identifikasi_bakteri

7/21/2019 identifikasi_bakteri

http://slidepdf.com/reader/full/identifikasibakteri 1/7

Laporan Praktikum Nama : Eka Yulianti

Mikrobiologi NIM : J3M113016

Kelas : LNK A P1

Kelompok : !lima"

#ari$tanggal : %abtu$ 10 Mei &01'(aktu : 1')00 * 1+)00 (I,

PJP : M) Ari- Mul.a$ %)Pi

Asisten : I/one

am2ani

INDENTIFIKASI BAKTERI(Karakteristik Sifat Biokimia dan Fisiologis Bakteri)

TEKNIK DAN MANAJEMEN LINK!NAN

"R#RAM DI"L#MA

INSTIT!T "ERTANIAN B##R

$%&'



Alat dan Baan

Alat9alat .ang igunakan$ .aitu tabung reaksi an tutup$ rak tabung reaksi$

bunsen$ kaat inokulum$ ose$ pipet tetes$ kertas 7akram$ an gelas ob4ek),a2an9ba2an .ang igunakan$ .aitu biakan bakteri ,$ para--in 7air$ #&B&

7iro$ meia B;$ meia %IM !Sulfida Indol Motility"$ reagen P9aminoimetil

anilina oksalat 1=$ an meia nutrien gelatin)

Metode Ker*a

4i katalase ilakukan engan iambiln.a satu ose koloni bakteri , se7ara

aseptis an iinokulasikan paa object glass paa ua titik engan sala2 satun.a

sebagai kontrol) %etela2 itu$ engan menggunakan pipet tetes$ 3= # &B& iteteskan

paa object glass se7ukupn.a paa sala2 satu aera2 .ang tela2 aa bakterin.a$kemuian iamati$ 4ika aa gelembung beberapa saat setela2 penetesan larutan

#&B& maka 2asil u4i positi- an 4ika tiak aa gelembung maka 2asiln.a negati-)

4i oksiase ilakukan engan seban.ak ua bua2 gelas ob4ek isiapkan

an iletakkan kertas 7akram steril paa masing9masing gelas ob4ek tersebut)

%ala2 satu kertas 7akram igunakan sebagai kontrol) Kemuian$ iteteskan reagen

P9aminoimetil anilina oksalat 1= paa ua bua2 kertas saring$ lalu iambil

biakan 7air bakteri , an iteteskan paa sala2 satu kertas 7akram .ang tela2

menganung reagen P9aminoimetil anilina oksalat 1=) Peruba2an .ang ter4ai

iamati$ 4ika arna beruba2 maka 2asil u4i positi-$ seangkan 4ika tiak ter4ai

peruba2an arna men4ai biru /iolet maka 2asil u4i negati-) Ceknik tersebut

ilakukan se7ara aseptik)

4i oksiati-;-ermentati- ilakukan engan ua bua2 tabung .ang berisi

meia B; isiapkan terlebi2 a2ulu lalu biakan bakteri , iambil seban.ak satu

ose an iinokulasikan se7ara /ertikal paa meia B;$ sala2 satu tabung itetesi 1

ml para--in 7air an tabung .ang satu lagi tiak itetesi para--in 7air kemuian

keua tabung iinkubasikan selama &' 4am$ 4ika tabung .ang tiak iberi para--in

meng2asilkan arna 2i4au an tabung .ang iberi para--in meng2asilkan arna

kuning maka bakteri merupakan -ermentati-; anaerob$ 4ika tiak iberi para--in

kuning an iberi para--in 2i4au maka 2asiln.a aala2 oksiati-) Jika iberi an

tiak iberi para--in 2asiln.a aala2 kuning maka bakteri termasuk oksiati-

-ermentati-$ 4ika keua tabung 2i4au maka negati-)4i motilitas ilakukan engan meia %IM isiapkan terlebi2 a2ulu lalu

biakan bakteri , iambil seban.ak satu ose an iinokulasikan se7ara /ertikal

paa meia %IM) Kemuian$ iinkubasi selama &' 4am) Ceknik tersebut ilakukan

se7ara aseptik) #asil u4i motilitas bakteri iperli2atkan engan aan.a

pertumbu2an bakteri paa permukaan meia an tiak 2an.a bekas paa tusukan$

bakteri non motil tumbu2 sepan4ang tusukan$ pembentukkan an aan.a

pembebasan sul-ia itun4ukkan engan terbentukn.a arna 2itam)

