EVALUASI EFEK PROTEKTIF EKSTRAK DAUN PALIASA Kleinhovia...

EVALUASI EFEK PROTEKTIF EKSTRAK DAUN PALIASA

(Kleinhovia hospita Linn.) TERHADAP PENINGKATAN

AKTIVITAS PEROKSIDASI LIPID HATI PADA TIKUS PUTIH

YANG DIINDUKSI DENGAN DOKSORUBISIN

SUSANTY TANDILILING

N11113029

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR

2017

ii

EVALUASI EFEK PROTEKTIF EKSTRAK DAUN PALIASA (Kleinhovia hospita Linn.) TERHADAP PENINGKATAN AKTIVITAS

PEROKSIDASI LIPID HATI PADA TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI DENGAN DOKSORUBISIN

SKRIPSI

untuk melengkapi tugas-tugas dan memenuhi syarat-syarat untuk mencapai gelar sarjana

SUSANTY TANDILILING N11113029

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR

2017

iii

EVALUASI EFEK PROTEKTIF EKSTRAK DAUN PALIASA (Kleinhovia hospita Linn.) TERHADAP PENINGKATAN AKTIVITAS

PEROKSIDASI LIPID HATI PADA TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI DENGAN DOKSORUBISIN

SUSANTY TANDILILING N11113029

Pada Tanggal, 5 April 2017

Pembimbing Pertama,

Subehan, S.Si., M.Pharm.Sc., Ph.D., Apt. NIP. 19750952 200112 1 002

Pembimbing Kedua,

Firzan Nainu, S.Si., M.Biomed.Sc., Ph.D., Apt. NIP. 19820610 200801 1 012

Disetujui oleh : Pembimbing Utama,

Yulia Yusrini Djabir, S.Si., MBM.Sc.,M.Si., Ph.D.,Apt.

NIP. 19780728 200212 2 003

iv

PENGESAHAN EVALUASI EFEK PROTEKTIF EKSTRAK DAUN PALIASA

(Kleinhovia hospita Linn.) TERHADAP PENINGKATAN AKTIVITAS PEROKSIDASI LIPID HATI PADA TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI DENGAN DOKSORUBISIN

Oleh :

SUSANTY TANDILILING

N11113029

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin

Pada Tanggal : 5 April 2017

Panitia Penguji Skripsi :

1. Ketua : Drs. Syaharuddin Kasim, M.Si., Apt.

2. Sekretaris : Habibie, S.Si., M.Pharm.Sc., Apt.

3. Anggota (Ex.Off) :Yulia Y.Djabir, S.Si., MBM.Sc.,M.Si.,Ph.D., Apt.

4. Anggota (Ex.Off) : Subehan, S.Si., M.Pharm.Sc., Ph.D., Apt.

5. Anggota (Ex.Off) : Firzan Nainu,S.Si., M.Biomed.Sc., Ph.D., Apt.

6. Anggota : Sumarheni, S.Si., M.Sc., Apt

v

PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan di bawah ini :

Nama : Susanty Tandililing

NIM : N11113029

Judul Skripsi :“Evaluasi Efek Protektif Ekstrak Daun Paliasa

(Kleinhovia hospita Linn.) Terhadap Peningkatan

Aktivitas Peroksidasi Lipid Hati Pada Tikus Putih

Yang Diinduksi Dengan Doksorubisin”

Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini adalah karya

saya sendiri, tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk

memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi dan sepanjang

pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah

ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu

dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Apabila dikemudian hari terbukti bahwa pernyataan saya ini tidak

benar, maka skripsi dan gelar yang diperoleh, batal demi hukum.

Makassar, 5 April 2017

Penulis,

Susanty Tandililing

vi

UCAPAN TERIMA KASIH

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yesus Kristus

atas segala limpahan kasih dan berkat yang telah Dia berikan kepada

penulis sehingga dapat menyelesaikan penyusunan skripsi ini sebagai

salah satu syarat dalam menyelesaikan studiprogram studi S1 pada

program studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin.

Penulis menyadari selama penyusunan skripsi ini, tidak terlepas

dari dukungan doa, bantuan dan nasihat dari berbagai pihak. Pada

kesempatan yang berbahagia ini perkenankan penulis mengucapkan

terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

1. Kedua orang tua yang sangat penulis cintai, Ayahanda Yosef Sampe

Tandililing dan Ibunda Ruth Minanga yang senantiasa berdoa,

memberikan semangat, memberikan cintanya, mendukung dalam

pemenuhan biaya dan dalam segala hal selalu memberikan yang

terbaik yang tak bisa penulis ucapkan dan balas satu per satu.

2. Dosen pembimbing penulis dalam penyelesaian tugas akhir ini,

pembimbing utama Ibu Yulia Yusrini

Djabir,S.Si.,MBM.Sc.,M.Si.,Ph.D.,Apt, pembimbing pertama Bapak

Subehan, S.Si., M.Pharm, Sc.,Ph.D., Apt dan pembimbing kedua

Bapak Firzan Nainu, S.Si., M.Biomed, Sc., Ph.D., Apt yang dengan

penuh kesabaran membimbing dan mengarahkan penulis.

vii

3. Tim Penguji penulis Bapak Drs.Syaharuddin Kasim, M.Si., Apt, Bapak

Habibie, S.Si., M.Pharm.Sc, Apt dan Ibu Sumarheni, S.Si.,M.Sc., Apt

yang telah memberikan kritik dan saran yang sangat membantu dalam

penyusunan skripsi ini.

4. Penasehat Akademik penulis yang terhormat Bapak Drs. Syaharudin

Kasim, M.Si., Apt yang sekaligus juga sebagai ketua penguji penulis

yang telah penulis anggap sebagai orang tua penulis yang telah

memberikan bimbingan dan senantiasa memotivasi penulis dari awal

perkuliahan sampai penyelesaian tugas akhir ini.

5. Dekan, Wakil Dekan I, Wakil Dekan II, Wakil Dekan III dan

semuadosen serta staf Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin

yang telah banyak membantu penulis selama proses studi di Fakultas

Farmasi.

6. Laboran Farmasi Klinik Ibu Adriana Pidun, Laboran Biofarmasi Ibu

Syamsiah dan Laboran Fitokimia Kak Abdillah Mahmud yang telah

menyediakan waktunya, membantu dan terus memotivasi penulis

selama proses penelitian.

7. Saudara-saudara penulis Sakti Tandililing, Silvester Ramba’

Tandililing, Semuel Ramba’ Tandililing, Febriono Tandililing dan

Filadelfia Ramba’ Tandililing yang senantiasa memberikan doa, cinta

kasihnya dan semangatnya kepada penulis serta terima kasih untuk

setiap keluarga yang tak bisa penulis ucapkan satu per satu.

viii

8. Teman-teman angkatan 2013“THEOBROMINE”yang sungguh luar

biasa membantu penulis kurang lebih 4 tahun berjuang bersama

meraih mimpi di Fakultas Farmasi tercinta.

9. Teman-teman “GENGTOR” 2013 Ilda, Alvin, Apri, Wanda, Christin,

Tovan, Yadi, Deris, Cosye, Datu, Elfin, Ersol, Febri, Deden, Elan,

Mitha, Indria, Jeni, Lola, Luiz, Maria, Marselina, Malvin, Nata, Novia,

Rani, Resta, Revi, Dita, Rupin, Silva, Vero, Milka, Septi, Uni, Mbak

Yun dan Tisar yang selalu menjalin kebersamaan, keceriaan dan

terus menyemangati penulis dalam menjalani keseharian dunia

kampus.

10. Teman-teman seperjuangan penelitianDerisyanti Kala’Padang,

Emiliana D.P Djawa dan Dewi Datu Sarira yang senantiasa

mendukung penulis dalam doa, memberikan waktu, pikiran, tenaga

dan terus berjuang bersama selama proses penyelesaian tugas akhir.

11. Teman-teman KOPRS Asiten Farmasi Klinik yang telah menjadi

bagian perjalanan kehidupan penulis yang telah berbagi ilmunya dan

terus menyemangati dalam penyelesai tugas akhir ini.

12. Teman-teman terkasih Kelompok Tumbuh Bersama (KTB) Angelo

Blessing (Kak Faradis, Kak Lia, Nata, Septi, Rani dan Febri) dan adik-

adik PAKTB Jill Albertin (Adel, Totting, Welty, Marni dan Irene) yang

telah menjadi keluarga kedua tempat berbagi kehidupan, tempat

untuk bertumbuh mengenal Kristus, yang terus menguatkan dan

menopang dalam doa dan dalam berbagai hal. Seluruh teman-teman

ix

PMKO Filadelfia MIPA_Farmasi Unhas baik kakak-kakak alumni,

teman pengurus maupun adik-adik di fakultas Farmasi dan MIPA yang

senantiasa mendukung dalam doa, pelayanan maupun study.

13. Teman-teman KKN Gelombang 93 Kabupaten Wajo khususnya teman

posko Desa Inalipue Kak Tommy, Malik, Saleh, Ida, Ifa dan Dina serta

Bapak Hj. Sulaiman beserta Ibu Hj. Emba yang telah berbagi

pengalaman dan menjadi bagian penting dalam kehidupan

perjuangan penulis.

