BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi

5/25/2018 BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi

1/6

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis PenelitianJenis penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan

melakukan serangkaian penelitian untuk mengetahui efektivitas ekstrak etanol

daun kemangi terhadap pertumbuhan bakteriEscherichia coli penyebab diare

dengan konsentrasi tertentu.

B. Waktu dan TempatPenelitian ini akan dilakukan pada bulan . 2014, di Laboratorium

Mikrobiologi Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan

RI Makassar.

C. Prosedur kerja1. Penyiapan Sampel Uji

a. Pengambilan SampelBahan yang digunakan adalah daun kemangi yang diperoleh dari

Pasar Pabaeng-baeng Kota Makassar.

b. Pembuatan SimplisiaDaun kemangi yang telah diperoleh, dibersihkan dengan air.

Kemudian, diseleksi lalu di potong kecil-kecil dan di keringkan

dengan cara diangin-anginkan pada suhu ruang dan terhindar dari

sinar matahari langsung. Setelah kering, daun kemangi di pisahkan

dari zat asing yang masih tertinggal. Simplisia daun kemangi yang


2/6

telah bersih di simpan pada tempat yang aman dan terhindar dari

matahari langsung,untuk menghindari kerusakan simplisia.

2. EkstraksiDaun kemangi yang telah dipotong kecil-kecil, di timbang

sebanyak 100 gr. Kemudian, dimasukkan ke dalam bejana

maserasi. Ditambahkan pelarut etanol hingga di atas bahan baku setinggi

2-3 cm, ditutup dan di biarkan selama 5 hari di tempat yang terlindung

dari cahaya sambil sesekali diaduk. Setelah 5 hari, ekstrak disaring ke

dalam wadah dan ampasnya di ekstraksi kembali dengan pelarut

etanol. Ekstrak etanol yang di peroleh kemudian dikumpulkan dan

dipekatkan dengan Rotavapor pada suhu 60o C hingga diperoleh ekstrak

kental. Kemudian, ekstrak Kental diuapkan kembali di atas waterbath,

sampai larutan etanol menguap dan yang tersisa sari daun kemangi.

Kemudian dibuat ekstrak etanol dengan beberapa konsentrasi.

3. Sterilisasi Alata. Sterilisasi dengan udara panas dan kering

Cara ini terutama dipakai untuk sterilisasi alat-alat gelas seperti

erlenmeyer, beker gelas, cawan petri, tabung reaksi, gelas ukur,

batang pengaduk. Sterilisasi ini dilakukan dengan oven. Tapi sebelum

alat-alat gelas tersebut dimasukkan dalam oven, semua alat-alat gelas

dicuci sampai bersih.Keringkan, dan disumbat/dibungkus,kemudian

siap untuk di sterilkan dengan oven pada suhu 160o-180o C selama 2


3/6

jam. Setelah temperatur waktu tercapai,alat dimatikan agar suhu

temperatur turun.

4. Pembuatan mediaMedia yang digunakan adalah media padatNutrient Agar dan media cair

Peptone Water.

a. Media padatNutrient AgarMedia agar padat dibuat dengan cara 1 gr Nutrient Agar (NA)

dilarutkan dalam 50 ml aquadest,kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer

dan ditutup dengan kapas. Selanjutnya,dipanaskan sampai mendidih dan

dimasukkan dalam 5 tabung reaksi(masing-masing tabung reaksi

sebanyak 7 ml untuk media peremajaan biakan murni antibakteri) dan

ditutup dengan menggunakan kapas. Selanjutnya, media disterilkan dalam

autoklaf pada suhu 121o C selama 15 menit dan tekanan 2 atm.

Kemudian, media untuk peremajaan diletakkan dalam keadaan miring

pada suhu kamar sampai media memadat.

b. Media cairPeptone Water.Media cair dibuat dengan cara di timbang sebanyak 2 gr Pepton

Water. Kemudian dilarutkan dalam 100 ml aquadest. Di aduk hingga

homogen. Kemudian di tambahkan metilen blue sebanyak 1 pipet aduk sampai

homogen dan dimasukkan dalam erlenmeyer dan ditutup dengan kapas.

Selanjutnya, dipanaskan sampai mendidih, kemudian didinginkan dalam

suhu ruang. Selanjutnya, media cair dimasukkan ke dalam 10 tabung


4/6

reaksi masing-masing 9 ml. Disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit

pada suhu 121o C selama 15 menit dan tekanan 2 atm.

5. Peremajaan BakteriBiakan murni Escherichia coli diambil dari stok laboratorium

sebanyak 1 ose, kemudian dibiakkan di Media PW selama 1 x 24 jam.

Apabila media PW terjadi perubahan warna dari hijau menjadi kuning

berarti pembiakan bakteri berhasil. Kemudian, diambil 1 ose biakan

bakteri dari media PW dan digoreskan ke media miring NA tabung

ditutup dengan kapas dan diinkubasi pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam.

Dari media NA diambil lagi 1 ose biakan bakteri untuk dibuat suspensi

bakteri,dimana biakan tersebut di masukkan dalam tabung reaksi yang

berisi aquadest.dan di homogenkan. Biakan pun siap di gunakan untuk

pengujian.

6. Pengujian Antibakteri10 Tabung reaksi yang berisi media PW sebanyak 9 ml

ditambahkan masing-masing 1 ml ekstrak daun kemangi dengan

konsentrasi yang berbeda yaitu, 6%, 7%, 8% , 9%, 10%. 11%, 12%, 13%,

14% dan sebagai kontrol 0% . Setelah itu, dimasukkan suspensi bakteri

sebanyak 1 ose dengan cara terlebih dahulu ose harus dipijarkan. Lalu,

dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi biakan bakteri secara

aseptis. Ose tersebut dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi

media cair PW dan sampel daun kemangi dengan kosentrasi 6 % secara

aseptis pula. Homogenkan. Pijarkan ose kembali setelah digunakan. Hal


5/6

ini dilakukan sampai konsentrasi akhir. Diinkubasi pada suhu 37oC

selama 1 x 24 jam,dan apabila terjadi perubahan warna dan kekeruhan

sehingga dapat ditentukan MIC (Minimum Inhibitory Concentration) dari

sampel ekstrak etanol daun kemangi terhadap bakteri Escherichia coli .

Kemudian diinkubasi kembali selama 1 x 24 jam untuk menentukan MBC

(Minimum Bacteridial Concentration) dari ekstrak etanol daun kemangi

terhadap bakteriEscherichia coli.

7. Analisis dataData yang diperoleh dianalisis secara deskriptif yaitu melihat

perubahan warna dan kekeruhan sehingga dapat ditentukan MIC

(Minimum Inhibitory Concentration) dari sampel ekstrak etanol daun

kemangi terhadap bakteriEscherichia coli setelah inkubasi selama 1 x 24

jam. Kemudian diinkubasi kembali selama 1 x 24 jam untuk menentukan

MBC (Minimum Bacteridial Concentration) dari ekstrak etanol daun

kemangi terhadap bakteriEscherichia coli.

8. KesimpulanKesimpulan dibuat berdasarkan hasil penentuan MIC (Minimum

Inhibitory Concentration) dan MBC (Minimum Bacteridial

Concentration).


6/6

BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi

Documents

Transcript of BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi