7/25/2019 ita pp

1/23

PROGRAM MAGISTERFARMASIFAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARAMEDAN2016

Oleh:

Yusnita

NIM 147014008

UJI ANTI KANKER KOMBINASI ETIL ASETAT LENKUAS

(Alpinia Purpurat ! "ENAN #$%LUOROURASIL &A"A SEL

KANKER 'OLON SE'ARA IN (ITRO

7/25/2019 ita pp

2/23

Pendahuluan14,1 juta kanker baru dan 8,2 %

kematian akibat kanker di thn 2012,Kanker colon menepatkkan urutanketiga dgn jumlah kasus sebesar1,4 juta (9,6% kematian (!"#$

i eropa kematiankanker colon 20&

'00 di thn 2004

enurut Kemengkes #! 201),!ndonesia menepati urutuan

keempat kanker colon

7/25/2019 ita pp

3/23

Kanker colon

*aktor lingkungan

*aktor +enetis

"dana abnormal sel karena adanamutasi -"

embentuk kolen dan berpoli.erasi, jaringa abnormalterikat dan terlihat darik beberapa ekpresi /rotein

alah satuna adalahkemoterapi

First line therapiy adalag ) * agentkemoterapi namu e.ek sampingna ang

tidak menanangkan

bbrp penelitian mula di arahkan kpd agen

kemoterapika dgn meningkatkan sensititas danmengurangi e.ek samping

7/25/2019 ita pp

4/23

i kembangkanlah pendekatan ilmiah denganpenggunaan kombinasi obar herbal 3kstra asetilengkuas erah untuk mengurangi e.ek samping

dengan adna kombinas ang sinergis 5aberapapenelitian 3kstraketi asetatlengkuas merah#usmarilin

(200&orika7a

kk (200)ukarami "dkk(200)

:aeoungkk (2004

Kombinasi ekstrak lengkua mengandungAcetoxy Chavicol Acetate (ACA). Acetoxychavicol acetate mempunai akti;itas anti

kanker dan antioksidan

/enelitia ini menggunaka uji sitotosiksecara assa dan pemicu

apoptosi mengunakan fowcytometry

7/25/2019 ita pp

5/23

Perumusan Masalah

1 "pakah ekstrak etil asetat engkuas erahmempunai e.ek sitotosik terhadap sel kanker colon* memiliki e.ek sinergis dalam menghambat

proli.erasi sel kanker kolon

7/25/2019 ita pp

6/23

!"#$esa

1 3kstrak etil asetat engkuas erah mempunaie.ek sitotosik terhadap sel kanker colon

7/25/2019 ita pp

7/23

Tu%uan Penel!$!an

1 ntuk mengetahui akti;itas sitotoksik ekstrakn-heksan, etil asetat engkuas merahterhadap sel kanker * dandapat diketahui konsntrasim optimumna

& ntuk mengetahui apakah ekstrak akti. sertakombinasi ekstrak lengkuas merah dan )

*luorourasil ()>* dapat diketahuikonsentarsi optimuna

4 ntuk mengetahui apakah ekstrak akti. sertakombinasi ekstrak engkuas merah dan ) ?Auorourasil ()>* dapat memacu "poptosis

7/25/2019 ita pp

8/23

Man&aa$ Penel!$!an

1 3kstrak engkuas erah dapatdigunakan sebagai terapikomplementer atau terapi subtitusi

pada pengobatan kanker colon

2 apat dilakukan budidaa dan

pengembangan engkuas erahmenjadi sediaan obat tradisional ange.ekti. dan selekti. sebagai anti kanker

