ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI PADA KLOAKA

IMAGO BETINA ULAT SUTERA LIAR Attacus atlas L.

(Lepidoptera: Saturniidae)

MUHAMMAD FAJAR

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2015

PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DANSUMBER

INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudulIsolasi dan Identifikasi

Bakteri pada Kloaka Imago Betina Ulat Sutera Liar Attacus atlas L. (Lepidoptera:

Saturniidae) adalah benar karya saya denganarahan dari komisi pembimbing dan

belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber

informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak

diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam

Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.

Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut

Pertanian Bogor.

Bogor, Januari 2015

Muhammad Fajar

NIM B04100164

ABSTRAK

MUHAMMAD FAJAR. Isolasi dan Identifikasi Bakteri pada Kloaka Imago

Betina Ulat Sutera Liar Attacus atlas L. (Lepidoptera: Saturniidae). Dibimbing

oleh USAMAH AFIFF dan DAMIANA RITA EKASTUTI.

Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi bakteri pada kloaka ulat

sutera liar Attacus atlas menggunakan metode yang umum. Sampel yang telah

disiapkan diambil menggunakan ose dan dibiakan ke dalam agar darah dan

MacConkey Agar (MCA) dengan tehnik goresan T. Koloni yang tumbuh pada

agar darah dan MCA dibiakkan kembali ke trypticase soy agar (TSA). Identifikasi

bakteri dilakukan dengan media identifikasi yakni indol, Simmon’s citrate Agar,

TSIA, Oksidase, Urea, Voges Proskauer (VP) dan kaldu gula-gula (glukosa,

sukrosa, manitol, maltosa, dan laktosa). Pada sampel imago tersebut terdapat 3

genus bakteri yakni Bacillus sp., Aeromonas sp. dan Pseudomonas sp.

Kata Kunci : A. atlas, bakteri, kloaka, identifikasi

ABSTRACT

MUHAMMAD FAJAR. Isolation and Identification Bacteria of Female Cloaca

Imago Wild Silkworm Attacus atlas L.(Lepidoptera: Saturniidae). Supervised by

USAMAH AFIFF and DAMIANA RITA EKASTUTI.

This study aimed to identify bacteria in the cloaca of wild silkworms Attacus

atlas using common methods. Samples that have been prepared are taken using the ose and planted into the blood agar and MacConkey Agar (MCA) with T streaking. Each form colonies growing on blood agar and MCA were subculture onto trypticase soy agar (TSA). Identification of bacteria used media identification i.e. indole, Simmon's citrate Agar, TSIA, Oxidase, Urea, Voges proskauer (VP) and broth of karbohidrat (glucose, sucrose, maltose, manitol and lactose). The results showed that on the imagoes there were 3 genera of bacteria such as Bacillus sp., Aeromonas sp., and Pseudomonas sp..

Keywords: A. atlas, bacteria, cloaca, identification

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI PADA KLOAKA

IMAGO BETINA ULAT SUTERA LIAR Attacus atlas L.

(Lepidoptera: Saturniidae)

Skripsi

sebagai salah satu syarat memperoleh Gelar

Sarjana Kedokteran Hewan pada

Fakultas Kedokteran Hewan

Institut Pertanian Bogor

MUHAMMAD FAJAR

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2015

Judul Skripsi: Isolasi dan Identifikasi Bakteri pada Kloaka Imago Betina Ulat Sutera Liar Attacus Atlas L. (Lepidoptera: Saturniidae}

Nama NIM

: Muhammad Fajar : B04100164

Disetujui oleh

Drh Usamah Afiff, MSc Pembimbing I

Tanggal Lulus: .1 4 JAN 2015

Dr Drh Damiana Rita Ekastuti, MS, AIF Pembimbing II

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa ta’ala atas

segala karunia-Nya sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan. Tema yang

dipilih dalam penelitian yang dilaksanakan sejak bulan Januari 2014 ini ialah

identifikasi bakteri, dengan judul Identifikasi Bakteri pada Kloaka Imago betina

Ulat Sutera Liar Attacus atlasL.(Lepidoptera : Saturniidae).

Ungkapan terima kasih penulis sampaikan teruntuk Bapak Syahruddin dan

Mama Nurrahmah atas doa yang tak henti mengalir serta teruntuk Fauzan, Faisal,

Om Hadi dan Acil Maris yang senantiasa memberi dukungan. Terima kasih

penulis ucapkan pula kepada Bapak Drh Usamah Afiff, MSc dan Ibu Dr Drh

Damiana Rita Ekastuti MS. AIF selaku pembimbing. Di samping itu, penghargaan

penulis sampaikan kepada Bapak Nursam dari perkebunan teh PTPN VIII

Panleujar kabupaten Purwakarta provinsi Jawa Barat, yang telah membantu

selama pengumpulan bahan penelitian Serta, Pak Ismed yang membantu dalam

menyiapkan bahan penelitian. Selain itu, penulis juga mengucapkan terimakasih

kepada sahabat yang selalu mendukung saya yakni Hairiah Latief, Bagus

Satriawan, Marwani Dianty, Diana Asriastita, Haryati Istiqomah, Windy Alvianty

serta sahabat lemes yakni Mas Abid, Mbak Intan, Gambreng, Tri, Dince, Novan

dan Kukuh serta kepada Rahmad Arsy dan Andra sebagai sahabat seperjuangan

dalam penelitian yang penulis jalani. Tak lupa teruntuk Deviana Novitasari yang

selalu membantu dan mendoakan penulis selama ini.

Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Januari 2015

Muhammad Fajar

DAFTAR ISI

PENDAHULUAN

Latar Belakang 1

Tujuan Penelitian 1

Manfaat Penelitian 1

TINJAUAN PUSTAKA

Taksonomi Ulat Sutera Liar (Attacus atlas) 2

Bakteri 3

Bakteri pada Ulat Sutera Bombyx mori 4

MATERI DAN METODE

Lokasi dan Waktu Penelitian 4

Bahan dan Alat 4

Prosedur Penelitian 5

Identifikasi Bakteri 7

Analisis Data 7

HASIL DAN PEMBAHASAN

Isolasi Bakteri 8

Pewarnaan Gram 10

Identifikasi Bakteri 11

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan 14

Saran 14

DAFTAR PUSTAKA 14

DAFTAR TABEL

1 Identifikasi bakteri pada ulat sutera B. mori yang sakit 4

2 Hasil pengamatan morfologi koloni yang tumbuh pada media Agar

darah 8

3 Hasil pengamatan morfologi koloni yang tumbuh pada media Mac

Conkey Agar (MCA) 8

4 Hasil pengamatan morfologi koloni dari agar darah ke trypticase soy

agar (TSA) 9

5 Hasil pengamatan morfologi koloni dari macconkey agar (MCA)

ketrypticase soy agar (TSA) 9

6 Hasil pengamatan mikroskopis pada koloni yang berasal dari agar darah 10

7 Hasil pengamatan mikroskopis pada koloni yang berasal dari MCA 10

8 Hasil uji Indol, TSIA, Oksidase, Urea, Sitrat dan VP 11

9 Hasil uji kaldu gula-gula 12

DAFTAR GAMBAR

1 Siklus hidup Attacus atlas 2 2 Diagram alir identifikasi bakteri Gram positif 6 3 Diagram alir identifikasi bakteri Gram negatif 7 4 Koloni β hemolitik pada media Agar darah 8 5 Koloni yang terbentuk pada media MCA 9 6 Uji Oksidase 12 7 Uji TSIA 12 8 Uji Urea 13 9 Uji Indol 13