14. Sahabat terbaik penulis Avner Tangkeallo, Jein Pratiwi, Linda Friskila,

Natalia Rombe, Ruth Rantela’bi dan Leny Satriani Lebang yang terus

menyemangati, memberikan doa, motivasi bahkan cinta kasihnya

kepada penulis.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan,

oleh karena itu saran dan kritik yang membangun dari semua pihak

sangat diharapkan untuk penulis guna memperbaiki penelitian selanjutnya

dapat menjadi lebih baik dan semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi

kita semua.

Penulis,

Susanty Tandililing

x

ABSTRAK

Doksorubisin merupakan salah satu obat antikanker paling penting dan banyak digunakan.Peningkatan radikal bebas seperti yang terjadi dengan penggunaan doksorubisin menyebabkan kondisi stres oksidatif yang ditandai dengan peningkatan pembentukan peroksidasi lipid yang berpotensi menimbulkan kerusakan sel termasuk sel hati.Penelitian ini bertujuan untuk menguji efek pemberian ekstrak daun paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) sebelum penggunaan doksorubisin terhadap aktivitas peroksidasi lipid melalui pengukuran malondialdehida (MDA).Tikus putih jantan sebanyak 20 ekor dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan. Kelompok I adalah kelompok kontrol sehat, kelompok II adalah kelompok yang hanya diinjeksikan doksorubisin (25 mg/kgBB), kelompok III adalah kelompok yang diberikan ekstrak etanol paliasa 100 mg/kgBB secara peroral selama 5 hari sebelum injeksi doksorubisin dan kelompok IV adalah kelompok yang diberikan ekstrak etanol paliasa 250 mg/kgBB secara peroral selama 5 hari sebelum injeksi doksorubisin. Setelah 48 jam penyuntikan doksorubisin, dilakukan pembedahan organ hati dan diukur kadar MDA hati dengan metode Thiobarbituric Acid Reactive Subtance (TBARS) menggunakan Spektrofotometer UV-VIS pada panjang gelombang 531 nm. Tikus yang hanya disuntikkan doksorubisin mengalami peningkatan kadar MDA hati sebesar 0,67±0,061 µg/mL yang sangat signifikan dibandingkan kelompok kontrol dengan kadar MDA hati 0,27±0,133 µg/mL. Kelompok yang diberi praperlakuan dengan ekstrak paliasa baik 100 mg/kgBB maupun 250 mg/kgBB menurunkan kadar MDA hati sebesar 50% dan 35% dibandingkan kelompok doksorubisin (p

xi

ABSTRACT

Doxorubicin is one of the most important anticancer drugs thatis

widely used. Increasing level of free radicals induced by doxorubicin,

promotes oxidative stress condition characterized by increased formation

of lipid peroxidation, which causes damage to liver cells. The aim of this

study was to investigate the effect extract of paliasa (Kleinhovia hospita

Linn.) on doxorubicin-induced lipid peroxidation activity in liver tissue using

malondialdehyde (MDA) parameter. Twenty male wistar rats were divided

into 4groups.Group I was defined as the healthy control group. Group II

was injected with doxorubicin (25 mg/kgBW). Group III was given ethanol

extract of paliasa 100 mg/kgBW for 5 days prior to doxorubicin injection,

and group IV was given ethanol extract of paliasa 250 mg/kgBW for 5 days

prior to doxorubicin injection. After 48 hours from doxorubicin injection,

MDA of liver tissue was measured by the Thiobarbituric Acid Reactive

Substance (TBARS) method, using Spectrophotometer UV-VIS at 531

nm.Rats injected withdoxorubicin had the highest levels of MDA

(0,67±0,061µg/mL), which increased significantly compared to the control

group (0,27±0,133µg/mL). The level of MDA in extract-treated groups (100

mg/kgBW and 250 mg/kgBW) was signicantly lower than the ones without

treatment, showing 50% and 35% lower than doxorubicin-treated

group(p

xii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN PERSETUJUAN ............................................................... iii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................. iv

HALAMAN PERNYATAAN ................................................................. v

UCAPAN TERIMA KASIH ................................................................... vi

ABSTRAK ........................................................................................... x

ABSTRACT ......................................................................................... xi

DAFTAR ISI ........................................................................................ xii

DAFTAR TABEL ................................................................................. xv

DAFTAR GAMBAR ............................................................................. xvi

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... xviii

BAB I PENDAHULUAN ....................................................................... 1

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................. 4

II.1 Doksorubisin ....................................................................... 4

II.1.1 Mekanisme Kerja ............................................................. 4

II.1.2 Farmakokinetika .............................................................. 6

II.1.3 Dosis ............................................................................... 6

II.1.4 Efek Samping .................................................................. 7

II.2 Paliasa (Klenhovia hospita Linn.) ........................................ 8

II.2.1 Klasifikasi Daun Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) ........ 9

II.2.2.Deskripsi Tanaman ........................................................... 10

xiii

II.3 Hati ...................................................................................... 11

II.4 Peroksidasi Lipid ................................................................. 14

II.4.1 Pembentukan Peroksidasi Lipid ....................................... 14

II.4.2 Pengukuran MDA Sebagai Indikator Peroksidasi Lipid ... 16

BAB III METODE PENELITIAN .......................................................... 17

III.1 Alat dan Bahan .................................................................. 17

III.1.1 Alat ................................................................................. 17

III.1.2 Bahan ............................................................................. 17

III.2. Cara Kerja ........................................................................ 17

III.2.1 Penyiapan Hewan Coba ................................................. 17

III.2.2 Pengolahan Sampel Daun Paliasa ................................. 18

III.2.3 Penyiapan Ekstrak Daun Paliasa .................................... 18

III.3 Prosedur Percobaan........................................................... 19

III.3.1 Perlakuan ........................................................................ 19

III.3.2 Pengambilan Organ Hati ................................................ 20

III.4 Pengukuran Kadar MDA Hati ............................................. 20

III.4.1 Pengukuran Kurva Baku ................................................. 20

III.4.2 Preparasi dan Evaluasi Jaringan Hati .............................. 21

III.5 Analisa Statistik .................................................................. 21

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................... 22

IV.1 Hasil Penelitian .................................................................. 22

IV.1.1 Penentuan Kurva Baku ................................................... 22

IV.1.2 Analisis Kadar Malondialdehida (MDA) .......................... 23

xiv

IV.2 Pembahasan ..................................................................... 24

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ................................................... 27

V.1 Kesimpulan ......................................................................... 27

V.2 Saran ................................................................................. 27

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................ 28

xv

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Absorbansi TMP (Standar MDA) ................................................... 22

2. Kadar Malondialdehida (MDA) Hati Tikus Putih ............................. 23

xvi

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1. Struktur Molekul Doksorubisin ...................................................... 4

2. Mekanisme Kerusakan DNA oleh Doksorubisin ............................ 5

3. Struktur Kleinhospitine A-D............................................................ 5

4. Daun Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) ........................................ 10

5. Anatomi Hati .................................................................................. 11

6. Reaksi Peroksidasi Lipid .............................................................. 14

7. Reaksi antara TBA dan MDA ......................................................... 16

8. Kurva Baku MDA ........................................................................... 22

9. Profil Rerata±SD Kadar MDA Hati Tikus Putih .............................. 23

10. Spektrum Panjang Gelombang Larutan Baku ............................... 35

11. Spektrum Absorbansi Kurva Baku ................................................. 36

12. Spektrum Absorbansi Kontrol dan Perlakuan ................................ 37

13. Proses Rotavapor .......................................................................... 46

14. Ekstrak Kental Etanol Paliasa ........................................................ 46

15. Tikus Putih (Rattus novergicus) ..................................................... 46

16. Pemberian Suspensi Ekstrak ........................................................ 46

17. Penyuntikan Doksorubisin ............................................................. 46

18. Pembedahan Organ Hati ............................................................... 46

19. Sentrifuge ...................................................................................... 46

20. Supernatan Untuk Dianalisis ......................................................... 47

xvii

21. Waterbath ...................................................................................... 47

22. Spektrofotometer UV-Visibel ......................................................... 47

xviii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Skema Kerja Uji Efek Pemberian Ekstrak Daun Paliasa .............. 32

2. Skema Kerja Preparasi dan Evaluasi Jaringan Hati ...................... 33

3. Skema Kerja Penyiapan Larutan Baku .......................................... 34

4. Spektrum Panjang Gelombang Kurva Baku .................................. 35

5. Spektrum Absorbansi Kurva Baku ................................................. 36

6. Spektrum Absorbansi Kelompok Kontrol dan Perlakuan ............... 37

7. Kadar MDA Hati Tikus Putih Setelah Perlakuan ........................... 38

8. Perhitungan Dosis dan Kadar Malondialdehida ............................. 39

9. Hasil Data Statistik One Way ANOVA ........................................... 44

10. Gambar Penelitian ......................................................................... 46

11. Rekomendasi Persetujuan Etik ...................................................... 48

1

BAB I

PENDAHULUAN

Doksorubisin merupakan antibiotik antrasiklin yang bersifat

antineoplastik yang diisolasi dari Streptomyces peucetius untuk

pengobatan sarkoma dan berbagai karsinoma, termasuk kanker payudara

dan paru, leukemi limfostik akut dan limfoma(1).Mekanisme kerja dari

doksorubisin melalui empat mekanisme utama yaitu : 1) penghambatan

topoisomerase II, 2) afinitas tinggi mengikat DNA, 3) mengikat membran

sel untuk mengubah fluiditas dan transportasi ion, dan 4) menghasilkan

radikal bebas membunuh sel kanker (2). Namun, penggunaan

doksorubisin pada terapi kanker dapat memberikan beberapa efek

samping antara lain kardiotoksisitas, hepatotoksisitas, mempengaruhi

sistem imun, rambut rontok dan radang tenggorokan (3,4).