4i gelatin ilakukan engan meia nutrien gelatin isiapkan lalu biakan

bakteri , iambil seban.ak satu ose an iinokulasikan se7ara /ertikal paa

meia nutrien gelatin tersebut$ kemuian iinkubasi selama &' 4am paa su2u

3D8) Ceknik tersebut ilakukan se7ara aseptik) #asil u4i positi- 4ika gelatin



ter2irolisa atau tetap 7air$ seangkan 2asil u4i negati- 4ika gelatin tiak

ter2irolisa atau membeku)

Data dan +asil "engamatan

Cabel 1 #asil Pengamatan Ienti-ikasi ,akteri ,

4i #asil Keterangan

Katalase 9 Ciak ter4ai gelembung

Bksiase 9 Ciak ter4ai peruba2an arna mera2

B; NC Not testable

Canpa para-in ? Men4ai berana kuning

Para-in ? Men4ai berarna kuning

Motilitas ? Cerapat motil

>elatin ? >elatin tetap 7air

#asil u4i Katalase$ Bksiase$ B;$ Motilitas an >elatin apat ili2at paa gambar berikut:

>ambar 1 2asil u4i Katalase bakteri ,

>ambar & 2asil u4i oksiase paa bakteri ,

>ambar 3 2asil u4i B; paa bakteri ,

>ambar ' 2asil u4i Motilitas paa bakteri ,

>ambar F 2asil u4i >elatin paa bakteri ,



"em,aasan

4i Bksiase ilakukan untuk mengeta2ui apaka2 bakteri apatmenguraikan en5im oksiase atau tiak) Peruba2an arna .ang ter4ai paa test

strip tai iamati setela2 iiamkan selama &0960 etik) Apabila ter4ai peruba2an

arna men4ai biru /iolet maka o@iase test in.atakan positi- an menanakan

ba2a bakteri tersebut aala2 bakteri non enterik$ seangkan bila tiak ter4ai

peruba2an arna maka o@iase test in.atakan negati- an menanakan bakteri

tersebut aala2 bakteri enterik !Marlina &00+") 4i oksiase bertu4uan untuk

menentukan bakteri enterik atau non enterik) En5im sitokrom oksiase akan

beruba2 men4ai bentuk tiak akti- engan mereuksi sitokrom 7) En5im ini akan

men4ai bentuk akti-n.a kembali 4ika ter4ai trans-er elektron ke molekul oksigen)

Keberaaan oksigen paa en5im oksiase akan mereuksi substan9substan

organik iantaran.a substan .ang terapat paa o@iase test strip .angmenganung N$N imetil1$' -enilen iammonium ikloria an 1 na-tol) eaksi

tersebut akan meng2asilkan molekul inop2enol blue .ang mengakibatkan arna

test strip akan berarna biru /iolet) eaksi ini merupakan reaksi positi- untuk

bakteri non enterik seangkan paa bakteri enterik tiak ter4ai peruba2an arna)

,erasarkan per7obaan 2asil .ang iperole2 aala2 bakteri tiak meng2asilkan

peruba2an arna .ang menanakan ba2a paa u4i ini menun4ukan 2asil .ang

negati-)

