berpengaruh baik untuk

produksi enzim. Beberapa jenis karbohidrat

seperti maltosa, sukrosa, glukosa, dan galaktosa

masing-masing diuji dalam penelitian ini agar

didapatkan sumber karbon lain yang dapat

membantu bakteri laut Arthrobacter arilaitensis

untuk menghasilkan produksi optimum amilase.

Penambahan ko-substrat dilakukan sebagai

substrat awal selama bakteri beradaptasi dengan

substrat utamanya (Dwipayana & Herto 2011).

Gambar 8 menunjukkan bahwa pertumbuhan

sel bakteri paling optimal terjadi pada jam ke-24

dengan maltosa dan glukosa sebagai ko-substrat

yang menunjukkan titik optimum tertinggi, lalu

diikuti dengan galaktosa dan sukrosa. Aktivitas

amilase mulai terlihat ketika pertumbuhan sel

bakteri mencapai jumlah sel bakteri optimum

dan aktivitas amilase mencapai titik optimum

ketika pertumbuhan sel bakteri ada dalam fase

stasioner yaitu pada jam ke-72. Gambar 9

menunjukkan bahwa aktivitas amilase optimum

dicapai oleh ko-substrat maltosa. Glukosa

menunjukkan hasil yang berbanding terbalik,

dimana media glukosa baik untuk pertumbuhan

sel bakteri, namun tidak untuk aktivitas amilase.

Beberapa penelitian sebelumnya juga menunjukkan

maltosa sebagai sumber karbon paling baik pada

media pertumbuhan, diantaranya pada Bacillus sp

(Thippeswamy et al. 2006) dan Bacillus spp.

(Grata et al. 2008). Juga, hal yang sama

dilaporkan oleh Santos dan Martinus (2003),

dimana produksi maksimum α-amilase dari

bakteri Bacillus sp pada fase eksponensial (350

U/mL) dengan medium yang mengandung 1%

pati terlarut dan 1% maltosa.

Sumber nitrogen optimum

Keberadaan nitrogen penting untuk protein,

asam nukleat, dan penyusun sel (Tedja 2009).

Aktivitas amilase meningkat nilainya pada saat

pertumbuhan sel bakteri mengalami fase

stasioner dan mencapai titik optimum ketika

fase stasioner berakhir yaitu pada jam ke-72

(Gambar 11). Bakteri yang tumbuh dan

menghasilkan amilase menunjukkan bahwa

terpenuhinya kebutuhan nitrogen didalam media

kultur, karena jika dalam substrat hanya

terdapat sedikit nitrogen, bakteri tidak akan

dapat memproduksi enzim yang dibutuhkan

untuk mensintesis senyawa (substrat) yang

mengandung karbon. Gambar 10 menunjukkan

bahwa kasein merupakan sumber nitrogen terbaik

untuk bakteri laut Arthrobacter arilaitensis

dibandingkan sumber nitrogen lainnya. Akan tetapi

nilai aktivitasnya lebih rendah dari sebelum

ditambahkan sumber nitrogen dari 2,7 U/mL

menjadi 2,3 U/mL. Hal ini menunjukkan bahwa

penambahan sumber nitrogen tidak menyebabkan

peningkatan signifikan terhadap aktivitas amilase

yang diperoleh. Hasil yang ditunjukkan pada

optimasi sumber nitrogen ini tidak berbeda jauh

nilainya dengan media kultur yang tidak

ditambahkan sumber nitrogen lainnya dengan

kondisi yang sama (Gambar 3). Kasein menjadi

sumber nitrogen terbaik untuk bakteri dalam

beberapa penelitian sebelumnya seperti Bacillus

megaterium BPTK5 (Kumar et al. 2012) dan

Bacillus subtilis IP 5832 (Bozic et al. 2011).

KESIMPULAN DAN SARAN

Produksi optimum enzim amilase

ditemukan pada konsentrasi substrat pati 1%,

pH 7, suhu 30ºC, maltosa sebagai ko-substrat

dengan nilai aktivitas enzim amilase 2,7 U/mL.

Penambahan sumber nitrogen tidak menunjukkan

peningkatan aktivitas amilase yang signifikan,

sebagai contoh sumber nitrogen terbaik maltose

menurunkan aktivitas amilase menjadi 2,3 U/

mL. Produksi enzim amilase optimum terjadi

saat pertumbuhan sel bakteri pada fase stasioner

yaitu jam ke-72.

UCAPAN TERIMA KASIH

Tulisan ini merupakan bagian dari kegiatan

hasil peneleitian yang dibiayai oleh dana DIPA

Tematik Puslit Bioteknologi LIPI. Ucapan

terima kasih kami sampaikan kepada segenap Staf

Peneliti Laboratorium Biokatalis dan Fermentasi.

223

DAFTAR PUSTAKA

Amutha, K. & J. Priya. 2011. Effect of pH,

Temperature, and Metal Ions on Amylase

Activity From Bacillus subtilis KCX 006.