Peningkatan radikal bebas seperti yang terjadi dengan penggunaan

doksorubisin, akan menyebabkan kondisi stres oksidatif. Stres oksidatif

terjadi karena adanya ketidakseimbangan antara oksidan dan antioksidan

yang kemudian berpotensi menimbulkan kerusakan sel termasuk sel hati

(5).Peningkatan stres oksidatif seringkali mengakibatkan peningkatan

aktivitas peroksidasi lipid.Peroksidasi lipid menyebabkan kerusakan

membran sel secara langsung dantidak langsung. Efek langsung

menyebabkan kerusakan pada struktur membran sel dan efek tidak

langsung melalui produk-produk metabolit dari peroksidasi lipid yang

disebut dengan Malondialdehida (MDA). Malondialdehida sebagai produk

2

akhir dapat digunakan sebagai marker untuk mengetahui derajat

kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh peroksidasi lipid (6,7).

Salah satu strategi yang dipilih untuk mengatasi efek

hepatotoksisitas dari penggunaan doksorubisin adalah menggunakan

ekstrak daun Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.).Paliasa (Kleinhovia

hospita Linn.)merupakan tumbuhan yang banyak digunakanoleh

masyarakat Sulawesi Selatan sebagai obat tradisional untuk mengobati

penyakit hepatitis. Daun paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) mengandung

senyawa kimia triterpenoid alkaloid, kleinhospitin A-D yang mempunyai

efek penghambatan terhadap toksisitas H2O2 pada kultur sel hati (8). Daun

Paliasa juga mengandung kaempherol 3-O-β-glukosida dan eleuterol yang

bersifat sebagai antioksidan yang dibuktikan secara in vitro menggunakan

metode DPPH (9).Selain itu, daun paliasa mengandung senyawa kimia

saponin, cardenolin, bufadienol dan antrakinon (10).Penelitian

sebelumnya juga menunjukkan bahwa paliasa mampu memproteksi

hepatotoksisitas obat paracetamol dosis tinggi (11) dan pemberian infus

daun paliasa dengan konsentrasi 15% b/v pada mencit jantan selama

tujuh hari, kemudian diinduksi dengan parasetamol dosis toksik mampu

memberikan efek hepatoprotektif (12).

Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji efek pemberian ekstrak

daun paliasa sebelum penggunaan doksorubisin terhadap aktivitas

peroksidasi lipid pada jaringan hatimelalui pengukuran MDA

hati.Penelitian ini bermanfaaat untuk memberikan informasi mengenai

3

potensi ekstrak daun paliasayang dapat digunakan untuk mengurangi efek

hepatotoksisitas dari penggunaan doksorubisin terutama karena aktivitas

peroksidasi lipid jaringan.

4

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II.1 Doksorubisin

Doksorubisin merupakan antibiotik antrasiklin yang bersifat

antineoplastik yang diisolasi dari Streptomyces peucetius untuk

pengobatan sarkoma dan berbagai karsinoma, termasuk kanker payudara

dan paru, leukemi limfostik akut dan limfoma (1). Doksorubisin merupakan

salah satu obat antikanker paling penting dan banyak digunakan (13).

Gambar 1. Struktur Molekul Doksorubisin. Doksorubisin terdiri dari bagian aglikon

dangula yang terikatsecara glikosidik pada C-7. Bagian aglikon terdiri dari 4 cincin, sedangkanbagian gulanya terdiri dari 3-amino-2,3,6-trideoksi-L-fukosil (14).

II.1.1 Mekanisme Kerja

Mekanisme kerja dari doksorubisin melalui empat mekanisme

utama yaitu : 1) penghambatan topoisomerase II, 2) afinitas tinggi

mengikat DNA melalui interkalasi dengan blokade akibat dari sintesis DNA

dan RNA, 3) mengikat membran sel untuk mengubah fluiditas dan

transportasi ion dan 4)menghasilkan radikal bebas membunuh sel kanker

(2). Doksorubisin mempunyai kemampuan untuk berikatan denganDNA

5

melalui proses yang disebut denganinterkalasi,sehingga menyebabkan

terganggunya sintesis RNA dan DNA. Enzim topoisomerase

jugamerupakan target yang penting pada pemakaian doksorubisin. Enzim

ini mempertahankan struktur 3 dimensidariDNA dan penting pada proses

replikasi,transkripsi, repairdan rekombinasi DNA yang bekerja melalui

pemotongan danpenyambungan rantai DNA serta

mengganggupenyambungan rantai DNA.Rantai DNA dirusakoleh radikal

bebas yang terbentuk.Mekanisme lainadalah kerusakan bagian sel oleh

reaksi oksidasi yangdiakibatkan oleh senyawa intermediat yang terbentuk

(15, 16).

Gambar 2.Mekanisme Kerusakan DNA oleh Doksorubisin (17).

6

II.1.2 Farmakokinetik

Doksorubisin tidak stabil dalam lingkungan asam sehingga tidak

dapat diberikan secara oral sehingga harus diberikan melalui rute

intravena.Setelahpemberian intravena, konsentrasi obat dalam plasma

akanmeningkat secara cepat dan segera didistribusikan kedalam jaringan.

Pengikatan obat oleh jaringan disebabkanoleh volume distribusi obat yang

sangat tinggi (>500 L/m2). Kadar doksorubisin didalam jaringan dapat

mencapai100 kali lebih tinggi bila dibandingkan dengan kadar obat dalam

plasma dan obat dapat bertahan dalam waktu yanglama.Doksorubisin

mempunyai waktu paruh 30 jam, dieliminasi melalui biotransformasi

yangterjadi terutama di hati dan diekskresi melalui empedu. Doksorubisin

akan memberikan warna merah pada urine (13,16).

II.1.3 Dosis

Secara klinis, efek yang terjadi dari penggunaan doksorubisin

tergantung pada dosis pemakaian obat sehingga sangat penting dilakukan

pemeriksaan pada pasien. Dosis doksorubisin untuk dewasa adalah 60-75

mg/m2diberikan sebagai suntikan tunggal setiap 3 minggu sampai dosis

total tidak melebihi 550 mg/m2. Alternatif dosis yang dapat digunakan

untuk mengurangi efek samping adalah 20 mg/m2setiap minggu.Pada

gangguan hati dosis dikurangi 25-75% baik pada anak maupun

dewasa.Selain itu, pada pasien setelah radiasi dosis harus dikurangi

menjadi 400 mg/m2. Dosis total yang diberikan juga harus diturunkan bila

sebelumnya pasien telah diberikan atau diberikan bersamaan dengan

7

antineoplastik tertentu misalnya siklofosfamid (18). Untuk penggunaan

pre-klinik, penelitian menunjukkan bahwa penggunaan doksorubisin

dengan dosis 20 - 60 mg/kgBB mampu menginduksi peningkatan radikal

bebas pada hati tikus dalam 24 jam (19,20).

II.1.4 Efek Samping

Salah satu mekanisme doksorubisin sebagai agen kemoterapi melalui

pembentukan radikal bebas yang menyebabkan kerusakan DNA atau peroksidasi

lipid(13).Cincin C pada doksorubisin berbentuk quinone,dapat mengalami

reaksi reduksi oleh flavindependent reduktase membentuk

semiquinone.Bentuk semiquinone adalah bentuk radikalbebas.Bila

terdapat oksigen, semiquinone akanmemberikan elektron yang tidak

berpasangan kemolekul oksigen sehingga terbentuklah superoxideanion

O2.Anion superoxide melalui proses enzimatik olehsuperoxide dismutase

akan membentuk molekuloksigen dan hidrogen peroksida (H2O2).Eliminasi

H2O2merupakan tahapan yang penting, karena H2O2 mempunyai

kemampuan memicupembentukan radikal hidroksil suatu oksidan yang

sangat reaktif dan destruktif (16).

Penggunaan doksorubisin pada terapi kanker dapat memberikan

beberapa efek samping antara lain hepatotoksisitas, kardiotoksisitas,

mempengaruhi sistem imun, rambut rontok dan radang tenggorokan (3,4).