10 Uji Sitrat 14 11 Uji VP 14 12 Uji Gula-gula 15 13 Aeromonas sp., pewarnaan Gram, perbesaran objektif 100x 16

1

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Indonesia merupakan negara yang diapit oleh dua benua yakni benua Asia

dan Australia serta diantara 2 samudra yakni Samudera Pasifik dan Hindia. Selain

itu, Indonesia juga terletak pada 60 LU, 110 LS, 97-1410 BT. Indonesia menjadi

negara yang berbasis pertanian karena letak yang sangat strategis dan memiliki

kesuburan tanah yang tinggi. Selain itu, lingkungan tropis membuat banyak flora

dan fauna dapat hidup dengan baik di Indonesia. Salah satu hasil pertanian yang

memiliki nilai jual tinggi adalah sutera. Menurut Riskomar (2000), permintaan

dan harga sutera yang berasal dari ulat sutera liar lebih tinggi dibandingkan sutera

biasa. Hal ini karena memiliki warna benang sutera yang menarik yaitu cokelat

keemasan, lebih mengkilat, dan harga jual kokon yang tinggi (Rianto 2009). Salah

satu ulat sutera liar yang mulai banyak dibudidayakan adalah Attacus atlas (A.

atlas).

Keindahan serta keunggulan yang dimiliki sutera yang berasal dari Attacus

atlas menyebabkan permintaan terhadap sutera tersebut cukup tinggi sehingga

kebutuhan kokon pun menjadi ikut meningkat sedangkan produksi kokon belum

banyak. Saat ini kebanyakan kokon A. atlas diambil dari alam, jika hal ini di

lakukan terus menerus akan menyebabkan kelangkaan ulat sutera liar A. atlas. Di

alam tingkat keberhasilan budidaya A. atlas masih rendah. Hal ini dikarenakan

perubahan lingkungan yang tidak menentu (anomali cuaca) serta pengaruh

predator, parasite,dan faktor penyebab lainnya (Rianto 2009), sehingga diperlukan

pembudidayaan yang tepat agar kelangkaan tersebut dapat dihindari dan dapat

meningkatkan nilai ekonomi.

Dewasa ini banyak penyakit dari hewan liar yang muncul dan menjadi

outbreak di dunia seperti Middle East Respiratory Syndrome (MERS), ebola, dan

Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS). Hal ini harus diwaspadai

keberadaannya karena ditakutkan zoonosis ke manusia dan hewan lainnya. Oleh

karena itu, perlu dilakukan pengamatan keberadaan bakteri pada A. atlas agar

dapat diketahui jenis bakteri dan sifatnya sehingga dapat dilakukan pencegahan

penularan ke manusia atau ke hewan lainnya.Kloaka merupakan salah satu bagian

tubuh yang penting karena dalam reproduksi A. atlas kloaka akan menjadi saluran

utama untuk mengeluarkan telur, apabila kloaka terkontaminasi maka akan ikut

mengkontaminasi telur tersebut. Telur yang terkontaminasi akan mempengaruhi

perkembangan telur selanjutnya dan dapat membahayakan pembudidayanya.

Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui bakteri yang terdapat dalam

kloakaimago betina ulat sutera liar Attacus atlas.

2

Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat untuk memberikan informasi

mengenai bakteri yang terdapat pada kloaka imago betina ulat sutera liar Attacus

atlas.

TINJAUAN PUSTAKA

Taksonomi Ulat Sutera Liar (Attacus atlas)

Pengembangan pemanfaatan ulat sutera liar dimulai tahun 1995 di

Yogyakarta. Salah satu yang yang telah dimanfaatkan adalah Attacus atlas.

Taksonomi A. atlas menurut Peigler (1989), sebagai berikut:

Filum : Arthropoda

Kelas : Insecta

Ordo : Lepidoptera

Famili : Saturniidae

Genus : Attacus

Spesies : Attacus atlas

Attacus atlas merupakan serangga dari ordo Lepidoptera yang ukuran

tubuhnya besar, sehingga sering disebut kupu-kupu gajah (si rama-rama). Attacus

atlas merupakan serangga nokturnal yang tersebar hampir diseluruh Indonesia

karena memiliki adaptasi lingkungan tropis yang cukup baik (Awan 2007). A.

atlas merupakan serangga yang poikiloterm dimana suhu tubuhnya berfluktuasi

sesuai dengan suhu lingkungan sehingga fluktuasi suhu dan kelembaban sangat

menentukan keberhasilan hidup larva selama pemeliharaan. Kelembaban dan

aliran udara juga mempengaruhi suhu tubuhnya. Bila tidak ada aliran udara diatas

tempat pemeliharaan, suhu tubuh ulat akan meningkat sejalan dengan

meningkatnya suhu lingkungan (Mulyani 2008).

Attacus atlas adalah serangga holometabola yang melewati stadia telur,

larva, pupa dan imago (Triplehorn & Johnson 2005). Menurut Peigler (1989),

siklus hidup A. atlas tersaji pada Gambar 1

Gambar 1 Siklus hidup Attacus atlas (sumber: Peigler 1989)

3

Berdasarkan siklus tersebut pada instar I berlangsung selama 4–6 hari

ditandai dengan kepala berwarna hitam, lalu pada instar II terjadi selama 4–6 hari

mulai ditutupi serbuk putih, instar III sampai instar IV selama 4–6 hari. Pada

instar ini terjadi perubahan berupa munculnya warna merah di bagian lateral

segmen tubuhnya, instar V berlangsung selama 7–8 hari dengan perubahan bentuk

tubuh yang mulai gemuk. Pada instar enam terjadi selama 10–12 hari merupakan

fase instar terlama karena larva mulai memasuki stadium pupa dan akan

membentuk kokon yang berbeda dengan fase lain. Fase pupa terjadi selama 20–26

hari selanjutnya akan muncul imago(Peigler 1989).