International Journal of Pharma and Bio

Sciences 2(2): 407-410.

Arnata, IW. 2009. Pengembangan Alternatif

Teknologi Bioproses Pembuatan Bioetanol

Dari Ubi Kayu Menggunakan Trichoderma

viride, Aspergillus niger, dan Saccharomyces

cerevisiae [Disertasi]. Bogor (ID): Institut

Pertanian Bogor.

Ashwini, K., K. Gaurav, L. Karthik, KV. Bhaskara

Rao. 2013. Optimization, Production and

Partial Purification of Extracellular α-

amylase From Bacillus sp. marini. Archives of

Applied Science Research 3(1): 33-42.

Bhaskara, RKV,, H. Bose, K. Richa, K. Singh ,

L. Karthik & G. Kumar. 2013. RSM

Mediated Optimization of Amylase

Production From Marine Arthrobacter

arilaitensis VITRKHB. Research Journal

of Pharmaceutical, Biological, and

Chemical Sciences 4(4): 523-536.

Bozic, N., J. Ruiz, J. Lopez-Santin, & Z. Vujcic.

2011. Optimization of the Growth and α-

amylase Production of Bacillus subtilis IP

5832 in Shake Flask and Laboratory

Fermenter Batch Cultures. Journal Serbian

Chemical Society 76(7): 965–972.

Copeland, RA. 2000. Methods for Protein

Analysis: A Practical Guide to Laboratory

Protocols. New York: Chapman and Hall.

Grata K, M. Nabrdalik & A. Latala. 2008.

Effect of Different Carbon Sources on

Amylolytic Activity of Bacillus spp.

Isolated From Natural Environment.

Proceedings of ECOpole 2(2).

Gupta, R., P. Gigras, H. Mohapatra, VK.

Goswami, & B. Chauhan. 2003. Microbial α-

amylases: A Biotechnological Perspective.

Process Biochemical. 38:1599-1616.

Hagihara, H., K. Igarashi, & Y. Hayashi. 2001.

Novel Alpha Amylase That Is Highly

Resistant to Chelating Reagents and

Chemical Oxidants From the Alkaliphilic

Bacillus Isolate KSM-K38. Applied and

Environmental Microbiology 67: 1744-

1750.

Kolusheva, T., & A. Marinova. 2007. A Study

of The Optimal Conditions For Starch

Hydrolysis Through Thermostable α-

amylase. Journal of the University of

Chemical Technology and Metallurgy. 42

(1):93-96.

Kumar MDJ, T. Silambarasan, R. Renuga, R.

Kumar, S. Karthigasdevi. 2012. . Production,

Optimization, and Characterization of α-

amylase and Glucose Isomerase Producing

Bacillus megaterium BPTK5 From Cassava

Waste. European Journal of Experimental

Biology 2(3): 590-595.

Liu, J., Z. Zhang, H. Zhu, H. Dang, J. Lu & Z.

Cui. 2011. Isolation and Characterization

of α-amilase From Marine Pseudomonas

sp.K6-28-040. Journal Biotechnology 10

(14): 2733 -2740.

Miller, GL. 1959. Use of Dinitrosalisylic Acid

Reagent for Determination of Reducing

Sugar. Analytical Chemistry 31(3): 426–

428.

Pandey, A., P. Nigam, CR. Soccol, VT. Soccol,

D. Singh & R. Mohan. 2000. Advances in

Microbial Amylases. Biotechnology

Application Biochemical 31:135–152.

Pelczar, MJ., & ECS. Chan. 2008. Dasar-Dasar

Mikrobiologi. Jakarta: UI Press.

Rahmani N, Yopi, A. Andriani, A. Prima. 2011 .

Production and characterization of amilase

anzyme from marine bacteria. Proceeding of

the 2nd International Seminar on Chemistry:

255-259.

Rani, G., P. Gigras, H. Mohapatra, VK. Goswami, &

B. Chauhan. 2003. Microbial α-amylases: A

Biotechnological Perspective Process

Biochemis. 38: 1599-1616.

Rofi’I, F. 2009. Hubungan Antara Jumlah Total

Bakteri dan Angka Katalase Terhadap

Daya Tahan Susu [Skripsi]. Bogor (ID):

Institut Pertanian Bogor.

Sankaralingam S, T. Shankar, R. Ramasubburayan, S. Prakash, C. Kumar C. 2012. Optimization of Culture Condition for the Production of Amylase from Bacillus licheniformis on Submerged Fermentation.American-Eurasian J. Agric & environ. Sci. 12 (11):1507-1513.

Santos, EO., & ML. Martinus. 2003. Effect

Product of the Medium Compositionon

Formation of Amylase by Bacillus sp.

224

Brazilian Archives of Biology and

Technology. 46 : 421-432.

Sivaramkrishnan, S., D. Gangadharan, KD.