4i katalase igunakan untuk meneteksi aan.a en5im katalase) En5im

ini terapat paa sel 9 sel .ang mempun.ai metabolisme aerobik) ,akteri

anaerob tiak mempun.ai en5im katalase) 4i katalase merupakan sala2 satu

pengu4ian biokimia untuk mengienti-ikasi bakteri apaka2 meng2asilkan en5im

katalase atau tiak) En5im katalase i2asilkan ole2 beberapa 4enis bakteri alam

rangka men7ega2 oksiasi raikal bebas .ang apat merusak atau membunu2

bakteri$ aa beberapa 4enis pengu4ian biokimia lain .ang merupakan bagian ari

pengienti-ikasian suatu 4enis bakteri iantaran.a .aitu$ kemampuan bakteri

meng2asilkan en5im 2irolitik ter2aap substrat .ang itamba2kan paa meia$

kemampuan mem-ermentasi gula$ mengoksiasi nitrat an sebagain.a) eagen

.ang igunakan sebagai pereaksi menganung 3= larutan #irogen peroksia)

En5im katalase akan bereaksi engan 2.rogen peroksia .ang meng2asilkan

gas !oksigen") Per7obaan ilakukan engan 7ara i atas ka7a ob4ek itetesi satu

tetes #&B& 3=$ itamba2kan koloni bakteri an langsung iamati ter4ain.a penguraian 2irogen peroksia in.atakan positi- bila meng2asilkan en5im

katalase .ang itanai engan terbentukn.a gelembung uara an negati- bila

tiak aa gelembung uara$ ini ter4ai karena bakteri .ang apabila itamba2kan

2irogen peroksia meng2asilkan peroksia) Mekanisme en5im katalase meme7a2

#&B& .aitu saat melakukan respirasi$ bakteri meng2asilkan berbagai ma7am

komponen sala2 satun.a #&B&) ,akteri .ang memiliki kemampuan meme7a2

#&B& engan en5im katalase maka segera membentuk suatu sistem perta2anan

ari toksik #&B& .ang i2asilkann.a seniri) ,akteri katalase positi- akan

meme7a2 #&B& men4ai #&B an B& imana parameter .ang menun4ukkan aan.a

akti/itas katalase tersebut aala2 aan.a gelembung9gelembung oksigen seperti

paa per7obaan .ang tela2 ilakukan) Prinsip ari u4i katalase aala2 pernapasan



anaerob$ mikroorganisme memprouksi 2.rogen peroksia an alam beberapa

kasus$ ba2kan men7apai ra7un toksik superoksia) Akumulasi ari 5at ini apat

mengakibatkan kematian organisme ke7uali mereka apat menegraasi se7ara

en5imatis) Gat ini iprouksi ketika lingkungan aerob$ -akultati- anaerob$ an

mikroaero-il igunakan alam 4alur pernapasan aerobi7$ imana oksigenmerupakan ak2ir aseptor ele7tron$ selama penegraasian karbo2irat untuk

prouksi energ.) Brganisme mampu memprouksi katalase .ang se7ara 7epat

mampu menegraasi 2.rogen peroksia) Brganisme aerobi7 .ang kekurangan

katalase apat menegraasi terutama superoksia toksik menggunakan en5im

superoksia ismutase) ,erasarkan per7obaan .ang tela2 ilakukan engan

menggunakan bakteri , maka 2asil menun4ukan ba2a tiak membentukk

gelembung gas .ang menanakan ba2a paa u4i katalase bakteri , menun4ukan

2asil negati-)

Meia B; merupakan sala2 satu meia .ang igunakan untuk pengu4ian

-isio9metabolisme suatu bakteri .aitu untuk mengeta2ui kemampuan meme7a2

karbo2irat !glukosa" alam suasana aerobik !oksiati-" an anaerobik !-ermentati/e" !Pel75ar 1<+6") ,akteri .ang meng2asilkan arna kuning 4ika

itamba2kan para--in 7air merupakan bakteri .ang apat meman-aatkan glukosa)