Bakteri

Bakteri berkembang biak dengan membelah diri dan hanya dapat dilihat

menggunakan mikroskop. Bakteri mempunyai beberapa organel yang dapat

melaksanakan beberapa fungsi hidup (Waluyo 2004).Spesies bakteri dapat

dibedakan berdasarkan morfologi (bentuk), komposisi kimia (umumnya dideteksi

dengan reaksi biokimia), kebutuhan nutrisi, aktivitas biokimia, dan sumber energi

(sinar matahari atau bahan kimia) (Pratiwi 2008).

Dinding sel bakteri yang kaku dapat mempertahankan bentuknya dan

melindungi sel dari perubahan tekanan osmotik antara sel dengan lingkungannya.

Dinding sel bakteri Gram positif memiliki lapisan peptidoglikan yang tebal dan

membran sel, sementara dinding sel bakteri Gram negatif memiliki tiga lapisan:

membran dalam, membran luar dan lapisan peptidoglikan yang lebih tipis. Bakteri

merupakan organisme prokariot yaitu memiliki kromosom tunggal dan tidak

memiliki nukleus. Untuk mengemas kromosom di dalam sel, DNA menggulung

(coil dan supercoil); suatu proses yang diperantarai oleh sistem enzim DNA girase.

Ribosom bakteri berbeda dengan ribosom eukariot, menjadikannya target untuk

terapi antibakteri. Bakteri juga mengandung DNA tambahan dalam bentuk

plasmid (Gillespie 2008).

Menurut Gillespie (2008) bakteri diklasifikasikan berdasarkan bentuknya:

kokus berbentuk sferis, bacillus berbentuk panjang dan tipis, dengan kokobasilus

diantara bentuk keduanya dan ada juga bacillus berbentuk melengkung dan spiral

dengan panjang lengkungan yang berbeda. Menurut Pratiwi (2008) bentuk-bentuk

bakteri yaitu bulat (tunggal: coccus, jamak: cocci), batang atau silinder (tunggal:

bacillus, jamak: bacilli), dan spiral yaitu berbentuk batang melengkung atau

melingkar-lingkar.

Kokus Gram positif dibagi menjadi dua kelompok utama: stafilokokus

(katalase positif), contoh patogen utamanya yaitu Staphylococcus aureus dan

Streptokokus (katalase negatif), contoh patogen utamanya yaitu Streptococcus

pyrogenes. Kokus Gram negatif meliputi Neisseria meningitides, sedangkan

Kokobasilus Gram negatif meliputi patogen saluran nafas Haemophilus dan

Bordetella, agen zoonotik seperti Brucella dan Pasteurella (Gillespie 2008).

Bacillus Gram positif dibagi menjadi bacillus yang membentuk spora dan

bacillus yang tidak membentuk spora. Kelompok yang membentuk spora dibagi

menjadi organisme aerob (Bacillus) dan organisme anaerob (Clostridium).

Bacillus bakteri Gram negatif meliputi keluarga bakteri fakultatif

Enterobacteriaceae yang merupakan bagian dari flora normal pada manusia dan

4

hewan dan dapat ditemukan di lingkungan. Termasuk dalam kelompok ini yaitu

Salmonella, Shigella, Escherichia, Proteus danYersinia (Gillespie 2008).

Bakteri pada Ulat Sutera Bombyx mori

Sebagai perbandingan, terdapat penelitian yang memaparkan beberapa

koloni bakteri dari ulat sutera Bombyx mori yang berhasil diisolasi dan

diidentifikasi ditabulasi dalam Tabel1.

Tabel 1. Identifikasi bakteri pada ulat sutera Bombyx mori yang sakit (Sakthivel et

al. 2012)

No Bakteri

1 Bacillus subtilis

2 Streptococcus pneumoniae

3 Staphylococcus aureus

4 Escherichia coli

5 Pseudomonas fluorescence

6 Bacillus cereus

7 Klebsiella cloacae

Bombyx mori merupakan salah satu jenis ulat sutera yang juga

memberikan keuntungan ekonomis karena mampu menghasilkan benang

sutera. Ulat sutera memiliki bentuk tubuh yang berwarna putih. Ulat sutera dapat

melakukan molting (berganti kulit) pada saat memasuki instar baru. Larva ulat

sutera mempunyai tanduk anal yang pendek dan memakan daun murbei (Morus

sp.) (Borror 1992).

MATERI DAN METODE

Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari 2014 sampai dengan Oktober

2014. Pemeliharaan ulat sutera liar Attacus atlas dilaksanakan di Laboratorium

Metabolisme Bagian Fisiologi Departemen Anatomi Fisiologi dan Farmakologi

Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Pengamatan dan

identifikasi bakteri dilaksanakan di Laboratorium Bakteriologi Bagian

Mikrobiologi Medis Departemen Ilmu Penyakit Hewan dan Kesehatan

Masyarakat Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.

Bahan dan Alat

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah imago ulat sutera liar

Attacus atlas sejumlah 5 ekor, akuades steril, media untuk mengisolasi bakteri

5

yakni agar darah, MacConkey Agar (MCA) dan trypticase soy agar (TSA). Media untuk mengidentifikasi bakteri yakni Indol, Triple Sugar Iron Agar (TSIA), Oksidase, Urea, Simmon’s citrate Agar, Voges-proskauer (VP) dan kaldu gula-gula (glukosa, sukrosa, manitol, maltosa, dan laktosa). Bahan-bahan untuk pewarnaan Gram yakni kristal violet, lugol, aseton alkohol, safranin, dan alkohol 70%.

Alat yang digunakan pada penelitian kali ini adalah kandang kasa berukuran

50 cm x 50 cm x 50 cm, alat bedah minor seperti pinset, gunting dan scalpel, ose,

needel, korek api, cawan petri, pipet, mikropipet, pembakar bunsen, inkubator,

tabung reaksi, botol kaca 5 ml, tabung evendorf, mikroskop cahaya, pensil, kertas

label, lemari pendingin dan kamera.

Prosedur Penelitian

Pengambilan dan penyimpanan kokon

Pengambilan kokon ulat sutera Attacus atlas dilakukan diperkebunan teh

PTPN VIII Panleujar kabupaten Purwakarta provinsi Jawa Barat. Kokon dibawa

ke Lab. Metabolisme kemudian disimpan dalam kandang kasa berukuran 50 cm X

50 cm X 50 cm. Pemisahan antara kokon betina dan jantan dilakukan dengan cara

membuka kokon dan melihat bakal antena pada pupa, antena yang besar akan

menjadi imago jantan, sedangkan antena yang kecil akan menjadi imago betina.

