Isolasi Flavonoid Dari Akar Citrus Sinensis

8/4/2019 Isolasi Flavonoid Dari Akar Citrus Sinensis

1/7

ISOLASI FLAVONOID DARI AKAR CITRUS SINENSIS

( Tugas Kimia Organik Bahan Alam )

Oleh

Ricardo Simarmata

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

2011


2/7

ISOLASI FLAVONOID DARI AKAR CITRUS SINENSIS

Citrus sinensis adalah tanaman asli Asia Pasifik dan wilayah subtropis lain di dunia. Ekstrak Etil

asetat dari akar Citrus sinensis mengandung senyawa flavonoid. Senyawa itu digambarkan

sebagai 5, 8-dihidroksi-6, 7, 4 '-trimethoxy berdasarkan massa UV, IR dan NMR (1 H, 13C)

studi spektral.

A. Pendahuluan

Citrus sinensis merupakan tanaman obat penting yang banyak ditemukan di daerah

Shahjahanpur. Tanaman ini diresepkan sebagai obat tradisional untuk mengobati berbagai

penyakit. Ia telah digunakan sebagai antidiabetes (Hamendra dan Anand, 2007), antimikroba(Cacciona et al.,1998), antijamur (Strange Jr et al 1993.), agen hipotensi(Kumamoto et al., 1986),

antioksidan (Proteggente et al 2003;.. Kanazi et al, 2008), karminatif, obat nyamuk, antibakteri,

larvasida, antivirus, uricosuric, anti-ragi, antihepatotoxic dan antimutagenik (Han, 1998). Daun

dan kulit buah digunakan untuk membunuh larva nyamuk dan tungau (Mwaiko, 1992). Ada

bukti kuat bahwa minyak esensial dari Citrus sinensis memiliki aktivitas Larvasida, penolak dan

fumigan terhadap nyamuk Aedes aegypti L. (Omobuwajo et al, 2005.). Ekstrak daun C. sinensis

telah digunakan dalam pengobatan tradisional untuk mengobati gangguan saraf dan

meningkatkan pencernaan makanan.

Meskipun monoterpen, seskuiterpen, asam giberelat, fitol, amyrin, limonin dan glucosida-nya,

derivat nomilin, karotenoid, alkaloid, brassinolide ,castasterone, sitosterol, hidrokuinon, asam

sinapic, anisol, asam ferulat, etrogol, vitamin C, asam coumaric, citrusins ( proteid), asam

caffeic, kumarin, pektin, stigmasterol dan flavonoid diisolasi dari Citrus sinensis (Han 1998),

hanya flavonoid yang menyajikan berbagai sifat farmakologis (Bylka, dan Pilewski Matlawska

2004). Flavanon yang lazim ada dalam Citrus sinensis :hesperidin, nobiletin, naringin, dan

tangeretin. Hesperidin menunjukkan sifat sebagai anti-inflamasi ,antihipertensi, analgesik ,

diuretik dan hipolipidemik (Gil-Izquierdo et al, 2001.). Ia juga memiliki sifat sebagai

antioksidan, anti-alergi, vasoprotective dan anti kanker (Proteggente, 2003;. Al Kanazi et al,

2008.). Nobiletin adalah sebuah flavon anti-inflamasi (Lin, Sato dan Takayama 2003) dan

imunomodulator obat-obatan. Telah terbukti memiliki efek penghambatan terhadap radang kulit


3/7

dalam phorbol ester-induksi, oksidatif stess dan promosi tumor pada tikus (Murakami dan

Nakamura Torikai 2000). Flavonoid lain,adalah naringin yang menunjukkan sifat sitoprotektif,

antiulcer (Martin et al, 1994.) dan aktivitas antioksidan (Pietta, 2000).