7/25/2019 ita pp

9/23

7/25/2019 ita pp

10/23

7/25/2019 ita pp

11/23

5"5 !!!-B""- /"K"

erlampir

7/25/2019 ita pp

12/23

5"5 !!!3C3 /3-3!!"-

/enelitian ini dilakukan denganeksperimental meliputi pemgumpulan

bahan, peniapan bahan, identikasitumbuhan pembuatan ekstrak denganpengujian secara sitotosik denganmengunakan assa dan pengujian

apoptosi dengan Ao7sitometri angdilakukan di uni;ersitas +adjah adaDokakarta

7/25/2019 ita pp

13/23

engkuaserah

disiapkanditimbang sebanyak kurang lebih 50 gram

disortasi basahdicucidiubah bentuk meliputi perajangan ,

pengupasan, pemotonganditempatkan dalam nampandikeringkandisortasi keringditimbang dan dicatat beratnyadimasukan dalam kertas dan simpan

ditempat kering

implisia

7/25/2019 ita pp

14/23

ekstrak rimpang lengkuas

Ampas

Filtra nheksan

Ekstrak n-heksan)

Filtrat etil asetat

E's$ra'e$!l

ase$a$

Ampas

Filtra Etanol

Ampas

Ekstar Etanol

Diuapkan dengan

Rotary evaporator

Diuapkan

denganotaryevapora

tor

Dikeringkan

Dimaserai menggunakanetil asetat dan disaring

Dimaserasi dengan dengan menggunaka n-heksan dan

disaring

Wadah ditutup dan dibiarkan pada suhu kamar

selam 5 hari terlindung dari cahaya

Sesekali di aduk lalu disaring

Dikeringkan

Dimaserasi menggunakan etil asetat dan disaring

Di uapkan denganrotary evaporator

Pembuatan ekstark n heksan, etil asetet dan etanol lengkuas merah

7/25/2019 ita pp

15/23

Karateristik implisiaE3kstrak

1. Makroskopik

2. Mikroskopik

3. Kadar air

4. Kadar abu total

5. Kadar abu tidak larut dalam

asam

6. Kadar sari larut dalam air

. Kadar sari larutdalam etanol

1"lkaloid

2*lo;onoid

&annin

4aponin

)riterpenoid

Eteroid

6+likosida

'+likosida"ntrakinon

krining *itokimia

7/25/2019 ita pp

16/23

Pem(ua$an Me)!a

1/embuatan ediaulbeccoFs odied3agleFs edium (3

2/embuatan edia Komplit 3(K3

&/embuatan media oswell !ark "emorial#nstitute(#/!

4/embuatan media oswell !ark "emorial

#nstitute(#/!)/embuatan edia 199

6/embuatan edia K>199

7/25/2019 ita pp

17/23

/anen el

/rosodur

sel dari inkubator $C2 amati kondisi sel /anen sel dilakukan setelah sel '0>

80% konAuen

5uang media dengan menggunakan pipet /asteur steril

$uci sel 2 kali dengan /5 1G (;olume /5 HI ;olume media

a7alambahkan tripsin>3" 1G (tripsin 0,2)% secara merata dan

inkubasi di dalam inkubator selama & menit

ambahkan media H) ml untuk menginakti.kan tripsin#esuspensi sel dengan pipet sampai sel terlepas satu>satu

(tidak menggerombol "mati keadaan sel di mikroskop #esuspensi kembali jika

masih ada sel ang menggerombol

rans.er sel ang telah lepas satu>satu ke dalam conical sterilbaru

7/25/2019 ita pp

18/23

5 K#

"mbil H&00Jl panenan sel dan masukkanke dalam conical ang lain ambahkan 'ml K dan resuspensi kembali

uang sel ke dalam 7adah (dish ang

telah disiapkan omogenkan

!nkubasi 24 jam dan ganti K esokharina "mati keadaan sel sebelum dan

setelah diganti media

7/25/2019 ita pp

19/23

/3-+!-+"- 3 sel

5uang media dengan menggunakan pipet /asteur steril $uci sel 2 kali dengan /5 1G (;olume /5 HI ;olume media a7al

ambahkan tripsin>3" 1G (tripsin 0,2)% secara merata daninkubasi di dalam inkubator selama &>) menit

ambahkan media H2>& ml untuk menginakti.kan tripsin#esuspensi sel dengan pipet sampai sel terlepas satu>satu (tidak

menggerombol

rans.er sel ang telah lepas satu>satu ke dalam conical steril baruambahkan K H2>& ml #esuspensi sel

