cuprac2

7/26/2019 cuprac2

1/31

PENGUKURAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN

METODE CUPRAC, DPPH, DAN FRAP SERTAKORELASINYA DENGAN FENOL DAN FLAVONOID

PADA ENAM TANAMAN

NIKEN WIDYASTUTI

DEPARTEMEN KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2010

7/26/2019 cuprac2

2/31

ABSTRAK

NIKEN WIDYASTUTI. Pengukuran Aktivitas Antioksidan dengan Metode CUPRAC,

DPPH, dan FRAP serta Korelasinya dengan Fenol dan Flavonoid pada Enam Tanaman.

Dibimbing oleh ELLY SURADIKUSUMAH dan MOHAMAD RAFI.

Keadaan stres oksidatif merupakan keadaan ketidakseimbangan antara radikal bebas dan

antioksidan yang dapat menyebabkan kerusakan oksidatif mulai dari tingkat sel, jaringan,

hingga ke organ tubuh. Penelitian ini bertujuan menentukan aktivitas antioksidan dari 6

tanaman obat dan menentukan hubungan antara aktivitas antioksidan dan kandunganfenol serta flavonoidnya. Penelitian ini dilakukan menggunakan beberapa tanaman obat,

yaitu kumis kucing, tempuyung, sidaguri, jati belanda, sambiloto, dan kedaung.

Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan menggunakan 3 metode yaitu CUPRAC(cupric ion reducing antioxidant capacity), DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), dan

FRAP (ferric reducing antioxidant power). Dari hasil penelitian diketahui bahwa semua

tanaman tersebut memiliki aktivitas antioksidan. Hasil pengukuran aktivitas antioksidan

dengan metode CUPRAC, DPPH, dan FRAP berbeda nyata secara statistika. Walaupundemikian metode CUPRAC dan FRAP menghasilkan urutan aktivitas antioksidan yang

sama dari 6 tanaman. Kandungan total fenol berkorelasi kuat dan searah dengan aktivitasantioksidan tetapi tidak memiliki korelasi dengan flavonoid. Jadi, aktivitas antioksidan

tidak hanya bersumber dari golongan flavonoid.

ABSTRACT

NIKEN WIDYASTUTI. Measurement of Antioxidant Activity CUPRAC, DPPH, and

FRAP Method and their Correlation with Phenol and Flavonoids in Six Herbs. Under

direction of ELLY SURADIKUSUMAH and MOHAMAD RAFI.

Oxidative stress is the imbalance condition between free radical and antioxidantsthat can cause oxidative damage in cell, tissues, organ, accelerates the aging process, and

emergence of diseases. This study aims to determine the antioxidant capacity of 6 herbs,and the relationship between phenol and flavonoids content with their antioxidant

activity and relationship between phenol and flavonoids content in the ethanol extract ofsome Indonesian herb, there are Orthosiphon stamineus, Sonchus avensis, Sida

rhombifolia, Guazuma umifolia, Andrographis paniculata, and Parkia biglobosa. Themeasurement of antioxidant activity use 3 methods, that are CUPRAC (cupric ion

reducing antioxidant capacity), DPPH (2,2-diphenyl-1-pickrylhidrazyl), and FRAP

(ferric reducing antioxidant power). The research of the six herbs showed antioxidant

activity. Statistic test from three method antioxidant showed that measurementantioxidant activity with CUPRAC, DPPH, and FRAP gave a significantly different

result, but CUPRAC and FRAP give the same response of the six herbs. The phenol hasno correlation with flavonoids content but have highly correlation with their antioxidant

activity. Flavonoids have no correlation with antioxidant activity.

7/26/2019 cuprac2

3/31

PENGUKURAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN

METODE CUPRAC, DPPH, DAN FRAP SERTAKORELASINYA DENGAN FENOL DAN FLAVONOID

PADA ENAM TANAMAN

NIKEN WIDYASTUTI

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains pada

Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2010

7/26/2019 cuprac2

4/31

Judul Skripsi : Pengukuran Aktivitas Antioksidan dengan Metode CUPRAC,DPPH, dan FRAP serta Korelasinya dengan Fenol dan Flavonoid

pada Enam Tanaman

Nama : Niken Widyastuti

NIM : G44076004

Disetujui

Pembimbing I Pembimbing II

Ir. Elly Suradikusumah, MS Mohamad Rafi, S.Si, MSi

NIP 19450214 197010 2 001 NIP 19770316 200604 1 010

Mengetahui,

Ketua Departemen

Prof.Dr. Tun Tedja Irawadi, MS

NIP 19501227 197603 2 002

Tanggal lulus:

7/26/2019 cuprac2

5/31

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah swt atas segala karuniaNyasehingga karya ilmiah berjudul Pengukuran Aktivitas Antioksidan dengan Metode

CUPRAC, DPPH, dan FRAP serta Korelasinya dengan Fenol dan Flavonoid pada Enam

Tanaman dapat diselesaikan. Penelitian ini dilaksanakan sejak bulan Mei sampai Agustus2009 dan bertempat di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka, Bogor.

Terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Ir. Elly Suradikusumah, MS dan

Bapak Mohamad Rafi, S.Si, MSi selaku pembimbing. Ungkapan terimakasih juga

penulis haturkan kepada Abah, Mamah, Mas Kris, Mbak Dypus, Teh Diah, dan MasWahyu. Selain itu ucapan terima kasih diperuntukan kepada seluruh staf Laboratorium

Uji Pusat Studi Biofarmaka, Ibu Nunu, Ibu Salina, Ka Agung, Endi, Nio, Mbak Wiwi,

dan Pak Mul serta semua teman-teman.

Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Desember 2009

Niken Widyastuti

7/26/2019 cuprac2

6/31

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 14 September 1984 sebagai anak ketigadari tiga bersaudara dari pasangan Iman Warsito dan Ida Mardiyah. Tahun 2002, penulis

lulus seleksi masuk Akademi Kimia Analisis (AKA) Bogor melalui jalur seleksi rapor.

Pada tahun 2005, penulis berkesempatan mengikuti praktik kerja lapangan di BalaiPengujian Mutu Produk Perternakan, Bogor. Akhir tahun 2005 penulis lulus dari

Akademi Kimia Analisis dan tahun 2006 bekerja di Orang Tua group Divisi Sweet Water

Product. Tahun 2007, penulis melanjutkan pendidikan S1 kimia di IPB melalui jalur S1

Kimia Penyelenggaraan Khusus. Selama perkuliahan, penulis pernah mengajar dibimbingan belajar BTA 8 dan bimbingan belajar Math Magic School. Agustus 2009,

Penulis juga berkesempatan untuk menjadi asisten praktikum pada program keahlian

Analisis Kimia di Diploma IPB.

7/26/2019 cuprac2

7/31

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL ........................................ ............................................ ..................... vii

DAFTAR GAMBAR .................................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................ ............................................ ............. vii

PENDAHULUAN ........................................................................................................ 1

TINJAUAN PUSTAKA

Radikal Bebas dan Antioksidan ...................................... .................................... 1

Uji Aktivitas Antioksidan .............................................. .................................... 1

Fenol dan Flavonoid ............................. ........................................ ..................... 2Kumis Kucing ..................................... .............................................. .................. 2

Tempuyung ........................................................................................................ 2Sidaguri .............................................................................................................. 2

Jati Belanda ........................................ ........................................... ..................... 3

Sambiloto ....................................... ........................................ ............................. 3Kedaung ............................................................................................................. 3Troloks ...................................... ............................................ .............................. 3

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat .......................................... ........................................... .............. 4Metode ............................................................................................................... 4

Analisis Data ......................................... ........................................... .................. 5

PEMBAHASAN

Ekstrak Tanaman .......................................... ........................................... ........... 5

Aktivitas Antioksidan .......................................... ............................................ ... 5Kandungan Total Fenol ........................................... ........................................... 7

Kandungan Total Flavonoid ........................................... .................................... 7

Hasil Uji Korelasi ...................................... ....................................... .................. 8

SIMPULAN DAN SARANSimpulan ..................................... ............................................ ............................ 9

Saran ........................................... ........................................... ............................. 9

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 10

LAMPIRAN .................................................................................................................. 12

vi

7/26/2019 cuprac2

8/31

DAFTAR TABEL

Halaman

1. Kapasitas antioksidan metode CUPRAC ......................................... ......................... 5

2. Kapasitas antioksidan metode DPPH .................................... .................................... 63. Kapasitas antioksidan metode FRAP ........................................ ................................ 6

4. Kandungan total fenol ......................................... ........................................... ........... 7

5. Kandungan total flavonoid ............................................. ........................................... 7

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1. Stuktur dasar flavonoid ......................................... ........................................... ....... 2