Pengambilan kloaka

Sampel diambil dari 5 ekor imago betina A. atlas. Imago betina A. atlas

dimasukkan ke dalam freezer selama 60 menit agar imago mati. Dilakukan

nekropsi pada imago menggunakan alat bedah minor yang sebelumnya telah

disterilkan. Pengambilan kloaka dilakukan menggunakan pinset steril lalu

dimasukkan ke dalam botol kaca yang berisi aquades steril 2 ml.

Isolasi bakteri

Sampel yang telah disiapkan diambil menggunakan ose dan dibiakkan ke

dalam agar darah dan MacConkey Agar (MCA) dengan tehnik goresan T. Agar

yang telah diinokulasi dengan sampel dimasukkan ke dalam inkubator selama 24

jam dengan suhu 370C. Setelah itu, koloni yang tumbuh dilakukan pengamatan

dan pencatatan koloninya. Setiap bentuk koloni berbeda yang terpisah dibiakkan

kembali ke agar miring trypticase soy agar (TSA) dan diberikan label agar tidak

terjadi kekeliruan. Agar miring yang telah dibiakkan dimasukkan ke dalam

inkubator selama 24 jam dengan suhu 370C.

Pewarnaan Gram

Koloni yang tumbuh pada media agar miring diwarnai dengan pewarnaan

Gram untuk melihat morfologi, sifat Gram, dan kemurniannya. Kaca objek

dibersihkan menggunakan alkohol kemudian dikeringkan dengan cara didekatkan

api bunsen. Kemudian, kaca objek ditetesi dengan aquades diatasnya. Ose dibakar

terlebih dahulu sampai berwarna merah, didinginkan sejenak lalu masukkan

kedalam tabung kaca berisi isolat bakteri kemudian tempelkan ose ke aquades

pada kaca objek. Aquades dihomogenkan perlahan dengan cara membentuk

lingkaran biarkan sejenak kemudian difiksasi dengan api bunsen dan diletakkan di

6

atas rak kaca objek. Ditetesi kristal violet dan didiamkan selama satu menit.

Dicuci dengan aquades. Ditetesi lagi dengan lugol pada kaca objek dan didiamkan

selama satu menit dan dicuci dengan aquades. Kemudian, ditetesi dengan larutan

pemucat (aseton alkohol)selama 10 detik, kemudian dicuci lagi dengan aquades.

Terakhir, ditetesi dengan safranin selama 10-20 detik lalu dicuci dengan aquades

hingga bersih. Dikeringkan kaca objek dengan kertas saring lalu diamati di bawah

mikroskop dengan perbesaran 1000x dengan bantuan minyak emersi dan

ditentukan sifat Gramnya. Bakteri Gram positif akan berwarna ungu sedangkan

bakteri Gram negatif akan terlihat berwarna merah. Jika koloni bakteri yang

terlihat belum murni, maka dilakukan kembali isolasi pada agar darah maupun

MCA dengan goresan T. Apabila hasil dari pewarnaan Gram tidak meyakinkan,

dapat dilakukan Uji KOH 3% untuk menentukan sifat Gramnya. Jika pada hasil

uji terlihat massa gelatin berupa benang-benang halus ketika diangkat

menggunakan ose artinya sampel merupakan bakteri Gram negatif. Identifikasi

Gram positif dan Gram negatif dapat dilihat dari Gambar 2 dan Gambar 3.

Gambar 2 Diagram identifikasi bakteri Gram positif (Bergey dan Breed 1994; Lay 1994)

Bakteri Gram positif

kokus

Katalase Negatif

Streptococcus sp.

α-hemolitik β-hemolitik γ-hemolitik

Katalase positif

Micrococcaceae

Uji Glukosa

Mikroaerolitik

(+)

kuning (fermentasi)

Stapylococcus aureus

Merah (tidak

fermentasi

Staphylococcus epidermidis

Tanam ke MSA

(-)

Micrococcaceae

Batang

Aerob

Batang kecil tidak membentuk spora

Tahan asam

Mycobacterium

Tidak tahan asam

Listeris

Erysopelothrix

Corynebacterium

Lactobacillus

Batang besar

membentuk spora

Bacillus

Anaaerob

Clostridium

7

Gambar 3 Diagram identifikasi bakteri Gram negatif (Bergey dan Breed 1994; Lay 1994)

Identifikasi bakteri

Isolat dikeluarkan dari lemari pendingin dan dihangatkan dulu dalam

inkubator selama beberapa menit. Ose dibakar terlebih dahulu pada api bunsen

sampai terlihat merah, didinginkan beberapa saat lalu disentuhkan dengan isolat

yang telah disiapkan kemudian ditanam ke setiap media identifikasi seperti indol,

tripel sugar iron agar (TSIA), oksidase, urea, Simmon’s citrate agar, voges-

proskauer (VP) serta kaldu gula-gula yang terdiri atas glukosa, sukrosa, manitol,

maltosa dan laktosa Setelah itu, dimasukkan ke dalam inkubator selama 24 jam

pada suhu 370C.

Analisis Data

Analisis data menggunakan metode deskripsi.

Bakteri Gram Negatif

Batang

(+)

Nonenterobakteriaceaae

Pseudomonas

Aeromonas

Vibrio

(-)

Enterobakteriaceae

Laktosa positifLaktosa Negatif

Kokus

Neisseria

Pewarnaan Zielhl

Neelsen

Uji oksidase

MacConkey Agar

TSIA

Indol

Sitrat

MRVP

Fermentasi Karbohidrat

8

HASIL DAN PEMBAHASAN

Isolasi Bakteri

Sampel ditanam ke dalam media agar darah atau Blood agar (BA) dan

MacConkeyAgar (MCA) dengan goresan T dan dimasukkan ke dalam inkubator

selama 24 jam dengan suhu 370C. Setelah inokulasi, dilakukan pengamatan

makroskopik pada Agar darah dan MCA dari 5 sampel yang digunakan. Hasilnya

terdapat beberapa koloni berbeda dari setiap sampel yang disajikan pada Tabel 2

dan Tabel 3.

Tabel 2 Hasil pengamatan morfologi koloni yang tumbuh pada media Agar darah

Parameter Agar Darah

A.1 B.1 B.2 C.1 C.2 D.1 D.2 E.1 E.2

Ukuran Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang

Bentuk Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat

Permukaan

Tidak halus

Tidak halus

Tidak halus

Tidak halus

Tidak halus

Tidak halus

Tidak halus

Tidak halus

Tidak halus

Aspek Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tidak

mengkilat

Tepi Tepi

kasar

Tepi rata Tepi

kasar

Tepi rata Tepi

kasar

Tepi rata Tepi

kasar

Tepi rata Tepi

kasar Elevasi Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Warna Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Hemolisis β - β - β - β - β

Sampel pertama hanya ditemukan 1 bentuk koloni. Pada Sampel kedua

sampai kelima terdapat dua koloni berbeda. Perbedaan terdapat pada parameter

hemolisis, dimana terdapat koloni yang menghasilkan hemolisis β dan koloni

yang tidak menghasilkan hemolisis.β-hemolisis di media menampilkan lingkaran

jernih yang jelas di sekitar koloni bakteri karena lisisnya seluruh sel darah merah

(Difco Manual1984).