,erasarkan per7obaan maka paa tabung .ang tiak iberikan para--in 7air

meng2asilkan arna kuning an paa bakteri .ang itamba2kan para--in 7air 4uga

meng2asilkan arna kuning se2ingga bakteri ini termasuk bakteri oksiati- an

bakteri -ermentati-)

Prinsip u4i motilitas .aitu untuk mengeta2ui apaka2 bakteri .ang iamati

motil !bergerak" atau tiak) Apabila setela2 ilakukan inkubasi selama &' 4am$

bakteri tumbu2 paa permukaan meia$ maka bakteri tersebut motil atau u4i

positi-$ tetapi bila bakteri 2an.a tumbu2 paa bekas tusukan 4arum inokulasi$

maka bakteri tersebut tiak motil atau u4i negati- !Carigan 1<++") Paa per7obaan

.ang ilakukan bakteri 2an.a tumbu2 paa bagian .angg itusukan sa4a se2ingga

2asil .ang iapatkan aala2 bakteri nonmotil)

Larutan gelatin bersi-at 7air paa su2u ruang atau su2u kamar an paat

apabila beraa alam lemari es) ,ila gelatin tela2 i2irolisa ole2 4asa renik akan

tetap bersi-at 7air meskipun beraa alam lemari es) #irolisis gelatin ter4ai

karena bakteri meng2asilkan gelatinase untuk meng2irolisis polimer protein$

gelatin$ asam amino) Prinsip u4i >elatin .aitu untuk meli2at kepemilikian en5im

proteolitik paa bakteri untuk menguraikan gelatin) >elatin .ang tela2 teruraikan

ole2 bakteri tiak akan membeku paa su2u ingin) %ebalikn.a gelatin .ang tiak

teruraikan ole2 bakteri akan membeku paa su2u ingin) Jai u4i positi- itanaiengan gelatin .ang 7air paa su2u ingin !Le2ninger 1<+&") ,erasarkan 2asil

per7obaan maka bakteri , tetap 7air meskipun paa su2u ingin se2ingga

meng2asilkan 2asil positi- paa u4i gelatin)

Sim-lan

,erasarkan 2asil per7obaan maka paa u4i katalase iperole2 2asil

negati-$ paa u4i oksiase iperole2 2asil negati-$ paa u4i B; bakteri

menun4ukan 2asil Not Testable an bakteri tersebut aala2 bakteri aerob an

bakteri anaerob) Paa u4i Motilitas paa bakteri , menun4ukan 2asil positi- an



paa u4i gelatin bakteri , menun4ukan 2asil positi- apat isimpulkan engan

menggunakan tabel 8oan maka bakteri , merupakan bakteri Bacillus)

Daftar "staka

8orin E) &00+. Buku Saku Patofisiologi) %ubekti$ Nike ,u2i$ pener4ema2)Jakarta : Penerbit ,uku Keokteran E>8) Cer4ema2an ari: Handbook Of

Pathophysiology.

i4oseputro) 1<<') Dasa!Dasa Mikobiologi. Jakarta: 4ambatan

Le2ninger$ AL) 1<+&) Dasa!dasa Bioki"ia) Pener4ema2: Mangg.

C2enai4a.a) Jakarta: Erlangga) Cer4ema2an ari Prin7iple o-

,io72emistr.

Marlina) &00+) Identifikasi baktei #ibio paahae"olitycus dengan "etode

Biolog dan Deteksi $en To%&nya secaa P'&) Jurnal %ains an Ceknologi

armasi ol 13 No 1 &00+

Mul.ono) 1<<&) Teknologi (e"entasi) ,ogor : IP,

Pel75ar MJ$ 82an E)8)%) 1<+6) Dasa!Dasa Mikobiologi) Jakarta: I9Press)

Caringan J) 1<++) Penganta Mikobiologi) Jakarta: epartemen peniikan

(alu.o$ L) &00') Mikobiologi )"u") Malang: ni/ersitas Mu2amai.a2

Malang

identifikasi_bakteri

Documents

Transcript of identifikasi_bakteri