Efek hepatotoksisitas seperti yang terjadi dengan penggunaan

doksorubisin menyebabkan terjadinya peningkatan radikal bebas yang

akan menyebabkan kondisi stress oksidatif. Stres oksidatif terjadi karena

8

adanya ketidakseimbangan antara oksidan dan antioksidan yang

kemudian berpotensi menimbulkan kerusakan sel termasuk sel hati (5)

Selain itu, efek hepatotoksisitas dari agen kemoterapi ini dapat

menginduksi akumulasi inflammatory cells yang terkait dengan

peningkatan amino transferase seperti alanin transaminase (ALT) dan

aspartat trasnaminase (AST) dalam serum. Peningkatan kadar ALT dan

AST akan terjadi jika adanya pelepasan enzim secara intraseluler ke

dalam darah yang disebabkan nekrosis sel-sel hati atau adanya

kerusakan hati secara akut (21).

Secara klinis, efek kardiotoksik yang terjaditergantung pada dosis

pemakaian obat.Saat dosis kumulatif doksorubisin mencapai 550 mg/ml,

risiko efek samping pada jantungmeningkat, termasuk gagal jantung,

pelebarancardiomyopathy dan kematian.Doksorubisin juga menyebabkan

supresi sum-sum tulang, stomatitis dan gangguan saluran pencernaan

serta alopepsia yang parah (13, 22).

II.2. Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.)

Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.)merupakan tumbuhan yang

banyak digunakan oleh masyarakat Sulawesi Selatan sebagai obat

tradisional untuk mengobati penyakit hepatitis.Paliasa termasuk salah satu

dari 19 tanaman unggulanyang sedang dikembangkan untukmenjadi

fitofarmaka antihepatitis. Daunpaliasa digunakan dan dipercayaberkhasiat

sebagai obat yang mampu mengobati penyakit

9

hepatitis,hipertensi,diabetes dan kolesterol dengan cara meminum air

rebusannya (10, 23).

Daun paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) mengandung senyawa

kimia triterpenoid alkaloid, kleinhospitine A-D yang mempunyai efek

penghambatan terhadap toksisitas H2O2 pada kultur sel hati (8). Daun

Paliasa juga mengandung kaempherol 3-O-β-glukosida dan eleuterol yang

bersifat sebagai antioksidan yang dibuktikan secara in vitro menggunakan

metode DPPH (9).Selain itu, daun paliasa mengandung senyawa kimia

saponin, cardenolin, bufadienol, dan antrakinon (10).Dalam banyak

penelitian, telah dilaporkan bahwa berbagai tanaman telah

mengalamiekstraksi senyawa antioksidan dengan menggunakan pelarut

etanol(24).

Gambar 3. Struktur Kleinhospitine A-D

Dosis ekstrak paliasa yang digunakan adalah 100 mg/kgBB dan

250 mg/kgBB.Pemilihan dosis dibuat berdasarkan penelitian sebelumnya

yang menunjukkan dosis tersebut mampu melindungi hati (25).

10

II.2.1 Klasifikasi Daun Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.)(25)

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub Divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledoneae

Ordo : Mal xales

Famili : Sterculiaceae

Genus : Kleinhovia

Spesies : Kleinhovia hospita Linn.

II.2.2 Deskripsi Tanaman

Gambar 4. Daun Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) (26).

Nama daerah : Indonesia (Betenuh), Sumatera (Manjar), Jawa

(Ubut, Lesmu, Senu, Weina, Kayu Tahun, Katunanja, Tunala), Nusa

Tenggara (Katimala, Katimaljan, Klundang, Kadanga), Maluku (Mjededo,

Nguhulu, Ngaru, Kuhusu), Melayu (Katimahar, Kimau) dan Sulawesi (Kayu

Paliasa, Kauwasan, Aju Pali, Palia, Daun Monto). (25)

11

Kleinhovia hospita Linn. adalah termasuk tanaman yang selalu

hijau, pohonnya lebat dan dapat tumbuh hingga mencapai ketinggian 20-

30 m. Daunnya membulat berbentuk hati dengan panjang dan lebar 10-25

cm. Berbunga dua kali setahun pada bulan januari dan juli, bunganya

berwarna pink muda dengan lebar sekitar 5 mm. Buah berbentuk kapsul

berselaput yang membulat, merekah pada rogganya masing-masing

rongga berbiji 1-2. Tumbuhan ini dapat tumbuh umum di hutan dan

perkebunan seperti di daerah Papua Nugini, Indonesia dan Malaysia (26).

II.3. Hati

Gambar 5. Anatomi Hati (27).

Hati adalah organ metabolik terbesar dan terpenting ditubuh, organ

ini dapat dipandang sebagai pabrik biokimia utama tubuh.Organ hati

beratnya kira-kira 1500 gram dan terletak di sudut kanan atas perut.Hati

terkait erat dengan usus kecil yang melakukan lebih dari 500 fungsi

metabolik (27,28). Organ ini berfungsi dalam proses detoksifikasi senyawa

toksik, hematologik, sistem imun tubuh, berperan dalam proses

metabolisme biomolekul, dan sekresi produk akhir metabolisme seperti

12

bilirubin, amonia, dan urea. Meskipun memiliki beragam fungsi kompleks,

namun tidak banyak spesialisasi ditemukan di antara sel-sel hati. Setiap

sel hati atau hepatosit melakukan beragam tugas metabolik dan sekretorik

yang sama. Spesialisasi ditimbulkan oleh organel-organel yang

berkembang maju di dalam setiap hepatosit.Satu-satunya fungsi hati yang

tidak dilakukan oleh hepatosit adalah aktivasi fagosit yang dilaksanakan

oleh makrofag residen yang dikenal sebagai sel Kuppfer.Sel Kuppfer

menelan dan menghancurkan sel darah merah dan bakteri yang

melewatinya dalam darah (28, 29).

Untuk melaksanakan beragam tugasnya, susunan anatomik hati

memungkinkan setiap hepatosit berkontak langsung dengan darah dari

dua sumber, darah arteri yang datang dari aorta dan darah vena yang

datang langsung dari saluran cerna. Seperti sel lain, hepatosit menerima

darah arteri segar melalui arteri hepatika, yang menyalurkan oksigen dan

metabolit-metabolit darah untuk dilepas oleh hati. Vena-vena yang

mengalir dari saluran cerna tidak langsung menuju ke vena kafa inferior,

vena besar yang mengembalikan darah ke jantung.Namun vena-vena dari

lambung dan usus masuk ke vena porta hati, yang membawa produk yang

diserap dari saluran cerna langsung ke hati untuk diproses, disimpan, atau

didetoksifikasi sebelum produk-produk ini memperoleh akses ke sirkulasi

umum.Di dalam hati, vena porta kembali bercabang-cabang menjadi

anyaman kapiler (sinusoid hati) untuk memungkinkan terjadinya

13

pertukaran antara darah dan hepatosit sebelum darah mengalir ke dalam

vena hepatika, yang kemudian menyatu dengan vena kava inferior (28).

Hati tersusun menjadi unit-unit fungsional yang dikenal sebagai

lobulus.Hepatosit secara terus menerus mengeluarkan empedu ke dalam

saluran tipis yang disebut kanalikulus biliaris yang mengangkat empedu

ke duktus biliaris di tepi lobulus.Duktus-duktus biliaris dari berbagai

lobulus menyatu untuk akhirnya membentuk duktus biliaris komunis, yang

mengangkut empedu dari hati ke duodenum.Lubang duktus biliaris ke

dalam duodenum dijaga oleh sfingter Oddi yang mencegah empedu

masuk ke duodenum kecuali sewaktu pencernaan makanan.Ketika

sfingter ini tertutup, sebagian besar empedu yang disekresikan oleh hati

dialihkan balik ke dalam kandung empedu.Empedu tidak diangkut

langsung dari hati ke kandung empedu.Empedu kemudian disimpan dan

dipekatkan di kandung empedu diantara waktu makan.Setelah makan,

empedu masuk ke duodenum akibat efek kombinasi pengosongan

kandung empedu dan peningkatan sekresi empedu oleh hati.Jumlah

empedu yang disekresikan per hari berkisar dari 250 ml sampai 1 liter,

bergantung pada derajat perangsangan (28).

Empedu mengandung beberapa konstituen organik, yaitu garam

empedu, kolesterol, lesitin dan bilirubin yang semuanya berasal dari

aktivitas hepatosit.Meskipun empedu tidak mengandung enzim

pencernaan apapun, namun bahan ini penting dalam pencernaan dan

penyerapan lemak, terutama melalui aktivitas garam empedu.Membran-

14

membran mikrosom hati sangat rentan terhadap peroksidasi lipid, karena

membran tersebut banyak sekali mengandung asam lemak tak jenuh.

Proses peroksidasi lipid pada mikrosom hati dapat berlangsung secara

enzimatis dan nonenzimatis (28,29).

II.4. Peroksidasi Lipid

II.4.1 Pembentukan Peroksidasi Lipid

Lipid merupakan salah satu molekul yangpaling sensitif terhadap

serangan radikal bebassehingga terbentuk lipid peroksida.Peroksidasilipid

adalah reaksi yang terjadi antara radikalbebas dengan asam lemak tak

jenuh majemuk(Polyunsaturated fatty acid, PUFA) yangsedikitnya memiliki

tiga ikatan rangkap.Peroksidasi lipid terjadidiakibatkan oleh radikal

bebas.Radikal bebassangat labil dan reaktif sehingga mudah

bereaksidengan setiap zat disekitarnya.Peroksidasi lipid merupakan rantai

reaksiyang berlangsung terus menerus, sebab reaksi inimembentuk

radikal lipid bebas (R•) yang lainsehingga peroksidasi berlangsung lebih

lanjut (29).