B. Metode

1. Bahan Tanaman

Akar dan daun Citrus sinensis didapatkan dari daerah pedesaan di kabupaten Shahjahanpur, pada

Januari 2007. Tumbuhan ini diidentifikasi oleh Departemen Botani G. F. College(University of

Rohilkhand) Shahjahanpur. Material tanaman segar atau kering dapat digunakan sebagai sumber

untuk ekstraksi komponen tanaman. Bahan segar yang dipanen dan dikeringkan yang disimpan

dalam jangka waktu lama dapat mengalami perubahan kualitatif. Daun dan akar tua yang rusak

oleh serangga dan penuh dengan jamur harus dibuang. Bahan tanaman kering (sekitar 1 kg)

digiling menjadi bubuk halus dan diekstraksi berturut-turut dengan heksana, kloroform, etil

asetat dan metanol.

2. Instrumentasi

Spektrum penyerapan ultraviolet tercatat pada spektrometer Perkin-Elmer Lambda 20 Bio UV.

Spektroskopi IR dilakukan dengan spektrometer inframerah 1710-Perkin Elmer transformasi

Fourier. Spektrum NMR dicatat pada Bruker avance DRX-300 (300, 100 Hz). Pergeseran kimia

ditunjukkan dalam nilai-nilai (ppm) dengan tetramethylsilane (TMS) sebagai acuan internal.

FEBMS dicatat dalam 1021/DA-6000 spektrometer massa JEOLSX. Kromatografi kolom

dilakukan dengan menggunakan gel silika (Merk 7749).

3. Ekstaksi dan Isolasi

Akar kering citrus sinensis pertama kali dihilangkan lemaknya dengan heksana (3 L x 5 kali),

kemudian disokletasi dengan kloroform, etil asetat (EtOAc) dan metanol (3 L x 5 kali) . EkstrakEtOAc kemudian diuapkan pada kondisi vakum pada rotary evaporator di bawah 50 C untuk

mendapatkan massa kasar (60 g). Suspensi diaduk baik dengan silika gel (100-150 gram dalam

petrolium eter pada suhu 60 C-80 C dituangkan ke dalam kolom (diameter 150 cm dan 50

mm). Ketika penyerap berlangsung baik, kelebihan petroleum-eter akan melewati kolom. Residu

tersebut diadopsi oleh silika gel dalam petroleum-eter dan dicerna dalam kolom. Kolom dielusi


4/7

berturut-turut dengan heksana, kloroform, metanol EtOAc, dan campuran dari larutan tersebut

berdasarkan peningkatan kepolaran. Elusi dengan CHCl3:MeOH (7: 1) diberikan bubuk kuning

(1,23 g). Senyawa yang memberi tes Shinoda positif dan larutan beralkohol dari FeCl 3 (alc)

memberikan warna hijau.

C. Hasil dan Pembahasan

1. Hasil

Identifikasi Hasil identifikasi

m.p (melting

point)

170C172C.

UV (MeOH)

max

272 dan 334 nm

Spektrum IR(KBr) max cm-1

3488, 1632, 1591, 1498, 1039, 811

Spektrum IH

NMR

(300 Hz, CDCl3) : 12.68 (1H, s, 5-OH), 8.59 (1H, s, 8-OH), 3.90-4.01

(9H, s, 3x OCH3), 7.86 (2H, d, J=8.6 Hz, H-2, H-6), 6.98 (2H, d, J=8.6

Hz, H-3, H-5), 6.53 (1H, s, H-3)

Spektrum 13C

NMR

(100 Hz, CDCl3) : 162.9 (C-2), 101.5 (C-3), 183.3 (C-4), 151.4 (C-5),

129.9 (C-6), 158.2 (C-7), 128.1 (C-8), 139.9 (C-9), 108.4 (C-10), 125.4

(C-1), 129.2 (C-2/6), 113.9 (C-3/5), 161.4 (C-4), 56.4 (6 OCH3),56.1 (7 OCH3), 55.5 (4 OCH3).

Spectrum MS

(m/z)344 [M+H]+, 329 [M CH3]+, 316 [M CO]+, 314 [M 2xCH3]+,301 [M COCH3]+, 197 [r. D. A. cleavage], 169 [197 CO]+, 153 [169

CH3]+, 141 [169 CO]+, 135 [fragmented ion peak], 126 [141 CH3]+,

113 [141 CO]+ and 107 [135 CH3]+ .

2. Pembahasan

Senyawa hasil diisolasi dari ekstrak EtOAc dari elusi campuran kloroform: metanol (7:1).