2. Tanaman kumis kucing .................................................................. ......................... 2

3. Tanaman tempuyung ..................................... ........................................... .............. 2

4. Tanaman sidaguri .......................................... ........................................... .............. 3

5. Tanaman jati belanda ....................................... ......................................... .............. 3

6. Tanaman sambiloto ........................................ ........................................... .............. 3

7. Tanaman kedaung .......................................... ........................................... .............. 3

8. Stuktur troloks ........................................... ........................................... .................. 4

9. Hubungan total fenol dengan kapasitas antioksidan .................................... ........... 8

10. Hubungan total flavonoid dengan kapasitas antioksidan ..................................... ... 9

11. Hubungan total fenol dengan total flavonoid ..................................... ..................... 9

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1. Bagan alir penelitian ........................................ ........................................... ........... 13

2. Penentuan kadar air ....................................... ........................................... .............. 14

3. Rendemen ekstrak kering ..................................... ........................................... ....... 15

4. Kapasitas antioksidan metode CUPRAC ...................................... ......................... 16

5. Kapasitas antioksidan metode DPPH ..................................... ................................ 17

6. Kapasitas antioksidan metode FRAP ..................................... ................................ 18

7. Uji-Fdan Uji-tuntuk metode pengukuran kapasitas antioksidan .......................... 19

8. Penentuan total fenol ........................................ ........................................ .............. 22

9. Kandungan total flavonoid ...................................... ............................................ ... 23

vii

7/26/2019 cuprac2

9/31

PENDAHULUAN

Antioksidan adalah zat penghambat reaksi

oksidasi akibat radikal bebas yang dapat

menyebabkan kerusakan asam lemak takjenuh, membran dinding sel, pembuluh darah,

basa DNA, dan jaringan lipid sehinggamenimbulkan penyakit (Subeki 1998). Suatutanaman dapat memiliki aktivitas antioksidan

apabila mengandung senyawaan yang mampu

menangkal radikal bebas seperti fenol dan

flavonoid.

Beberapa penelitian telah dilakukan untuk

melihat hubungan antara kandungan fenol,flavonoid, dan aktivitas antioksidan. Hasil

penelitian Kao et al. (2007) menunjukkanbahwa kandungan fenol dan flavonoid dalam

blackberryberbanding lurus dengan aktivitas

antioksidan. Sementara Khamsah et al.(2006)

dalam penelitiannya menyatakan bahwa

aktivitas antioksidan tidak hanya bergantungpada kandungan total fenol tetapi juga

dipengaruhi oleh senyawa lain, seperti asamursolat, asam betulinat, dan asam oleat yang

terdapat dalamOrthosiphon stamineus.

Penelitian ini dilakukan dengan

menggunakan beberapa tanaman obat, yaitu

kumis kucing, tempuyung, sidaguri, jatibelanda, kedaung, dan sambiloto. Ekstrak

etanol dari tanaman tersebut diukur nilai

kandungan fenol, flavonoid, dan aktivitasantioksidannya. Pengukuran aktivitas

antioksidan dilakukan menggunakan 3

metode, yaitu DPPH (2,2-difenil-1-

pikrilhidrazil), FRAP (ferric reducingantioxidant power) dan CUPRAC (cupric ion

reducing antioxidant capacity. Penelitian inibertujuan menentukan aktivitas antioksidan

dari 6 tanaman obat. Selain itu, hubungan

antara kandungan fenol, total flavonoid dan

aktivitas antioksidannya juga ditentukan.

Diduga terdapat keterkaitan hubungan antarakandungan total fenol, total flavonoid, dan

aktivitas antioksidan pada ekstrak etanol

beberapa tanaman obat Indonesia.

TINJAUAN PUSTAKA

Radikal Bebas dan Antioksidan

Radikal bebas adalah suatu molekul atau

atom yang mempunyai 1 atau lebih elektron

tidak berpasangan. Radikal ini dapat berasaldari atom hidrogen, molekul oksigen, atau ion

logam transisi. Senyawa radikal bebas sangat

reaktif dan selalu berusaha mencari pasanganelektron agar kondisinya stabil (Subeki 1998).

Radikal dapat terbentuk secara endogendan eksogen. Radikal endogen terbentuk

dalam tubuh melalui proses metabolism

normal di dalam tubuh. Sementara radikal

eksogen berasal dari bahan pencemar yang

masuk ke dalam tubuh melalui pernafasan,

pencernaan, dan penyerapan kulit (Miller1996). Radikal bebas dalam jumlah normal

bermanfaat bagi kesehatan misalnya,

memerangi peradangan, membunuh bakteri,

dan mengendalikan tonus otot polos

pembuluh darah serta organ-organ dalam

tubuh (Yuwono 2009). Sementara dalamjumlah berlebih mengakibatkan stress

oksidatif. Keadaan tersebut dapat

menyebabkan kerusakan oksidatif mulai daritingkat sel, jaringan, hingga ke organ tubuh

yang mempercepat terjadinya proses penuaan

dan munculnya penyakit (Yuwono 2009).

Oleh karena itu, antioksidan dibutuhkan untuk

dapat menunda atau menghambat reaksioksidasi oleh radikal bebas.

Berdasarkan sumbernya, antioksidan dapatdibedakan menjadi antioksidan endogen dan

eksogen. Antioksidan endogen terdapat secara

alamiah dari dalam tubuh sedangkan

antiosidan eksogen dari luar tubuh Percival(1998). Antioksidan eksogen sendiri

dibedakan menjadi antioksidan alami dan

sintetik (Miller 1996).

Uji Aktivitas Antioksidan

Pengukuran aktivitas antioksidan dapat

dilakukan dengan beberapa metode diantaranya CUPRAC, DPPH, dan FRAP.

Metode CUPRAC (Apak et al. 2007)

menggunakan bis(neokuproin) tembaga(II)(Cu(Nc)2

2+) sebagai pereaksi kromogenik.

Pereaksi Cu(Nc)22+

yang berwarna biru akan

mengalami reduksi menjadi Cu(Nc)2+ yang

berwarna kuning dengan reaksi:

n Cu(Nc)22+

+ AR(OH)n nCu(Nc)2++

AR(=O)n+ nH+

Metode DPPH menggunakan 2,2difenil-1-pikrilhidrazil sebagai sumber radikal bebas.

Prinsipnya adalah reaksi penangkapan

hidrogen oleh DPPH dari zat antioksidandengan reaksi sebagai berikut:

7/26/2019 cuprac2

10/31

Metode FRAP (Benzie & Strain 1996)menggunakan Fe(TPTZ)2

3+ kompleks besi-

ligan 2,4,6-tripiridil-triazin sebagai pereaksi.

Kompleks biru Fe(TPTZ)23+

akan berfungsi

sebagai zat pengoksidasi dan akan mengalami

reduksi menjadi Fe(TPTZ)22+

yang berwarna

kuning dengan reaksi berikut:Fe(TPTZ)2

3++ AROH Fe(TPTZ)2

2++ H

+

+ AR=O

Fenol dan Flavonoid

Senyawaan fenol biasanya terdapat dalam

berbagai jenis sayuran, buah-buahan dantanaman. Turunan senyawaan fenol

merupakan metabolit sekunder terbesar yangdiproduksi oleh tanaman. Senyawaan ini

diproduksi dalam tanaman melalui jalur

sikimat dan metabolisme fenil propanoid.Senyawaan fenol dapat memiliki aktivitas

antioksidan, antitumor, antiviral, danantibiotik (Apak et al. 2007). Diantara

senyawaan fenol alami yang telah diketahuilebih dari seribu stuktur, flavonoid merupakan

golongan terbesar (Subeki 1998). Flavonoid

merupakan senyawa dengan bobot melekulrendah dan memiliki stuktur dasar C6C3C6,

yaitu terdiri atas 2 buah cincin benzena yangdihubungkan dengan 3 karbon (Gambar 1).

Flavonoid terbagi menjadi 7 kelompok, yaitu

antosianin, proantosianin, isoflavon, flavonon,flavonol, flavanol, dan flavon. Flavonoid

memiliki aktivitas antioksidan di dalam tubuh

sehingga disebut bioflavonoid.

Gambar 1 Stuktur dasar flavonoid (Apak et

al.2007).

Kumis Kucing

Kumis kucing (Orthosiphon stamineus)

merupakan tanaman obat yang berasal dari

wilayah Afrika tropis dan kemudian menyebarke Asia dan Australia. Kumis kucing masuk

ke dalam divisi Spermatophyta, subdivisi

Magnoliophyta (Angiospermae), kelasMagnoliopsida (Dicotyledonae), ordo

Lamiales, suku Lamiaceae, genus

Orthosiphon, spesiesstamieus.

Kumis kucing merupakan tanamantahunan dengan tinggi 50-100 cm (Gambar 2).