Gambar 6. Reaksi Peroksidasi Lipid (28)

15

Umumnya peroksidasi lipid dapat melalui tiga tahap reaksi yaitu

inisiasi, propagasi, dan terminasi.Reaksi peroksidasi lipid diawali dengan

pemisahan sebuah atom hidrogen oleh radikal bebas dari suatu grup

metilena (-CH2-) PUFA. Radikal tersebut menghasilkan pembentukan

suatu radikal karbon (-•CH-) pada PUFA. Radikal karbon ini dapat

distabilkan melalui suatu pengaturan ulang ikatan rangkap yang

menghasilkan pembentukan diena terkonjugasi. Bila diena terkonjugasi

bereaksi dengan O2 akan terbentuk radikal peroksida lipid (ROO•).

Selanjutnya radikal peroksi lipid dapat juga menghilangkan sebuah atom

hidrogen dari molekul lipid lainnya yang berdekatan untuk membentuk

hidroperoksida lipid dan juga membentuk radikal karbon lainnya. Jika

radikal karbon lain tersebut bereaksi lagi dengan oksigen maka reaksi

peroksidasi lipid akan terus berlanjut. Pembentukan endoperoksida lipid

pada PUFA yang mengandung sedikitnya tiga ikatan rangkap akan

mendorong pembentukan malondialdehida (MDA) sebagai produk dari

reaksi peroksidasi tersebut. Malondialdehida sebagai produk akhir

peroksidasi lipid, biasanya digunakan sebagai biomarker biologis

peroksidasi lipid dan menggambarkan derajat stres oksidatif (7, 28). MDA

adalah senyawa dialdehida atau berkarbon tiga yang reaktif merupakan

produk final peroksidasi lipid di dalam membran sel. MDA dalam jaringan

terdapat dalam bentuk bebas atau membentuk ikatan kompleks dengan

unsur lainnya di dalam jaringan (30).

16

II.4.2 Pengukuran MDA Sebagai Indikator Peroksidasi Lipid

Kadar lipid peroksida dapat diukur dengan metode asam

tiobarbiturat (TBA) yang mengukur adanya MDA. TBA akan bereaksi

dengan gugus karbonil dari MDA, yaitu satu molekul MDA akan berikatan

dengan dua molekul TBA sehingga membentuk senyawa kompleks

berwarna merah. Terbentuknya warna merah tersebut akan diukur

serapannya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 532 nm

yang sebanding dengan tingkat oksidasi lipid (29).

Gambar 7. Reaksi anatara TBA dengan MDA (29)

17

BAB III

PELAKSANAANPENELITIAN

III.1 Alat dan Bahan

III.1.1 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu alat-alat gelas,

alat bedah,mikropipet (Socorex®), sentrifus (Hettich®), rotary evaporator

(Heidolp®), spektrofotometer uv-vis (Shimadzu MR 2500®), timbangan

analitik (Sartorius®), waterbath.

III.1.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu aquadest,

dietil eter, ekstrak daun paliasa (Kleinhovia hospita Linn.), doksorubisin

(Dankos®), NaCMC 1%, Natrium Klorida 0,9%, nitrogen cair,Phosphate

Buffer Saline (PBS), Triobarbiturat acid 1% (TBA), Trichloroacetic acid 1%

(TCA), 1,1,3,3-tetramethoxypropane (TMP).

III.2 Cara Kerja

III.2.1 Penyiapan Hewan Coba

Pada penelitian ini digunakan hewan coba berupa tikus putih

sebanyak 20 ekor dengan berat badan rata-rata 150-220 gram. Hewan

dimasukkan dalam 4 kandang berbeda, masing-masing berisi 5 ekor

tikus.Hewan percobaan diadaptasi dengan situasi dan kondisi lingkungan

laboratorium dengan pemberian pakan dan air minum selama 2

minggu.Penggunaan hewan coba berupa tikus putih telah mendapatkan

18

rekomendasi persetujuan etik dengan nomor 1382/H04.8.4.5.31/PP36-

KOMETIK/2016.

III.2.2. Pengolahan Sampel Daun Paliasa

Daun paliasa diperoleh di lingkungan Fakultas MIPA Universitas

Hasanuddin. Sampel daun paliasa yang telah dikumpulkan dipisahkan dari

pengotor dan daun yang rusak kemudian sampel dicuci dengan air

mengalir sampai bersih. Setelah itu, sampel dikeringkan dengan cara

diangin-anginkan selama 3 hari kemudian dilakukan perajangan untuk

memudahkan proses ekstraksi.

III.2.3 Penyiapan Ekstrak Daun Paliasa

Metode ekstraksi yang dilakukan dalam penelitian ini adalah

metode maserasi. Simplisia daun paliasa dimasukkan ke dalam bejana

maserasi kemudian ditambahkan etanol 70% secukupnya, selanjutnya

diaduk menggunakan batang pengaduk dan didiamkan selama 5 hari

sambil sesekali dilakukan pengadukan. Pada hari keenam, hasil maserasi

disaring kemudian dimasukkan ke alat rotavapor untuk memudahkan

proses pemisahan ekstrak dari cairan penyarinya untuk mendapatkan

ekstrak kental.

19

III.3 Prosedur Percobaan

III.3.1 Perlakuan

Hewan coba dikelompokkan menjadi 4 kelompok perlakuan dan

masing-masing kelompok perlakuan terdiri dari 5 ekor tikus.

- Kelompok I (kontrol sehat) tikus diberikan suspensi NaCMC 1%

(pembawa ekstrak) diberikan secara peroral selama 5 hari dan

disuntik NaCl 0,9%(pembawa doksorubisin) secara intraperitonial

pada hari ke-5

- Kelompok II diberikan suspensi NaCMC 1% (pembawa ekstrak)

peroral selama 5 hari dan diinjeksikan doksorubisin (25 mg/kgBB)

secara intraperitonial pada hari ke-5

- Kelompok III diberikan suspensi ekstrak etanol paliasa 100

mg/kgBB selama 5 hari. Pada hari ke-5 tikus diinjeksikan

doksorubisin (25 mg/kgBB) secara intraperitonial

- Kelompok IV diberikan suspensi ekstrak etanol paliasa 250

mg/kgBB selama 5 hari. Pada hari ke-5 tikus diinjeksikan

doksorubisin (25 mg/kgBB) secara intraperitonial

Prosedur ini dilakukan untuk melihat apakah pemakaian ekstrak

paliasa beberapa hari sebelum terapi doksorubisin dapat mengurangi

aktivitas peroksidasi lipid yang diinduksi doksorubisin.

20

III.3.2 Pengambilan Organ Hati

Setelah 48 jam penyuntikan doksorubisin, tikus dianastesi

menggunakan dietel eter dan dilakukan pembedahan dan diambil organ

hati. Sampel hati dimasukkan ke dalam nitrogen cair sampai beku dan

disimpan dalam lemari pendingin pada suhu -20˚C sampai organ siap

untuk dianalisa.

III.4 Pengukuran kadar MDA Hati

III.4.1 Pengukuran Kurva Baku

Pengukuran kurva baku dibuat dengan cara membuat terlebih

dahulu larutan standar. Larutan standar 1000 ppm dibuat dengan memipet

10 µL1,1,3,3-tetrametoksipropana (TMP) ke dalam labu tentukur 10

mLdan dicukupkan volumenya dengan aquadest. Kemudian dibuat larutan

standar 100 ppm dengan memipet 1 mL larutan standar 1000 ppm ke

dalam labu tentukur 10 mL. Deret standar dibuat sebanyak 8 variasi yaitu

konsentrasi 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8 ppm dengan memipet

masing masing 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 µL larutan stok 100 ppm ke

dalam labu tentukur 5 mL. Setiap konsentrasi TMP ditambahkan 2 mL

PBS pH 7,4; 1 mL TBA 1% dan 1 mL TCA 1% kemudian dipanaskan

dipenangas air dengan suhu 100˚C selama 40 menit selanjutnya diangkat

dan dibiarkan dingin beberapa menit. Lalu dilakukan analisis dengan

menggunakan spektrofotometer uv-vis pada panjang gelombang 531 nm

21

III.4.2 Preparasi dan Evaluasi Jaringan Hati

Aktivitas peroksidasi lipid dapat diketahui dengan pengukuran

malonaldehida (MDA).Pengukuran MDA dilakukan dengan metode

Thiobarbituric Acid Reactive Subtance (TBARS). Organ hati tikus digerus

menggunakan mortal kemudian ditimbang 400 mg menggunakan neraca

analitik, kemudian ditambahkan 2 mL PBS pH 7,4 dan digerus hingga

homogen kemudian dimasukkan ke dalam tabung sentrifus. Lalu

disentrifuse dengan kecepatan 3000 rpm selama 20 menit. Dipipet 0,5 ml

sampel lalu ditambahkan 1 mL TBA 1% dan 1 mL TCA 1% ke dalam

tabung. Kemudian dipanaskan di penangas air dengan suhu 100˚C

selama 40 menit, kemudian diangkat dan dibiarkan dingin beberapa

menit.Selanjutnya disentrifuse dengan kecepatan 3000 rpm selama 10

menit untuk memisahkan supernatannya.Lalu dilakukan analisis dengan

menggunakan spektrofotometer uv-vis pada panjang gelombang 531 nm

(31).