Gambar 4 Koloni β hemolitik pada media Agar darah

9

Tabel 3 Hasil pengamatan morfologi koloni yang tumbuh pada media Mac ConkeyAgar

(MCA)

Parameter MCA

A.1 B.1 C.1 C.2 C.3 D.1 D.2 E.1 E.2

Ukuran Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang Sedang

Bentuk Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat Bulat

Permukaa

n

halus halus halus halus halus halus halus halus halus

Aspek mengkil

at

mengkil

at

mengkil

at

mengkil

at

mengkil

at

mengkil

at

mengkil

at

mengkil

at

mengkil

at

Tepi Tepi rata Tepi rata Tepi rata Tepi rata Tepi rata Tepi rata Tepi rata Tepi rata Tepi rata

Elevasi Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Cembun

g

Warna Pink

(Tepi

Putih)

Pink

(Tepi

Putih)

Merah Pink

(Tepi

Putih)

Putih Merah Pink

(Tepi

Putih)

Merah Pink

(Tepi

Putih)

Hemolisis - - - - - - - - -

Inokulasi pada media MCA terdapat beberapa koloni yang berbeda. Pada

sampel 1 dan 2 hanya terdapat 1 koloni. Sampel 3 terdapat 3 koloni dengan

perbedaan parameter warna koloni yaitu merah, pinkdengan tepi putih dan putih.

Sampel 4 dan 5 terdapat 2 koloni berbeda dengan perbedaan parameter warna

yaitu merah dan pink dengan tepi putih.

Gambar 5 Koloni yang terbentuk pada media MCA

Setiap koloni yang tumbuh pada media agar darah maupun MCA di

biakkan kembali ke agar miring TSA sebagai biakan murni isolat. Agar miring

yang telah diinokulasi dimasukkan kedalam inkubator selama 24 jam pada suhu

37°C. TSAberfungsi sebagai salah satu media yang umum digunakan dalam

prosedur bakteriologi seperti untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan

untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni(Dwidjoseputro 1994). Lay

(1994) menyatakan bahwa biakkan murni merupakan biakan yang hanya

mengandung satu jenis bakteri.Hasil pengamatan makroskopis disajikan pada

Tabel 4 dan Tabel 5. Untuk mengetahui kemurnian yang dari isolat yang ditanam

pada TSA dilakukan pengamatan secara makroskopis pada sifat pertumbuhannya

dan pengamatan secara makroskopis.

10

Tabel 4 Hasil pengamatan dari agar darah ke TSA

Parameter Agar Darah

A.1 B.1 B.2 C.1 C.2 D.1 D.2 E.1 E.2

Jumlah

Pertumbuhan

Subur Subur Subur Subur Subur Subur Subur Subur Subur

Warna Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem

Sifat tembus

cahaya

Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque

Tabel 5 Hasil pengamatan dari MCA ke TSA

Morfologi

Koloni

MCA

A.1 B.1 C.1 C.2 C.3 D.1 D.2 E.1 E.2

Jumlah

Pertumbuhan

Subur Subur Subur Subur Subur Subur Subur Subur Subur

Warna Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem Krem

Sifat tembus

cahaya

Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque Opaque

Penanaman koloni ke media agar miring TSA baik dari koloni agar darah

maupun dari MCA menghasilkan pertumbuhan yang subur dan seragam.

Pewarnaan Gram

Koloni yang telah tumbuh pada media agar miring dilakukan pewarnaan

Gram untuk melihat bentuk, susunan dan sifat Gram. Pewarnaan Gram dilakukan

pada setiap koloni dan diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran 100x.

Bakteri Gram positif akan terlihat berwarna ungu sedangkan bakteri Gram negatif

berwarna merah (Lay 1994). Hasil pengamatan mikroskopis pada setiap koloni

dengan pewarnaan Gram disajikan pada Tabel 6.

Tabel 6 Hasil pengamatan mikroskopis pada koloni yang berasal dari agar darah

Morfologi

Koloni

BA

A.1 B.1 B.2 C.1 C.2 D.1 D.2 E.1 E.2

Bentuk Batang Halus

Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang Halus

Batang

Susunan Tunggal Berantai Berantai Berantai Berantai Berantai Berantai Tunggal Berantai

Gram Negatif Positif Positif Positif Positif Positif Positif Negatif Positif

Spora + + + + + + +

Dari pengamatan mikroskopis terdapat dua morfologi yang berbeda yakni

batang dan batang halus. Dua bakteri gram negatif yakni A.1 dan E.1 memiliki

susunan tunggal, sedangkan bakteri Gram Positif yakni B.1, B.2, C.1, C.2, C.3,

D.1, D.2, dan E.2 memiliki susunan berantai.

Tujuh sampel yang menghasilkan Gram positif dan memperlihatkan

bentuk batang dan berspora pada pengamatan mikroskopis. Berdasarkan diagram

alir identifikasi bakteri oleh Bergey dan Breed (1994); Lay (1994), dapat

disimpulkan 7 sampel tersebut merupakan genus Bacillus sp.. Menurut Wongsa

dan Werukhamkul (2007), Bacillus sp. merupakan bakteri berbentuk batang,

bersifat Gram Positif. Bacillus sp.juga menghasilkan spora yang merupakan ciri

khas bakteri ini.

Bacillus sp. yang teridenfikasi pada kloaka imago A. atlasdiduga berasal

dari lingkungan yaitu tanah karena menurut Pelczar dan Chan(1986),Bacillus sp.

11

dapat dijumpai di tanah dan di air. Pada penelitian Anand et al. (2010), Bacillus

sp. di temukan pada larva instar ke lima dan merupakan flora normal pada

Bombyx mori. Bakteri yang terdapat pada tahap larva ini diduga bertahan dan

menyebar dalam tubuh A. atlas hingga imago karena menurut Keynan dan Sandler

(1983), Bacillus sp. mempunyai ketahanan yang tinggi terhadap faktor kimia dan

fisika, seperti suhu ekstrim, alkohol, dan sebagainya.

Dari pengamatan mikroskopis pada koloni yang berasal dari MCA di

dapatkan 2 bentuk morfologi yakni batang halus dan batang yang didominasi

bentuk batang. Susunan tidak terdapat perbedaan yakni tunggal. Sifat Gram juga

tidak terdapat perbedaan yakni negatif karena media MCA menghambat

pertumbuhan bakteri Gram positif (Lay 1994). Hasil pengamatan mikroskopis

dapat dilihat pada Tabel 7.