Kumis kucing mengandung saponin, kalium(Wirakusumah & Setyowati 1994), asam

rosmarinat, diterpenoid, triterpenoid

(Matkowski 2008), asam oleat, asam ursolat,

asam betulinat, 3-hidroksi flavon, 3,4-

dihidroksiflavon, dan 2,3-dihidroksiflavon

(Khamsah et al.2006).

Gambar 2 Tanaman kumis kucing.

Tempuyung

Tempuyung (Sonchus avensis) termasuk

ke dalam divisi Spermatophyta, subdivisiMagnoliophyta (Angiospermae), kelas

Magnoliopsida (Dicotyledonae), bangsa

Asterales, suku Asteraceae, genus Sonchus,spesies avensis. Tempuyung merupakan

tanaman menahun yang tumbuh liar pada

tanah lembap dan cukup sinarmatahari (Gambar 3). Tempuyung

mengandung kandungan senyawa kimia

seperti flavonoid (kaemferol, luteolin-7-O-

glukosida, dan apigenin-7-O-glukosida),

kumarin, dan asam fenolat bebas (Sriningsih

et al.2002).

Gambar 3 Tanaman tempuyung.

Sidaguri

Sidaguri (Sida rhombifolia) merupakan

tanaman liar yang tersebar di seluruh daerahtropis. Tanaman ini dapat mencapai tinggi 2

m (Gambar 4). Sidaguri masuk ke dalam

divisi Spermatophyta, subdivisi

Magnoliophyta (Angiospermae), kelasMagnoliopsida (Dicotyledonae), ordo

Malvaves, suku Malvaceae, genus Sida,

spesies rhombifolia. Daun tanaman inimengandung alkaloid, steroid, kalsium

2

7/26/2019 cuprac2

11/31

oksalat, saponin, fenol dan asam amino(Khalil et al.2006).

Gambar 4 Tanaman sidaguri.

Jati Belanda

Jati belanda (Guazuma umifolia) termasuk

dalam divisi Spermatophyta, subdivisiMagnoliophyta (Angiospermae), kelas

Magnoliopsida (Dicotyledonae), bangsa

Malvaves, suku Stercuiaceae, genusGuazuma, spesies ulmifolia. Jati belanda

merupakan tanaman liar yang tingginya dapatmencapai 2,2 m (Gambar 5). Kulit batangtanaman ini mengandung glukosa dan asam

damar (Wirakusumah & Setyowati 1994).

Daunnya mengandung flavonoid, steroid,triterpenoid, saponin, dan tanin (Umar 2008).

Gambar 5 Tanaman jati belanda.

Sambiloto

Sambiloto (Andrographis paniculata)merupakan tanaman liar yang tingginya dapat

mencapai 80 cm (Gambar 6). Tanaman ini

banyak mengandung kalium dan garamnatrium (Wirakusumah & Setyowati 1994).

Gambar 6 Tanaman sambiloto.

Sambiloto termasuk dalam divisiSpermatophyta, subdivisi Magnoliophyta

(Angiospermae), kelas Magnoliopsida

(Dicotyledonae), bangsa Scrophulariales, suku

Acanthaceae, marga Andrographis, spesies

paniculata.

Kedaung

Kedaung (Parkia biglobosa) merupakan

tanaman liar yang tingginya dapat mencapai

45 m (Gambar 7). Biji tanaman ini

mengandung glukosida, damar, tanin, dangaram-garam alkali (Wirakusumah &

Setyowati 1994). Daun kedaung mengandung

asam oksalat dan asam hidroksinamat (Alabiet al. 2005). Tanaman ini termasuk dalam

divisi Spermatophyta, subdivisi

Magnoliophyta (Angiospermae), kelas

Magnoliopsida (Dicotyledonae) bangsa

Fabales, suku Fabaceae, genusParkia, spesiesbiglobosa.

Gambar 7 Tanaman kedaung.

Troloks

Troloks atau senyawa 6-hidroksi-2,5,7,8-

tetrametilkroman-2-asam karboksilat denganbobot molekul 250,32 g/mol merupakan

antioksidan sintetik (Gambar 8). Secara

stuktur troloks serupa dengan -tokoferolkecuali penggantian rantai sampinghidrokarbon dengan gugus COOH. Troloks

berupa bubuk berwarna putih sampai kuning

dan memiliki titik leleh 189-195 C. Senyawaini stabil selama 2 bulan pada suhu 22-45 C

dan mempunyai aktivitas antioksidan yang

lebih tinggi dibandingkan -tokoferol, BHA,

serta BHT (Belitz 1999). Troloks seringdipergunakan sebagai standar dalam

pengukuran antioksidan. Koefisien TEAC

(troloks equivalent antioxidant capacity)

adalah konsentrasi troloks yang memilikikapasitas antioksidan yang ekuivalen dengan

sampel yang dianalisis. Kapasitas antioksidan

dari setiap metode dinyatakan dalam mol

troloks/g ekstrak etanol tanaman.

3

7/26/2019 cuprac2

12/31

Gambar 8 Stuktur troloks.

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat

Bahan yang digunakan adalah daun dan

batang dari 6 jenis tanaman obat, yaitu kumiskucing, tempuyung, sidaguri, jati belanda,

sambiloto, dan kedaung, DPPH, Neokuproin

alkoholik, TPTZ , kuersetin, asam galat, dan

troloks produksi Aldrich, CuCl22H2O,FeCl36H2O, Folin-Ciocalteu, dan AlCl3

produksi Merck. Peralatan yang digunakanadalah spektrofotometer Shimadzu UV 2700.

Metode

Diagram alir penelitian ditunjukkan padaLampiran 1. Analisis dilakukan pada ekstrak

etanol dari daun kumis kucing, tempuyung,

sidaguri, jati belanda, sambiloto, dan kedaungyang meliputi analisis kuantitatif total fenol,

analisis kuantitatif total flavonoid, dan uji

aktivitas antioksidan menggunakan 3 metode,

yaitu CUPRAC, DPPH, dan FRAP.

Preparasi Sampel

Daun dan batang tanaman dikeringkan

kemudian dihancurkan dan diayak dengan

ukuran 100 mesh. Bahan ini kemudian

dipergunakan untuk pengujian selanjutnya.

Penentuan Kadar Air

(AOAC No 934.01 1998)

Sebanyak 1 g serbuk tanaman dimasukkan

dalam cawan porselen yang telah dikeringkan

dalam oven pada suhu 105 C selama 30

menit. Cawan porselen yang telah berisisimplisia tersebut dikeringkan dalam oven

pada suhu 105 C selama 3 jam, didinginkan

dalam eksikator, lalu ditimbang bobotnya.Penimbangan dilakukan sampai diperoleh

bobot tetap.

Ekstraksi Etanol (Macari et al.2006)

Serbuk tanaman dimaserasi dalam etanol

70% selama 3 x24 jam dengan nisbah serbuk

kering-etanol 1:13 (g/ml). Ekstrak dipekatkan

dengan penguap putar dan dikeringkan

dengan pengering beku kemudian ditimbanguntuk menentukan rendemen.

Analisis Kuantitatif Total Fenol (Slinkard &

Singleton 1977)

Sebanyak 0,1 ml ekstrak etanol tanaman

ditambahkan 3,9 ml akuades dan 0,5 mlpereaksi Folin-Ciocalteu (1:10 dalam

akuades). Larutan tersebut didiamkan selama

3 menit kemudian ditambahkan 2 ml Na2CO3

20% dan diukur nilai absorbansnya pada756,5 nm. Larutan asam galat digunakan

sebagai zat untuk membuat kurva kalibrasi.

Kandungan total fenol dalam ekstrak etanoldiekspresikan sebagai mg asam galat

ekuivalen/g serbuk kering.

Analisis Kuantitatif Total Flavonoid

(Pourmorad et al.2006)

Sebanyak 0,5 ml ekstrak yang telah

diencerkan (1:10 g/ml etanol) ditambahkan1,5 ml etanol; 0,1 ml AlCl3 10%; 0,1 ml

natrium asetat 1 M; dan 2,8 ml akuades.

Campuran larutan tersebut dibiarkan selama30 menit dan diukur absorbansnya pada 417

nm. Kuersetin digunakan untuk membuat

kurva kalibrasi. Kandungan total flavonoiddalam ekstrak etanol diekspresikan sebagai

mg kuersetin /g serbuk kering.

Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode

CUPRAC (Apak et al.2007)

Sebanyak 1 ml ekstrak dilarutkan dalam

etanol 96% ditambahkan 1 ml CuCl22H2O

0,01 M; 1 ml neokuproin etanolik 0,0075 M;1 ml bufer amonium asetat pH 7 1M; dan 0.1

ml akuades. Larutan didiamkan selama 30

menit dan diukur absorbansnya pada 453,4nm. Sebagai blangko digunakan campuran

larutan tanpa ekstrak. Kurva kalibrasi dibuat

menggunakan larutan troloks dengan berbagaikonsentrasi. Kapasitas antioksidan dinyatakan

dalam mol troloks/g serbuk kering.