III.5 Analisa Statistik

Data yang dihasilkan dianalisa menggunakan software SPSS 16

kemudian diuji distribusi normalnya menggunakan Kolmogorov-Smirnov

Test. Data yang terdistribusi normal dianalisis menggunakan one way

ANOVA dilanjutkan dengan Post-Hoc Test Tukey HSD. Hasil dinyatakan

signifikan apabila p

22

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Penelitian

IV.1.1 Penentuan Kurva Baku

Berdasarkan hasil penelitian, diperoleh nilai absorbansi setiap

konsentrasi larutan baku pada panjang gelombang 531 nm dan

persamaan kurva baku yang ditunjukkan pada tabel 1 dan gambar 7.

Tabel 1. Absorbansi TMP (Standar MDA) pada konsentrasi 0,1-0,8 ppm

Konsentrasi (ppm) Absorbansi

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0. 14047

0.19377

0.33259

0.48484

0.63315

0.70359

0.84322

0.95213

Gambar 8. Kurva Baku MDA

y = 1,2131x - 0,01043R² = 0.99838

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

0 0 . 2 0 . 4 0 . 6 0 . 8 1

Absorb

ansi

Konsentrasi (ppm)

23

IV.1.2 Analisis Kadar Malondialdehida (MDA)

Kadar MDA diukur menggunakan alat spektrofotemeter UV-Visible

dan ditunjukkan pada tabel 2 dan gambar 8.

Tabel 2. Kadar Malondialdehida (MDA) Hati Tikus Putih Setelah Perlakuan

Kelompok Rerata±SD

Kontrol Sehat 0,27±0,133

Doksorubisin 25 mg/kgBB

0,67±0,061

Ekstrak etanol Paliasa 100

mg/kgBB 0,33±0,144

Ekstrak etanol Paliasa

250 mg/kgBB 0,43±0,124

Gambar 9.Profil Rerata±SD Kadar Malondialdehida (MDA) hati tikus putih setelah

pemberian doksorubisin yang sebelumnya diberi praperlakuan ekstrak paliasa

berdasarkan kelompoknya.Tanda * menunjukkan hasil yang signifikan.

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

Kontrol Sehat Doksorubisin25 mg/kg BB

Ekstrak Paliasa100 mg/kg BB

Ekstrak Paliasa250 mg/kg BB

Kad

ar

MD

A (

µg

/ml)

Perlakuan

* *

*

24

IV.2 Pembahasan

Doksorubisin merupakan salah satu obat antikanker paling penting

dan banyak digunakan (13). Namun, penggunaan doksorubisin pada

terapi kanker dapat memberikan beberapa efek samping antara lain

kardiotoksisitas dan hepatotoksisitas (3,4). Pada peneltian ini, digunakan

ekstrak daun Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) untuk melihat efek

protektifnya terhadap hepatoksisitas dari penggunaan doksorubisin

terutama karena aktivitas peroksidasi lipid pada jaringan

hati.Malondialdehida (MDA) sebagaiprodukakhir peroksidasi lipid,

biasanyadigunakansebagai biomarker biologis peroksidasi lipid

danmenggambarkan derajat stres oksidatif (7).Pengukuran

Malondialdehida (MDA) dilakukan dengan metode Thiobarbituric Acid

Reactive Substance (TBARS) menggunakan spektrofotometer UV-Visible

pada panjang gelombang 531 nm.

Berdasarkan tabel 2, rata-rata kadar MDA pada kelompok

perlakuan yang hanya diinjeksikan doksorubisin 0,67±0,061 µg/mL

sedangkan rata-rata kadar MDA pada kelompok kontrol sehat

0,27±0,133µg/mL menunjukkan terjadi peningkatan signifikan yang berarti

bahwa penggunaan doksorubisin dapat meningkatkan radikal bebas

dalam tubuh setelah 48 jam penyuntikan.Injeksi doksorubisin

menyebabkan hepatotoksisitas umumnya disebabkan melalui regenerasi

radikal bebas.Selain kerusakan oksidatif, toksisitas doksorubisin telah

terbukti menginduksi perubahan inflamasi di hati, jantung dan jaringan

25

ginjal pada tikus.Stres oksidatif berhubungan dengan injeksi doksorubisin

yang menyebabkan kerusakan sel dan kerusakan DNA (32).Doksorubisin

menginduksi disfungsi hati dengan mengubah aktivitassuperoksid

dismutase, katalasedan glutation peroksidase yaitu antioksidan dalam

jaringan hati.Penelitian yang dilakukan oleh Sadhansu, dkk (2014)

kegiatan antioksidan hati tikus menurun akibat injeksi doksorubisin dimana

terjadi kerusakan di antioksidan hati (33).Selain itu, hasil uji statistik nilai

kelompok perlakuan doksorubisin secara nyata berpengaruh atau berbeda

sangat signifikan (p=0,000) jika dibandingkan dengan kelompok kontrol

sehat.

Dibandingkan kelompok perlakuan yang hanya diinjeksikan

doksorubisin, kelompok perlakuan ekstrak etanol paliasa 100 mg/kgBB

dan 250 mg/kgBB memiliki rata-rata kadar MDA berturut-turut yaitu

0,33±0,144 dan 0,43±0,124µg/mL, yang menunjukkan terjadinya

penurunakan kadar MDA. Berdasarkan hasil statistik, kelompok perlakuan

yang hanya diinjeksikan doksorubisin dibandingkan terhadap kelompok

ekstrak 100 mg/kgBB memiliki kadar MDA yang menurun secara signifikan

(p=0,002). Demikian pula untuk kelompok ekstrak 250 mg/kgBB yang

memiliki kadar MDA lebih sedikit dari pada kelompok doksorubisin

(p=0,031). Bila dibandingkan dengan kelompok kontrol sehat, nilai kadar

MDA tikus yang diberi ekstrak etanol paliasa baik dosis 100 mg/kgBB dan

250 mg/kgBB masih lebih tinggi dibandingkan dengan nilai kadar MDA

kontrol sehat, tetapi perbedaannya tidak signifikan secara statistik. Hal ini

26

menunjukkan bahwa pemberian ekstrak paliasa (100 mg/kgBB dan 250

mg/kgBB) mampu menurunkan kadar MDA hati mendekati nilai kelompok

kontrol sehat.

Secara normal makhluk hidup tetap memproduksi peroksidasi lipid

di hati yang ditandai dengan terdapatnya kadar MDA yang dapat terukur

pada organ, namun kadarnya tidak setinggi kelompok yang diberikan

doksorubisin (p=0,000). Saatkeadaan normal, peroksidasi lipid di

dalamtubuhsebagianbesarmasihdapatdiatasiolehantioksidanalami

(antioksidan endogen)seperti superoksid dismutase, katalasedan glutation

peroksidase tetapi tidak cukup untuk mengatasi radikal bebas akibat

penggunaan doksorubisin (34).Hasil peneltian ini menunjukkan bahwa

pemberian ekstrak paliasa dengan dosis 100 mg/kgBB dan 250 mg/kgBB

sebelum injeksi doksorubisinmampu memproteksi peningkatan kadar MDA

hati pada tikus putih akibat injeksidoksorubisin.

27

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

IV.1 Kesimpulan

Kesimpulan yang diperoleh dari penelitian ini yaitu praperlakuan

dengan ekstrak etanol paliasa 100 mg/kgBB dan 250 mg/kgBB selama 5

hari dapat memproteksipeningkatan kadar MDA hati tikus putih jantan

akibat penyuntikan doksorubisin 25 mg/kgBB.

IV.2 Saran

Sebaiknya dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai efek

pemberian ekstrak etanol paliasa :

1. Terhadap kadar enzim antioksidan hati (superoksid dismutase,

katalasedan glutation peroksidase) untuk melihat apakah

ekstrak paliasa bisa meningkatkan aktivitas antioksidan alami

hati.

2. Dosisdibawah 100 mg/kgBB untuk menurunkan kadar MDA hati.

28

DAFTAR PUSTAKA

1. Mycek, Richard, Harvey, and Chawpe. Farmakologi Ulasan Bergambar Edisi 2. Alih Bahasa Azwar Agoes, Editor Huriawati Hartanto dari Lippincott’s Ilustrated Reviews : Pharmacology. 2001. Jakarta : Widya Medika

2. Katzung B.G. Basic & Clinical Pharmacology, Tenth Edition. United States : Lange Medical Publications. 2007

3. Bustová I. Risk of Cardiotoxicity of Combination Treatment Radiotherapy and Chemotherapy of Locally Advanced Breast Carcinoma Stage III. Klin Onkol. 2009. 22 (1),17-21.

4. Frias M.A., Lang U., Gerber-Wicht C., and James R.W. Native and reconstituted HDL protect cardiomyocytes from doxorubicininduced apoptosis. Cardiovasc Res, 2009, 85, 118-126.