Tabel 7 Hasil pengamatan mikroskopis pada koloni yang berasal dari MCA

Morfologi

Koloni

MCA

A.1 B.1 C.1 C.2 C.3 D.1 D.2 E.1 E.2

Bentuk Batang

Halus

Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang Batang

Susunan Tunggal Tunggal Tunggal Tunggal Tunggal Tunggal Tunggal Tunggal Tunggal Gram Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif

Identifikasi Bakteri

Lima koloni yang berbeda pada pengamatan makroskopis maupun

mikroskopis dipilih untuk selanjutnya dilakukan identifikasi bakteri menggunakan

uji biokimia. Uji biokimia hanya dilakukan pada isolat yang bersifat Gram negatif.

Lima koloni yang dipilih yakni 2 sampel berasal dari agar darah yang

menghasilkan β hemolisis (A.1) dan yang tidak mengalami hemolisis (E.1). 3

sampel lainnya berasal dari MCA yaitu koloni yang berwarna merah (C.1), pink

dengan tepi putih (C.2) dan putih (C.3).

Tabel 8 Hasil uji Indol, TSIA, Oksidase, Urea, Sitrat dan VP

Koloni Indol Motilitas TSIA Oksidase Urea Sitrat VP

Slant Butt Gas H2S

A.1

(BA)

- - Asam Asam + - + - + -

E.1

(BA)

- - Asam Asam + - + - + -

C.1 (MCA)

- - Basa Basa + - + - + +

C.2

(MCA)

- - Basa Basa + - + - + +

C.3

(MCA)

- - Basa Basa + - + - + +

Uji biokimia yang pertama dilakukan yakni uji Oksidase yang berfungsi

untuk mengetahui ada tidaknya enzim oksidase (MacFaddin2000). Selain itu, uji

oksidase berfungsi untuk membedakan bakteri Enterobactericeae jika hasilnya

negatif dan non-Enterobactericeaejika hasilnya positif (Bergey dan Breed 1994).

Isolat yang telah diuji oksidase menghasilkan hasil positif pada semua sampel.

Hal ini menjelaskan bahwa bakteri yang terdapat pada sampel termasuk dalam

famili Enterobactericeae. Selanjutnya, untuk membedakan famili

12

Enterobactericeaedilakukan uji lain yaitu uji TSIA, uji Indol, uji Sitrat, uji Urea

dan fermentasi karbohidrat serta uji VP sebagai tambahan (Lay 1994).

Gambar 6 Uji Oksidase

Uji TSIA berperan untuk melihat kemampuan bakteri dalam memfermentasi

karbohidrat serta kemampuan menghasilkan H2S dan gas (MacFaddin2000). Hasil

uji TSIA dapat dilihat pada Tabel 7. Uji TSIA dari 2 isolat yakni isolat A.1 dan

E.1 menghasilkan slant asam dan butt asam dengan gas positif dan tidak

menghasilkan H2S. Hasil tersebut mengarah pada 8 bakteri yakni Aeromonas sp.,

E. Coli, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter intermedius, Proteus rettgeri,

Serratia sp. dan Erwinia herbicola(Jang et al 1976). Uji TSIA pada 3 isolat (C.1,

C.2, dan C.3) lainnya menghasilkan slant basa dan butt basa dengan gas positif

dan tidak menghasilkan H2S. Hasil ini mengarah pada 5 genus bakteri yakni

Alcaligenes sp., Bordetella sp., Pseudomonas sp., Flavobacterium sp. dan

Chromobacterium sp (Jang et al. 1976).

Gambar 7 Uji TSIA

Uji biokimia selanjutnya yakni uji urea. Uji urea bertujuan untuk melihat

kemampuan bakteri dalam mengurai urea menggunakan enzim urease

(MacFaddin2000). Semua isolat yang diuji urea menghasilkan hasil negatif. Dari

13

hasil ini, isolat A.1 dan E.1 mengarah pada Aeromonas sp. dan E. Coli (Jang et al

1976). Isolat C.1, C.2 dan C.3 mengarah pada Alcaligenes sp., Pseudomonas sp.,

Flavobacterium sp. dan Chromobacterium sp. (Jang et al. 1976).

Gambar 8 Uji Urea

Setelah uji Urea, dilakukan uji indol berfungsi untuk melihat kemampuan

bakteri dalam memecah asam amino tryptophan menggunakan enzim

tryptophanase (Isenberg dan Sundheim 1958). Hasil uji indol dapat dilihat pada

tabel 7. Hasil negatif dari uji indol pada isolat A.1 dan E.1 mengarah pada

Aeromonas sp. (Jang et al 1976). Hasil negatif juga ditemukan pada isolat C.1,

C.2 dan C.3 yang mengarah pada Alcaligenes sp., Pseudomonas sp. dan

Chromobacterium sp. (Jang et al. 1976).

Gambar 9. Uji Indol

Uji Sitrat berfungsi untuk mendeteksi kemampuan bakteri dalam

menggunakan sitrat sebagai sumber karbon tunggal dan energi (MacFaddin2000).

Uji sitrat menghasilkan hasil positif pada semua isolat. Isolat A.1 dan E.1 masih

mengarah Aeromonas sp. sedangkan isolat C.1, C.2 dan C.3 mengarah ke genus

Pseudomonas sp. (Jang et al. 1976).

14

Gambar 10 Uji Sitrat

Uji VP merupakan uji tambahan yang dilakukan. Uji ini dilakukan untuk

mendeteksi adanya butylene glycol yang diproduksi bakteri(Madigan dan

Martinko2008). Menurut Spring (2009), isolat A.1 dan E.1 menghasilkan hasil

negatif mengarah ke genus Aeromonas sp.. Pada sampel C.1, C.2 dan C.3

menghasilkan hasil positif pada uji VP yang mengarah pada genus Pseudomonas

sp.

Gambar 11 Uji VP

Uji gula-gula untuk mendeteksi kemampuan bakteri dalam memfermentasi

karbohidrat (Volk dan Wheeler 1993). Hasil uji fermentasi karbohidrat dapat

dilihat pada tabel 8. Isolat A1 dan E.1 mampu memfermentasikan semua uji dan

memperlihatkan adanya gas pada tabung durham namun pada isolat C.1, C.2 dan

C.3 yang diuji hanya mampu memfermentasi sukrosa, glukosa, maltosa dan

manitol serta terbentuk gas pada tabung durham, sedangkan uji laktosa tidak

terfermentasi tetapi terbentuk gas.