Senyawa ini menunjukkan tes positif terhadap uji Besi klorida dan Shinoda untuk flavonoid, ini

menunjukkan bahwa senyawa yang mungkin merupakan flavonoid (Geissman 1962; Markham

1982). Hasil ini juga menyarankan bahwa senyawa ini berasal flavonoid dengan gugus hidroksil

bebas pada C-5 (Geissman 1962). Dalam spektrum massa elektrospray, puncak ion molekul

senyawa ini pada m/z 344 [M + H] + terkait dengan rumus molekul C18H16O7. Spektrum UV


5/7

memperlihatkan serapan maksimum pada 272 dan 334 nm, menunjukkan bahwa ini milik

keluarga senyawa flavon, diganti di posisi 3 - (Markham dan Mabry 1975). Spektrum IR

senyawa menunjukkan pita penyerapan hidroksil (3488 cm-1), chelated , - karbonil tak jenuh

yang melekat pada inti aromatik (1632, 1591, 1448 cm-1), kelompok metoksi (1039 cm-1) dan

cincin benzen -substitusi (811 cm-1) fungsional (MabryMarkham dan Thomas 1970).

Spektrum 1H NMR menunjukkan sinyal pada 12,68 (1H, s), terkait dengan kelompok hidroksil

chelated. Selanjutnya, sinyal diamati pada 8,59 (1H, s) adalah karena kelompok hidroksil

fenolat. 1H NMR menampilkan singlet di 6,53 yang dapat ditujukan untuk proton H-3

(Markham dan Mabry 1975). Tiga singlet diamati pada rentang 3,90 - 4,01 (9H, s) ditujukan

untuk tiga kelompok metoksi. 1H NMR juga menunjukkan dua doublet proton pada 7,86 (2H,

d, J = 8,6 Hz), 6,98 (2H, d, J = 8,6 Hz), ditujukan untuk proton H-2 '/ H-6' dan H-3' /H-5'(Mabry,

Markham dan Thomas 1970). Munculnya dua doublet dan memiliki nilai konstanta kopling

menunjukan adanya kelompok metoksi pada C-4 '. Spektrum massa senyawa juga menunjukkan

puncak massa yang signifikan pada m / z 344 [M + H], 329 [M-CH3]+, 316 [M-CO] +, 314 [M-

2XCH3]+, 301 [ M-CO-CH3]

+, 197 [r.D.A pembelahan], 169 [197 - CO]+, 153 [169-CH3], 141

[169-CO], 135 [fragmentasi ion puncak], 126 [141-CH3], 113 [141-CO]+ dan 108 [135-CH3]

+.

Pola fragmentasi MS jelas menunjukkan bahwa dua metoksi dan dua gugus hidroksil terikat pada

cincin-A, sedangkan kelompok metoksi yang tersisa terkait dengan cincin-B pada C-4' (Harborne

dan Baxter, 1999) . Spektrum UV senyawa dalam aluminium klorida, tetap tidak berubah setelah

penambahan asam klorida, yang menetapkan adanya hidroksi C-5 dan satu kelompok metoksi di

C -4 '(Markham dan Mabry, 1975). Pola fragmentasi massa juga menegaskan bahwa C-6 ini

diblokir oleh sekelompok metoksi. Senyawa memberikan uji Gibb negatif, menunjukkan adanya

gugus hidroksil lain di C-8, oleh karena itu, kelompok metoksi sisanya harus pada posisi C-7

(Porter, 1988, Porter 1994, Harborne dan Williams, 2000). Dari data spektal 1H NMR tersebut,

senyawa diidentifikasi sebagai 5, 8-dihidroksi-6, 7, 4 '-trimethoxy (Gbr. 1). Struktur ini

selanjutnya diperjelas oleh studi spektra13

C NMR. Spektrum13

C NMR senyawa menunjukkantotal 16 sinyal dari 18 atom karbon. Sebuah sinyal diamati pada 183,3 dan ditugaskan ke C-4.