7/26/2019 cuprac2

13/31


DPPH (Blois 1958 diacu dalam Hanani et al.

2005)

Sebanyak 1 ml larutan DPPH 1 mM

(dalam metanol) dimasukkan ke dalam tabung

reaksi. Ekstrak etanol tanaman dilarutkandalam metanol lalu dimasukkan ke dalamtabung reaksi hingga volume larutan tepat 5

ml. Larutan tersebut didiamkan selama 30

menit dan diukur absorbansnya pada 515,5

nm. Larutan troloks dengan berbagai

konsentrasi digunakan untuk membuat kurvakalibrasi. Kapasitas antioksidan dinyatakan



FRAP (Benzie & Strain 1996)

Pereaksi FRAP dibuat dengan campuran

bufer asetat 300 mM pH 3,6; TPTZ 10 mMdalam 40 mM HCl; dan 20 mM FeCl36H2O

dengan nisbah 10:1:1. Sebanyak 150 lekstrak ditambahkan 4,5 ml pereaksi FRAP

kemudian didiamkan selama 30 menit pada

suhu 30 C dan diukur absorbansnya pada 598

nm. Larutan troloks dengan berbagaikonsentrasi digunakan untuk membuat kurva

kalibrasi. Kapasitas antioksidan dinyatakan


Analisis Data

Data hasil penelitian diolah untuk melihat

korelasi total fenol, flavonoid dan aktivitasantioksidan dengan CUPRAC, DPPH, dan

FRAP. Data kemudian diolah dengan

rancangan acak lengkap untuk melihatpengaruh metode pengukuran terhadap nilai

aktivitas antioksidan.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Ekstrak Tanaman

Semua serbuk tanaman terlebih dahulu

ditentukan kadar airnya. Pengukuran kadar air

dilakukan untuk mengetahui daya simpan

suatu bahan. Kadar air kedaung, kumiskucing, jati belanda, tempuyung, sambiloto,

dan sidaguri secara berurut adalah 8,35;

11,34; 8,32; 10,31; 11,13; dan 6,93% (b/b)(Lampiran 2). Ekstraksi dilakukan dengan

etanol karena merupakan pelarut yang aman

digunakan dalam obat-obatan, sesuai dengan

lisensi Badan POM. Sementara penggunaan

etanol 70% didasarkan hasil penelitian Macariet al. (2006), yaitu pengujian antioksidan

tanaman obat dalam etanol 70% menunjukkanaktivitas yang tinggi dibandingkan dengan

dalam konsentrasi ataupun beberapa pelarut

lainnya. Sementara maserasi atau perendaman

dalam pelarut tanpa adanya pemanasan

bertujuan agar senyawaan yang terkandung

dalam contoh tidak rusak. Proses inidilakukan selama 3 hari kemudian dilanjutkandengan pemekatan dan pengeringan ekstrak.

Pengeringan ekstrak dilakukan dengan

pengering beku pada suhu -70 C.

Rendemen hasil ekstraksi untuk kedaung,

kumis kucing, jati belanda, tempuyung,sambiloto dan sidaguri secara berurut adalah

15,13; 15,44; 14,87; 11,57; 7,11; dan 7,16%

(Lampiran 3). Nilai rendemen ini berbedauntuk setiap jenis tanaman bergantung pada

kandungan senyawa setiap tanaman itu

sendiri.

Aktivitas Antioksidan

Metode CUPRAC

Pada metode CUPRAC (cupric ion

reducing antioxidant capacity), kompleks bis-

neokuproin-tembaga(II) akan mengoksidasisenyawaan antioksidan dalam ekstrak

tanaman dan mengalami reduksi membentuk

kompleks bis-neokuproin-tembaga(I). Secaravisual hal ini dapat dilihat dari perubahan

warna kompleks larutan dari biru toska

menjadi kuning. Pereaksi CUPRAC

merupakan pereaksi yang selektif karena

memiliki nilai potensial reduksi yang rendah,yaitu sebesar 0,17 V (Apak et al. 2007). Hasil

pengukuran kapasitas antioksidan dengan

metode CUPRAC ditunjukkan pada Tabel 1.Data selengkapnya dapat dilihat pada

Lampiran 4.

Tabel 1 Kapasitas antioksidan metode

CUPRAC

Jenis Tanaman

Kapasitas Antioksidan

(mol troloks/g serbukkering)

Sidaguri 11,8879

Sambiloto 17,2824

Tempuyung 45,8327Jati belanda 194,9299Kumis kucing 209,4936

Kedaung 548,9904

Kapasitas antioksidan kedaung > kumis

kucing > jati belanda > tempuyung >sambiloto > sidaguri. Kedaung dari data di

atas memiliki aktivitas antioksidan paling

7/26/2019 cuprac2

14/31

tinggi yang diduga mengandung asamhidroksinamat (Alabi et al. 2005). Asam

hidrosinamat termasuk golongan polifenol

dan dapat berperan sebagai zat antioksidan

karena memiliki atom hidrogen dari gugus

hidroksil yang dapat disumbangkan pada

radikal bebas.

Metode DPPH

Metode DPPH (2,2-difenil-1-

pikrilhidrazil) merupakan senyawa radikal

nitrogen. DPPH akan mengambil atomhidrogen yang terdapat dalam suatu senyawa,

misalnya senyawaan fenol. Mekanisme

terjadinya reaksi DPPH ini berlangsungmelalui transfer elektron. Larutan DPPH yang

berwarna ungu memberikan serapan

absorbans maksimum pada 515,5 nm.

Larutan DPPH ini akan mengoksidasi

senyawa dalam ekstrak tanaman. Proses iniditandai dengan memudarnya warna larutan

dari ungu menjadi kuning. Hasil uji aktivitasantioksidan dengan metode DPPH dapat

dilihat pada Tabel 2 sementara data

selengkapnya ditunjukkan pada Lampiran 5.

Tabel 2 Kapasitas antioksidan metode DPPH

Jenis Tanaman


(mol troloks/g serbukkering)

Sidaguri 17,9414

Sambiloto 16,1915

Tempuyung 71,4714Jati belanda 126,5693

Kumis kucing 192,3260

Kedaung 450,5449


kucing > jati belanda > tempuyung > sidaguri> sambiloto. Hasil pengukuran ini berbeda

dengan pengukuran metode CUPRAC, yang

diduga karena perbedaan pelarut dansensitivitas metode. DPPH menggunakan

pelarut metanol sehingga kemungkinan

senyawa hidrofilik yang terekstrak dalam

metanol lebih banyak dibandingkan dalam

pelarut etanol. Metode DPPH ini mudahdigunakan, cepat, cukup teliti (Prakash 2001),

dan baik digunakan dalam pelarut organik,khususnya alkohol (Apak et al. 2007). Metode

ini juga sensitif untuk menguji aktivitas

antioksidan dalam ekstrak tanaman

(Pourmorad et al.2006). Akan tetapi, metode

DPPH kurang sensitif untuk mengukur

aktivitas antioksidan selain dari senyawaanfenol (Apak etal. 2007)

Metode FRAP

Pengujian aktivitas antioksidan dengan

metode FRAP (ferric reducing antioxidantpower) didasarkan atas kemampuan senyawaantioksidan dalam mereduksi senyawa

besi(III)-tripiridil-triazin menjadi besi(II)-

tripiridil triazin pada pH 3,6. Hasil pengujian

dengan FRAP ditunjukkan pada Tabel 3

sedangkan data selengkapnya di Lampiran 6.

Tabel 3 Kapasitas antioksidan metode FRAP

Jenis Tanaman


(mol Troloks/g serbukkering)

Sidaguri 3,8515

Sambiloto 5,4021

Tempuyung 10,2304

Jati belanda 14,3581

Kumis kucing 23,7300

Kedaung 90,1591


kucing > jati belanda > tempuyung >

sambiloto > sidaguri. Pengukuran FRAPmemberikan urutan respons yang sama

dengan metode CUPRAC. Namun hasilnya

menunjukkan aktivitas yang lebih kecil

dibandingkan dengan data pengujian

CUPRAC ataupun DPPH. Hal ini diduga

karena larutan FRAP bersifat kurang stabilsehingga harus dibuat secara in timedan harus

segera dipergunakan (Then et al. 2003).Menurut Ou et al. (2002), pengukuran

antioksidan dengan metode FRAP dapat

berjalan akurat apabila dilakukan pada

senyawaan antioksidan yang bisa mereduksiFe(III)TPTZ pada kodisi reaksi secara

termodinamika dan memiliki laju reaksi yang

cukup cepat. Selain itu, antioksidan yangteroksidasi dan semua produk reaksi

sekundernya harus tidak memiliki serapan

maksimum pada absorbansi 598 nm atau

serapan Fe(II)TPTZ.