15

Tabel 9 Hasil uji kaldu gula-gula

Koloni Uji Karbohidrat

Sukrosa Laktosa Glukosa Manitol Maltosa

A.1

(BA)

Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas

E.1

(BA)

Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas

C.1

(MCA)

Asam/Gas Basa/Gas Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas

C.2

(MCA)

Asam/Gas Basa/Gas Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas

C.3

(MCA)

Asam/Gas Basa/Gas Asam/Gas Asam/Gas Asam/Gas

Gambar 12 Hasil uji kaldu gula-gula

Berdasarkan hasil semua uji biokimia dapat disimpulkan bahwa isolat A.1

dan E.1 mengarah pada genus Aeromonas sp.. Isolat C.1, C.2 dan C.3 mengarah

pada genus Pseudomonas sp.. Aeromonas sp. merupakan bakteri gram negatif,

berbentuk batang dan bersifat non-spora. Bakteri ini termasuk dalam famili

Vibrionaceae (Popoff 1984). Bakteri Aeromonas sp. yang berhasil diisolasi dan

diidentifikasi pada kloaka ulat sutera liar A. atlas berasal dari lingkungan sekitar.

Hal ini karena daerah Purwakarta merupakan salah satu daerah yang telah

tercemar bakteri Aeromonas sp. (BKIPM 2011). Bakteri ini merupakan salah satu

flora normal pada saluran pencernan Bombyx mori yang berfungsi sebagai

pendegradasi polysakarida (Anand et al. 2010). Bakteri ini dapat menyebabkan

diare dan cellulitis jika terinfeksi pada manusia (Janda dan Duffey 1988). Akan

tetapi, kemampuan Aeromonas sp. menyebabkan penyakit dipengaruhi oleh

jumlah paparan, usia, imunokompetensi, dosis infeksi dan faktor virulensi yang

menginfeksi organisme (Nichols et al. 1996).

16

Gambar 13 Aeromonas sp., pewarnaan Gram, perbesaran objektif 100x

Genus Pseudomonas sp. merupakan bakteri Gram negatif. Bakteri ini berbentuk batang dan memiliki flagella yang berperan dalam patogenisitasnya (Arwiyanto et al. 2007). Pseudomonas sp. yang berhasil disolasi dan diidentifikasi berasal dari lingkungan sekitar karena bakteri ini banyak ditemukan di lingkungan seperti air, tanah, dan tanaman (Palleroni 1992, Schroth et al. 1992).Berdasarkan penelitian Sakthivel et al. (2012), Pseudomonas sp. juga ditemukan pada ulat sutera spesies lain yakni Bombyx mori. Selain itu, pada penelitian Anand et al. (2010), juga menemukan bakteri Pseudomonas sp. pada saluran pencernaan Bombyx mori.

Pseudomonas sp. merupakan bakteri yang patogen karena dapat menginfeksi saluran pernafasan, saluran pencernaan dan kornea (Driscoll et al. 2007). Kemampuan Pseudomonas sp. menyerang jaringan tergantung pada produksi enzim dan toksin yang merusak barier fisik dan sel-sel inang serta serta resistensi terhadap fagositosis dan pertahanan kekebalan tubuh inang (Kipnis et al. 2006).

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Isolasi dan identifikasi bakteri pada kloaka imago betina ulat sutera liar A.

atlas mendapat 3 genus bakteri yakni Bacillus sp., Aeromonas sp. dan Pseudomonas sp.

Saran

Penelitian berikutnya diharapkan dapat melakukan uji yang lebih spesifik

terhadap bakteri pada kloaka imago betina ulat sutera liar A. atlas, sehingga dapat

diketahui jenis bakteri hingga tahap spesies. Dengan penelitian ini disarankan

dalam budidaya agar melakukan desinfeksi terlebih dahulu pada telur-telur yang

diproduksi untuk mencegah terjadinya penularan bakteri yang terdapat pada

imago.

17

DAFTAR PUSTAKA

Anand AAP, Vennison SJ, Sankar SG, Prabhu DIG, Vasan PT, Raghuraman T,

Geoffrey CJ, Vendan SE. 2010. Isolation and characterization of bacteria

from the gut of Bombyx mori that degrade cellulose, xylan, pectin, and

starch and their impact on digestion. Journal of Insect Science 10:107.

Arnaut RI., Vauterin L, De Vos P, Massart D.L, Devriese L.A, De Zutter L, Van

Hoof J. 1999. A numerical taxonomic study of the Pseudomonas flora

isolated from poultry meat. J Appl Microbiol. 87: 15-28.

Arwiyanto T, Maryudani YMS, Azizah NA. 2007. Sifat-sifat fenotipik

Pseudomonas fluoresen, agensia pengendalian hayati penyakit lincat pada

tembakau temanggung. Biodiversita. 8:147-151.

Awan A. 2007. Domestikasi ulat sutera liar Attacus atlas (Lepidoptera:

Saturniidae) dalam usaha meningkatkan persuteraan nasional [disertasi].

Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.

Bergey DH, Breed RS. 1994. Identification flow charts Bergey’s manual of

determinative bacteriology. [internet]. [diunduh 1 september 2014].

Tersedia pada: http://www.uiweb.uidaho.edu/micro_biology/

250/IDFlowcharts.pdf.

BKIPM [Badan Karantina Ikan dan Pengendalian Mutu]. 2011. Stasiun karantina

ikan pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan kelas II Cirebon.

[internet]. [diunduh 1 September 2014]. Tersedia

pada :http://www.bkipm.kkp.go.id/bkipm/profil/upt/37.0/Stasiun%20Kara

ntina%20Ikan%20Kelas%20II%20Cirebon.html.

Borror. 1992. Pengenalan Pelajaran Serangga. Yogyakarta (ID) : Gajah Mada Pr.

Brooks,GF. 2005. Mikrobiologi Kedokteran Edisi Pertama. Jakarta (ID): Salemba

Medika

Buchanan RE, Gibbons. 2006. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology.

Baltimore (US): Woverly.

Difco M. 1984. Dehydrated culture media and reagents for microbiology, 10th

ed.Detroit (US): Difco Laboratories.

Driscoll JA, Brody SL, Kollef MH. 2007. The epidemiology, pathogenesis and

treatment of Pseudomonas aeruginosa infections. Drugs. 67(3):351-68

Dwidjoseputro D. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta (ID) : Djambatan.

Fischetti AV, RP Novick, JJ Ferreti, DA Portnoy,JI Rood. 2000. GramPositife.

Washington (US): ASM Pr

Gillespie, Stephen, Kathleen Bamford. 2008. At a Glance Mikrobiologi Medis dan

Infeksi Edisi Ketiga. Jakarta (ID) : Erlangga

Isenberg H. D., and L. H. Sundheim. 1958. Indole reactions in bacteria. J.