"mbil 10 J panenan sel dan pipetkan ke hemactometer

itung sel di ba7ah mikroskop (in;ertedatau mikroskop

cahaabiasa dengan counter2 rans.er sejumlah sel ang diperlukan ke dalam conical ang lain

dan tambahkan K sesuai dengan konsentrasi sel angdikehendaki&

7/25/2019 ita pp

20/23

U! S!"#"#$S!$ %&"#D& %""

"mbil sel dari inkubator $C2, amati kondisi sel +unakan kultursel dalam kondisi '0> 80% konAuen untuk dipanen el

kepadatan 1G104

edium dibuang di ganti ang baru di tambah ekstrak sampel ujidengan consol;en C etelah sel normal kembali, segera buat serikonsentrasi sampel untuk perlakuan (termasuk kontrol sel dan kontrolC

asukkan 100 Jl /5 ke dalam semua sumuran ang terisisel, kemudian buang /5 dengan cara membalik plate

iriskan sisa cairan dengan tisu

!nkubasi sel di dalam inkubator selama '( jam dgn

suhu )*o+

!nkubasi sel di dalam inkubator selama '( jam dgn suhu )*o+

%asukkan seri konsentrasi sampel ke dalam sumuran di dalam

inkubator ama inkubasi tergantung pada e.ek perlakuan terhadap

sel ika dalam /aktu '( jam belum terlihat e.ek sitotoksik, inkubasi

kembali selama '( jam /aktu inkubasi total1 '(-(2 jam3

7/25/2019 ita pp

21/23

5uang media sel, cuci /5 1G dan tambahkan reagen 100 Jl ke setiap sumuran, termasuk kontrol media diinkubasi sampai terbentuk *ormaLan

#eaksi dihentikan tambahkan stopper 10%dalam 0,1 - $l 5ungkus platedengan kertas ataualumunium .oil

erapan di baca dgn measukkan ke dalam 3!"reader 5aca absorbansi masing>masing sumuran

dengan 3!" reader dengan MN))0>600 nm

!nkubasi sel di dalam inkubator selama ( sampai

4 jam jam dgn suhu )*o

+

7/25/2019 ita pp

22/23

B! KC5!-"! 3-+"- "+3- K3C3#"/! "mbil sel dari inkubator $C2, amati kondisi sel

rans.er sel ke dalam sumuran, masing>masing 100 Jl etiap

kali mengisi 12 sumuran, resuspensi kembali sel agar tetaphomogen

"mati

!nkubasi sel di dalam inkubator selama semalam (agar selpulih kembali setelah panen

etelah sel normal kembali, segera buat seri konsentrasisampel dan agen kemoterapi (misal oGorubicin untukperlakuan (termasuk kontrol sel eri konsentrasi terdiri dari 4

konsentrasi !$)0, O !$)0, I !$)0,dan P !$)0

asukkan 100 Jl /5 ke dalam semua sumuran ang terisi sel, asukkan seri konsentrasi sampel ke dalam sumuran Q )0 Jl

(triplo asukkan seri konsentrasi ) *lorourasil untukkombinasi Q )0 J

7/25/2019 ita pp

23/23

!nkubasi di dalam inkubator ama inkubasi tergantungpada e.ek perlakuan terhadap sel Bika dalam 7aktu 24 jam

belum terlihat e.ek sitotoksik, inkubasi kembali selama 24jam (7aktu inkubasi total 24>48 jam

5uang media sel, cuci /5 1G (seperti pada no 11, dantambahkan reagen 100 Jl ke setiap sumuran !nkubasisel selama 2>4 jam di dalam inkubator (sampai terbentuk

.ormaLan Bika .ormaLan telah jelas terbentuk, tambahkan stopper

10% dalam 0,1 - $l

5ungkus platedengan kertas atau alumunium .oil daninkubasikan di tempat gelap (suhu ruangan semalam

(jangan diletakkan di inkubatorR asukkan ke dalam 3!"

5aca absorbansi masing>masing sumuran dengan 3!"reader dengan MN))0>600 nm ()9) nm, tekan tombol