Pada kenyataannya kondisi ini sulitditemui dan tidak realistis (Apak et al. 2007),

Menurut Ou et al.(2002), hal ini disebabkanoleh beberapa faktor, yaitu karena nilai

potensial reduksi standar dari Fe (III)/Fe(II)

adalah 0.77 V sehingga senyawa apapun

dengan nilai potensial reduksi dibawah 0.77 V

dapat mereduksi Fe(III) menjadi Fe(II) danmemberikan kontribusi pada pengukuran

6

7/26/2019 cuprac2

15/31

antioksidan dengan metode FRAP. Selain itu,tidak semua antioksidan dapat mereduksi

Fe(III) dengan waktu yang sesuai dengan

waktu inkubasi. Menurut Pulido et al. (2000),

absorbans dari beberapa senyawaan fenol

seperti asam kafeat, asam ferulat, kuersetin,

dan tanin tidak stabil dalam pengukuranFRAP karena waktu inkubasi yangdibutuhkan lebih lama dibandingkan dengan

waktu inkubasi FRAP. Senyawaan

antioksidan tipe-S seperti glutation juga

membutuhkan waktu reaksi yang lebih lama

sehingga tidak dapat diukur dengan metodeFRAP (Ou et al. 2002). Penyebab lainnya,

senyawaan pengganggu dapat memiliki

serapan absorbans maksimum pada daerahpengukuran FRAP. Hal ini berlaku untuk

contoh bahan alam yang memiliki banyak

senyawa pengganggu sehingga FRAP tidak

cocok untuk diaplikasikan pada contoh

biologis.

Uji-Fdan Uji-t

Pengukuran aktivitas antioksidan metode

CUPRAC, DPPH dan FRAP pada enam

tanaman obat memberikan hasil yang berbedasehingga perlukan uji-F dan uji-t.

Berdasarkan perhitungan nilai uji-F

didapatkan nilai Fhitung untuk setiap jenistanaman lebih besar dari F0,05(2,6) artinya

minimal ada sepasang metode yangmemberikan hasil berbeda nyata. Oleh karena

itu, dilakukan uji lanjutan, yaitu uji-t yang

menunjukkan bahwa setiap tanaman padaketiga metode memberikan hasil yang berbeda

nyata (Lampiran 7).

Kandungan Total Fenol

Pengukuran kandungan total fenoldilakukan dengan penambahan pereaksi

Folin-Ciocalteau. Folin-Ciocalteau adalah

pereaksi anorganik yang dapat membentuklarutan kompleks dengan senyawaan fenol.

Warna yang terbentuk dapat dideteksi oleh

sinar tampak pada panjang gelombang 756,5nm. Senyawa fenol sebagai metabolit

sekunder dalam tanaman berpotensi sebagai

zat antioksidan. Hal ini disebabkan olehkeberadaan gugus hidroksil dalam senyawaan

fenol. Gugus hidroksil dapat berfungsi

sebagai penyumbang atom hidrogen ketikabereaksi dengan senyawa radikal melalui

mekanisme transfer elektron sehingga proses

oksidasi dihambat. Hasil pengukuran totalfenol ditunjukkan pada Tabel 4.

Tabel 4 Kandungan Total Fenol

Jenis

Tanaman

Total fenol

(mg as galat/

g serbuk kering)

Sidaguri 4,9318

Sambiloto 5,2348

Tempuyung 12,0633Jati belanda 20,2204

Kumis kucing 24,5345Kedaung 57,2686

Data kandungan total fenol selengkapnya

dapat dilihat pada Lampiran 8. Dari hasilpercobaan diketahui kandungan total fenol

kedaung > kumis kucing > jati belanda >

tempuyung > sambiloto > sidaguri. Kedaung

memiliki kandungan total fenol yang paling

besar di antara 5 tanaman herbal lainnya

Kandungan Total Flavonoid

Kandungan total flavonoid diukur

berdasarkan keberadaan kuersetin di dalam

ekstrak tanaman. Analisis kandungan

flavonoid dilakukan dengan penambahanpereaksi AlCl3. Sebagai asam lewis, AlCl3

akan membentuk ikatan kompleks dengan

gugus hidroksil dari senyawaan flavonoid.Perubahan ini diidentifikasi melalui absorbans

pada daerah sinar tampak melalui alat

spektofotometer. Semakin banyak kandungan

senyawa flavonoid dalam suatu ekstrak maka

secara visual warna kuning yang terbentukakan semakin pekat. Kandungan total

flavonoid dari setiap tanaman ditunjukkanpada Tabel 5. Data kandungan total flavonoidselengkapnya dapat dilihat pada Lampiran 9.

Tabel 5 Kandungan Total Flavonoid

Jenis Tanaman

Total flavonoid

(mg kuersetin/g serbukkering)

Sidaguri 0,4153

Sambiloto 0,4598

Kumis kucing 0,6600

Tempuyung 0,7537

Kedaung 2,0835

Jati belanda 3,0480

Berdasarkan data tersebut kandungan total

flavonoid jati belanda > kedaung >tempuyung > kumis kucing > sambiloto >

sidaguri. Urutan ini tidak sama dengan urutan

kandungan total fenol, berarti tingginya

kandungan total fenol tidak hanya disebabkan

oleh golongan flavonoid. Perbedaan ini

7

7/26/2019 cuprac2

16/31

kemungkinan disebabkan oleh ketidak-sensitifan metode ini dalam menguji semua

golongan flavonoid. Menurut Apak et al.(2007), metode pengujian dengan

menggunakan AlCl3 memiliki kekurangan.

AlCl3 juga dapat mengkompleks beberapa

kelompok dari flavonoid seperti flavon(krisin, apigenin, dan luteolin) dan flavonol(kuersetin, mirisetin, morin, dan rutin) tetapi

tidak dapat mengkompleks golongan flavanon

dan flavanonol.

Hasil Uji Korelasi

Total Fenol dengan Aktivitas Antioksidan

Senyawaan fenol adalah senyawaan kimia

yang berpotensi sebagai antioksidan, tetapi

aktivitas antioksidan tidak hanya disebabkan

oleh senyawaan fenol. Senyawaan triterpena

pentasiklik, vitamin C, zat warna sepertiklorofil, senyawaan sulfur, ataupun nitrogen

dapat berperan sebagai zat antioksidan(Khamsah et al. 2006). Analisis korelasi

antara total fenol dan aktivitas antioksidan

menggunakan metode CUPRAC, DPPH, serta

FRAP bertujuan untuk menentukan kedekatanhubungan antara total fenol dan aktivitas

antioksidan.

Hasil analisis korelasi ditunjukkan padaGambar 9. Dari analisis korelasi tersebut

didapatkan nilai korelasi untuk kandungan

total fenol terhadap aktivitas antioksidan

metode CUPRAC, DPPH, dan FRAP adalah

sebesar 0,995; 0,998; dan 0,978. Hal iniberarti terlihat hubungan korelasi yang positif

dan kuat antara total fenol dan aktivitas

antioksidan dengan ketiga metode tersebut.Dari hasil tersebut dapat dinyatakan bahwa

aktivitas antioksidan disebabkan oleh

kandungan total fenol dari suatu tanaman.

Keterangan:

1) sidaguri, 2) sambiloto, 3) tempuyung,

4) jati belanda, 5) kumis kucing, dan 6) kedaung.

Gambar 9 Hubungan total fenol denganaktivitas antioksidan (a)

metode CUPRAC, (b) metode

DPPH, dan (c) metode FRAP.

Total Flavonoid dengan Aktivitas

Antioksidan

Senyawaan flavonoid dapat memiliki

aktivitas antioksidan sehingga dilakukan uji

korelasi. Hasil korelasi ditunjukkan padaGambar 10. Hasil uji korelasi (r) total

flavonoid dengan aktivitas antioksidan

metode CUPRAC, DPPH dan FRAP masing-masing sebesar 0,589; 0,495; dan 0,430. Nilai

(r) ini mendekati nol sehingga dapat

dinyatakan bahwa total flavonoid tidak

berkorelasi dengan aktivitas antioksidan

(a)

(b)

(c)

y = 10,40x 44,12

r = 0,995

R2= 0,989

y = 8,353x 27,15

r = 0,998

R2= 0,996

y = 1,643x 9,418

r = 0,978

R2= 0,956

8

7/26/2019 cuprac2

17/31

Keterangan:

1)sidaguri, 2) sambiloto, 3) kumis kucing,4)tempuyung, 5)kedaung, dan 6) jati belanda.

Gambar 10 Hubungan total flavonoid dengan

aktivitas antioksidan (a) metodeCUPRAC, (b) metode DPPH, dan

(c) metode FRAP.