5. Elgml, S.A., & Hashish, E. A, Clinicopathological studies of Thymus vulgaris Extract Against Cadmium Induced Hepatotoxicity in Albino Rats. Global Journal of Pharmacology. 2004. 8 (4): 501-509

6. JauniauxE, PostonLand Burton G.J. Placental-Related Diseases

ofPregnancy: Involvement of Oxidative Stress and Implications in Human Evolution. Hum Reprod, 2006:12(6):747-755

7. Eberhardt M.K. Reactive Oxygen Metabolites. 2nd .Ed. CRC Press,

Washington DC, 2001:174-185. 8. Zhou, C-X Zou, L., Gan, L-S., and Cao, Y-L. Kleinhospitines A-D, New

Cycloartane Triterpenoid Alkaloids from Kleinhovia hospita. Organic letters, 2013,15(11):2734-2737

9. Arung ET, Kusuma IW, Purwatiningsih S, Roh SS, Yang CH, Yang

CH, Kim YU, Sukaton E, Susilo J, Astuti Y, Wicaksono BD, Sandra F, Shimizu K, Kondo R.Antioxidant Activity and Cytotoxicity of the Traditional Indonesian Medicine Tangohai (Kleinhovia hospita L.) Extract. J Acupunct Meridian Stud. 2009 (4): 306-8

10. Raflizar, Adimunca, C, Sulistyowati T. Dekok Daun Paliasa (Kleinhovia

hospita Linn.) Sebagai Obat Radang Hati Akut. Cermin Dunia Kedokteran. 2006, 150 : 10 – 14.

29

11. Djabir YY, Arsyad A, Budiarto S. Paliasa Leaf (Kleinhovia hospita Linn.) Extract Can Prevent Hepatotoxicity Induced By Chronic Use Of High Dose Paracetamol. Journal STIFA Makassar. 2015.1(1)

12. Tayeb R, Wahyudin E, Alam G, Usmar dan Lukman. Toksisitas Akut “Tea Bag” Paliasa (Kleinhovia hospita Linn.) Pada Mencit (Mus musculus) Galur Bal/C Sebagai Prototipe Sediaan Fitofarmaka. Majalah Farmasi dan Farmakologi. 2012.16(3)

13. Mycek M.J, Richard A.H, and Chawpe P.C. Farmakologi Ulasan

Bergambar Edisi 2. Alih Bahasa Azwar Agoes, Editor Huriawati Hartanto dari Lippincott’s Ilustrated Reviews : Pharmacology. 2001. Jakarta : Widya Medika.

14. Minotti G, Menna, P, Salvatorelli E, Cairo G and Gianni L.

Anthracyclins: Molecular Advances and Pharmacologic Developments in Antitumor Activity and Cardiotoxicity. Pharmacol Rev., 2004,56:185-228.

15. Gewirtz DA. A Critical Evaluation of the Mechanisms of Action Proposed for the Antitumor Effects of the Anthracycline Antibiotics Adriamycin and Daunorubicin. Biochem Pharmacol, 1999, 57:727–741

16. Siahaan I.H, Tobing T.C, Rosdiana N, Lubis B. Dampak Kardiotoksik Obat Kemoterapi Golongan Antrasiklin. Sari Pediatri, Vol.9 No.2. 2007. Bagian Ilmu Penyakit Jantung dan Pembuluh Darah FK-UI, Indonesia

17. Mizutani H, Oikawa H, Hiraku Y, Murata M, Kojima M and Kawanishi S. Distinct mechanisms of site-specific oxidative DNA damage by doxorubicin in the presence of copper (II) and NADPH-cytochrome P450 reductase.Cancer Sci.Vol.94 No.3 2003.

18. Ganiswarna S, Setiabudy R, Suyatna F.D, Purwantyastuti, Nafrialdi. Farmakologi dan Terapi Edisi 4. Jakarta : Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran-Universitas Indonesia. 1995

19. Ayla S, Seckin I, Tanriverdi G, Cengiz M, Eser M, Soner BC. Doxorubicin induced nephrotoxicity: protective effect of nicotinamide. Int J Cell Biol 2011. 201;390238.

20. Peng X, Chen B, Lim CC, Sawyer DB. The cardiotoxicology of anthracycline chemotherapeutics: translating molecular mechanism into preventative medicine. Mol Interv. 2005. 5:163-71

21. Wibowo AW., L Maslachah & R. Bijanti. Pengaruh Pemberian Perasan Buah Mengkudu (Morinda citrifolia) terhadap Kadar AST dan ALT

30

Tikus Putih (Rattus norvegicus) Diet Tinggi Lemak. 2008. Jurnal Veterineria Medika Universitas Airlangga, Vol.1:1-5

22. Chabner, B.A., Lynch, T.J. and Longo, D.L. Harrison’s: Manual of

Oncology. 2008. Mc Graw-Hill Companies Inc., New York. 23. Herlina. Pengaruh Infus Daun Kayu Paliasa Klenhovia hospita Linn.

Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Kelinci. Skripsi tidak diterbitkan. Makassar: Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Hasanddin. 1993

24. Sultana B., Anwar F., Ashraf M., Effect of extraction solvent/technique on the antioxidant activity of selected medicinal plant extracts. Molecules. 2009. 14(6):2167-2180.

25. Raflizar. Uji Toksisitas Sub Kronis Ekstrak Alkohol Daun Paliasa

(Kleinhovia hospita Linn.) terhadap Hati dan Ginjal Tikus Percobaan. Media Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. 2009. Vol.XIX No. 4. hal. 204.

26. Medical Plants In Papua Nugea. 2009:149. World Healt Organitation 27. Plaats, A.V.D The Groningen hypothermic liver perfusion system for

improved preservation in organ transplantation. 2005. University Medical Center Groningen

28. Murray RK, Granner DK, Mayes PA, Rodwel VW. Biokimia Harper.

Ed.ke-24. Hartanto A, Penerjemah. 1999. Jakarta : EGC 29. Halliwel B, Gutteridge JMC. Free Radical in Biology and Medicine. Ed.

3. 1999. New York : Oxford University 30. Suryohudoyo, P. Kapita Selekta Ilmu Kedokteran Molekuler.

Perpustakaan Nasional RI. 2000. Jakarta. Penerbit CV Sagung Seto 31. Pramita, R, Widodo CS, Juswono UP. Pengaruh Ekstrak Kelopak

Rosella (Hibiscus Sabdariffa L.) Pada Aktivitas SOD Dan MDA Mata Tikus (Rattus Wistar) Yang Dipapar Radiasi Gamma. 2014. Universitas Brawijaya

32. Bulucu F, Ocal R, Karadurmus N, Sahin M, Kenar L, Aydin A, Oktenli

C, Koc B, Inal V, Yamanel L. Effects of N-acetylcysteine, deferoxamine and selenium on doxorubicininduced hepatotoxicity. Biol Trace Elem Res,2009; 132: 184-196.

31

33. Jambhulkar S, Deshireddy S, Dinesh BJ, Periyasamy L. Quercetin attenuating doxorubicin induced hepatic, cardiac and renal toxicity in male albino wistar rats. AJPCT, 2014. 2(8):985-1004

34. Zulaikhah ST, Anies, Suwondo A, Santosa. Effects of Tender Coconut

Water on Antioxidant Enzymatic Superoxida Dismutase (SOD), Catalase (CAT), Glutathione Peroxide (GDx) and Lipid Peroxidation In Mercury Exposure Workers. Volume 4 Issue 12, December 2015.

32

LAMPIRAN I

Skema Kerja Uji Efek Pemberian Ekstrak Daun Paliasa

Aklimatisasi (14 hari)

48 jam

Pengambilan organ hati

Analisis MDA (Spektrofotometer uv-vis, ʎ (531 nm)

)

Praperlakuan (5 hari)

PERLAKUAN (5 jam setelah praperlakuan

pada hari kelima)

Kelompok 1

Kelompok 2

Kelompok 3

Kelompok 4

NaCMC 1% b/v peroral

NaCMC 1% b/v peroral

Ekstrak Paliasa 250 mg/kgBB, p.o

NaCl 0,9% b/v (i.p)

Doksorubisin (25 mg/kgBB, i.p)



Ekstrak Paliasa 100 mg/kgBB, p.o

33

LAMPIRAN II

Skema PreparasidanEvaluasiSampelJaringan Hati

Gerus di lumpang

+ PBS pH 7,4 (2 mL) Homogenkan

Disentrifuse, 3.000 rpm,

20 menit

Pipet supernatan, 0,5 mL

+ 1 mL TBA 1% + 1 mL TCA 1%

Panaskan, 100oC, 40 menit

Disentrifuse, 3.000 rpm,

10 menit

Pipet supernatan

Analisis MDA spektrofotometer UV-VIS,

ʎ 531 nm

Organ hati

digerus di lumpang,

kemudian

ditimbang 400 mg

34

LAMPIRAN III

Penyiapan Larutan Baku

Zat Baku 1,1,3,3-tetrametoksipropana (TMP)