Bacteriol. 75:682–690.

Janda JM, Duffey PS (1988). Mesophilic aeromonads in human disease: current

taxonomy, laboratory identification, and infectious disease spectrum.

Reviews in Infectious Diseases, 10:980–987. Jang SS, Biberstein EL, Hirsh DC. 1976. A Manual of Vetrinary Clinical

Bacteriology and Miology. Davis (US) : Univercity of California Jawetz E, JL Melnick, EA Adelberg, GF Brooks, JS Butel, LN Ornston,

1995.Mikrobiologi Kedokteran, ed. 20. SanFrancisco (US) : University of

California,

18

Keynan, A. and N. Sandler 1983. The Bacterial Spore, vol 2. (Hurst, A. and

Gould, G. W., eds). New York (US) : Academic Press.

Kipnis E, Sawa T, Wiener-Kronish J.2006.Targeting mechanisms of pseudomonas

aeruginosa pathogenesis. Médecine et maladies infectieuses. 36: 78–91.

Lay BW. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta (ID): Raja Grafindo

Persada.

MacFaddin JF.2000. Biochemical Tests for the Identification of Medical Bacteria,

3rd ed.Philadelphia (US) : Lippincott Williams & Wilkins.

Madigan, M. T., and J. M. Martinko. 2008. Brock biology of microorganisms,

12th ed. New Jersey (US) : Benjamin Cummings, Upper Saddle River.

Mulyani N. 2008. Biologi Attacus atlas (Lepidoptera: Saturniidae) Dengan Pakan

Daun Kaliki (Ricinus communis L.) dan Jarak Pagar (Jatropha curcas L.)

di Laboratorium [tesis]. Bogor (ID): Sekolah Pascasarjana, Institut

Pertanian Bogor.

Nichols GL et al. 1996. Health Significance of Bacteria in Distribution Systems

Review of Aeromonas. London (UK) : Water Industry Research Ltd

(Report DW-02/A).

Palleroni NJ. 1992. Present situation of the taxonomy of aerobic pseudomonads.

Di dalam:E. Galli, S. Silver, and B. Witholt, editor. Pseudomonas

Molecular Biology and Biotechnology. Washington (DC): ASM Press.

Peigler RS. 1989. A Revision of The Indo-Australian Genus Attacus. California

(US): The Lepidoptera Researc Foundation, Inc.

Pratiwi, Sylvia T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta (ID) : Erlangga

Pelczar MJ, ECSChan. 1986. Microbiology.New York (US) :MC Graw Hill Book

Company.

Popoff M. 1984. Genus III Aeromonas Kluyver and van Niel 1936 398AL. In:

Krieg NR, Holt JG, eds. Bergey’s manual of systematic bacteriology, Vol.

1.Baltimore (US) : Williams & Wilkins: 545–548.

Purves Bill, Sadava D. 2003. Life The Science of Biology 7th Edition. Sinauer

Associates Inc. New York.

Rianto F. 2009. Performa reproduksi imago Attacus atlas L. yang berasal dari

perkebunan teh Purwakarta [skripsi]. Bogor (ID): Fakultas Peternakan,

Institut Pertanian Bogor.

Riskomar D. 2000. Soleh:”Kesulitan Bahan Baku untuk Memenuhi Pesanan

Barang”. Mitra Bisnis. Minggu III April 2000 hal 8 kolom 1-4.

Sakthivel S, Angaleswari C, Mahalingam PU. 2012. Isolation and identification of

bacteria responsible for flacherie in silkworms. Adv Appl Sci Res. 3:4066-

4068

Schroth M, D C Hildebrand, N. Panopoulos. 1992. Phytopathogenic

pseudomonads and plant-associated pseudomonads. Di dalam:A. Balows,

H G. Trüper, M. Dworkin, W. Harder, and K.-H. Schleifer, Editor. Ney

York (US) The Prokaryotes, 2nd ed. Springer-Verlag. New York (US),

NY. 3:3104–3131.

Singleton, Sainsbury. 2006. Dictionary of Microbiology and Molecular Biology

3rd Edition.England (UK) J Wiley.

Smith Keary PF. 1988.Genetic Elements in Escherichia coli,

MacmillanMolecular biology series. London (UK), p. 1-9, 49-54

19

Spring. 2009. Microbiology 20 Biochemical Unknown. [internet]. [diunduh 6

September 2014]. Tersedia pada: http://www.lamission.

edu/lifesciences/Steven/Biochemical%20Unknown%20guidelines.pdf

Tay L, KT Goh, SETan. 2008. An Outbreak of Bacillus cereusfood poisoning.

Singapore Medical Journal.23(04):214-217.

Triplehorn CA, Johnson NF. 2005. Borror and Delong’s Introduction to the Study

of Insect. Seventh Edition. USA: Tomson Brooks/Cole.

Vecchi E D, L Dargo. 2006. Lactobacillus sporogenes or

Bacilluscoagulans:Misidentification or Mislabelling?. International

Journal of Probiotics and Prebiotics. 3(1):3-10.

Volk and Wheleer. 1993. Analisis Praktikum Mikrobiologi Umum untuk

Perguruan Tinggi. Yogyakarta (ID) : UGM Press.

Waluyo, L. 2004. Mikrobiologi Umum. Malang (ID) : Universitas

Muhammadiyah Press : Malang

Wongsa P, P Werukhamkul. 2007. Product Development and Technical

Service, Biosolution International. Thailand : Bangkadi Industrial Park

134/4.

20

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan pada tanggal 29 Januari 1993 dari ayah bernama

Syahruddin dan ibu bernama Nurrahmah di Sanggatta, Kabupaten Kutai Timur,

Kalimantan Timur. Penulis merupakan anak pertama dari 3 bersaudara. Penulis

menyelesaikan sekolah dasar di SD Negeri 001 Sangatta Selatan dan lulus pada

tahun 2004. Kemudian penulis melanjutkan ke SMP YPPSB (Yayasan Pendidikan

Prima Swarga Bara) dan lulus pada tahun 2007. Penulis melanjutkan sekolah

menengah atas di SMA Negeri 1 Sangatta Selatan dan lulus pada tahun 2010.

Penulis diterima sebagai mahasiawa Institut Pertanian Bogor melalui jalur

Beasiswa Utusan Daerah (BUD).

Selama kegiatan perkuliahan penulis aktif di beberapa organisasi yakni

Himpunan Minat Profesi Satwa Liar sekaligus anggota divisi Kominfo tahun

2012/2013, Badan Eksekutif Mahasiswa FKH IPB sebagai kepala depatemen

Budaya, Olahraga dan Seni (BOS) taun 2013/1014.