Sinyal diamati pada 56.4, 56.1 dan 55.5 ditugaskan untuk tiga kelompok metoksi pada C-6 ,C-

7 dan C-4'. Dua sinyal lain yang diamati pada 129,2, dan 113,9 ditujukan untuk masing-

masing C-2 '/ C-6' dan C - 3 '/ C-5'(Agrawal, 1989).


6/7

D. Kesimpulan

Kami telah berhasil mengisolasi flavonoid dari tanaman Citrus sinensis. Berdasarkan beberapa

data spektral yang telah dipaparkan, senyawa tersebut diidentifikasi sebagai 5, 8-dihidroksi-6, 7,

4'-trimethoxyflavone, seperti terlihat pada gambar 1.

E. Daftar Pustaka

AGRAWAL, P. K. (Ed.,) (1989) Carbon-13 NMR of Flavonoids (Amsterdam: Elsevier).

BRAHMACHARI, G., GORAI, D., CHATTERJEE, D. & MISTRI, B. (2004) A novel

flavonoids constituent ofLimnophila indica,Indian Journal Chemistry B, 43: 219

BYLKA, W., MATLAWSKA, I. & PILEWSKI, N.A. (2004) Natural Flavonoids as

Antimicrobial Agents,Journal of the American Nutraceutical Association, 7: 2431.

CACCIONI, D. R., GUIZZARDI, M., BIONDI, D. M., RENDA, A. & RUBERTO, G. (1998)

Relationship between volatile components of citrus fruit essential oils and antimicrobial

action on Penicillium digitatum and Penicillium italicum,International Journal of Food

Microbiology, 43: 7379.

CHALIHA, B. P., SASTRY, G. P. & RAO, P. R. (1965) Isolation of a new flavone,

Tetrahedron, 21:1441-1443.

GEISSMAN, A. (Ed.,) (1962) The Chemistry of Flavonoid Compoundspp. 72 (New York: The

MacMillan Company).


7/7

GIL-IZQUIERDO, A., GIL, M. I., FERRERES, F. & TOMAS-BARBERAN, F. A. (2001) In

vitro availability of flavonoids and other phenolics in orange juice, Journal of Agricultural

and Food Chemistry, 49: 10351041.

HAMENDRA, S. P. & ANAND, K. (2007) Antidiabetic potential ofCitrus sinensis and

Punica granatumpeel extracts in alloxan treated male mice,Bio Factors, 31: 1724.

HAN, S. T. (1998) Medicinal Plants in the South Pacific, World Health Organization,

(WHO), Regional Publications West Pacific Series No. 19, Manila.

HARBORNE, J. B. & BAXTER, H. (Ed.,) (1999) The Handbook of Natural Flavonoids Vol. 1

and 2 (Chichester: John Wiley and Sons).

HARBORNE, J. B. & WILLIAMS, C. A. (2000) Advances in flavonoids research since 1992,

Phytochemistry, 55: 481504.

HERTOG, M. G. L., FESKENS, E. J. M., HOLLMANN, P. C. H., KATAN, M. B. &

KROMBOUT, D. (1994) Dietary flavonoids and cancer risk in the Zutphen Elderly Study,

Nutrition and. Cancer, 22: 175 184.

MWAIKO, G. L. (1992) Citrus peel oil extracts as mosquito larvae insecticides,East African

Medical Journal, 69: 223226.

OMOBUWAJO, O. R., GBOLADE, A. A., NIA, R. & ADEWOYIN, F. B. (2005) 11th Napreca

Symposium Abstracts, The 11th Symposium of the Natural Product Research Network for

Eastern and Central Africa (NAPRECA) August 9th12th, Madagascar, Antananarivo, p. 72.

PIETTA, P. -G. (2000) Flavonoids as Antioxidants,Journal Natural Product, 63: 10351042.

PORTER, L. J. (1988) IN: HARBORNE, J. B. (Eds.). The Flavonoids, Advances in Research

since 1980 (London: Chapman & Hall).

PORTER, L. J. (1994) IN: HARBORNE, J. B. (Eds.). The Flavonoids, Advances in Research

since 1986(London: Chapman & Hall).

Isolasi Flavonoid Dari Akar Citrus Sinensis

Documents

Transcript of Isolasi Flavonoid Dari Akar Citrus Sinensis