Total Fenol dengan Total Flavonoid

Diketahui bahwa flavonoid merupakangolongan terbesar senyawaan fenol (Subeki

1998). Dengan menghubungkan kandungan

total fenol dengan kandungan flavonoid

didapatkan nilai korelasi (r) sebesar 0,539

(Gambar 11). Hal ini berarti total fenol tidak

memiliki hubungan yang linear dengan totalflavonoid karena nilai r mendekati nol

(Mattjik dan Sumertajaya 2006). Hal ini

menunjukkan bahwa untuk setiap jenis

tanaman tingginya kandungan fenol dari

setiap tanaman tidak selalu bersumber pada

golongan flavonoid.

keterangan:

1) sidaguri, 2) sambiloto, 3) tempuyung,

4) jati belanda, 5)kumis kucing, dan 6) kedaung.

Gambar 11 Hubungan total fenol dengan total

flavonoid.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Dari ekstrak etanol 70% 6 jenis tanaman

obat, yaitu, kumis kucing, tempuyung,

sidaguri, jati belanda, sambiloto, dan kedaungdiketahui bahwa semua tanaman tersebut

memiliki aktivitas antioksidan. Hasil

pengukuran aktivitas antioksidan denganmetode CUPRAC, DPPH, dan FRAP berbeda

nyata secara statistika. Walaupun demikian

metode CUPRAC dan FRAP memberikan

urutan aktivitas antioksidan yang sama dari

enam tanaman. Kandungan total fenol tidak

memiliki memiliki korelasi dengan totalflavonoidnya tetapi memiliki korelasi yang

kuat dan searah dengan aktivitas

antioksidannya. Kandungan total flavonoidtidak memiki korelasi dengan aktivitas

antioksidan berarti aktivitas antioksidan tidakhanya bersumber dari golongan flavonoid.

Saran

Sebaiknya dilakukan penelitian lanjutan

dengan memperbanyak jumlah sampel dan

populasi dari berbagai jenis tanaman obat

Indonesia lainnya.

(a)

(b)

(c)

y = 0,029x +0,619

r = 0,539

R2= 0,290

y = 13,07x +8,456

r = 0,430

R2= 0,184

y = 74,97x +53,11

r = 0,495

R2= 0,244

y = 111,5x +33,42

r = 0,589

R2= 0,347

7/26/2019 cuprac2

18/31

DAFTAR PUSTAKA

Alabi DA, Akinsulire OR, Sanyaolu MA.

2005. Qualitative determination of

chemical and nutritional compotition ofParkia Biglobosa (Jacq) Benth. Afr J

Biotechnol4:812-815.

Apak R et al. 2007. Comparative evaluation

of various total antioxidant capacity assay

applied to phenolic compounds with the

CUPRAC assay.Molecules12:1496-1547.

[AOAC] Association of Official AnalyticalChemistry. 1998. Official Methods of

Analysis of AOAC International. Ed-16.Volume ke-2. Maryland: AOAC

International.

Belitz HD, Grosch W. 1999. Food Chemistry.

Jerman: Springer.

Benzie IFF, Strain JJ. 1996. The ferricreducing ability of plasma (FRAP) as a

measurement of antioxidant power : the

FRAP assay.Anal Biochem239:70-76.

Femi-Ola TO, Ajibade VA, Avolabi A. 2008.Chemical composition and termicidal

properties of Parkia Biglobosa (Jacq)

Benth.J Bio Sci 8:494-497.

Hanani E, Munim A, Sekarini R. 2005.

Identifikasi senyawa antioksidan dalam

spons Callispongia sp dari KepulauanSeribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2:127-

133.

Kamiloglu O et al. 2009. Total Phenolic and

antioxidant activity of jujube (Zyziphus

Jujube Mill.) genotypes selected from

turkey.Afr J Biotechol8:302-307.

Kao MS et al. 2007. Phenolic content and

antioxidant capacities of Alabama-Grownthornless blackberries.Int J Fruit Sci 7:33-

46.

Khalil NM, Sperotto JS, Manfron MP. 2006.Anti-inflmmatory of the hydroalcoholyc

extracts of leaves of Sida rhombifolia L

(Malvaceae).Act Farm Bon25:260-261.

Khamsah SM, Akowah G, Zhari I. 2006.

Antioxidant activity and phenolic content

of orhosiphon stamineus Benth from

different geofraphical origin. J Sust SciManagement1:14-20.

Macari PdAT, Portela CN, Polhit AM. 2006.Antioxidant, cycotoxic, and UVB-

absorbing activity of Maytenus

guyanensisi Klotzch (celastaceae) bark

extracts.Acta Amazonica 36:513-518.

Matkowski A. 2008. Antioxidant activity ofextracts and different solvent of Glechomahederacea L and Orhosiphon stamineus

(Benth) Kudo. Adv Clin Exp Med17:615-

624.

Miller AL. 1996. Antioxidant flavonoid:structure, function and clinical usage.

[terhubung berkala]

http://public.carnet.hr/acphee/42305.pdf[ 24 Feb 09]

Ou B, et al. 2002. Analysis of antioxidant

activities of common vegetables

employing oxygen radical absorbance(ORAC) and ferric reducing antioxidant

power (FRAP) assay: A comparativestudy.J Agric Food Chem50:3122-3128.

Percival.M.1998.Antioxidants. [terhubung

berkala] http://acudoc.com/Antioxidants.pdf [19 Feb 09].

Pourmorad F, Hosseinimehr SJ, ShahabimajdN. 2006. Antioxidant activity, phenol, and

flavonoid contents of some selected

Iranian medicinal plants. Afr J Biotechnol

5:1142-1145.

Pulido R, Bravo L, Saura-Calixo F. 2000.Antioxidant Activity of dietary

polyphenols as determined by modified

ferric reducing antioxidant power assay. JAgric Food Chem48:3396-3402.

Prakash A. 2001. Antioxidant activity.Analitical progress19:2.

Slinkard, K dan Singleton VL. 1977. Total

phenol analysis: automation andcomparison with manual methods. Am J

Enol Victic28:49-55.

Sriningsih et al. 2002. Analisa senyawa

golongan flavonoid herba tempuyung

(Soncus Arvensis L). Pusat TeknologiFarmasi BPPT.

Subeki. 1998. Pengaruh cara pemasakanterhadap kandungan antioksidan beberapa

macam sayuran serta daya serap dan

retensinya pada tikus percobaan [tesis].Bogor: Program Pascasarjana, Institut

Pertanian Bogor

7/26/2019 cuprac2

19/31

Then M, Szentmihalyi K, Sarkzi A, VargaIS. 2003. Examination on antioxidant

activity in greater celadine (Celidoniummajus L) extracts by FRAP method. Acta

Bio szegediensis 47:115-117.

Umar F. 2008. Optimasi ekstraksi flavonoidtotal daun jati belanda [skripsi]. Bogor:Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam, Institut Pertanian

Bogor.

Wirakusumah ES, Setyowati RN. 1994.Cantik dan Bugar dengan Ramuan Nabati.

Jakarta: Penebar Swadaya.

Yuwono A. 2009. Antioxidant and health

disease. [terhubung berkala]

http://farmacology.org/specialistmedic/internist [ 2 Maret 2009]

11

7/26/2019 cuprac2

20/31

LAMPIRAN

7/26/2019 cuprac2

21/31

Lampiran 1 Bagan alir penelitian

Sampel daun atau batang

tanaman

Ekstrak Etanol

Uji Total

Fenol

Uji Total

Flavonoid

Uji Antioksidan

Metode CUPRAC

Metode DPPH

Metode FRAP

Analisis Korelasi Total Fenol, Flavonoid dan Aktivitas

Antioksidan

Preparasi SampelKadar Air

13

7/26/2019 cuprac2

22/31

Lampiran 2 Penentuan kadar air

Jenis Tanaman UlanganBobot Awal

(g)Bobot Akhir

(g)Kadar Air(% [b/b])

Rerata(% [b/b])

SBR(%)

Kedaung 1 0,9991 0,9153 8,39

8,35 0,952 0,9980 0,9156 8,26

3 0,9988 0,9149 8,40

Sambiloto 1 0,9999 0,8874 11,25

11,13 0,972 0,9994 0,8886 11,09

3 1,0001 0,8896 11,05

Tempuyung 1 0,9956 0,8916 10,45

10,31 1,362 0,9968 0,8940 10,31

3 0,9985 0,8970 10,17

Sidaguri 1 0,9934 0,9248 6,91

6,93 0,932 0,9978 0,9292 6,88

3 0,9988 0,9289 7,00

Kumis Kucing 1 0,9965 0,8824 11,45

11,34 1,002 0,9976 0,8845 11,34

3 0,9970 0,8851 11,22

Jati Belanda 1 1,0054 0,9220 8,30

8,32 0,932 0,9968 0,9144 8,27

3 0,9961 0,9123 8,41

# Kadar Air (%) = bobot awal bobot akhir x100%bobot awal

Kadar Air (%) = 0,9991- 0,9153 x100% = 8,39%

0,9991

# Simpangan Baku Rerata (%SBR)

n

## Rerata (x) = xi = (8,39 + 8,26 + 8,40) = 8,35%i=1 3

n

n

## Standar Deviasi (s2) = (xix)

2

i=1

n - 1

s2= (8,39 8,35)