Dipipet 10 µL larutan TMP

Dicukupkan dengan aquadest

hingga 10 mL

Larutan stok 1000 ppm

Dipipet 1 mLad 10 mL

Larutan stok 100 ppm

5 µL ad 5 mL (0,1ppm)

10 µL ad 5 mL (0,2 ppm)

15 µL ad 5 mL (0,3 ppm)

20 µL ad 5 mL (0,4 ppm)

25 µL ad 5 mL (0,5 ppm)

30 µL ad 5 mL (0,6 ppm)

35 µL ad 5 mL (0,7 ppm)

40 µL ad 5 mL (0,8 ppm)

Analisis dengan spektrofotometri UV-Visible 531 nm

35

LAMPIRAN IV

Spektrum Panjang Gelombang Kurva Baku

Gambar 10. Spektrum panjang gelombang maksimum larutan baku

36

LAMPIRAN V

Spektrum Absorbansi Kurva Baku

Gambar 10. Spektrum Absorbansi Kurva Baku

Gambar 11. Spektrum absorbansi kurva baku

37

LAMPIRAN VI

Spektrum Absorbansi Kelompok Kontrol dan Perlakuan

No Name Absorbansi

1 Kontrol sehat 0, 22690





6 Doksorubisin (25 mg/kgBB) 0, 69469





11 Ekstrak 100 mg/kgBB 0, 29662










Gambar 12. Spektrum absorbansi kelompok kontrol, doksorubisin 25 mg/kgBB,

ekstrak etanol paliasa 100 mg/kgBB dan ekstrak etanol paliasa 250 mg/kgBB

38

LAMPIRAN VII

Kadar Malondialdehida (MDA) Hati Tikus Putih Setelah Perlakuan

Kelompok Kode Absorbansi Kadar MDA

(µg/mL) Rerata±SD

Kontrol sehat

I 0, 22690 0, 19563

0,27±0,133

II 0, 42359 0, 35777

III 0, 28704 0, 24521

IV 0, 14801 0,13060

V 0, 55595 0, 46688

Doksorubisin 25 mg/kgBB

I 0, 69469 0, 58125

0,67±0,061

II 0, 78950 0, 65940

III 0, 89374 0, 74533

IV 0, 82117 0, 68551

V 0, 84972 0, 70905


mg/kgBB

I 0, 29662 0, 25311

0,33±0,144

II 0, 24096 0, 20722

III 0, 46343 0, 39061

IV 0, 30117 0, 25686

V 0, 67092 0, 56166


mg/kgBB

I 0, 46815 0, 39450

0,43±0,124

II 0, 37070 0, 31417

III 0, 40397 0, 34160

IV 0, 67314 0, 56349

V 0, 69173 0, 57881

39

LAMPIRAN VIII

Perhitungan Dosis dan Kadar Malondialdehida

1. Penyiapan Sediaan Uji dan Perhitungan Volume Pemberian

1.1 Larutan Doksorubisin

Doksorubisin tersedia dalam bentuk sediaan injeksi dalam vial

dengan konsentrasi 2 mg/mL.

Dosis yang digunakan untuk setiap tikus adalah 25 mg/kgBB.

Untuk tikus dengan berat 100 gram, dosis yang dibutuhkan :

C = 25 mg/kg x 0,1 kg = 2,5 mg

Karena sediaan doksorubisin mengandung 2 mg/mL maka volume

pemberian untuk tikus 100 gram adalah :

C = 2,5 mg/2mg x 1mL = 1,25 mL

Untuk tikus dengan berat 200 gram, dosis yang dibutuhkan :

C = 25 mg/kg x 0,2 kg = 5 mg

Karena sediaan doksorubisin mengandung 2 mg/mL maka volume

pemberian untuk tikus 200 gram adalah :

C = 5 mg/2 mg x 1 mL= 2,5 mL

1.2 Pembuatan Suspensi Ekstrak Paliasa

Untuk dosis 100 mg/kgBB ditimbang 250 mg ekstrak daun paliasa

kemudian disuspensikan dengan NaCMC 1% dan dicukupkan

volumenyahingga 25 mL, menghasilkan ekstrak daun paliasa 10 mg/mL

(1%b/v). Pemberian volume ekstrak disesuaikan dengan bobot tikus,

40

dimana setiap 100 gram bobot tikus diberikan ekstrak daun paliasa

sebesar 1 mL.

Untuk dosis 250 mg/kgBB ditimbang 625 mg ekstrak daun paliasa

kemudian disuspensikan dengan NaCMC 1% dan dicukupkan volumenya

hingga 25 mL, menghasilkan ekstrak daun paliasa 25 mg/mL (2,5% b/v).

Pemberian volume ekstrak disesuaikan dengan bobot tikus, dimana setiap

100 gram bobot tikus diberikan ekstrak daun paliasa sebesar 1 mL.

2. Perhitungan Kadar Malondialdehida (MDA)

Persamaan garis kurva baku :

Y = 1,2131x - 0,01043

Dimana : a = -0,01043 dan b = 1,2131

Kelompok Kontrol Sehat :

I. 0,22690 = 1,2131x - 0,01043 IV. 0,14801 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,22690+0,01043

1,2131 X =

0,14801+0,01043

1,2131

X = 0,23733

1,2131 X =

0,15844

1,2131

X = 0, 19563µg/mL X = 0,13060 µg/mL

II. 0,42359 = 1,2131x - 0,01043 V. 0,55595 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,42359+0,01043

1,2131 X =

0,55595+0,01043

1,2131

X = 0,43402

1,2131X =

0,56638

1,2131

X = 0,3577 µg/mL X = 0,4668 µg/mL

41

III. 0, 28704 = 1,2131x – 0,01043

X = 0,28704+0,01043

1,2131

X = 0,29747

1,2131

X = 0,24521 µg/mL

Kelompok Doksorubisin(25 mg/kgBB):

I. 0,69469 = 1,2131x - 0,01043 IV. 0,82117 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,69469+0,01043

1,2131 X =

0,82117+0,01043

1,2131

X = 0,70512

1,2131 X =

0,8316

1,2131

X = 0, 58125µg/mL X = 0,68551 µg/mL

II. 0,78950 = 1,2131x - 0,01043 V. 0,84972 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,78950+0,01043

1,2131 X =

0,84972+0,01043

1,2131

X = 0,79993

1,2131X =

0,86015

1,2131

X = 0,65940 µg/mL X = 0,70905 µg/mL

III. 0, 89374 = 1,2131x – 0,01043

X = 0,89374+0,01043

1,2131

X = 0,90417

1,2131

X = 0,74533 µg/mL

42

Kelompok Ekstrak Paliasa 100 mg/kgBB :

I. 0,29662 = 1,2131x - 0,01043 IV. 0,30117 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,29662+0,01043

1,2131 X =

0,30117+0,01043

1,2131

X = 0,30705

1,2131 X =

0,3116

1,2131

X = 0, 25311µg/mL X = 0,25686 µg/mL

II. 0,24096 = 1,2131x - 0,01043 V. 0,67092 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,24096+0,01043

1,2131 X =

0,67092+0,01043

1,2131

X = 0,25139

1,2131X =

0,68135

1,2131

X = 0,20722 µg/mL X = 0,56166 µg/mL

III. 0, 46343 = 1,2131x – 0,01043

X = 0,46343+0,01043

1,2131

X = 0,47386

1,2131

X = 0,39061 µg/mL

43

Kelompok Ekstrak Paliasa 250 mg/kgBB:

I. 0,46815 = 1,2131x - 0,01043 IV. 0,67314 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,46815+0,01043

1,2131 X =

0,67314+0,01043

1,2131

X = 0,47858

1,2131 X =

0,68357

1,2131

X = 0, 39450µg/mL X = 0,56349 µg/mL

II. 0,37070 = 1,2131x - 0,01043 V. 0,69173 = 1,2131x - 0,01043

X = 0,37070+0,01043

1,2131 X =

0,69173+0,01043

1,2131

X = 0,38113

1,2131X =

0,70216

1,2131

X = 0,31417 µg/mL X = 0,57881 µg/mL

III. 0, 40397 = 1,2131x – 0,01043

X = 0,40397+0,01043

1,2131

X = 0,4144

1,2131

X = 0,34160 µg/mL

44

LAMPIRAN IX

Hasil Data Statistik One Way ANOVA

46

LAMPIRAN X

Gambar Penelitian

Gambar 13. Proses rotavapor Gambar 14. Ekstrak kental etanol paliasa

Gambar 15.Tikus putih (Rattus novergicus)Gambar 16. Pemberian suspensi ekstrak

paliasa secara peroral

Gambar 17.Penyuntikan doksorubisin Gambar 18. Pembedahan organ hati

secara intraperitonial

47

Gambar 19.Sentrifuge Gambar 20. Supernatan untuk dianalisis

` Gambar 21.Waterbath Gambar 22. Spektrofotometer uv-visible

48

LAMPIRAN XI

Rekomendasi Persetujuan Etik

EVALUASI EFEK PROTEKTIF EKSTRAK DAUN PALIASA Kleinhovia...

Documents

Transcript of EVALUASI EFEK PROTEKTIF EKSTRAK DAUN PALIASA Kleinhovia...