Nampoothiri, CR. Sossol & A. Pandey. 2006.

α-amylase From Microbial Sources- An

Overview on Recent Developments. Food.

Technology Biotechnology. 44: 173-184.

Tedja, IS. 2009. Mikrobiologi Esensial 1.

Jakarta: Ardy Agency.

Thippeswamy, S., K. Girigowda, & VH. Mulimani.

2006. Isolation and Identification of α–

amylase Producing Bacillus sp. From Dhal

Industry Waste. Indian Journal of

Biochemistry & Biophysics 43: 295-298.

Vidyalakshmi, R., R Paranthaman & J. Indhumathi.

2009. Amylase Production on Submerged and

Fermentation by Bacillus spp. World Journal

Chemistry 43(4): 89-91.

Vishnu, TS., AR. Soniyamby, BV. Praveesh &

AT. Hema. 2014. Production and

Optimization of Extracellular Amylase

From Soil Receiving Kitchen Waste

Isolate Bacillus sp. VS 04. World Applied

Sciences Journal 29 (7): 961-967.

Whitman, WB., DC. Coleman & Wiebe. 1998. Prokaryotes: The Unseen Majority. Proceeding of the National Academy of Sciences 95: 6578-6583.

PANDUAN PENULIS

Naskah dapat ditulis dalam bahasa Indonesia atau bahasa Inggris. Naskah disusun dengan urutan: JUDUL (bahasa Indonesia dan Inggris), NAMA PENULIS (yang disertai dengan alamat Lembaga/Instansi), ABSTRAK (bahasa Inggris, dan Indonesia maksimal 250 kata), KATA KUNCI (maksimal 6 kata), PENDAHULUAN, BAHAN DAN CARA KERJA, HASIL, PEMBAHASAN, UCAPAN TERIMA KASIH (jika diperlukan) dan DAFTAR PUSTAKA. Penulisan Tabel dan Gambar ditulis di lembar terpisah dari teks.

Naskah diketik dengan spasi ganda pada kertas HVS A4 maksimum 15 halaman termasuk gambar, foto, dan tabel disertai CD. Batas dari tepi kiri 3 cm, kanan, atas, dan bawah masing-masing 2,5 cm dengan program pengolah kata Microsoft Word dan tipe huruf Times New Roman berukuran 12 point. Setiap halaman diberi nomor halaman secara berurutan. Gambar dalam bentuk grafik/diagram harus asli (bukan fotokopi) dan foto (dicetak di kertas licin atau di scan). Gambar dan Tabel di tulis dan ditempatkan di halaman terpisah di akhir naskah. Penulisan simbol a, b, c, dan lain-lain dimasukkan melalui fasilitas insert, tanpa mengubah jenis huruf. Kata dalam bahasa asing dicetak miring. Naskah dikirimkan ke alamat Redaksi sebanyak 3 eksemplar (2 eksemplar tanpa nama dan lembaga penulis).

Penggunaan nama suatu tumbuhan atau hewan dalam bahasa Indonesia/Daerah harus diikuti nama ilmiahnya (cetak miring) beserta Authornya pada pengungkapan pertama kali.

Pustaka didalam teks ditulis secara abjad.

Contoh penulisan Daftar Pustaka sebagai berikut :

Jurnal : Achmadi, AS., JA. Esselstyn, KC. Rowe, I. Maryanto & MT. Abdullah. 2013. Phylogeny, divesity , and

biogeography of Southeast Asian Spiny rats (Maxomys). Journal of mammalogy 94 (6):1412-123. Buku : Chaplin, MF. & C. Bucke. 1990. Enzyme Technology. Cambridge University Press. Cambridge. Bab dalam Buku : Gerhart, P. & SW. Drew. 1994. Liquid culture. Dalam : Gerhart, P., R.G.E. Murray, W.A. Wood, & N.R.

Krieg (eds.). Methods for General and Molecular Bacteriology. ASM., Washington. 248-277. Abstrak : Suryajaya, D. 1982. Perkembangan tanaman polong-polongan utama di Indonesia. Abstrak Pertemuan

Ilmiah Mikrobiologi. Jakarta . 15 –18 Oktober 1982. 42. Prosiding : Mubarik, NR., A. Suwanto, & MT. Suhartono. 2000. Isolasi dan karakterisasi protease ekstrasellular dari

bakteri isolat termofilik ekstrim. Prosiding Seminar nasional Industri Enzim dan Bioteknologi II. Jakarta, 15-16 Februari 2000. 151-158.

Skripsi, Tesis, Disertasi : Kemala, S. 1987. Pola Pertanian, Industri Perdagangan Kelapa dan Kelapa Sawit di Indonesia.[Disertasi].

Bogor : Institut Pertanian Bogor. Informasi dari Internet : Schulze, H. 1999. Detection and Identification of Lories and Pottos in The Wild; Information for surveys/

Estimated of population density. http//www.species.net/primates/loris/lorCp.1.html.