2+ (8,26 8,35)

2+ (8,40 8,35)

2 = 0,0781

3-1

## %SBR = s2x100% = 0,0781 x100% = 0,95%

X 8,35

14

7/26/2019 cuprac2

23/31

Lampiran 3 Rendemen ekstrak kering

Jenis Tanaman Ulangan Bobot Awal (g) Bobot Akhir(g)Rendemen

(% [b/b])

Rerata

(% [b/b])

Kedaung

1 38,4550 5,6136 15,93

15,132 38,4562 5,1951 14,74

3 38,4591 5,1893 14,72

Sambiloto

1 38,4556 2,4870 7,28

7,112 38,4535 2,1817 6,38

3 38,4602 2,6176 7,66

Tempuyung

1 38,4820 4,1194 11,94

11,572 38,3928 3,8977 11,32

3 38,4671 3,9503 11,45

Sidaguri

1 14,9920 0,9235 6,62

7,162 14,9915 1,0795 7,74

3 14,9967 0,9946 7,13

Kumis Kucing1 38,4565 5,3340 15,64

15,442 38,4656 5,1490 15,10

3 38,4668 5,3107 15,57

Jati Belanda

1 38,4563 5,2043 14,76

14,872 38,4460 5,3240 15,11

3 38,4603 5,1988 14,74

# Rendemen (%) = bobot akhir x100% = 5,6136 x100% = 15,13%

bobot awal x(1-kadar air) 38,4550 (1-0,0835)

15

7/26/2019 cuprac2

24/31

Lampiran 4 Kapasitas antioksidan metode CUPRAC

# Pembuatan Kurva kalibrasi

Larutan troloks (M) Absorbans

25 0,04950 0,166

75 0,276

100 0,416

150 0,692

200 1,044

Gambar Kurva standar troloks

# Pengukuran Kapasitas Antioksidan

Jenis

Tanaman

BobotContoh

(mg)

fpV-

contoh

(ml)

AbsC-contoh

(M

troloks)

KapasitasAntioksidan

(mol

troloks/g

ekstrak kering)

KapasitasAntioksidan

(mol

troloks/g

serbuk kering)

Rerata(mol

troloks/g

serbuk

kering)

%

SBR

Kedaung 24,8 20 25 0,91 183,0541 3690,6071 558,3889

548,9904 1,6425,2 20 25 0,893 180,0468 3572,3577 540,4977

24,9 20 25 0,895 180,4006 3622,5025 548,0846

Kumis

Kucing

25,4 20 25 0,266 69,1311 1360,8487 210,1150

209,4936 0,3125,3 20 25 0,263 68,6004 1355,7394 209,3262

25,4 20 25 0,264 68,7773 1353,8841 209,0397

Jati

Belanda

24,3 20 25 0,237 64,0010 1316,8938 195,8221

194,9299 0,5924,5 20 25 0,236 63,8241 1302,5335 193,6867

24,3 20 25 0,236 63,8241 1313,2539 195,2809

Tempuyung 25,4 2 25 1,01 200,7440 395,1654 45,7206

45,8327 1,2925,7 2 25 1,013 201,2747 391,5851 45,3064

25,1 2 25 1,015 201,6285 401,6504 46,4710

Sambiloto 25,2 5 25 0,156 49,6722 246,3900 17,5183

17,2824 2,3625,2 5 25 0,156 49,6722 246,3900 17,5183

25,7 5 25 0,150 48,6108 236,4340 16,8105

Sidaguri 24,4 - 25 0,799 163,4183 167,4368 11,9885

11,8879 1,1124,4 - 25 0,795 162,7107 166,7118 11,9366

25 - 25 0,802 163,9490 163,9490 11,7387

16

7/26/2019 cuprac2

25/31

Lampiran 5 Kapasitas antioksidan metode DPPH


Larutan troloks (M) Absorbans Absorbans

Blanko 1,218 0,000

2,5 1,186 0,032

5 1,136 0,082

7,5 1,093 0,125

10 1,061 0,157

12,5 1,041 0,177

15 0,983 0,235

20 0,785 0,433

25 0,749 0,469

50 0,337 0,881

100 0,050 1,168

# Pengukuran Aktivitas Antioksidan

JenisTanaman

Bobot

Contoh

(mg)

fp

Volume

contoh

(ml)

Abs AbsC-contoh

(M

troloks)

Kapasitas

Antioksidan

(moltroloks/g

ekstrak

kering)

Kapasitas

Antioksidan

(moltroloks/g

serbuk

kering)

Rerata(mol

troloks/g

serbuk

kering)

%SBR

Blanko 1,218

Kedaung 25,0 50 25 0,420 0,798 59,4470 2972,3503 449,7166

450,5449 0,6825,2 50 25 0,417 0,801 59,6936 2960,9925 447,9982

24,7 50 25 0,422 0,796 59,2826 3000,1317 453,9199Kumis

Kucing25,0 50 25 0,835 0,383 25,3336 1266,6813 195,5756

192,3260 1,5324,7 50 25 0,845 0,373 24,5116 1240,4665 191,5280

25,5 50 25 0,838 0,380 25,0870 1229,7561 189,8743Jati

Belanda24,7 40 25 0,880 0,338 21,6346 875,8941 130,2455

126,5693 2,5225,6 40 25 0,882 0,336 21,4702 838,6790 124,7116

25,2 40 25 0,886 0,332 21,1414 838,9436 124,7509

Tempuyung

24,4 10 25 0,411 0,807 60,1868 616,6682 71,3485

71,4714 0,4224,6 10 25 0,406 0,812 60,5978 615,8315 71,2517

25,5 10 25 0,373 0,845 63,3104 620,6907 71,8139Sambiloto 25,3 40 25 1,071 0,147 5,9342 234,5538 16,6768

16,1915 3,8524,6 40 25 1,078 0,140 5,3588 217,8376 15,488325,0 40 25 1,073 0,145 5,7698 230,7924 16,4093

Sidaguri 25,5 10 25 0,834 0,384 25,4158 249,1748 17,8409

17,9414 0,4925,7 10 25 0,829 0,389 25,8268 251,2338 17,9883

25,2 10 25 0,835 0,383 25,3336 251,3257 17,9949

Gambar Kurva Standar troloks

17

7/26/2019 cuprac2

26/31

Lampiran 6 Kapsitas antioksidan metode FRAP


Larutan troloks (M) Absorbans

25 0,016

50 0,067

75 0,079

100 0,097

150 0,264

200 0,403

300 0,596

Gambar kurva kalibrasi troloks

# Pengukuran Aktivitas Antioksidan

Jenis

Tanaman

Bobot

Contoh

(mg)

fp

V-

contoh

(ml)

Abs

C-contoh

(M

Troloks)

Kapasitas

Antioksidan

(mol

troloks/g

ekstrak kering)

Kapasitas

Antioksidan

(mol

troloks/g

serbuk kering)

Rerata

(mol

troloks/g

serbuk

kering)

%

SBR

Kedaung 24,8 2 25 0,59 297,0818 598,9553 90,6219

90,1591 1,0725,2 2 25 0,589 296,6294 588,5505 89,0477

24,9 2 25 0,594 298,8913 600,1833 90,8077Kumis

Kucing

25,7 - 25 0,279 155,6323 151,3933 23,3751

23,7300 1,4925,5 - 25 0,281 156,7716 153,6976 23,7309

25,4 - 25 0,284 158,4805 155,9847 24,0840

Jati

Belanda24,3 - 25 0,169 92,9720 95,6502 14,2232

14,3581 0,9124,5 - 25 0,172 94,6809 96,6132 14,3664

24,3 - 25 0,172 94,6809 97,4084 14,4846

Tempuyung 25,3 - 25 0,156 85,5667 84,5521 9,7827

10,2304 3,8624,8 - 25 0,162 88,9846 89,7022 10,3785

24,6 - 25 0,163 89,5542 91,0104 10,5299

Sambiloto 24,2 - 25 0,134 73,0347 75,4490 5,3644

5,4021 2,6724,8 - 25 0,142 77,5918 78,2175 5,5613

24,2 - 25 0,132 71,8954 74,2721 5,2807

Sidaguri 24,4 - 25 0,05 52,8029 54,1014 3,87373,8515 0,5024,4 - 25 0,049 52,3506 53,6379 3,8405

24,4 - 25 0,049 52,3506 53,6379 3,8405

y= 0,002x 0,066

R2= 0,979

18

7/26/2019 cuprac2

27/31

Lampiran 7 Uji Fdan Uji tuntuk metode pengukuran aktivitas antioksidan

1. Kedaung

Hipotesis:

H0:i =1=2=3=0H1: minimal ada sepasang dimanaii

Tabel analisis Ragam

SumberKeragaman

Derajat bebas JumlahKuadrat

KuadratTengah

Fhitung F0,05 (2,6)

Perlakuan 2 668083749,86 334041874,93 5780,02 5,143

Galat 6 346755,28 57792,55

Total 8 668430505,14

Fhitung>F0,05 (2,6) maka tolak H0, artinya minimal ada sepasang dimanaii

# Uji t(Duncan)pada setiap jenis tumbuhan obat

Hipotesis:H0 : i =i

H1:iiNilai kritisDuncan:SY = KTG/r= 57792,55/3 = 138,80

Rp = r0,05 (2,6)x SY= 3,46 x 138,80 = 480,23

Rp = r0,05 (3,6)x SY= 3,58 x 138,80 = 496,90

Tabel Analisis RagamJenis FRAP DPPH CUPRAC

molTroloks/ g serbuk kering 3938,5087 19681,5917 23982,0828

Kesimpulan A B C

2. Kumis Kucing

Hipotesis:

H0:i =1=2=3=0

H1: minimal ada sepasang dimanaii


SumberKeragaman


KuadratTengah

Fhitung F0,05 (2,6)

Perlakuan 2 111254206,26 55627103,13 10491,97 5,143

Galat 6 31811,25 5301,88

Total 8 111286017,51


# Uji t (Duncan)pada setiap jenis tumbuhan obat

Hipotesis:

H0 : i =i

H1: ii

Nilai kritisDuncan:SY = KTG/r= 5301,88/ 3 = 42,04

Rp = r0,05 (2,6)x SY= 3,46 x 42,04 = 145,46Rp = r0,05 (3,6)x SY= 3,58 x 42,04 = 150,50



Kesimpulan A B C

19

7/26/2019 cuprac2

28/31

Lampiran 7 Uji-Fdan Uji-tuntuk metode pengukuran aktivitas antioksidan (lanjutan)

3. Jati Belanda

Hipotesis:

H0:i =1=2=3=0



Sumber

Keragaman

Derajat bebas Jumlah

Kuadrat

Kuadrat

Tengah

Fhitung F0,05 (2,6)

Perlakuan 2 102000375,64 51000187,82 6570,36 5,143

Galat 6 46572,95 7762,16Total 8 102046948,58


# Uji-t(Duncan)pada setiap jenis tumbuhan obatHipotesis:

H0 : i =i

H1: iiNilai kritisDuncan:

SY = KTG/r= 7762,16/ 3 = 50,87Rp = r0,05 (2,6)x SY= 3,46 x 50,87= 176,00Rp = r0,05 (3,6)x SY= 3,58 x 50,87 = 182,12



Kesimpulan A B C

4. Tempuyung

Hipotesis:H0:i =1=2=3=0


Tabel analisis RagamSumber

Keragaman


Kuadrat

Kuadrat

Tengah

Fhitung F0,05 (2,6)

Perlakuan 2 31670683,70 15835341,85 14311,01 5,143

Galat 6 6639,09 1106,51Total 8 31677322,79


# Uji-t(Duncan)pada setiap jenis tumbuhan obat

Hipotesis:H0 : i =i


SY = KTG/r= 6639,09/ 3 = 47,04

Rp = r0,05 (2,6)x SY= 3,46 x 47,04 = 162,77Rp = r0,05 (3,6)x SY= 3,58 x 47,04 = 168,40

Tabel Analisis RagamJenis FRAP CUPRAC DPPH


Kesimpulan A B C

Lampiran 7 Uji-Fdan Uji-t untuk metode pengukuran aktivitas antioksidan (lanjutan)

20

7/26/2019 cuprac2

29/31

5. SambilotoHipotesis:

H0:i =1=2=3=0



SumberKeragaman


KuadratTengah

Fhitung F0,05 (2,6)

Perlakuan 2 10124730,02 5062365,01 673,19 5,143Galat 6 45119,55 7519,92

Total 8 10169849,57


# Uji-t (Duncan)pada setiap jenis tumbuhan obat

Hipotesis:

H0 : i =i


SY = KTG/r= 7519,92/ 3 = 50,07Rp = r0,05 (2,6)x SY= 3,46 x 50,07 = 173,23

Rp = r0,05 (3,6)x SY= 3,58 x 50,07 = 179,25



Kesimpulan A B B

6. SidaguriHipotesis:

H0:i =1=2=3=0



Sumber

Keragaman


Kuadrat

Kuadrat

Tengah

Fhitung F0,05 (2,6)

Perlakuan 2 11405391,02 5702695,51 17761,89 5,143Galat 6 1926,38 321,06

Total 8 11407317,40


# Uji-t(Duncan)pada setiap jenis tumbuhan obatHipotesis:

H0 : i =i


SY = KTG/r= 1926,38/ 3 = 25,34Rp = r0,05 (2,6)x SY= 3,,46 x 25,34 = 87,68

Rp = r0,05 (3,6)x SY= 3,58 x 25,34 = 90,72

Tabel Analisis RagamJenis FRAP CUPRAC DPPH


Kesimpulan A B C

21

7/26/2019 cuprac2

30/31

Lampiran 8 Penentuan total fenol

Larutan asam galat (mg/L) Absorbans

12,5 0,058

25 0,127

50 0,262

75 0,417

100 0,535

150 0,801

200 1,033

Kandungan Total Fenol

Jenis

Tanaman

Bobot

Contoh

(mg)

fpV-contoh

(ml)Abs

C-contoh

(mg/L)

Total fenol (mg

ekuivalen as

galat/g ekstrakkering)

Total fenol

(mg

ekuivalen as

galat/gserbuk

kering)

Rerata (mgekuivalen as

galat/g

serbukkering)

%

SBR

Kedaung 25,2 10 25 0,211 39,5936 392,7940 59,4297

57,2686 3,4924,8 10 25 0,199 37,3020 376,0280 56,8930

25,3 10 25 0,198 37,1110 366,7096 55,4832

Kumis 24,8 - 25 0,826 157,0406 158,3071 24,4426

24,5345 0,42Kucing 26,0 - 25 0,873 166,0163 159,6310 24,6470

25,6 - 25 0,855 162,5788 158,7684 24,5138

Jati 24,8 - 25 0,711 135,0790 136,1684 20,2482

20,2204 0,29Belanda 25,1 - 25 0,720 136,7977 136,2527 20,2608

25,2 - 25 0,719 136,6068 135,5226 20,1522

Tempuyung 24,9 - 25 0,549 104,1417 104,5600 12,0976

12,0633 0,3724,8 - 25 0,543 102,9959 103,8265 12,0127

24,8 - 25 0,546 103,5688 104,4041 12,0796

Sambiloto 24,7 - 25 0,380 71,8677 72,7406 5,17195,2348 1,0424,7 - 25 0,387 73,2045 74,0936 5,2681

26,2 - 25 0,410 77,5968 74,0428 5,2644

Sidaguri 25,6 - 25 0,369 69,7670 68,1318 4,8782

4,9318 0,9724,9 - 25 0,364 68,8122 69,0885 4,9467

25,4 - 25 0,373 70,5309 69,4202 4,9705

Konsentrasi contoh ekuivalen dengan asam galat

y = 0,0052x+ 0,0037

0,211 = 0,0052x+ 0,0037

x= 39,5936 mg/L

Total fenol = Vcontoh (l)xCcontoh(mg/l) x fp

Bobot Contoh (g)

Total fenol = 25 ml x 39,5936 mg/l x10 x 10 l/ml 25,2 mg x10 g/mg

Total fenol = 392,7940 mg ekuivalen as,galat/ g ekstrak kering

Total fenol = 392,7940 mg ekuivalen as,galat/ g ekstrak kering x rendemen

Total fenol = 392,7940 mg ekuivalen as,galat x 1g ekstrak kering

g ekstrak kering (1/0,1513) g serbuk kering

Total fenol = 59,4229 mg ekuivalen as,galat/ g serbuk kering

y = 0.0052x + 0.0037

R2= 0.9985

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

0 50 100 150 200 250

mg/L asam galat

Absorbansi

Gambar Kurva Standar Asam Galat

y= 0,0052x+ 0,0037

R2= 0,9985

22

7/26/2019 cuprac2

31/31

cuprac2

Documents

Transcript of cuprac2